Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞在体外对肝星状细胞TGF-β1信号传导的影响

目的:探讨Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞(Smad7-EGFP-BMSCs)在体外抑制肝纤维化的机制。方法:分离、纯化大鼠BMSCs并经Smad7基因腺病毒质粒(Ad-Smad7-EGFP)转染建立Smad7-EGFP-BMSCs。实验将大鼠肝星状细胞HSC-T6分为A组、B组、C组和D组,分别与Smad7-EGFP-BMSCs、BMSCs、Smad7质粒及PBS进行共同培养72 h,采用ELISA测定培养液中Smad7和TGF-β1的表达,采用Western印迹法和RT-PCR法测定细胞Smad7、TGF-β1、ColⅠ、α-SMA蛋白和mRNA的表达,采用流式细胞术测定细胞凋亡情况。结果:(1)ELISA结果显示,B组、C组和D组培养液TGF-β1蛋白水平较A组显著降低(P0.01),而Smad7蛋白水平较A组显著升高(P0.01);D组TGF-β1蛋白水平较B组和C组显著降低(P0.01),而Smad7蛋白水平较B组和C组显著升高(P0.01);(2)Western印迹法和PCR结果显示,B组、C组和D组TGF-β1、ColⅠ和α-SMA蛋白和mRNA表达水平较A组显著降低(P0.01),而Smad7蛋白和mRNA表达水平较A组显著升高(P0.01);D组TGF-β1、ColⅠ、α-SMA蛋白和mRNA表达水平较B组和C组显著降低(P0.01),而Smad7蛋白和mRNA表达水平较B组和C组显著升高(P0.01);(3)流式细胞仪检测结果显示,B组、C组和D组HSC-T6细胞凋亡率较A组显著升高(P0.01),而D组细胞凋亡率较B组和C组显著升高(P0.01)。结论:Smad7基因质粒转染骨髓间充质干细胞可通过作用肝星状细胞TGF-β1信号转导通路以及促进星状细胞凋亡而具有抗肝纤维化的作用。     

不同营养支持方式对胃溃疡大鼠MTL、 CGRP-mRNA表达及胃黏膜损伤指数的影响差异

目的探讨安素肠内营养支持治疗对胃溃疡大鼠胃组织胃动素(MTL)分泌和胃黏膜降钙素基因相关肽(CGRP)mRNA的表达及对胃黏膜损伤指数的影响。方法选取60只SD大鼠作为实验对象,采取随机数字表法将其随机分为正常对照组(A组)、胃溃疡模型组(B组)、肠内营养组(C组)、安素肠内营养支持组(D组),每组15只。B和D组大鼠采用经典的Okabe法建立胃溃疡模型。检测并比较各组大鼠胃组织MTL mRNA和CGRP mRNA表达水平及胃黏膜损伤指数。结果 B组大鼠胃组织MTL mRNA表达水平显著高于A组、C组和D组,D组显著高于C组(P0.05);B组大鼠胃黏膜CGRP-mRNA表达水平显著低于A组,D组显著低于C组(P0.05),但D组仍显著低于A组(P0.05);B组大鼠胃黏膜损伤指数显著高于A组,C组则显著低于B组,D组显著高于C组(P0.05)。结论胃溃疡大鼠胃肠组织MTLmRNA表达水平显著升高,CGRP-mRNA表达水平显著降低,引发和加剧胃肠动力障碍并影响溃疡的愈合,而给予安素肠内营养支持治疗能够显著改善胃组织MTL mRNA及胃黏膜CGRP-mRNA的表达,有利于促进溃疡愈合,改善胃肠动力障碍。     

