三七总皂甙对大鼠肝脏缺血再灌注损伤肝细胞线粒体的自由基的清除作用

目的观察三七总皂甙(PNS)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤线粒体的自由基的清除作用。方法通过阻断血运前将PNS经直接通道注入并保留于肝脏组织的方法并提取肝脏局部缺血再灌注模型大鼠肝细胞线粒体,测定线粒体成分的SOD总活力、MDA含量;且同步观察电镜下的组织学改变。结果PNS组的SOD总活力在再灌注90min时(10.767±1.638)NU/mg·pro明显低于相对应的实验对照组(15.945±2.891)NU/mg·pro(P<0.05)。MDA含量在再灌注90min时(1.822±0.240)nM/mg·pro明显低于相对应的实验对照组(2.893±0.782)nM/mg·pro)(P<0.05)。电镜观察表明PNS组在再灌注90min时线粒体等超微结构的破坏明显较对照组轻。结论PNS在大鼠肝脏缺血再灌注早期主要通过直接清除自由基及提高线粒体SOD活力而减轻和预防大鼠缺血再灌注肝细胞线粒体的损伤。     

三七总皂甙对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中肝细胞线粒体的保护作用

目的　观察三七总皂甙(PNS)对大鼠肝脏缺血再灌注(IR)损伤中对线粒体的保护作用。方法　制作IR模型,阻断血运前将PNS经直接通道注入并保留于肝脏组织,并提取肝细胞线粒体,测定线粒体成分的超氧化物歧化酶(SOD)总活力、丙二醛(MDA)含量;观察电镜下的组织学改变;动态性对比观察再灌注早期上述指标的变化。结果　在再灌注90 min时实验组的SOD总活力明显低于相对应的对照组(P<0 .0 1) ,MDA含量明显低于相对应的对照组(P<0 .0 1) ,电镜观察表明实验组在再灌注90 m in时线粒体等超微结构的破坏明显比对照组轻。结论　PNS在大鼠肝脏IR早期主要通过直接清除自由基及提高线粒体SOD活力而减轻和预防大鼠IR肝细胞线粒体的损伤。     

三七总皂甙对大鼠胆管上皮细胞缺血再灌注损伤的保护

目的 探讨胆管上皮细胞缺血再灌注损伤的机制及三七总皂甙在大鼠胆管细胞I/R损伤中的作用.方法 采用大鼠原位部分肝缺血再灌注模型.分4组观察在不同条件下胆管细胞及肝细胞的病理形态及超微结构变化及三七总皂甙对此缺血再灌注损伤的影响.结果 缺血再灌注组胆管细胞损伤更重,氧自由基生成更多,三七总皂甙预处理保护组胆管损伤明显减轻.结论 缺血再灌注损伤对胆管细胞的损伤较肝细胞更重,三七总皂甙预处理可减轻该损伤,其机制可能为抑制氧自由基生成.     

盐酸氟桂利嗪对鼠肝细胞钙超载的作用

目的：观察再灌注损伤时盐酸氟桂利嗪（ｆｌｕｎａｒｉｚｉｎｅ,ＦＬＵ）对肝细胞线粒体钙超载的影响。方法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为３组,每组１３只,Ａ组为对照组,Ｂ组为缺血／再灌注组,Ｃ组为ＦＬＵ组,其中Ｂ、Ｃ两组均阻断肝门造成肝脏完全缺血３０ｍｉｎ后再灌注９０ｍｉｎ。测定各组动物血清中ＡＬＴ、ＬＤＨ、ＴＢＩ含量、肝组织及肝细胞线粒体钙含量,行线粒体超微结构观察。结果：与Ａ组比较,Ｂ组血清ＡＬＴ、ＬＤ     

