紫甘薯花色苷通过 circ_0003998/miR-145 轴调控乳腺癌 MDA-MB-231 细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：探讨紫甘薯花色苷（purple sweet potato anthocyanin, PSPA）是否通过 circ_0003998/miR-145 轴调控乳腺癌 MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭。方法：选用乳腺癌MDA-MB-231细胞,将其分为对照组,200、400和800 μg/ml PSPA 组,pcDNA 组、pcDNA-circ_0003998 组、si-NC 组、si-circ_0003998 组、si-circ_0003998+anti-miR-145 组、PSPA+pcDNA 组、PSPA+ pcDNA-circ_0003998 组和 PSPA+anti-miR-145 组。用 qPCR 法检测细胞中 circ_0003998 和 miR-145 的表达,CCK-8 法、Transwell 小室法分别检测转染前后细胞的增殖、迁移和侵袭能力,WB法检测细胞中Ki-67、MMP-2 和 MMP-9 蛋白的表达。用双荧光素 酶报告基因实验验证circ_0003998与miR-145 的靶向关系。结果：与对照组比较,各剂量PSPA组 MDA-MB-231细胞的增殖抑 制率、miR-145表达水平均显著升高（均P<0.01）Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白和circ_0003998的表达水平、细胞迁移和侵袭细胞数 均显著降低（均P<0.01）,并呈现浓度依赖性。circ_0003998可以靶向负调控miR-145的表达。敲减circ_0003998后,MDA-MB-231细 胞的增殖抑制率、miR-145表达水平显著升高,Ki-67、MMP-2 和 MMP-9 蛋白表达水平、细胞迁移和侵袭细胞数均显著减少（均P<0.01）。共转染si-circ_0003998和anti-miR-145则可逆转敲减circ_0003998表达对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制 作用,过表达circ_0003998或抑制miR-145表达可逆转PSPA对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论：PSPA通 过circ_0003998/miR-145轴抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-182靶向NUMB调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究miR-182对结直肠癌细胞HT-29增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、结直肠癌细胞HT-29中miR-182、NUMB的表达；将anti-miR-con组（转染anti-miR-con）、anti-miR-182组（转染anti-miR-182）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-NUMB组（转染pcDNA-NUMB）、anti-miR-182+si-con组（anti-miR-182和si-con共转染）、anti-miR-182+si-NUMB组（anti-miR-182和si-NUMB共转染）均用脂质体法转染HT-29细胞；Western blot检测各组细胞中NUMB的蛋白表达；Transwell检测各组细胞的迁移和侵袭；MTT法检测各组细胞的增殖；双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光素酶活性。结果:与人正常结肠上皮细胞HCoEpiC相比，结直肠癌细胞HT-29中miR-182表达显著升高，NUMB表达显著降低（P<0.05）；抑制miR-182、过表达NUMB均可下调HT-29细胞的增殖、迁移、侵袭；NUMB是miR-182的靶标。敲减NUMB可逆转抑制miR-182对HT-29细胞增殖、迁移、侵袭的下调作用。结论:miR-182可促进结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭，其机制可能与靶向NUMB有关，将可为miR-182靶向治疗结直肠癌提供依据。     