当归四逆汤对糖尿病血瘀症大鼠周围神经病变及水通道蛋白1、RhoA/ROCK信号通路的影响

目的:研究当归四逆汤对糖尿病血瘀症大鼠周围神经病变及水通道蛋白1(AQP1)、RhoA/ROCK信号通路的影响。方法:65只健康雄性SD大鼠,12只作为正常对照组(A组),其余53只制备2型糖尿病大鼠血瘀症模型。48只成模大鼠再分为:糖尿病血瘀症组(B组)、甲钴胺治疗组(C组)、当归四逆汤低剂量治疗组(D组)和当归四逆汤高剂量治疗组(E组),每组12只。检测各组大鼠坐骨神经传导速度、坐骨神经含水量;背根神经节AQP1和RhoA/ROCK信号通路相关因子mRNA/蛋白表达水平变化。结果:造模大鼠体重明显下降,血糖、血脂、血流变指标水平明显异常(P0.01);B组大鼠坐骨神经含水量显著高于A组(P0.01),C组与A组接近(P0.05),E组与C组相当(P0.05),好于D组(P0.05);各组坐骨神经传导速度差异无统计学意义(P0.05);各组大鼠背根神经节信号通路因子mRNA表达比较,B组AQP1高于A组,RhoA、ROCKII低于A组(P0.05),C组AQP1、RhoA、ROCKII表达水平接近A组(P0.05),E组接近C组(P0.05),D组AQP1表达高于E组,RhoA、ROCKII表达量低于E组(P0.05),各组ROCKI mRNA表达未见统计学差异(P0.05);各组大鼠信号通路因子蛋白表达,B组AQP1、RhoA、ROCKII较A组显著下调(P0.01),C组AQP1、RhoA、ROCKII表达接近A组(P0.05),E组接近C组(P0.05),D组表达低于E组(P0.05),各组ROCKI蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论:当归四逆汤治疗糖尿病周围神经病变有效,且高剂量组效果更好,作用机理可能与其调节AQP1及RhoA/ROCK信号通路表达水平有关。     

敲除Dock180抑制大鼠H9C2心肌细胞系增殖和促凋亡

目的探讨敲除细胞质移动蛋白1(Dock180)对大鼠H9C2心肌细胞系增殖和凋亡的影响及其机制。方法用CRISPR/Cas9系统构建single guide RNA(sgRNA)Dock180质粒,并将其包装成敲除Dock180重组慢病毒再进行筛选,建立敲除Dock180的H9C2心肌细胞稳定株。实验分为A:阴性慢病毒组(Cas9)、B:敲除Dock180组、C:阴性慢病毒低氧组、D:敲除Dock180低氧组。RT-PCR检测各组细胞Dock180 mRNA表达水平,Western blot检测相关蛋白的表达水平,MTT检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 B组和D组Dock180 mRNA和蛋白无表达;分别较A组和C组,B组和D组p-ERK1/2、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均降低(P0.01),Bax蛋白和细胞凋亡率均增加(P0.05,P0.01);较A组,C组Dock180 mRNA和蛋白表达降低,p-ERK1/2、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均降低,Bax蛋白和细胞凋亡率均增加(P0.05,P0.01);较B组、D组p-ERK1/2、Bcl-2蛋白和细胞增殖率均降低,Bax蛋白和细胞凋亡率均增加(P0.05,P0.01)。结论敲除Dock180可抑制H9C2心肌细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用可能通过p-ERK1/2、Bax和Bcl-2分子介导。     