S-腺苷蛋氨酸对大鼠缺血再灌注肝线粒体超微结构的影响

[目的]研究S-腺苷蛋氨酸(SAM)预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤线粒体超微结构的影响.[方法]大鼠随机分为对照组(A组)、I/R组(B组)和SAM处理组(C组),SAM组大鼠在缺血再灌注前2 h先行腹腔注射SAM预处理.三组动物在阻断肝门30 min后(A组仅做分离,不阻断肝门),于再灌注0、1、6 h抽取下腔静脉血检测ALT、AST,切取肝组织用电镜观察线粒体的超微结构及制备线粒体匀浆检测SOD、MDA.[结果]再灌注1 h,B组MDA(5.15±0.33)nmol/mg、SOD(29.73±4.48)u/mg;C组MDA(4.57±0.15)nmol/mg、SOD(36.61±3.09)u/mg.再灌注6h,B组MDA(6.82±0.27)nmol/mg、SOD(23.86±1.68)u/mg;C组MDA(5.52±0.21)nmol/mg、SOD(28.38±2.18)u/mg.电镜下A组线粒体结构基本正常;B组线粒体数量减少,肿胀明显,部分细胞核固缩,可见凋亡小体;C组线粒体轻度肿胀,未见到细胞凋亡现象.[结论]SAM能抑制脂质过氧化反应,保护线粒体的形态和结构,肝细胞缺血再灌注后的损伤程度.     

线粒体在缺血预处理肝细胞凋亡中的作用

目的 :探讨缺血预处理对急性肝脏缺血再灌注中细胞凋亡的影响及线粒体在其中的作用。方法 :建立大鼠局部肝脏缺血再灌注模型 ,将 2 4只健康雄性 Wistar大鼠随机分为假手术、缺血再灌注、缺血预处理 3组 ,以缺血前、短暂缺血再灌各 1 0 min作预处理。采用免疫组化法检测肝组织中 Bcl- 2蛋白含量 ,末端脱氧核苷酸转移酶介导的 d UTP缺口末端标记 ( TUNEL )法检测肝细胞凋亡状态 ,透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化 ,并用图象分析仪对线粒体立体形态进行定量分析。结果 :与缺血再灌注组相比 ,缺血预处理组 Bcl- 2蛋白表达的光密度值明显增高 ,而肝细胞凋亡指数则明显下降 ,线粒体立体形态定量分析表明其肿胀损伤程度亦明显减轻。结论 :缺血预处理可通过保护线粒体超微结构和功能及上调跨线粒体膜 Bcl- 2蛋白的表达而抑制肝脏缺血再灌注中肝细胞凋亡的发生     

缺血预处理对肝线粒体的保护作用

建立大鼠肝脏缺血再灌注模型。将24只健康雄性SD大鼠随机分为假手术、缺血再灌注、10min缺血预处理、20min缺血预处理4组，后两组分别以缺血前短暂缺血再灌注各10min和20min作预处理。采用DiOC6染色后流式细胞仪测线粒体膜电位，化学法测抗超氧阴离子自由基、ATP酶活力。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测肝细胞凋亡状态，透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化。此法用来探讨在急性肝脏缺血再灌注损伤中缺血预处理对肝细胞线粒体的保护作用及有效的缺血预处理时间。结果与缺血再灌注组相比，10min缺血预处理组线粒体膜电位明显增高，抗超氧阴离子自由基能力明显增强，ATP酶亦明显减少，而肝细胞凋亡指数则明显下降，线粒体形态表明其肿胀损伤程度亦明显减轻；20min缺血预处理组则变化不明显。提示10min缺血预处理可通过上调线粒体跨膜电位。降低线粒体膜通透性；上调抗超氧阴离子自由基活力以增强肝线粒体抗氧自由基能力，减少氧自由基的合成，从而保护肝线粒体超微结构；下调ATP酶活性使ATP含量升高，电子传递功能恢复正常，从而改善肝功能。减轻肝缺血再灌注损伤；抑制肝脏缺血再灌注损伤中肝细胞凋亡的发生来保护肝线粒体。而20min缺血预处理则不能起到保护作用。     