LncRNA SNHG6调控miR-186表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的:研究SNHG6通过调控miR-186表达对人肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测57名肝癌患者癌组织和肝癌细胞系中SNHG6和miR-186的表达；双荧光素酶报告实验验证SNHG6和miR-186的靶向调控关系；将SNHG6的小干扰RNA（si-SNHG6组）、阴性无意义对照序列（si-con组）、si-SNHG6与anti-miR-186抑制剂（si-SNHG6+anti-miR-186组）、si-SNHG6与miR-186抑制物阴性对照（si-SNHG6+anti-miR-con组），均以脂质体法转染至肝癌HepG2细胞，MTT法检测细胞增殖；Transwell检测肝癌细胞迁移和侵袭；Western blot实验检测肝癌细胞CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9及EMT的标志物（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达。结果:与癌旁正常组织或正常肝细胞相比，SNHG6在肝癌患者和肝癌细胞系中的表达升高，而miR-186表达降低，两者存在负相关性。与si-con组比较，si-SNHG6组HepG2细胞活力明显下降，迁移和侵袭细胞数明显减少，CDK4、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低，E-cadherin蛋白表达增加。SNHG6靶向负调控miR-186表达，抑制miR-186表达可部分逆转下调SNHG6对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:下调SNHG6可能通过负调控miR-186表达和调控细胞EMT过程抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-21通过靶向PDCD4调控三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的： 研究miR-21在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达，以及其是否通过调控PDCD4影响MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭。方法： 采用实时定量PCR（qPCR）法检测MDA-MB-231细胞和正常乳腺细胞MCF-10A中miR-21和PDCD4 mRNA的表达。将MDA-MB-231细胞随机分为5组：空白对照组，转染miR-21模拟物组，模拟物对照组，转染miR-21抑制物组和抑制物对照组。采用Western blot法检测MDA-MB-231细胞PDCD4蛋白的表达；采用荧光素酶报告基因试剂盒检测转染不同载体后荧光强度的变化来判断miR-21的靶标；采用Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭数目。结果： miR-21和PDCD4 mRNA在MDAMB-231细胞中的表达水平分别明显高于和低于MCF-10A细胞（P均 < 0.01）。过表达或抑制miR-21可调节PDCD4的表达水平。荧光素酶报告基因试剂盒检测结果显示miR-21可直接靶向调控PDCD4的表达。Transwell实验结果表明过表达miR-21表达能增强MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。结论： 在MDA-MB-231细胞中，miR-21通过靶向调控PDCD4表达影响细胞的迁移和侵袭。miR-21可能成为抑制三阴性乳腺癌迁移和侵袭的靶点。     

miR-21通过靶向PDCD4调控三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的： 研究miR-21在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达，以及其是否通过调控PDCD4影响MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭。方法： 采用实时定量PCR（qPCR）法检测MDA-MB-231细胞和正常乳腺细胞MCF-10A中miR-21和PDCD4 mRNA的表达。将MDA-MB-231细胞随机分为5组：空白对照组，转染miR-21模拟物组，模拟物对照组，转染miR-21抑制物组和抑制物对照组。采用Western blot法检测MDA-MB-231细胞PDCD4蛋白的表达；采用荧光素酶报告基因试剂盒检测转染不同载体后荧光强度的变化来判断miR-21的靶标；采用Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭数目。结果： miR-21和PDCD4 mRNA在MDAMB-231细胞中的表达水平分别明显高于和低于MCF-10A细胞（P均 < 0.01）。过表达或抑制miR-21可调节PDCD4的表达水平。荧光素酶报告基因试剂盒检测结果显示miR-21可直接靶向调控PDCD4的表达。Transwell实验结果表明过表达miR-21表达能增强MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力。结论： 在MDA-MB-231细胞中，miR-21通过靶向调控PDCD4表达影响细胞的迁移和侵袭。miR-21可能成为抑制三阴性乳腺癌迁移和侵袭的靶点。     