小分子干扰RNA沉默CTGF对肾小管上皮细胞的作用及对氧化应激的影响

目的研究小分子干扰RNA沉默结缔组织生长因子(CTGF)基因对高糖诱导肾小管上皮细胞的作用及对氧化应激的影响。方法肾小管上皮细胞(HK-2)分组:①正常对照组(A组),培养基含D-葡萄糖1 g/L;②高糖组(B组),培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;③高糖+阴性对照组(C组):细胞转染含无关序列的重组质粒后于D-葡萄糖4.5 g/L的高糖培养基中培养;④高糖+干扰组(D组):细胞转染针对CTG F的siRNA表达质粒后于D-葡萄糖4.5 g/L的高糖培养基中培养。Q-PCR和western blot检测CTGF的表达。ELISA检测氧化应激指标F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平。结果与A组相比,B和C组CTGF mRNA和蛋白表达水平上调(P0.05);B组和C组CTGF mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P0.05);与C组相比,D组CTGF mRNA和蛋白表达水平下调(P0.05)。与A组相比,B和C组F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平上调(P0.05);B组和C组F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平无明显变化(P0.05);与C组相比,D组F2-aisoprostanes、8-OHdG、NT、MDA水平下调(P0.05)。结论沉默CTGF基因可抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化应激。     

颈部迷走神经干低频刺激对SD大鼠房颤模型的抑制作用

目的研究颈部迷走神经干低频刺激对SD大鼠房颤模型的抑制作用及心房肌凋亡率和同型半胱氨酸(Hcy)、间隙连接蛋白43(Cx43)水平的影响。方法选择80只实验SD大鼠作为研究对象,使用随机数字分为4组:空白对照组(A组)、模型组(B组)、假手术组(C组)、治疗组(D组),每组20只。4组大鼠均治疗2周,分别对组大鼠心房有效不应期(ERP)以及房颤诱发情况、心肌组织Hcy、Cx43水平、心肌凋亡率之间的差异以及大鼠心房肌凋亡比率与心肌组织Hcy、Cx43水平相关性进行分析。结果 4组大鼠的ERP从高到低依次为A、C、B、D组,A、C两组大鼠均未出现房颤,且D组大鼠的房颤频率以及持续时间均显著小于B组大鼠;B、C两组大鼠的Hcy、Cx43水平差异无统计学意义(P0.05),而其他两两比较之间的差异有统计学意义(P0.05);B、C两组大鼠的心房肌心肌凋亡率之间的差异无统计学意义,而其他两两比较之间的差异有统计学意义(P0.05);大鼠的心房肌凋亡比率与心肌组织Hcy、Cx43水平呈现正相关。结论通过对模拟房颤实验大鼠进行颈迷走神经的刺激作用,实验大鼠的Hcy、Cx43水平显著降低,患者的心肌凋亡率显著下降,房颤频率以及持续时间显著缩短。     

Adipo/AMPK信号通路的下调参与肥胖型哮喘小鼠的发病

目的探讨Adipo/AMPK信号通路在肥胖型哮喘气道炎性反应及气道高反应中的作用及机制。方法将40只SPF级C57BL/6小鼠随机分为正常体质量组(A)、哮喘组(B)、肥胖组(C)和肥胖哮喘组(D),A组进行普通饲料喂养+0.9%氯化钠溶液致敏激发,B组进行普通饲料喂养+OVA/Al(OH)3致敏激发,C组予以高脂饲料喂养+0.9%氯化钠溶液致敏激发,D组则给予高脂饲料喂养+OVA/Al(OH)_3致敏激发。测定各组小鼠气道阻力,HE染色观察肺组织病理改变,ELISA法检测血清Adipo水平,qRT-PCR法检测肺组织Adipo、AdipoR1及AMPKαmRNA的表达,Western blot法检测肺组织Adipo、AMPKα和p AMPKα蛋白的表达水平。结果 C组和D组小鼠体质量增长明显(P0.01);与A组相比,B组、C组和D组总气道阻力(RL)增高、肺部炎性反应加重,D组增高最显著(P0.05);同时,B组、C组和D组小鼠肺组织Adipo mRNA、AdipoR1 mRNA、Adipo蛋白和p AMPKα蛋白的表达较A组显著降低(P0.05)。结论肥胖型哮喘小鼠气道反应增高、气道炎性反应加重可能与Adipo/AMPK信号通路的下调有关。     

