稳心颗粒调控内质网应激途径抑制心梗大鼠心肌凋亡的机制

目的 探讨稳心颗粒对心梗大鼠内质网应激凋亡通路的影响及分子机制。方法 结扎左冠状动脉前降支建立心梗大鼠模型,术后随机分为假手术组,模型组,稳心颗粒低剂量组、高剂量组及倍他乐克组,每组10只,假手术组与模型组给予10 mL?kg^-1?d^-1去离子水灌胃,稳心颗粒低剂量及高剂量组分别给予1.35,2.7 g?kg^-1?d^-1水溶液灌胃,倍他乐克组给予2.25 mg?kg^-1?d^-1水溶液灌胃,治疗2周后,采用导管法检测心脏血流动力学,之后处死大鼠取材,苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠心肌组织病理形态的变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）,蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）,磷酸化激活的PERK（p-PERK）,活化转录因子6（ATF6）,细胞核转录因子X盒结合蛋白（XBP1）和凋亡蛋白C/EBP同源蛋白（CHOP）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达变化,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡。结果 与假手术组比较,模型组的左室内压最大上升速率（+dp/dt_max）,下降速率（-dp/dt_max）,左室收缩压（LVSP）明显降低（P<0.05）,左室终末舒张压（LVEDP）明显上升（P<0.05）,内质网应激蛋白GRP78,p-PERK,PERK,ATF6及XBP1表达均明显升高（P<0.05,P<0.01）,凋亡蛋白CHOP和Bax表达显著增高（P<0.01）,Bcl-2蛋白及Bcl-2/Bax显著降低（P<0.01）,凋亡指数显著增加（P<0.01）;与模型组比较,稳心颗粒低剂量组-dp/dt_max及Bcl-2蛋白表达明显增加（P<0.05）,心肌细胞凋亡指数显著降低（P<0.01）;稳心颗粒高剂量组+dp/dt_max与-dp/dt_max明显增加（P<0.05,P<0.01）,内质网应激通路蛋白GRP78,p-PERK,PERK,ATF6,XBP1及凋亡相关蛋白CHOP,Bax表达均显著降低（P<0.01）,Bcl-2蛋白及Bcl-2/Bax显著增加（P<0.01）,凋亡指数显著降低（P<0.01）。结论 稳心颗粒可抑制过度的内质网应激,减少心肌细胞凋亡,进而改善心梗大鼠心脏血流动力学,其分子机制与下调GRP78,PERK,p-PERK,ATF6,XBP1表达,减少CHOP,Bax表达,增加Bcl-2表达有关。     

双参宁心胶囊对冠状动脉微循环障碍大鼠心脏功能及血流动力学的影响

目的 研究益气活血中药双参宁心胶囊对冠状动脉微循环障碍大鼠心脏血流动力学及心功能的影响。方法 大鼠随机分为6组,分别为假手术组,模型组,尼可地尔组（5 mg·kg^-1）,双参宁心胶囊高、中、低剂量（180,90,45 mg·kg^-1）组。动物按分组先给予相应药物7 d,末次给药后2 h进行模型制备。采用左心室注射内注射栓塞微球（40~120 μm,约1 000个微球）方法建立大鼠冠脉微循环障碍模型。造模术后24 h后超声心动图观察左室舒张末期内径（LVIDd）,左室收缩末期内径（LVIDs）,左室舒张末期容积（LVEDV）,左室收缩末期容积（LVESV）,每搏输出量（SV）,心输出量（CO）,左室射血分数（EF）,左室缩短率（FS）;心导管技术测定大鼠动脉收缩压（SBP）,舒张压（DBP）,左室峰压（LVSP）,左室舒张末压（LVEDP）,左室内压最大上升速率（LV+dp/dt_max）,左室内压最大下降速率（LV-dp/dt_max）,计算平均动脉（MAP）,体表标准Ⅱ导心电图计算心率（HR）;生化分析法检测肌酸激酶（CK）,肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）活性;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清心肌肌钙蛋白T（cTnT）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠心肌组半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）,B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）及Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达;2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察心肌梗死面积;苏木素-伊红（HE）染色观察心肌形态学改变。结果 与假手术组比较,模型组SV,CO,EF,FS显著降低（P<0.01）,LVIDs,LVEDV显著增加（P<0.01）;与模型组比较,双参宁心胶囊各剂量组可以增加EF（P<0.05,P<0.01）和FS（P<0.01）;180,90 mg·kg^-1剂量组明显降低LVIDs,LVESV,增加LVEDV,SV和CO（P<0.05,P<0.01）。与假手术组比较,模型组SBP,DBP,MAP,LVSP,LV+dp/dt_max及LV-dp/dt_max均显著降低（P<0.01）,HR差异无统计学意义。双参宁心胶囊各剂量组对大鼠血流动力学具有一定程度改善,较模型组增加大鼠SBP,DBP,MAP,LVSP,LV+dp/dt_max,LV-dp/dt_max及HR（P<0.05,P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠血清CK,LDH,CK-MB及cTnT明显升高（P<0.01）,与模型组比较,双参宁心胶囊有明显降低动物血清CK,LDH,CK-MB及cTnT的作用（P<0.05,P<0.01）。与假手术组比较,模型组大鼠心肌Caspase-3蛋白表达显著升高（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较,双参宁心胶囊低剂量组心肌Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05）;与模型组比较,双参宁心胶囊高剂量组显著增加大鼠心肌Bcl-2表达（P<0.01）。心肌TTC染色显示,与模型组比较,双参宁心胶囊各剂量组均能显著减少心肌梗死面积（P<0.01）。HE病理结果显示,双参宁心胶囊各剂量组心肌组织病理变化与模型组比较有不同程度的减轻。结论 益气活血中药双参宁心胶囊可以明显增加微球栓塞导致的冠脉微循环障碍的心脏功能,改善心脏血流动力学指标,减少心肌梗死面积,降低CK,LDH,CK-MB及cTnT等心肌损伤标志物水平,其作用机制与抑制心肌细胞凋亡起到保护心肌的作用有关。     