大鼠肝脏短期缺血再灌注损伤早期肝细胞超微结构观察

目的　探讨大鼠肝脏缺血再灌注损伤早期肝细胞超微结构的病理变化。方法　切取肝脏局部缺血再灌注模型大鼠肝脏组织 ,观察光镜及电镜下的组织学改变。结果　肝脏局部缺血再灌注模型大鼠肝细胞在缺血 4 0min后再灌注 90min时 ,达到不可逆性破坏。结论　实验大鼠肝脏组织的缺血时间应少于 4 0min。     

短期禁食对大鼠心肌缺血再灌注后心肌线粒体结构和功能的影响

目的 观察短期禁食对大鼠心肌缺血再灌注后心肌细胞、线粒体的结构和功能的保护作用.方法 40只SD大鼠,随机分为对照组、缺血再灌注组(I/R)、短期禁食组(STF)、缺血预处理组(IP)、短期禁食+缺血预处理组(sTF+IP).建立I/H实验模型.用分光光度计检测线粒体丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性;透射电镜观察心肌超微结构的改变.结果 与对照组相比,I/R组MDA含量明显升高,SOD及GSHPx活性明显降低;STF和IP组MDA升高,SOD、GSHPx降低不如I/R组明显.I/R组心肌细胞及线粒体损伤重,STF及IP组心肌超微结构破坏减轻,STF及IP联合应用对心肌细胞的保护作用更明显.结论 短期禁食通过减轻心肌细胞和线粒体损伤对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用.     

缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护效应

目的探讨缺血后处理对肝脏缺血再灌注损伤（IRI）的保护效应。方法建立大鼠局部肝脏IRI模型,将24只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术、缺血再灌注、缺血后处理3组,以缺血再灌前、反复多次的短暂预再灌、停灌作后处理;观察肝组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）水平变化,采用免疫组化法检测肝组织中Bcl-2蛋白含量,TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化,并以图象分析仪对线粒体立体形态进行定量分析。结果与缺血再灌注组相比,缺血后处理组肝组织中MDA含量及肝细胞凋亡指数明显下降（P〈0.05）,而SOD、CAT、GSH-PX水平和Bcl-2蛋白表达的光密度值则显著升高（P〈0.05）,线粒体超微结构损伤亦明显减轻。结论缺血后处理可通过抑制再灌注后肝实质细胞凋亡,减轻肝脏IRI。     

三七总皂苷对大鼠肝移植中胆管细胞缺血再灌注损伤保护的实验研究

目的探讨胆管上皮细胞缺血再灌注损伤的机制及三七总皂苷（panax notoginseng saponins,PNS）在大鼠肝移植中胆管细胞I/R损伤中的作用。方法采用吻合肝动脉的大鼠原位肝移植模型。分三组观察在不同条件下胆管细胞的病理形态变化及PNS对此缺血再灌注损伤的影响。结果缺血再灌注的胆管细胞损伤更重,氧自由基生成更多,NF-κB表达更多,PNS预处理保护组胆管细胞损伤明显减轻。结论缺血再灌注损伤能加重胆管细胞的损伤,PNS预处理可减轻该损伤,其机制可能为抑制氧自由基生成,减少NF-κB的表达。     

三七总苷对重症急性胰腺炎大鼠氧自由基的影响

目的探讨三七总苷对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠氧自由基的影响。方法SD大鼠135只，随机分为假手术组、SAP组和三七总苷治疗组，每组45只，通过十二指肠胆胰管逆行加压注射5％牛磺胆酸钠溶液的方法制备大鼠SAP模型，每组造模后又按6、12和24h分为3个时间点。分别在3个组的不同时间点抽血，测定大鼠血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、淀粉酶。胰腺病理改变等指标的变化。结果SAP组各个时段血清淀粉酶和MDA水平升高,SOD水平降低，与对照组各个时段比较有统计学差异（P〈0.01）；三七总苷治疗组在6、112和24h3个时间点与SAP组相比，血清淀粉酶和MDA的水平均降低（P〈0.01或P〈0．05），SOD水平升高（P〈0．01）。结论三七总苷通过降低损害因子MDA、升高保护因子SOD，对SAP有治疗作用。     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的作用