肿瘤坏死因子-α诱导连接蛋白43重构在心力衰竭大鼠室性心律失常发生中的作用

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对心力衰竭大鼠连接蛋白(Cx)43表达和分布调控作用,并探讨其与室性心律失常发生的关系。方法 36只SD大鼠随机分为3组,每组12只:心衰组(F组)、加药组(D组)、假手术组(S组)。通过腹主动脉缩窄法构建心力衰竭模型,D组待术后第2周开始应用TNF-α螯合剂rhTNFR:Fc至第16周。术后第16周应用程序刺激诱发室性心律失常,记录各组诱发情况。Western blot检测心肌组织TNF-α、总CX43(T-Cx43)、磷酸化CX43(P-Cx43)和非磷酸化CX43(NP-Cx43)的蛋白表达水平,应用激光共聚焦显微镜观察T-Cx43的分布情况。结果与S组相比,F组心肌组织TNF-α表达显著增加(P0.05),T-Cx43表达下降且分布紊乱,P-Cx43水平下降且NP-Cx43水平增加(P0.05),室性心律失常诱发率明显升高(P0.05);与F组比较,D组TNF-α表达显著减少(P0.05),T-Cx43和P-Cx43水平有所增加(P0.05),NP-Cx43水平下降(P0.05),T-Cx43分布紊乱有所减轻,室性心律失常诱发率显著下降(P0.05)。结论心力衰竭大鼠心肌组织中过表达的TNF-α可以诱导Cx43重构,其在心衰室性心律失常的发生中可能发挥重要作用。     

何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织P450胆固醇侧链裂解酶和类固醇激素急性调节蛋白的影响

目的 探讨何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和类固醇激素急性调节蛋白(StAR)的影响.方法 60只雄性SD大鼠,随机分为安静对照组(A组)、安静何首乌饮组(B组)、模型组(C组)、自然恢复组(D组)、何首乌饮治疗组(E组);何首乌饮预防组(F组),每组10只.C、D、E和F组大鼠复制运动疲劳动物模型,其中F组每天训练前给何首乌饮20g/(kg·d)(含生药4.8kg/L)灌胃60 d.模型成功后E组给何首乌饮20 g/(kg·d)(含生药4.8kg/L)灌胃治疗60 d.采用美国Beckmancoulter Unicel Dxl 800仪器测定睾酮水平; 采用RT-PCR、Western blotting和免疫组织化学法检测各组睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达变化.结果 P450scc免疫组织化学阳性颗粒主要表达于间质细胞及精母细胞,B组和F组表达最强,C组最弱,与其余各组相比差异有统计学意义.P450scc蛋白和mRNA表达变化为B、F组明显高于E、D和A组(P<0.05),C组明显低于A组(P<0.05),A组和D组以及B组和F组两两之间差异无显著性;StAR免疫组织化学阳性颗粒主要表达于睾丸间质细胞胞质,阳性强度表现为E组和F组最强,C组最弱.StAR蛋白和mRNA表达变化为E和F组明显高于A、D组(P<0.05),C组明显低于A组(P<0.05),A、D组之间无差异.结论 何首乌饮可以提高睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达.     