稳心颗粒对心肌梗死大鼠缝隙连接蛋白43和内质网应激通路基因表达的影响

目的 探讨稳心颗粒调节缝隙连接蛋白43（CX43）和内质网应激通路基因表达的心脏保护机制。方法 建立心肌梗死大鼠模型,术后第2天根据心电图筛选入组,随机分为模型组、稳心颗粒低剂量组、稳心颗粒高剂量组、美托洛尔组,另设平行操作不结扎的假手术组,药物治疗2周。腹腔注射异丙肾上腺素记录心律失常发生率;心脏血流动力学检测各组大鼠左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）、左心室内压最大上升速率（+dp/dt_max）、左心室内压最大下降速率（–dp/dt_max）;苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠心脏病理改变;Masson染色检测心肌梗死边缘区胶原容积分数;实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测各组大鼠CX43、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、肌醇需求激酶1（IRE1）、活化转录因子6（ATF6）、X盒结合蛋白1（XBP1）mRNA的相对表达量;蛋白免疫印迹法检测CX43的表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠心律失常发生率明显上升（P<0.01）,LVSP、+dp/dt_max、–dp/dt_max均显著降低（P<0.01）,LVEDP显著增高（P<0.01）,心肌组织病理性改变明显,心肌胶原容积分数明显增加（P<0.01）,CX43 mRNA相对表达量明显下调（P<0.01）,IRE1 mRNA相对表达量增高（P<0.05）,GRP78、ATF6、XBP1 mRNA相对表达量明显增高（P<0.01）,CX43蛋白表达明显降低（P<0.01）;稳心颗粒及美托洛尔治疗2周后,给药组大鼠心律失常发生率下降（P<0.05）,LVSP增加（P<0.05）,+dp/dt_max、–dp/dt_max显著增加（P<0.01）,心肌组织病理性变化显著改善,心肌胶原容积分数明显降低（P<0.01）,CX43 mRNA表达量上调（P<0.05）,GRP78、IRE1、ATF6、XBP1 mRNA表达量下调（P<0.05）,CX43蛋白表达升高（P<0.05）。结论 稳心颗粒可调节心肌梗死大鼠CX43和内质网应激通路基因表达,进而发挥心脏保护作用。     

淫羊藿苷通过Akt /GSK3β/CDK通路抑制CLC5肝癌细胞增殖

目的 研究淫羊藿苷对肝细胞癌细胞CLC5增殖能力的影响及其可能的机制。方法 通过网络药理学筛选淫羊藿苷作用靶点，构建靶点网络及构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，预测淫羊藿苷可能作用靶点及相关通路；使用梯度浓度（0、6.25、12.5、25、50 μmol·L^-1）淫羊藿苷刺激肝细胞癌CLC5细胞，通过细胞活性及增殖检测（CCK-8）法检测淫羊藿苷对CLC5细胞活力的影响；使用不同浓度（0、25、50 μmol·L^-1）淫羊藿苷处理肝细胞癌CLC5细胞，通过Edu-488及克隆形成实验（Clone Forming）检测淫羊藿苷对CLC5细胞增殖的影响；使用不同浓度淫羊藿苷分别刺激CLC5细胞不同时间，通过蛋白免疫印迹法（Western blot）验证淫羊藿苷对蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶3β（GSK3β）/细胞周期依赖激酶（CDK）通路蛋白表达水平的影响情况。结果 网络药理学分析发现淫羊藿苷作用于肝细胞癌的机制与阻滞细胞周期抑制肿瘤细胞增殖有关；CCK-8法结果表明，与空白组比较，淫羊藿苷组CLC5细胞活力显著下降（P<0.01），呈时间-浓度依赖性；与空白组比较，淫羊藿苷组Edu-488阳性率及克隆形成菌落数量明显减少（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，淫羊藿苷组p-Akt、p-GSK3β、CDK4、细胞周期蛋白D₁（CyclinD₁）的蛋白表达水平明显下降（P<0.05，P<0.01）。结论 淫羊藿苷可抑制阻滞肝细胞癌细胞周期，抑制肝细胞癌增殖，作用机制可能与抑制Akt/GSK3β/CDK通路有关。     

