颞叶癫(癎)大鼠海马中miRNA表达谱的检测和分析

目的 探讨颞叶癫(癎)大鼠海马组织中miRNA分子表达谱的差异,为进一步研究相关miRNA在颞叶癫(癎)发病机制中的作用打下基础.方法 对同一父系和母系的子代大鼠,利用氯化锂-匹罗卡品化学诱导方法制备慢性颞叶癫(癎)大鼠模型.分别提取1只正常和3只颞叶癫(癎)大鼠海马组织的miRNA,采用高通量的miRNA微阵列芯片杂交,筛选颞叶癫(癎)海马组织中差异表达的内源性miRNA.结果 在大鼠海马组织中共检测到125个miRNA基因.与正常大鼠相比,颞叶癫(癎)大鼠海马组织中差异表达的miRNA有23个,其中有5个miRNA下调,18个miRNA上调.结论 与正常大鼠相比,颞叶癫(癎)大鼠海马组织中存在差异表达的miRNA分子,差异表达的miRNA分子可能参与癫(癎)的发病过程,具有潜在的研究价值.     

普瑞巴林对慢性颞叶癫癎大鼠海马凋亡调控基因的影响

目的通过观察普瑞巴林对匹罗卡品慢性癫癎大鼠海马区Bcl-2和Bax表达的影响,探讨普瑞巴林治疗癫癎的药理学机制及对大鼠海马神经元的抗凋亡作用。方法采用氯化锂-匹罗卡品化学诱导方法建立慢性颞叶癫癎模型。经腹腔注射普瑞巴林40mg(/kg·d)连续治疗3周,免疫组织化学染色和Western blotting法检测不同处理组大鼠海马区Bcl-2和Bax表达变化。结果与生理盐水对照组比较,模型组大鼠海马区Bcl-2和Bax表达水平显著升高(均P=0.000);与模型组比较,普瑞巴林治疗组大鼠海马区Bcl-2表达水平升高、Bax表达水平降低,组间差异具有统计学意义(均P=0.000)。结论新型抗癫癎药物普瑞巴林可通过降低慢性颞叶癫癎大鼠海马区Bax表达、上调Bcl-2表达而抑制细胞凋亡,发挥神经元保护作用。     

颞叶癫(癎)大鼠海马轴突导向分子Sema3F及其受体Np2表达的变化

目的研究颞叶癫大鼠海马轴突导向分子Sema3F及其受体Np2表达的变化。方法给SD大鼠腹腔注射匹罗卡品、氯化锂制作颞叶癫模型。用免疫组化法和原位杂交技术对致后不同时间点大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回的Sema3F mRNA、Np2 mRNA和蛋白表达进行检测,并与正常对照组比较。结果颞叶癫大鼠致后7d、15d,海马CA1区、CA3区Sema3F mRNA、Np2 mRNA和蛋白的表达明显低于正常对照组(P<0.05~0.01),致后30d、60d表达与正常对照组差异无统计学意义;而齿状回Sema3F mRNA、Np2 mRNA和蛋白的表达与正常对照组的差异无统计学意义。结论颞叶癫大鼠海马CA1区、CA3区Se-ma3F、Np2表达在致后早期明显下调,而在慢性期恢复正常。     

颞叶癫(癎)大鼠海马区NCX3 mRNA和蛋白的表达变化

目的:动态观察钠-钙交换体(NCX)mRNA和蛋白在氯化锂-匹罗卡品致(癎)模型大鼠海马CA1、CA3及齿状回区表达的变化,探讨其在癫(癎)发生发展中的作用.方法:用氯化锂-匹罗卡品制备癫(癎)动物模型;应用原位杂交和免疫组化技术检测各时间点NCX3 mRNA和蛋白的表达.结果:急性期(6～24 h)海马各区NCX3 mRNA表达均随时间的延长逐渐减少;进入静止期各区表达趋向回升,慢性反复自发发作期(30、60 d)各区表达又出现不同程度的两次下调.除致(癎)后6 h大鼠海马各区的NCX3蛋白表达无明显变化外,NCX3蛋白变化趋势与NCX3 mRNA基本一致.结论:NCX3表达下调可能通过增加神经元钙超载,改变海马神经元的兴奋性,促使癫(癎)发生.     