目的：观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的作用。方法：体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，分别以400μg／mL和800μg／mLPNS处理细胞，在激光共聚焦显微镜下观察细胞内钙离子浓度的变化。结果：随着给药浓度的增加，和空白对照组相比，各给药组的细胞内钙离子浓度均有所下降（P〈0．05），两给药组之间差异也具有统计学意义（P〈0．05）。结论：三七总甙能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度，并具有剂量依赖效应。     

三七皂甙对局灶性脑缺血再灌注后MMP-9表达的影响

目的探讨三七皂甙对大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法采用半定量RT—PCR测定MMP-9的变化,测定脑梗死体积并观察血脑屏障的破坏程度。结果再灌注后22 h,三七皂甙治疗组脑梗死体积和脑缺血区血脑屏障的破坏程度均低于对照组(P<0.05);三七皂甙治疗组MMP-9的表达明显低于对照组。结论三七皂甙能减轻脑缺血再灌注后的损伤和血脑屏障的破坏程度,抑制MMP-9的表达可能是其作用机制之一。     

三七总皂苷通过上调VEGF表达对大鼠拔牙创愈合的促进作用

目的：探讨拔牙创愈合过程中血管内皮生长因子（VEGF）的表达,并阐明三七总皂苷（PNS）促进拔牙创愈合的作用及其机制。方法：45只SD雄性大鼠随机分为对照组（不给药）、壳聚糖凝胶组（给予壳聚糖凝胶）、0.5 g·L^-1 PNS组（给予含0.5 g·L^-1 PNS的壳聚糖凝胶）、1.0 g·L^-1 PNS组（给予含1.0g·L^-1PNS的壳聚糖凝胶）和1.5 g·L^-1 PNS组（给予含1.5 g·L^-1 PNS的壳聚糖凝胶）,每组9只。拔除右下颌中切牙后,除对照组外各组大鼠每个拔牙创注入约20μL含有不同浓度PNS的壳聚糖凝胶,给药后1、2和4周,分别处死3只大鼠并制备术区标本。HE染色后显微镜下观察各组大鼠拔牙创给药后1、2和4周愈合情况。免疫组织化学染色检测各组大鼠给药后1、2和4周拔牙创组织中VEGF阳性细胞数和蛋白表达水平。结果：HE染色,给药后1、2和4周,壳聚糖凝胶组大鼠拔牙创愈合情况与对照组相似;与对照组比较,0.5、1.0和1.5 g·L^-1 PNS组大鼠拔牙创组织中成骨细胞和血管内皮细胞大量分化迁移,骨小梁数目增多。给药后1、2和4周,与对照组比较,壳聚糖凝胶组大鼠拔牙创组织中VEGF阳性细胞数和蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）,0.5、1.0和1.5 g·L^-1 PNS组大鼠拔牙创组织中VEGF阳性细胞数和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：PNS通过上调大鼠拔牙创血管内皮细胞和成骨细胞中VEGF表达,诱导血管内皮细胞和成骨细胞分化,使其迁移和聚集数量增多,达到促进大鼠拔牙创愈合的作用。     

三七总皂苷与特利加压素联合治疗肝硬化腹水的效果观察

目的探讨肝硬化腹水患者采用三七总皂苷联合特利加压素进行治疗的临床效果。方法研究对象为来我院就诊的84例肝硬化腹水患者，按治疗方法不同分为对照组和观察组,分别给予综合治疗方法、三七总皂苷联合特利加压素共同治疗。对两组患者临床治疗效果、症状及体征、肝肾功能及各项肝纤维化观察指标进行比较。结果观察组患者的总有效率与对照组比较明显较高（P〈0．05）；观察组治疗8周后更好的改善了腹胀、腹水及肝区痛等临床症状体征，与对照组比较差异具有显著的统计学意义（P〈0．05）。两组患者治疗6～8周后，肝纤维化各项指标均明显降低，但观察组下降幅度更为明显（P〈0．05）。结论肝硬化腹水患者采用三七总皂苷联合特利加压素进行治疗能够使患者的临床症状得到显著的改善，效果较为满意，可以在临床推广应用。     