红景天苷对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 红景天苷是从红景天的根茎部中提取得到的，是红景天中含量最高的天然活性化合物。该实验旨在研究红景天苷对人源性肝癌细胞（HepG2细胞）增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 选取未作任何处理的HepG2细胞作为空白组，以终浓度为20、40、80 μmol·L^-1红景天苷处理的HepG2细胞作为红景天苷组。采用多功能细胞分析仪测定红景天苷对HepG2细胞增殖的影响，划痕实验测定红景天苷对HepG2细胞迁移能力的影响，Transwell小室实验测定红景天苷对HepG2细胞侵袭能力的影响，倒置显微镜观察红景天苷对HepG2细胞形态的影响，透射电镜观察红景天苷对HepG2细胞中线粒体的影响，流式细胞术分析红景天苷对HepG2细胞凋亡及周期分布的影响，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定红景天苷对HepG2细胞相关凋亡基因的影响，蛋白免疫印迹法测定红景天苷对HepG2细胞相关迁移、侵袭及凋亡蛋白的影响。结果 与空白组比较，红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）细胞指数均明显下降（P<0.05），愈合面积均明显增加（P<0.05），且呈时间和浓度依赖性；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）中能够穿过Matrigel基质胶的HepG2细胞数量呈浓度依赖性减少；红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）总凋亡率呈浓度依赖性升高，且阻滞细胞于G₂/M期（P<0.05）；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin）表达呈浓度依赖性升高（P<0.05），神经钙黏附蛋白（N-cadherin）表达呈浓度依赖性降低（P<0.05）。红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）胱天蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Caspase-3蛋白及胱天蛋白酶-9（Caspase-9）蛋白表达均呈浓度依赖性升高（P<0.05），肌动蛋白结合蛋白（Girdin）及Bcl-2表达均呈浓度依赖性降低（P<0.05）。结论 红景天苷对HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭均具有抑制作用，且通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。表明红景天苷可作为一种潜在的肝癌化疗候选药物。     

寿胎丸通过调控Nrf2信号通路减轻人绒毛膜滋养层细胞的氧化损伤治疗复发性流产

目的 研究寿胎丸含药血清通过核因子E₂相关因子2（Nrf2）信号通路对过氧化氢（H₂O₂）损伤的人绒毛膜滋养层细胞（HTR-8/Svneo）的保护作用,并阐明其可能的机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度的H₂O₂溶液（25、50、100、200、400 μmol·L^-1）对HTR-8/Svneo增殖的抑制作用,CCK-8法筛选含药血清的最佳浓度。将细胞分为空白组、模型组、地屈孕酮组、寿胎丸组,CCK-8法检测含药血清对H₂O₂诱导的HTR-8/Svneo细胞增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞内活性氧（ROS）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核Nrf2、血红素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO1）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）蛋白表达;细胞免疫荧光检测Nrf2、Bcl-2的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Nrf2、Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA的表达。结果 CCK-8法筛选H₂O₂最佳造模浓度为50 μmol·L^-1,含药血清的最佳体积分数为10%。与空白组比较,模型组细胞的增殖活力显著降低（P<0.01）,细胞内ROS含量显著升高（P<0.01）,Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）,Caspase-3、Bax蛋白表达显著上升（P<0.01）,Nrf2 mRNA表达显著降低（P<0.01）,Caspase-3、Bax mRNA的表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,寿胎丸组细胞的增殖活力显著上升（P<0.01）,细胞内ROS含量显著降低（P<0.01）,Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白表达明显上升（P<0.05,P<0.01）,Caspase-3、Bax蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）,Nrf2 mRNA表达明显升高（P<0.05）,Caspase-3、Bax mRNA的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 寿胎丸含药血清可以通过激活Nrf2信号通路来抑制H₂O₂诱导的细胞凋亡,对人绒毛膜滋养层细胞具有一定的保护作用。     