lncRNAHOXA-AS2靶向miR-520a-3p调控卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探究长链非编码RNA HOXA-AS2（lncRNA HOXA-AS2）与微小RNA-520a-3p（miR-520a-3p）之间的靶向关系及其对卵巢癌SKOV3 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：qPCR检测lncRNA HOXA-AS2 与miR-520a-3p 在多种卵巢癌细胞（SKOV3、HO8910、OVCAR3 细胞）及正常卵巢上皮细胞HOSE中的表达水平。生物信息学手段预测HOXA-AS2 与miR-520a-3p之间的靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。将si-HOXA-AS2、miR-520a-3p mimic、anti-miR-520a-3p 和相应对照片段分别或共转染SKOV3 细胞，MTT、Transwell 和Western blotting 法分别检测各组SKOV3 细胞增殖、迁移、侵袭及相关蛋白（CyclinD1、p21、p27、MMP-2、MMP-9、MMP-14）表达情况。结果：与HOSE细胞相比，多种卵巢癌细胞中HOXA-AS2 均呈高表达（均P<0.05）、miR-520a-3p 均呈低表达（均P<0.05）；HOXA-AS2 可靶向下调miR-520a-3p 的表达。si-HOXA-AS2 和miR-520a-3p mimics 组SKOV3 细胞的增殖、迁移及侵袭能力均较对照组均显著降低（ 均P<0.01），且p21、p27 蛋白表达显著升高，而CyclinD1、MMP-2、MMP-9、MMP-14 蛋白表达显著减少（均P<0.01）；si-HOXA-AS2+anti-miR-520a-3p 组SKOV3 细胞增殖、迁移及侵袭能力较si-HOXA-AS2 和si-HOXA-AS2+anti-miR-NC 组显著增强（均P<0.05）。结论：lncRNA HOXA-AS2 通过靶向抑制miR-520a-3p表达进而增强卵巢癌SKOV3 细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

miR-6775-3p在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：微小RNA（microRNA，miRNA）与肿瘤的发生、发展过程密切相关。探讨miR-6775-3p在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测4种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468和BT-549中miR-6775-3p的表达水平，选取miR-6775-3p表达水平最低的乳腺癌细胞系过表达miR-6775-3p后，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）法检测细胞的增殖情况，同时采用transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。通过RTFQ-PCR和蛋白［质］印迹法（Western blot）检测miR-6775-3p过表达的乳腺癌细胞系中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（cyclin-dependent protein kinase 4，CDK4）和CDK6，以及侵袭转移标志物基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）17和MMP24 mRNA以及蛋白的表达变化。结果：RTFQ-PCR结果显示，乳腺癌细胞系MDA-MB-453中miR-6775-3p的表达最低，在MDA-MB-453细胞中转染miR-6775-3p mimics后，miR-6775-3p的表达水平明显升高（P<0.001）。CCK-8实验结果显示，MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后，细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）。Transwell迁移和侵袭实验结果显示，MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后，细胞的迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.01）明显降低。RTFQ-PCR和Western blot实验结果显示，CDK4、CDK6及MMP17、MMP24的mRNA表达和蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论：miR-6775-3p可能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-32-5p靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的:探究miR-32-5p靶向CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT/enhancer binding proteins α,CEBPA）调控表皮生长因子/β联蛋白（EGFR/β-catenin）信号通路影响骨髓瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的机制。方法:qRT-PCR、Western blot检测细胞中miR-32-5p、CEBPA的表达水平;转染慢病毒至骨髓瘤细胞U266,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;生物信息学预测miR-32-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因、Western blot验证miR-32-5p与CEBPA的关系及在骨髓瘤细胞中的作用,Western blot检测miR-32-5p与CEBPA的表达对EGFR/β-catenin信号通路的影响。结果:与正常浆细胞比较,骨髓瘤细胞株H929、U266、IM-9、RPMI-8226中miR-32-5p表达水平显著增高,CEBPA mRNA和蛋白水平显著降低（P＜0.05）;与NC、anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组miR-32-5p mRNA表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,细胞侵袭数目显著减少（P＜0.05）;TargetScan生物信息学预测显示,miR-32-5p与CEBPA 3' UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验、Western blot进一步证实miR-32-5p可与CEBPA直接结合负向调控CEBPA的表达;与NC、pcDNA-control组比较,pcDNA-CEBPA组CEBPA 表达量显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭数目显著减少（P＜0.05）;与anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组CEBPA蛋白表达量显著升高,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著降低;与anti-miR-32-5p+si-con组比较,anti-miR-32-5p+si-CEBPA组CEBPA蛋白表达量显著降低,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著升高（P＜0.05）。结论:骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭受miR-32-5p和CEBPA的双重调控,miR-32-5p可靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭。     