BMSCs脑内移植改善AD小鼠学习记忆功能的分子机制研究

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)脑内移植对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力及病理改变的影响,并对其分子机制进行探讨。方法:将C57/BL6野生型(WT)小鼠和C57/BL6 APP/PS1转基因(Tg)小鼠随机分为4组:WT/PBS组、WT/BMSCs组、Tg/PBS组及Tg/BMSCs组,侧脑室注射法将PBS或BMSCs注入小鼠脑内。术后第3天起进行持续8 d的Morris水迷宫实验以检测小鼠认知能力。术后第10天取材,组织免疫荧光染色检测小鼠脑内小胶质细胞的激活;real-time PCR检测CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)、CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)、IL-1β、TNF-α、Nurr1、YM1、胰岛素降解酶(IDE)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的mRNA表达;ELISA检测脑组织匀浆CX3CL1和Aβ42的含量;Western blot检测突触后致密蛋白95(PSD95)、突触小泡蛋白(SYP)、p85和p110蛋白表达以及Akt磷酸化水平的变化。结果:术后第10天,在APP/PS1小鼠海马区附近观察到移植的BMSCs。水迷宫实验结果显示,与WT/PBS组小鼠相比,Tg/PBS组小鼠逃避潜伏期明显延长(P0.01),BMSCs移植治疗后APP/PS1小鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05);与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组CX3CL1在海马区的mRNA水平(P0.01)及皮质区的蛋白水平(P0.05)明显增加;BMSCs移植可以促进WT和Tg小鼠脑内小胶质细胞的激活,同时M2型小胶质细胞表面标志物YM1的mRNA表达上调(P0.05)。Tg/PBS组与WT/PBS组相比,皮质区和海马区TNF-α的mRNA表达明显升高(P0.05),皮质区Nurr1的mRNA表达降低(P0.01);而与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组皮质区的TNF-α(P0.01)mRNA表达降低,CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显上调(P0.05),海马区TNF-α和IL-1β的mRNA明显下调(P0.05),CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显增加(P0.05)。此外,Tg/BMSCs组的PSD95、p85和p110蛋白表达及Akt的磷酸化水平均较Tg/PBS组明显增加(P0.05)。与Tg/PBS组比,BMSCs移植降低了APP/PS1小鼠脑内Aβ42蛋白的水平(P0.05),增加了海马区Aβ清除相关酶IDE和MMP9的表达(P0.05)。结论:BMSCs移植可以调控神经炎症因子分泌,促进神经保护因子和突触蛋白的表达,从而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力,其分子机制可能是BMSCs移植上调CX3CL1后激活了PI3K/Akt通路。     

TLR4拮抗剂抑制感染性早产大鼠子宫平滑肌收缩及对MyD88/NF-κB表达的影响

目的探讨Toll样受体4拮抗剂(TLR4拮抗剂)对感染性早产炎症因子和子宫收缩的保护作用,及其对MyD88/NF-κB通道表达的影响。方法清洁级SD大鼠以2:1的比例雌雄合笼,取雌鼠45只、雄鼠30只,次日清晨发现阴道栓或阴道涂片发现精子为妊娠第0天。随机将孕鼠分为对照组(Control组)、感染性早产模型组(LPS组)和TLR4拮抗剂+LPS组(TLR4组)。HE染色观察子宫组织病理改变,子宫离体肌条检测肌张力变化,ELISA检测血清中炎症因子和氧化应激指标的变化,免疫组化和Western blot检测子宫组织中MyD88/NF-κB通道相关蛋白的表达。结果 TLR4拮抗剂明显改善LPS诱导的大鼠感染性早产子宫组织中炎细胞浸润情况,降低子宫离体肌条肌张力,降低炎症反应和氧化应激,抑制MyD88/NF-κB通道蛋白的表达。结论 TLR4拮抗剂对感染子宫收缩的保护作用可能与MyD88/NF-κB通道相关。     