人参皂苷Rg1对大鼠坐骨神经冷冻保存后SCs活性及异体移植后神经再生的影响

目的 观察人参皂苷Rg₁（G-Rg₁）对冷冻保存大鼠坐骨神经施万细胞（SCs）生物学活性影响，探讨G-Rg₁减轻冷冻保存大鼠坐骨神经SCs损伤的可行性。方法 取SD大鼠双侧坐骨神经，随机分为7组：新鲜组、空白组、G-Rg₁组（1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5、1×10^-4、1×10^-3 mol·L^-1 G-Rg₁），除新鲜组神经外，将其余各组神经依次置于含0、1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5、1×10^-4、1×10^-3 mol·L^-1 G-Rg₁的冷冻保存液中液氮保存4周。原位末端标记法（TUNEL）/S100检测各组神经SCs凋亡，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测胱天蛋白酶（Caspase）-9、Caspase-3和主要组织相容性复合体（MHC）-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达。将新鲜组和液氮保存4周的6组神经，置于37 ℃、5% CO₂培养箱中培养7 d，Western blot检测胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、神经生长因子（NGF）表达。用液氮保存4周的空白组和1×10^-6、1×10^-5、1×10^-4 mol·L^-1 G-Rg₁组坐骨神经，同种异体移植修复Wistar大鼠坐骨神经10 mm缺损（空白移植组，1×10^-6、1×10^-5、1×10^-4 mol·L^-1 G-Rg₁移植组），同时设新鲜坐骨神经同种异体移植、同系移植对照组。移植术后16周，电生理检测肌肉复合动作电位（CMAP）和神经传导速度（NCV），神经丝（NF）-200免疫荧光单染、透射电镜和甲苯胺蓝染色分析再生神经组织学。结果 与新鲜组比较，空白组和G-Rg₁各浓度组Caspase-9、Caspase-3表达、SCs凋亡明显升高（P<0.05，P<0.01），GDNF、NGF表达及MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达显著降低（P<0.01）。与空白组比较，1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5、1×10^-4 mol·L^-1 G-Rg₁组Caspase-9、Caspase-3表达显著降低（P<0.01）；1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5、1×10^-4 mol·L^-1 G-Rg₁组SCs凋亡降低（P<0.05，P<0.01），1×10^-3 mol·L^-1组升高（P<0.05）；1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5、1×10^-4 mol·L^-1 G-Rg₁组GDNF、NGF表达升高（P<0.05，P<0.01），1×10^-3 mol·L^-1组降低（P<0.01）；G-Rg₁各浓度组MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达差异无统计学意义。与1×10^-7、1×10^-3 mol·L^-1 G-Rg₁组比较，1×10^-6、1×10^-5、1×10^-4 mol·L^-1组Caspase-3表达、SCs凋亡降低（P<0.05，P<0.01），GDNF、NGF表达升高（P<0.05，P<0.01），MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达差异无统计学意义。移植术后16周，与同系移植组比较，空白移植组和G-Rg₁移植组各组CMAP、NCV、髓鞘厚度、有髓神经纤维数显著降低（P<0.01），1×10^-6、1×10^-4 mol·L^-1 G-Rg₁移植组NF200降低（P<0.01）；与同异移植组比较，空白移植组和G-Rg₁移植各组CMAP、NCV、NF200、髓鞘厚度、有髓神经纤维数升高（P<0.05，P<0.01）；与空白移植组比较，G-Rg₁移植各组CMAP、NF200、髓鞘厚度、有髓神经纤维数升高（P<0.05，P<0.01）；G-Rg₁移植各组间，1×10^-5 mol·L^-1移植组各项指标优于1×10^-4、1×10^-6 mol·L^-1移植组（P<0.05）。结论 一定浓度的G-Rg₁能维持冷冻保存的大鼠坐骨神经SCs生物活性，减轻神经冷冻保存损伤，异体移植后能促进受者神经再生。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨白头翁皂苷A对人伯基特淋巴瘤（BL）细胞Raji细胞增殖、凋亡及相关通路蛋白表达的影响。方法 以人BL细胞Raji细胞为研究对象，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞增殖情况，并计算出24、48、72 h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为19.77、18.31、16.70 μmol·L^-1。后续相关实验根据白头翁皂苷A作用Raji细胞72 h IC₅₀，选用白头翁皂苷A 8、16、32 μmol·L^-1开展实验。用0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A作用于Raji细胞24、48、72 h，CCK-8法检测细胞生长曲线吸光度A。检测经0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A处理Raji细胞24 h后Raji细胞中胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活性。流式细胞仪检测不同浓度白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测0、8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h，Raji细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）、活化的Caspase-3（cleaved Caspase-3）凋亡蛋白表达情况，检测非受体型酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）、信号转导及转录激活因子3（STAT3）、磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况。结果 与空白组比较，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组细胞增殖受到抑制，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化（P<0.01），细胞凋亡明显增加（P<0.05，P<0.01），细胞于有丝分裂准备期（G₂）期阻滞明显增加（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，8、16、32 μmol·L^-1白头翁皂苷A组Raji细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01），Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加（P<0.01），JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变，p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 白头翁皂苷A可以抑制人BL细胞Raji细胞的增殖并促进其凋亡，其作用机制可能与白头翁皂苷A调控JAK2/STAT3信号通路有关。     