颞叶癫癎大鼠海马TrkB mRNA及其蛋白表达的动态变化

目的探讨颞叶癫瘸发作大鼠海马TrkB mRNA及其蛋白表达的动态变化特征.方法建立匹罗卡品(PILO)颞叶癫癎大鼠模型,应用原位杂交及免疫组织化学方法分别检测致瘸大鼠海马齿状回、CA3区及CAi区TrkB mRNA及其蛋白质表达的变化.结果 PILO致瘸后3～6 h,海马齿状回颗粒细胞层、CA1、CA3区锥体细胞层TrkBmRNA表达显著增高(P＜0.01),稍后TrkB蛋白表达也随之增高.第7～30d,TrkBmRNA及其蛋白在齿状回、CA3区呈现第二次表达增强.结论在癫癎发作早期,TrkB表达增强,提示其可能参与急性癜癎状态的发生;后期表达增强则可能参与了海马的可塑性反应而与慢性自发性发作形成有关.     

颞叶癫大鼠海马轴突导向分子Sema3F及其受体Np2表达的变化

目的 研究颞叶癫(癎)大鼠海马轴突导向分子Sema3F及其受体Np2表达的变化.方法 给SD大鼠腹腔注射匹罗卡品、氯化锂制作颞叶癫(癎)模型.用免疫组化法和原位杂交技术对致(癎)后不同时间点大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回的Sema3F mRNA、Np2 mRNA和蛋白表达进行检测,并与正常对照组比较.结果 颞叶癫(癎)大鼠致(癎)后7 d、15 d,海马CA1区、CA3区Sema3F mRNA、Np2 mRNA和蛋白的表达明显低于正常对照组(P＜0.05～0.01), 致(癎)后30 d、60 d表达与正常对照组差异无统计学意义;而齿状回Sema3F mRNA、Np2 mRNA和蛋白的表达与正常对照组的差异无统计学意义.结论 颞叶癫(癎)大鼠海马CA1区、CA3区Sema3F、Np2表达在致(癎)后早期明显下调,而在慢性期恢复正常.     

颞叶癫痫大鼠海马区NR2B／PSD-95的动态表达变化

目的:观察N-甲基-D-天冬氨酸受体2亚基B(NR2B)和突触后致密物95(PSD-95)蛋白在锂-匹罗卡品致大鼠海马表达的动态变化,探讨其在颞叶癫癎发生、发展中的作用。方法:采用锂-匹罗卡品颞叶癫癎大鼠模型,用免疫组织化学法观察不同时间点大鼠海马CA1、CA3、DG区NR2B和PSD-95蛋白表达。结果:NR2B和PSD-95蛋白在大鼠海马分布广泛,表达丰富;大鼠腹腔注射锂-匹罗卡品后,NR2B和PSD-95蛋白在海马各区表达逐渐减少,24h降至低谷,与对照组比较差异有显著意义(P<0.01);此后逐渐回升,但仍低于对照组;30d在海马CA1、CA3区表达再次降低,与对照组比较有显著意义(P<0.05)。结论:NR2B和PSD-95蛋白表达下调可能分别参与颞叶癫癎急性期和慢性自发发作期的保护性机制。     

人参皂甙Rd对颞叶癫大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达的影响

目的研究人参皂甙Rd对氯化锂-匹罗卡品点燃颞叶癫(temporal lobe epilepsy,TLE)大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达的干预作用。方法建立氯化锂-匹罗卡品点燃颞叶癫大鼠模型,将30只造模成功的颞叶癫大鼠随机分为TLE组(生理盐水10ml/kg腹腔注射,15只)及GSRd干预组(人参皂甙Rd2mg/kg腹腔注射,15只),另选15只大鼠作为正常对照组;采用Morris水迷宫及免疫组化染色分别检测各组大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达水平。结果与正常对照组比较,TLE组大鼠学习记忆能力下降,海马5-HT表达明显减少(P0.05);与TLE组比较,GSRd干预组可显著提高大鼠学习记忆能力及海马5-HT的表达水平(P0.05)。结论人参皂甙Rd可能通过增加海马5-HT的表达来提高颞叶癫大鼠学习记忆能力。     