一氧化氮对慢性缺氧高二氧化碳大鼠肺血管尾加压素Ⅱ的影舷

目的探讨一氧化氮/L-精氨酸(NO/L-Arg)系统和尾加压素Ⅱ(U Ⅱ)在大鼠慢性缺氧(O2)高二氧化碳(CO2)肺动脉高压病理过程的作用及关系.方法40只大鼠随机分成4组(每组各10只)正常对照组(A组)、慢性缺O2高CO2加生理盐水4周组(B组)、慢性缺O2高CO2加L-Arg脂质体4周组(C组)、慢性缺O2高CO2加N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)4周组(D组).免疫组化法和组织原位杂交法检测肺小动脉U Ⅱ和U Ⅱ mRNA、U Ⅱ受体(UT) mRNA的表达,并观察肺小动脉显微结构的变化.结果(1)肺动脉平均压(mPAP)、右心室(RV)和左心室+室间隔(LV+S)重量比值[RV/(LV+S)]B组高于A组(均P＜0.05);C组低于B组(均P＜0.01);D组两指标不仅高于A组(P＜0.01和＜0.05),且mPAP也高于B组(P＜0.01).(2)肺小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)和中膜厚度(PAMT)B组显著大于A组(P＜0.05);C组与B组的差异也有显著性(P＜0.01);而D组WA/TA也显著高于A组.(3)肺小动脉U Ⅱ、U Ⅱ mRNA、UT mRNA表达同A组比较,B组、D组各指标都显著增高(均P＜0.01);C组U Ⅱ、U Ⅱ mRNA的表达较B组明显下调(P＜0.01),同A组比较,其U Ⅱ表达下调但UT mRNA表达增加(均P＜0.01);D组U Ⅱ表达较B组低,而UT mRNA表达较B组高(均P＜0.01).结论慢性缺O2高CO2肺动脉高压的发生发展可能与U Ⅱ的异常表达增加有关,而外源性NO可能有抑制U Ⅱ的作用.     

足月妊娠PGF2α及其受体表达与引产成功率的关系

目的研究足月妊娠子宫平滑肌与蜕膜组织中前列腺素F2α(Prostaglandin F2α,PG F2α)的浓度、子宫平滑肌中PGF2α受体(PG F2α recepor,PTGFR)蛋白的表达与缩宫素引产成功率的关系。方法选择缩宫素引产成功与缩宫素引产失败的孕妇,于剖宫产术中取子宫平滑肌及子宫蜕膜组织。分别行ELISA法检测组织匀浆中PGF2α的浓度,Western blot检测子宫平滑肌中PTGFR蛋白的表达。结果ELISA法证明缩宫素引产成功组子宫平滑肌、子宫蜕膜组织中PGF2α浓度显著高于缩宫素引产失败组(P0.01);Western blot检测证明缩宫素引产成功组子宫平滑肌组织中PTGFR蛋白的表达也明显高于缩宫素引产失败组(P0.01)。结论子宫平滑肌与蜕膜组织中PGF2α浓度、子宫平滑肌组织中PTGFR蛋白的表达量与缩宫素引产成功率关系密切。     

地塞米松对哮喘大鼠肺组织ADM及基因表达的影响

目的： 探讨地塞米松(DEX)对哮喘大鼠肺组织肾上腺髓质素(ADM)及基因表达的影响。方法: 选择30只雄性SD大鼠随机分为3组，每组10只。采用卵蛋白皮下注射及雾化吸入制成大鼠哮喘模型；采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组肺组织ADM的mRNA表达水平，同时用免疫组化方法检测ADM表达水平，并在光镜下观察支气管壁厚度(WA/Pi)、支气管平滑肌厚度(平滑肌面积/Pi)及肺组织形态学改变。结果: 哮喘组(A组)ADM的mRNA和蛋白表达明显高于对照组(C组)(P<0.05)；治疗组（B组）ADM的mRNA和蛋白表达进一步增加，明显高于哮喘组(A组)(P<0.01)。结论: 地塞米松促进肺组织ADM表达升高，可能是其治疗哮喘的机制之一。     

S100B、AQP4和CX43表达紊乱对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障功能的影响

目的探讨S100B、AQP4和CX43表达紊乱对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障功能的影响。方法将大鼠分为糖尿病组[高脂乳灌胃2周+尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,38 mg/kg)]、抑郁症组(慢性不可预知性应激28 d)、糖尿病并发抑郁症组(联合以上两种方法建立)、对照组。造模结束后,旷场实验和Morris水迷宫实验观察大鼠行为学,ELISA检测血清S100B含量,免疫组化法检测海马血脑屏障AQP4和CX43的表达。结果与对照组比较,糖尿病组和抑郁症组大鼠自主活动次数和空间探索时间显著减少,逃避潜伏期延长(P0.05,P0.01);血清S100B含量明显增多(P0.01);海马血脑屏障功能性蛋白AQP4、CX43积分吸光度明显减少(P0.01)。与糖尿病组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠自主活动次数和空间探索时间减少,逃避潜伏期延长(P0.05,P0.01);血清S100B含量明显增多(P0.05);海马血脑屏障功能性蛋白AQP4、CX43积分吸光度明显减少(P0.05,P0.01)。结论 S100B、AQP4和CX43表达紊乱所致海马血脑屏障功能障碍可能是糖尿病并发抑郁症发生机制之一。     