小檗碱对DHF大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度的影响

目的:观察小檗碱(Ber)对舒张性心力衰竭(diastole heart failure,DHF)大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度[Ca²⁺]_i的影响。方法:Wistar大鼠腹主动脉缩窄法建立DHF模型;术后4周,模型大鼠随机分为DHF模型组,Ber高、中、低剂量组(63,42,21mg·kg^-1.d^-1)4组(n=10),另有假手术组10只。连续给药4周后,应用十六导生理记录仪测定血流动力学指标;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)扫描用Fluo-3AM负载好的心肌细胞内的荧光强度(FI)来表示[Ca²⁺]_i。结果:模型组与假手术组比,左心室收缩压(LVSP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_max)无显著变化,左心室舒张末期内压(LVEDP)显著升高(P<0.01),左室内压最大下降速率(-dp/dt_max)显著降低(P<0.01),左室松弛时间常数(T)数值显著延长(P<0.01);心肌细胞内[Ca²⁺]_i明显增高(P<0.05)。与模型组比较,Ber高剂量组比中剂量组低剂量组更显著降低LVEDP,显著升高-dp/dt_max(P<0.01),显著缩短T(P<0.01),显著降低心肌细胞内[Ca²⁺]_i(P<0.01)。结论:Ber高剂量组可以明显改善DHF大鼠血流动力学和降低心肌细胞内[Ca²⁺]_i。     

乏氧环境下川芎嗪对肺癌干细胞样细胞血管生成拟态的作用

目的 探讨乏氧状态下，川芎嗪（TMP）对非小细胞肺癌A549干细胞样细胞（CSLCs）血管生成拟态（VM）的作用，及TMP对肝细胞生长因子（HGF）/肝细胞生长因子受体（c-Met）蛋白表达的影响。方法 应用无血清成球培养法分离富集A549 CSLCs，流式细胞术检测A549 CSLCs干细胞标志物CD44⁺/CD24^-/low表达水平，使用CoCl₂化学诱导乏氧模型。细胞活性与增殖检测（CCK-8）法检测（100、200、400、800、1 600、3 200 μmol·L^-1）TMP对A549 CSLCs细胞活力的作用，选择对A549 CSLCs细胞活力无明显影响的低、中、高浓度（100、200、400 μmol·L^-1）进行后续实验。小管形成实验检测不同浓度TMP对乏氧状态A549 CSLCs VM形成的作用，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同浓度TMP对乏氧状态CSLCs HGF/c-Met蛋白表达的影响。结果 流式细胞术检测所分离富集CSLCs CD44⁺/CD24^-/low表达比例为（80.3±0.21）%，与A549组比较显著升高（P<0.01）；CCK-8法显示，与空白组比较，各浓度TMP组CSLCs抑制率不同程度上升，其中24 h TMP组（800、3 200 μmol·L^-1）；48 h TMP组（1 600、3 200 μmol·L^-1）CSLCs抑制率明显升高（P<0.05）；小管形成实验结果显示，与空白组及贝伐珠单抗（Bev）组比较，各浓度TMP组小管结点、交叉点数显著下降（P<0.01）；与SU11274组比较，TMP各组小管结点及交叉点数目减少，TMP组（200 μmol·L^-1）小管交叉点数明显减少（P<0.05）；TMP组（400 μmol·L^-1）小管结点数及交叉点数显著减少（P<0.01）。Western blot结果显示，与空白组比较，各浓度TMP组HGF、c-Met蛋白水平明显下调（P<0.05，P<0.01）。结论 TMP能够在体外模型中抑制乏氧状态A549 CSLCs VM形成，可能通过调控HGF/ c-Met相关通路发挥作用。     