癫癎大鼠海马区囊泡锚定蛋白Ⅰ的表达及突触超微结构的改变

目的观察大鼠癫癎发作后海马区囊泡锚定蛋白Ⅰ(synapsinⅠ)的表达和突触超微结构的变化,探讨突触功能、形态可塑性与癫癎的关系.方法　用锂-匹罗卡品制作癫癎大鼠模型,应用免疫组化法观察致癎后急性期、静止期和慢性期synapsinⅠ在海马的表达;应用电镜和图像处理软件观察海马突触超微结构.结果癫癎组大鼠海马区synapsinⅠ的表达于致癎后3 h减弱;6 h和12 h达高峰,与对照组比较差异有显著性(P<0.05～0.01);24 h恢复正常并持续到60 d.致癎后3 h突触后致密物质厚度(PSD)和突触数密度(Nv)无显著改变;6 h PSD增高,Nv降低;7 d、30 d PSD恢复正常,Nv增高.结论synapsinⅠ的高表达和PSD的增高可能与急性期癫癎持续状态的维持有关;synapsinⅠ的正常表达和PSD的正常可能是静止期内癫癎不发作的原因之一;慢性期Nv的增加是自发性发作出现的物质基础.     

颞叶癫大鼠海马区NCX3 mRNA和蛋白的表达变化

目的:动态观察钠-钙交换体(NCX)mRNA和蛋白在氯化锂-匹罗卡品致模型大鼠海马CA1、CA3及齿状回区表达的变化,探讨其在癫发生发展中的作用。方法:用氯化锂-匹罗卡品制备癫动物模型;应用原位杂交和免疫组化技术检测各时间点NCX3mRNA和蛋白的表达。结果:急性期(6～24h)海马各区NCX3mRNA表达均随时间的延长逐渐减少;进入静止期各区表达趋向回升,慢性反复自发发作期(30、60d)各区表达又出现不同程度的两次下调。除致后6h大鼠海马各区的NCX3蛋白表达无明显变化外,NCX3蛋白变化趋势与NCX3mRNA基本一致。结论:NCX3表达下调可能通过增加神经元钙超载,改变海马神经元的兴奋性,促使癫发生。     

发育期大鼠内侧颞叶癫痫模型丙戊酸治疗前后的蛋白质组学研究

目的 研究丙戊酸(VPA)对发育期大鼠内侧颞叶癫痫(MTLE)模型海马蛋白质表达谱的影响,寻求与VPA抗癫痫作用相关的蛋白质以及探讨VPA在MTLE发病早期发挥抗癫痫作用的机制.方法 建立氯化锂-匹罗卡品诱导的发育期大鼠MTLE模型,采用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离海马总蛋白,PDQuest软件识别差异表达蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定.结果 建立了VPA治疗前后的MTLE模型大鼠海马蛋白质的2-DE图谱.质谱鉴定出9个差异表达的蛋白质,其中4个在VPA治疗后表达上调;5个下调.结论 本实验成功建立了发育期大鼠MTLE模型VPA处理前后的海马蛋白质2-DE图谱;β-synuclein、Neurogranin等差异表达蛋白可能与VPA在MTLE发病早期发挥抗癫痫作用的机制相关.     

Upregulation of dysbindin in temporal lobe epileptic foci of human and experimental animals

The gene encoding dystrobrevin-binding-protein-1 (dysbindin) is expressed in many areas of the central nervous system and plays a role in intracellular vesicle trafficking, synaptic vesicle trafficking, and neurotransmitter release. At a cellular level, dysbindin is thought to mediate presynaptic glutamatergic transmission. Using Western blotting and immunofluorescence, we investigated dysbindin expression in brain tissues of the patients with temporal lobe epilepsy (TLE) and rats with TLE (lithium chloride pilocarpine model) to explore its possible role in epileptogenesis. Twenty-five samples of temporal neocortex from patients undergoing surgery for drug-refractory TLE epilepsy and 10 histologically normal temporal lobes tissues from control subjects were used in our study. We also examined dysbindin expression in the hippocampus and adjacent cortex from experimental Sprague-Dawley rats. Dysbindin was expressed in the cytoplasm of neurons from epileptic specimens, and levels of dysbindin proteins were significantly increased in patients with TLE. Dysbindin was also expressed in the neurons of the hippocampus and adjacent cortex from experimental and control rats. Western blotting of rat brain tissue showed that dysbindin was upregulated gradually from 6 h after kindling. Maximal expression was seen around 2 months in chronic epileptic phase. These results demonstrated that the increased expression of dysbindin might play a role in the pathogenesis of drug-refractory TLE.     