CKIs对人乳腺癌细胞侵袭转移的影响

目的利用CKI肽类似物抑制CDK激酶活性,以明确CKI对人乳腺癌细胞的作用,探讨其对乳腺癌细胞体外侵袭转移的影响。方法利用作用于CDK4／CDK6的CKI肽类似物p20和p21,分别干预人乳腺癌MDA-MB-231细胞株24h。然后应用细胞与纤维连结蛋白黏附实验测定肿瘤细胞黏附率,通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化,Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭力。结果人乳腺癌MDA-MB-231细胞株经CKI肽类似物p20和p21分别干预后,细胞黏附、迁移及侵袭能力明显减弱。结论 CDK4/CDK6激酶对乳腺癌侵袭转移过程具有重要的作用。CKI肽类似物可以抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的黏附、侵袭和迁移。因此CKI肽类似物可能阻抑肿瘤细胞的转移,显示此类细胞穿膜肽在恶性肿瘤治疗上的潜在作用。     

lncRNA NEAT1调控miR-4262表达影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究长链非编码RNA NEAT1（lncRNA NEAT1）对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:qPCR检测NEAT1和miR-4262在人正常甲状腺滤泡上皮细胞株Nthy-ori 3-1与甲状腺癌细胞株FTC-133、ML-1、SW579中的表达。用si-NEAT1或miR-4262 mimic转染SW579细胞，考察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。生物学信息预测结合双荧光素酶报告实验分析NEAT1和miR-4262之间的靶向关系。MTT法检测细胞增殖抑制率；Western blot检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达；Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。共转染si-NEAT1和anti-miR-4262，观察抑制miR-4262表达对抑制NEAT1表达诱导的SW579细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:NEAT1在甲状腺癌细胞中的表达显著上调（P＜0.05），miR-4262表达下调（P＜0.05）。抑制NEAT1表达或过表达miR-4262显著增加SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量（P＜0.05），显著降低迁移细胞数、侵袭细胞数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量（P＜0.05）。miR-4262是NEAT1的靶基因。上调或下调NEAT1表达明显调控miR-4262表达（P＜0.05）。抑制miR-4262表达能逆转抑制NEAT1表达对SW579细胞增殖抑制率和p21蛋白表达的促进作用，以及对细胞迁移、侵袭及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达的抑制作用。结论:lncRNA NEAT1通过靶向miR-4262影响甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA MALAT1靶向miR-150对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的:研究MALAT1对口腔鳞癌细胞SCC-25增殖、凋亡的影响，并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测人口腔鳞癌细胞SCC-25、人永生化口腔上皮细胞HIOEC中MALAT1和miR-150的mRNA表达；将si-con组（转染si-con）、si-MALAT1组（转染si-MALAT1）、miR-150组（转染miR-150 mimics）、miR-con组（转染miR-con）、si-MALAT1+anti-miR-con组（si-MALAT1和anti-miR-con共转染）、si-MALAT1+anti-miR-150组（si-MALAT1和anti-miR-150共转染），均以脂质体法转染至SCC-25细胞；MTT法检测各组细胞的增殖；流式细胞术检测各组细胞的凋亡；双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与人永生化口腔上皮HIOEC细胞（Normal组）相比，口腔鳞癌SCC-25细胞（Tumor组）中MALAT1表达显著上调，miR-150显著下调（P＜0.05）；敲减MALAT1、过表达miR-150均可抑制SCC-25细胞增殖，促进凋亡；MALAT1靶向miR-150。抑制miR-150逆转了敲减MALAT1对口腔鳞癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:MALAT1可促进口腔鳞癌细胞增殖并抑制凋亡，其机制可能与靶向miR-150有关，可为口腔鳞癌的治疗提供新靶点。     