茯苓多糖对ApoE-/-AS小鼠肝脏脂质沉积及胆固醇逆向转运相关蛋白表达的影响＊

目的 探讨茯苓多糖对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）小鼠肝脏脂质沉积及胆固醇逆向转运的影响。方法 采用随机数字表法将30只ApoE^-/-小鼠随机分为模型组、茯苓多糖组、辛伐他汀组，每组10只，10只C57BL/6J小鼠作为正常组。正常组给予基础饲料喂饲，其余小鼠给予高脂饲料喂饲12周。茯苓多糖组以0.2 g/kg/d灌胃，辛伐他汀组以2.275 mg/kg/天灌胃，正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃，共干预4周。全自动生化分析仪检测小鼠血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平，苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肝脏病理形态学变化，油红O染色观察小鼠肝脏脂质沉积情况，ELISA检测各组小鼠血清载脂蛋白A1 （ApoA1）、对氧磷酶-1（PON1）含量，Real-time RT-qPCR法及Western Blot法检测肝脏胆固醇酯转运蛋白（CETP）、磷脂转运蛋白（PLTP）、卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠血清TG、TC、LDL-C含量均明显上升，HDL-C含量明显下降（P<0.01），肝细胞脂肪变性明显，肝脏脂质沉积明显，小鼠血清ApoA1、PON1含量均明显下降（P<0.01），小鼠肝脏CETP、PLTP mRNA及蛋白表达明显上升，LCAT mRNA及蛋白表达明显下降（P<0.01）。与模型组相比，茯苓多糖组血清TG、TC、LDL-C含量均显著下降（P<0.01），HDL-C含量呈上升趋势（P>0.05），肝细胞脂肪变性、脂质沉积程度均有所减轻，茯苓多糖组ApoA1含量明显上升（P<0.01），PON1含量呈上升趋势（P>0.05），茯苓多糖组CETP、PLTP mRNA及蛋白表达有所下降，LCAT mRNA及蛋白表达有所上升（P<0.05，P<0.01）。结论 茯苓多糖可能通过调控血脂水平与胆固醇逆向转运过程，改善ApoE^-/- AS小鼠肝脏脂质沉积，进而发挥防治AS作用。     

通脉养心丸对ApoE-/-小鼠动脉斑块形成的影响及机制研究

[目的] 观察通脉养心丸对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠动脉斑块形成的影响并对其可能的作用机制进行探索。[方法] 将ApoE^-/-小鼠分为4组,分别为模型组、通脉养心丸2.0 g/kg组;通脉养心丸1.0 g/kg组、通脉养心丸0.5g/kg组,C57BL/6J小鼠为空白对照组。高脂饲养ApoE^-/-小鼠,复制动脉粥样硬化（AS）模型。末次给药1 h后,生化法测定血清中总胆固醇（TC）及三酰甘油（TG）水平;分别采用油红O染色法及苏木精-伊红（HE）染色法,观察斑块形成及动脉缩窄程度;采用Affymetrix Mouse Genome对小鼠动脉组织基因谱进行检测,进行差异基因分析、聚类分析、Ingenuity Canonical通路分析,探究通脉养心丸药效作用机制。并采用实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）和酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法对关键蛋白或基因进行验证。[结果] 与空白对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG水平显著升高,动脉大面积斑块形成,动脉明显缩窄,通脉养心丸能有效改善上述情况;差异基因富集分析表明,通脉养心丸可能通过影响PPARα/RXRα、基质金属蛋白酶信号通路、血小板源性生长因子信号通路等产生抑制斑块形成作用;通脉养心丸能使过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）基因表达显著上调,并使血浆中p-核因子κB（p-NF-κB）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素6（IL-6）、白介素1β（IL-1β）水平显著降低。[结论] 通脉养心丸能够有效抑制动脉斑块形成,活化PPARα,抑制炎症因子表达是药效产生的确切途径之一。     

双参芎连颗粒对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化炎症反应的干预作用

目的:研究双参芎连颗粒对高脂饲料喂养的Apo E基因敲除小鼠动脉粥样硬化炎症反应的干预作用。方法:采用C57BL/6小鼠做为正常组(BLA),ApoE~(-/-)小鼠随机分为4组:动脉粥样硬化模型组(MOD),普罗布考治疗组(PRO,216 mg·kg~(-1)),双参芎连颗粒高剂量治疗组(SSXL-H,1.6 g·kg~(-1))以及双参芎连颗粒低剂量治疗组(SSXL-L,0.8 g·kg~(-1))。各组ApoE~(-/-)小鼠均给予高脂饲料喂养2周后采用生化法进行血脂测定,并灌胃相应的药物。给药8周后再次进行血脂检测。同时采用超声法检测主动脉弓内膜厚度;采用油红O染色的方法分析主动脉斑块面积进行计算斑块面积/血管内表面积;采用流式高通量多因子检测技术检测血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,白细胞介素(interleukin,IL)-1α,IL~(-1)0,以及单核细胞趋化蛋白(monocyte chemoattractant protein,MCP)-1等炎症细胞因子的表达。结果:双参芎连颗粒能够减少ApoE~(-/-)小鼠主动脉中-内膜厚度,降低主动脉斑块面积/血管内表面积,抑制TNF-α和MCP-1炎症因子表达,但是对血脂水平无明显的影响。结论:双参芎连颗粒可以通过对炎症反应的抑制作用而防治动脉粥样硬化,且不依赖与血脂水平的变化。     