Alterations in cerebral metabolomics and proteomic expression during sepsis

The cause of brain dysfunction during sepsis and septic encephalopathy is still under ongoing research. Sepsis induced changes in cerebral protein expression may play a significant role in the understanding of septic encephalopathy. The aim of the present study was to explore cerebral proteome alterations in septic rats. Fifty-six male Wistar rats were randomly assigned to a sepsis group (coecal ligature and puncture, CLP) or a control group (sham). Surviving rats were killed 24 or 48 hours after surgery and whole-brain lysates were used for two-dimensional gel electrophoresis and subsequent protein identification. Differentially expressed proteins were identified by mass spectrometry. Using the Ingenuity Pathways Analysis (IPA) tool, the relationship and interaction between the identified proteins was analyzed. Mortality was 53 % in septic rats. No rat of the control group was lost. More than 1,100 spots per gel were discriminated of which 29 different proteins were significantly (2-fold, P<0.01) changed: 24 proteins down-regulated after 24 hours; two proteins up-regulated and three down-regulated after 48 hours. IPA identified 11 of 35 differentially regulated proteins allocating them to an existing inflammatory pathway. In the analysis of septic rat brains, multiple differentially expressed proteins associated with metabolism, signaling, and cell stress can be identified via proteome analysis, that may help to understand the development of septic encephalopathy.     

塞来昔布对慢性颞叶癫癎大鼠海马核因子-κBp65和P-糖蛋白表达的影响

目的探讨环氧合酶-2抑制药塞来昔布对慢性颞叶癫癎大鼠海马核因子-κBp65和P-糖蛋白表达的影响,以及核因子-κBp65和P-糖蛋白与颞叶癫癎发病机制的关系,以为环氧合酶-2抑制药用于抗癫癎药物辅助治疗提供实验依据。方法采用大鼠海马CA3区微量注射海人酸的方法制备颞叶癫癎动物模型,免疫组织化学染色和Western blotting法观察塞来昔布治疗后大鼠海马核因子-κBp65和P-糖蛋白表达变化。结果与对照组相比较,颞叶癫癎大鼠海马核因子-κBp65、P-糖蛋白表达水平,以及核因子-κBp65核移位现象明显增加(均P<0.05);经塞来昔布治疗后,海马组织中核因子-κBp65、P-糖蛋白表达水平及核因子-κBp65核移位现象显著改善,与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论核因子-κBp65和P-糖蛋白在颞叶癫癎慢性期表达上调、核因子-κBp65核移位现象增加,有可能是难治性癫癎发生与发展的分子生物学机制之一。环氧合酶-2抑制药塞来昔布通过降低慢性颞叶癫癎大鼠海马CA3区核因子-κBp65和P-糖蛋白表达水平,抑制核因子-κBp65核移位,最终降低炎性反应,逆转多药耐药而发挥抗癫癎作用。     

α-细辛醚治疗前后海人酸致痫大鼠海马差异表达蛋白质的筛选研究

目的应用蛋白质芯片技术筛选海人酸致痴大鼠于仅．细辛醚治疗前后海马区差异表达蛋白质,寻找α-细辛醚治疗癫痫的药物作用靶点。方法健康成年SD大鼠20只,随机分为模型组和α-细辛醚组,经腹腔注射海人酸制备癫痼模型,选择Racine发作标准达Ⅳ～Ⅴ级的大鼠作为观察动物,BCA法分别测量α-细辛醚治疗前后海马组织差异表达的蛋白质水平,以INR≥1．30表示蛋白质表达水平上调、INR≤0．77表示蛋白质表达水平下调。结果共发现35种差异表达的蛋白质,与模型组大鼠相比,α-细辛醚组大鼠海马组织共有5种高表达蛋白质、30种低表达蛋白质,其中大多数蛋白质参与了机体的细胞信号转导、细胞周期调控、基因转录及调控、细胞凋亡和神经生物学等重要生物功能。结论α-细辛醚可调节由海人酸诱发的SD大鼠海马组织中多种蛋白质的表达变化,提示α-细辛醚具有多个药物治疗靶点。