瘦素受体、IRF-1和糖皮质激素受体-β在肥胖哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达

目的:观察体外培养肥胖哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)表达瘦素受体(OB-R)、干扰素调节因子-1(IRF-1)及糖皮质激素受体-β(GR-β)的情况,探讨肥胖与难治性哮喘的关系。方法:60只雄性SD大鼠随机分为四组,即正常体质量对照组(A组)、正常体质量哮喘组(B组)、肥胖对照组(C组)、肥胖哮喘组(D组),肥胖及哮喘模型建立后取各组大鼠气道,体外培养ASMC,反转录PCR(RT-PCR)测OB-R mRNA的表达,蛋白印迹法测定IRF-1及GR-β蛋白的表达。结果:OB-R mRNA的表达,B组、C组及D组较A组明显增加,D组较B组及C组明显增加;IRF-1和GR-β蛋白的表达,B组、C组及D组较A组明显增加,D组较B组及C组明显增加。结论:OB-R、IRF-1及GR-β在ASMC中表达的增加可能与肥胖哮喘发病及激素抵抗相关。     

碱性成纤维细胞生长因子诱导人间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在体外诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化中的作用,及其对MSCs增殖的影响。方法用含5-氮杂胞苷(5-aza)的培养基(A组)、含bFGF的培养基(B组)、含5-aza bFGF的培养基(C组)以及普通培养基(对照组)培养人骨髓MSCs。观察细胞形态的改变;免疫细胞化学法检测α-actin、cTnT和connexin-43的表达;RT-PCR法检测Nkx2·5、GATA-4和cTnT的mRNA水平;MTT法检测MSCs的增殖。结果A组和C组的部分细胞呈肌细胞样改变,表达蛋白α-actin,cTnT和connexin43;A组和C组的cTnT、Nkx2·5和GATA-4的mRNA水平明显高于对照组,B组的Nkx2·5和GATA-4的mRNA水平明显高于对照组;B组细胞增殖明显高于对照组,A组和C组细胞增殖明显低于对照组,但C组明显高于A组。结论bFGF能明显促进MSCs增殖,与5-aza合用能更好地诱导人MSCs向心肌样细胞分化。     

磷酸化信号转导和转录激活因子3(Y705)在子宫腺肌症中的表达及其临床意义

目的通过检测磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)(Y705)和血管内皮生长因子(VEGF)在正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜中的定位与表达,探讨p-STAT3(Y705)和VEGF在子宫腺肌症中发生发展中的作用。方法免疫组织化学SP法检测14例正常子宫内膜和14例子宫腺肌症在位内膜中p-STAT3(Y705)和VEGF的定位和表达情况;Real-time PCR检测正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜组织中STAT3 mRNA表达情况;Western blotting检测正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜组织中p-STAT3(Y705)、STAT3和VEGF蛋白的表达水平。结果 p-STAT3(Y705)主要在正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜腺上皮细胞核中表达,子宫腺肌症在位内膜蛋白表达高于正常子宫内膜(P0.05),正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜相应的增殖期和分泌期p-STAT3(Y705)的表达无显著性差异(P0.05)。正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜中,STAT3在mRNA和蛋白表达水平差异均无显著性(P0.05)。VEGF主要表达在腺上皮细胞中,子宫腺肌症在位内膜蛋白表达高于正常子宫内膜(P0.05),正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜相应的增殖期和分泌期VEGF的表达差异无显著性(P0.05)。结论 p-STAT3(Y705)促进血管生成对子宫腺肌症的发生发展有一定的作用。     