葛根芩连汤抗大鼠心肌缺血再灌注致心律失常作用及其机制研究

目的:研究葛根芩连汤对大鼠心肌缺血再灌注所致心律失常的治疗作用及其机制。方法:健康SD大鼠随机分为6组,每组10只,即假手术组、模型组、稳心颗粒组(2.43 g·kg-1)及葛根芩连汤高、中、低(生药含量)(8.64,4.32,2.16 g·kg-1)剂量组,连续给药7 d后,除正常组外,其余各鼠结扎冠状动脉左前降支(LAD)建立大鼠心肌缺血再灌注致心律失常模型,监测肢体II导联心电图(ECG),Na+-K+-ATP酶(Na+-K+-ATPase),Ca2+-ATP酶(Ca2+-ATPase)及血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)的含量。结果:葛根芩连汤能显著降低再灌注心律失常的发生率(P<0.01或P<0.05);也能显著增加心肌组织匀浆Na+-K+-ATPase,Ca2+-ATPase活力(P<0.01或P<0.05),增加血清SOD活性(P<0.01或P<0.05),降低MDA含量(P<0.01或P<0.05)。结论:葛根芩连汤能够有效的调节心肌缺血再灌注模型大鼠各种酶活性,清除氧自由基,从而改善心律失常,保护缺血心肌。     

硒化壳聚糖对慢性粒细胞白血病K562细胞 bcr/abl融合基因表达的影响

目的:研究硒化壳聚糖对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的影响,探讨这种作用与bcr/abl融合基因表达的关系。方法:应用磺酰罗丹明B(SRB)法和集落形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响;应用Western blot(免疫印迹)法检测细胞P210bcr/abl融合蛋白含量;应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测bcr/abl融合基因信使RNA(mRNA)水平。结果:50,100,200 mg·L-1硒化壳聚糖作用K562细胞48 h可明显抑制细胞增殖和降低其存活率(P<0.05,P<0.01);50,100,200 mg·L-1硒化壳聚糖作用48 h或200 mg·L-1硒化壳聚糖作用12,24,48 h后K562细胞内P210bcr/abl蛋白含量呈时间和剂量依赖性下降(P<0.05,P<0.01),而bcr/abl融合基因mRNA水平未见明显改变。结论:硒化壳聚糖可通过下调bcr/abl融合基因表达的P210bcr/abl融合蛋白对K562细胞增殖产生抑制作用。     

UHPLC/MS~n质谱树技术与Q/TOF联用在利舒康胶囊成分鉴定中的应用

目的建立UHPLC/MS~n质谱树技术与Q/TOF联用的方法,对中药复方制剂利舒康胶囊成分进行快速识别和鉴定。方法以含有0.5%乙酸的甲醇-水(3∶1)混合溶液作为提取液制备供试液,采用Thermo Syncronis C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,以乙腈-甲醇(1∶1)-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,线性离子阱质谱采用正、负离子同时扫描模式并进行多级质谱碎裂,Q/TOF高分辨质谱分别采用正、负离子扫描模式并进行二级质谱碎裂。结果在线性离子阱正、负离子多级质谱树的验证下,高分辨质谱在中药复方制剂利舒康胶囊中同时确认出生物碱类、黄酮类、三萜类、有机酸类、苯丙素类等各种电离模式下响应的小分子化合物,22个成分经与对照品比对而准确鉴定。结论 UHPLC-Q/TOF高分辨质谱与UHPLC/MS~n质谱树推导技术的联用可以快速鉴定复杂体系中的化学成分,同时也为该复方制剂的质量评价指标选择和药效物质研究奠定了基础。     

虎杖苷对高脂喂养的中年LDLr~(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝炎的作用及机制研究

目的探讨虎杖苷对高脂喂养的中年低密度脂蛋白受体基因敲除(low-density lipoprotein receptor knockout,LDLr~(-/-))小鼠非酒精性脂肪肝炎的保护作用及机制。方法 12月龄雄性LDLr~(-/-)小鼠随机分为对照组、模型组、白藜芦醇(200 mg/kg)组和虎杖苷低、高剂量(100、200 mg/kg)组,对照组给予常规饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养;同时给予虎杖苷和白藜芦醇干预12周后,检测各组小鼠血清代谢参数;采用油红O染色、苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色考察各组小鼠肝脏组织病理变化;采用试剂盒检测各组小鼠肝脏中三酰甘油(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6 (interleukin 6,IL-6)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase,GSH)活性;采用免疫共沉淀法检测各组小鼠肝脏组织中乙酰化肝激酶B1 (liver kinase Bl,LKB1)表达情况;采用Western blotting法检测各组小鼠肝脏组织中氧化应激、纤维化及sirtuin l (SIRT1)信号通路相关蛋白表达情况。结果虎杖苷显著改善高脂喂养的中年LDLr-/小鼠代谢基础特征(P0.05),抑制肝脏脂肪变性和肝纤维化;显著降低肝脏组织中TC、TG、TNF-α、IL-6、MDA和HYP水平(P0.05);显著升高SOD、GSH和CAT活性(P0.05);显著降低肝脏中脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶 1 (stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)、转化生长因子-β (transforming growth factor-β,TGF-β)和α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达水平(P0.05),显著升高过氧化物酶体增殖激活受体α (peroxisome proliferator-activated receptor α,PPARα)和肉毒碱棕榈酰基转移酶 1α (carnitine palmitoyltransferasela,CPT1α)蛋白表达水平(P0.05);显著增加核因子E2相关因子(nuclear factor E2-:related factor2,Nrf2)入核表达(P0.05);显著升高SIRT1蛋白表达水平(P0.05),降低SIRT1靶蛋白肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1乙酰化水平(P0.05);显著升高p-LKB1/LKB1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphorylated AMP-activated protein kinase,p-AMPK)/AMPK 蛋白表达水平(P0.05),显著降低p65乙酰化水平和p65入核表达(P0.05)。结论虎杖苷对高脂喂养的中年LDLr~(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝炎具有保护作用,且与SIRT1的激活有关。     