三七总皂苷对慢性心力衰竭大鼠心功能的改善作用及其机制

目的：观察三七总皂苷对慢性心力衰竭（CHF）模型大鼠心功能的改善作用,探讨其可能机制。方法：采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型。将60只模型大鼠随机分为模型组,阳性对照组,低、中和高剂量三七总皂苷组,每组12只;另取12只大鼠作为假手术组。彩色多普勒超声检测大鼠左室舒张末期内径（LVEDD）、左室收缩末期内径（LVESD）、左室后壁舒张期厚度（LVPWD）、左室射血分数（LVEF）、心输出量（CO）、左室舒张末压（LVEDP）、左室收缩压（LVSP）、左心室压力最大上升速率（+dp/dt max）和左心室压力最大下降速率（-dp/dt max）,HE染色观察各组大鼠心肌组织病理形态表现,TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡率,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中细胞外信号调节激酶（ERK）、磷酸化ERK （p-ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK （p-JNK）、p38和p-p38蛋白表达水平,ELISA法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）水平。结果：与假手术组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD、LVPWD、LVEDP和-dp/dt max明显升高（P<0.05）,LVEF、CO、LVSP及+dp/dt max明显降低（P<0.05）;与模型组比较,阳性对照组和低、中及高剂量三七总皂苷组大鼠LVEDD、LVESD、LVPWD、LVEDP和-dp/dt max明显降低（P<0.05）,LVEF、CO、LVSP和+dp/dt max明显升高（P<0.05）。模型组大鼠心肌细胞肥大、坏死,心肌纤维排列不规则,出现炎性细胞浸润,大量心肌细胞凋亡,阳性对照组和低、中及高剂量三七总皂苷组大鼠心肌组织结构较完整,心肌细胞肥大减轻,心肌纤维排列疏松。与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,心肌组织中p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,血清TNF-α和IL-6水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较,阳性对照组和低、中及高剂量三七总皂苷组大鼠心肌细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,心肌组织中p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,血清TNF-α和IL-6水平明显降低（P<0.05）。结论：三七总皂苷可通过下调心肌组织中p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白表达水平,抑制血清炎性因子分泌,从而抑制心肌细胞调亡,对CHF有一定的改善作用。     

三七总皂甙预处理大鼠供肝对细胞凋亡及TNF-α、Caspase-3表达的影响

目的探讨三七总皂甙(PNS)预处理对大鼠供肝的保护作用及其对供肝细胞凋亡和TNF-α、Caspase-3 mRNA表达的影响.方法雄性SD大鼠分别用作供、受体,采用Kamada's袖套法建立原位肝移植模型,根据供肝切取前1 h是否静脉注射pNS(50mg/kg)将大鼠随机分为2组PNS预处理组(P组)和NS对照组(N组);另设假手术作对照组(S组).分别于供肝再灌注后2、6、24 h处死各组动物,检测血清ALT、AST,HE切片作组织学检查,TUNEL法检测肝细胞凋亡,RT-PCR法检测TNF-α、Caspase-3 mRNA的表达.结果供肝再灌注后2、6、24h各时点,P组大鼠血清ALT、AST水平及肝细胞凋亡指数(AI)均明显低于N组(P＜0.05);供肝再灌注后2h、6 h,P组大鼠肝组织TNF-α、Caspase-3 mRNA的相对表达水平明显低于N组(P＜0.05).结论三七总皂甙(PNS)预处理大鼠供肝,可以有效地减轻移植肝的缺血/再灌注损伤和细胞凋亡,影响TNF-α、Caspase-3的表达,可能为PNS抗细胞凋亡的机制之一.