超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对体外培养人肝癌细胞Huh7的影响

目的:观察超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对体外培养人肝癌细胞Huh7的影响.方法:以超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡转染体外培养人肝癌Huh7细胞株.实验分5组:对照组(A组),miR-520c-3p mimics negative control+miR-132 mimics negative control+微泡造影剂+超声辐照(B组),miR-520c-3p mimics+微泡造影剂+超声辐照(C组),miR-132 mimic+微泡造影剂+超声辐照(D组),miR-520c-3p mimics+miR-132 mimics+微泡造影剂+超声辐照(E组).超声辐照条件:机械指数0.4,辐照参数2.0 W/cm2,连续辐照30 s,间隔60 s,共5次.采用实时荧光定量PCR检测miR-520c-3p,miR-132,磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)和转录辅助因子YAP mRNA表达,采用Western印迹检测GPC3和YAP蛋白表达,采用噻唑监比色法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡.结果:与A组、B组比较,C组、E组miR-520c-3p相对表达量升高(P＜0.05),而D组无明显改变(p＞0.05);D组、E组miR-132相对表达量升高(p＜0.05),而C组无明显改变(p＞0.05).与A组、B组比较,C组、E组GPC3蛋白相对表达量降低(P＜0.05),而其mRNA相对表达量无明显改变(P＞0.05).C组、D组、E组YAP蛋白以及其mRNA相对表达量均降低(P＜0.05).与A组、B组比较,C组、D组、E组细胞增殖率降低(P＜0.05),且E组降低最明显(p＜0.05);C组、D组、E组细胞凋亡率增加(P＜0.05),且E组凋亡最明显(p＜0.05).结论:超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡能显著抑制人肝癌Huh7细胞株增殖,并促进其凋亡,其机制可能与调节GPC3和YAP的表达有关.     

心脏收缩力调节对慢性心力衰竭兔心室肌电重构的影响

目的:观察心脏收缩力调节(cardiac contractility modulation, CCM)对慢性心力衰竭兔心室肌电重构的影响并探讨其可能的机制。方法:30只新西兰大白兔随机分为3组:假手术组、心衰组(采用升主动脉根部套扎法建立兔慢性心力衰竭模型)和心衰+CCM刺激组(模型制作成功后给予4周的CCM治疗)。电生理记录仪测定QTc和心室有效不应期(ventricular effective refrective period, VERP);采用RT-qPCR和Western blot检测心室肌Kv1.4、Kv4.3和缝隙连接蛋白43 (connexin 43, Cx43)的mRNA和蛋白的表达水平。结果:(1)实验第12周末,心衰兔QTc显著延长(P<0.05);实验第16周末,与心衰组相比,心衰+CCM组经4周CCM刺激后QTc显著缩短(P<0.05)。实验第16周末,与假手术组相比,心衰组、心衰+CCM组VERP显著延长(P<0.05);与心衰组相比,CCM可缩短心衰模型兔的VERP(P<0.05)。(2)与假手术组相比,心衰组心肌组织中Kv1.4、Kv4.3和Cx43的mRNA水平显著下降(P<0.05)。与心衰组相比,CCM显著上调心衰兔心肌组织中Kv1.4、Kv4.3和Cx43的mRNA水平(P<0.05)。(3)与假手术组相比,心衰组心肌组织中Kv1.4、Kv4.3和Cx43的蛋白表达显著下降(P<0.05)。与心衰组相比,CCM可上调心衰兔心肌组织中Kv1.4、Kv4.3和Cx43的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:心脏收缩力调节可改善慢性心力衰竭兔心室肌电重构,其潜在机制可能与Kv1.4、Kv4.3和Cx43的mRNA和蛋白表达上调有关。