基于“肠道菌群-炎症”通路探讨丹蒌片防治ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用及机制

目的观察丹蒌片对高脂喂养动脉粥样硬化模型ApoE~(-/-)小鼠的影响,从菌群失调诱发炎症角度探讨丹蒌片抗动脉粥样硬化的作用机制。方法采用C57BL/6J野生型小鼠作为对照,高脂喂养ApoE~(-/-)小鼠24周后随机分为模型组、丹蒌片组,连续ig给药8周后取血测定血脂水平;ELISA法检测血清中脂多糖(LPS)水平;动脉大体油红O及主动脉窦HE染色观察斑块形成;粪便16 SrRNA扩增子测序检测肠道菌群;GC-MS法检测短链脂肪酸;实时荧光定量PCR法检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的表达。结果与对照组比较,模型组小鼠血脂水平升高,肠道菌群失调,有害菌增加,有益菌减少,血清LPS水平升高,主动脉周围炎症水平升高;与模型组比较,丹蒌片干预可明显降低小鼠总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平(P0.01),有效减少斑块面积;调节肠道菌群,进而降低血清LPS及主动脉周围炎症因子TNF-α、ICAM-1和IL-1β水平(P0.01)。结论丹蒌片通过改善菌群结构,降低菌群失调诱发的炎症反应发挥抗动脉粥样硬化作用。     

津力达对高脂诱导的胰岛素抵抗ApoE-/-小鼠骨骼肌脂质转运酶类的表达变化

目的:探究津力达对高脂诱导的胰岛素抵抗Apo E-/-小鼠骨骼肌脂质转运酶类相关基因的表达变化。方法:8只雄性C57BL/6J小鼠设为正常组(NF);40只雄性Apo E-/-小鼠喂养16周后分为模型组(HF)、罗格列酮组(LGLT)、津力达低剂量组(JLDL)、津力达中剂量组(JLDM)、津力达高剂量组(JLDH),开始灌胃给药,连续8周。采用组织游离脂肪酸、BCA蛋白浓度法测定骨骼肌FFA含量;实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)测定小鼠骨骼肌脂肪酸转位酶(FAT/CD36)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1(CPT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)mRNA和蛋白表达。结果:津力达能够不同程度降低小鼠的空腹血糖(FBG)、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA);下调空腹胰岛素(FIns)水平,提高胰岛素敏感指数(ISI);津力达能够不同程度的上调小鼠CPT1,PPARαmRNA和蛋白表达,下调FAT/CD36的mRNA和蛋白水平。结论:津力达能够通过调节骨骼肌脂质转运酶类的表达变化,改善高脂诱导的Apo E-/-小鼠的胰岛素抵抗。     

冠心病痰瘀互结证小鼠模型的建立与评价研究

[目的]应用冠状动脉左前降支结扎联合高脂饲料喂养建立冠心病痰瘀互结证小鼠模型,以模拟心肌缺血复合动脉粥样硬化(AS)病理特征,从而达到模拟小鼠冠心病痰瘀互结证的病理变化。[方法]健康C57BL/6J雄性小鼠随机分为空白组和假手术组,载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))雄性小鼠随机分为血瘀组、痰浊组、痰瘀互结组。痰浊组和痰瘀互结组给予高脂饲料喂养12周,其余各组给予普通饲料喂养12周。在8周末时,对血瘀组和痰瘀互结组进行冠状动脉左前降支结扎,假手术组行穿线不结扎。[结果]观察各组小鼠一般状态,超声心动图,对小鼠血清血脂水平进行检测,并对心脏组织进行苏木精-伊红(HE)染色、对主动脉组织进行油红O染色,进而评价冠心病痰瘀互结证小鼠模型建立。[结论]ApoE~(-/-)小鼠采用冠状动脉左前降支结扎联合高脂饲料喂养12周,明显出现心肌缺血及AS病理特征,提示本实验方法可成功建立冠心病痰瘀互结证小鼠模型。