沉默circZFR通过调控miR-497-5p表达抑制脊索瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:研究环状RNA（circular RNAs,circRNAs）circZFR是否通过调控微小RNA（microRNA,miRNA/miR）-497-5p的表达影响脊索瘤细胞增殖、迁移及侵袭。方法:实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测脊索瘤组织中circZFR和miR-497-5p的表达。在脊索瘤U-CH1细胞中转染si-circZFR或miR-497-5p。噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭情况,蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloprotease-2,MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloprotease-9,MMP-9）蛋白表达,StarBase预测工具和双荧光素酶报告实验分析circZFR与miR-497-5p的靶向结合。si-circZFR和anti-miR-497-5p共转染,观察下调miR-497-5p表达对沉默circZFR表达诱导的U-CH1细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结果:与髓核组织比较,脊索瘤组织中的circZFR表达量明显增加,miR-497-5p表达量显著减少（P＜0.05）。沉默circZFR表达或过表达miR-497-5p明显降低U-CH1细胞48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量,显著提高p21蛋白水平（P＜0.05）。circZFR靶向调控miR-497-5p的表达。下调miR-497-5p表达逆转了沉默circZFR表达对脊索瘤U-CH1细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP-2及MMP-9蛋白表达的抑制作用,和对p21蛋白表达的促进作用。结论:沉默circZFR表达可以抑制脊索瘤细胞的增殖、迁移及侵袭,其作用机制与靶向调控miR-497-5p的表达有关。     

miR-4728-3p通过PI3K/AKT信号通路调控DOT1L基因抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-4728-3p通过调控类端粒沉默干扰体-1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)基因对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:使用乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常乳腺细胞MCF-10A。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞随机分为NC组(转染miR-4728-3p-NC)和敲低组(转染miR-4728-3p-inhibitor)。利用RT-qPCR技术检测不同的细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量改变情况。集落克隆形成实验和EDU实验可以同时检测体内各个细胞异常增殖的情况;TUNEL荧光标记检测法和流式细胞术实验可以同时检测不同组癌细胞的凋亡变化;划痕实验和Transwell实验可以同时检测到在各个细胞内因不同处理而可能产生的细胞迁移率和侵袭力的改变;Western blot检测与细胞凋亡状态相关细胞蛋白以及与细胞通路凋亡相关细胞蛋白p-AKT和p-PI3K相对表达的含量。结果:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及SKBR3中发现miR-4728-3p和DOT1L的表达高于人正常乳腺细胞MCF-10A(P＜0.05)。转染细胞miR-4728-3p后,与NC组细胞进行实验比较,发现敲低组细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量明显降低,且敲低组细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,细胞迁移能力大大降低。敲低组的细胞凋亡活性蛋白相对表达明显发生变化。其中p-AKT与p-PI3K蛋白均被抑制激活。RT-qPCR和Western blot实验验证DOT1L是miR-4728-3p的下游靶向基因。结论:敲低miR-4728-3p可以下调DOT1L的表达从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖,同时使乳腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱。     

LINC00511靶向miR-497-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭及机制研究

目的:探讨LINC00511对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:将pcDNA、pcDNA-LINC00511、si-NC、si-LINC00511、miR-NC、miR-497-5p分别转染至MGC-803细胞中,分别记为pcDNA组、pcDNA-LINC00511组、si-NC组、si-LINC00511组、miR-NC组、miR-497-5p组;将si-LINC00511质粒分别与anti-miR-NC、anti-miR-497-5p共转染至MGC-803细胞中,分别记为si-LINC00511+anti-miR-NC组、si-LINC00511+anti-miR-497-5p组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-497-5p和LINC00511表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测细胞周期素D1（cyclin D1,CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）蛋白表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测LINC00511和miR-497-5p的靶向关系。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞MGC-803、MKN-45、AGS中miR-497-5p表达水平显著降低,LINC00511表达水平显著升高。LINC00511靶向调控miR-497-5p的表达。抑制LINC00511表达和miR-497-5p过表达可降低细胞活性和迁移、侵袭数量,降低CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平,提高p21蛋白表达水平。干扰miR-497-5p表达逆转了抑制LINC00511表达对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:抑制LINC00511表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-497-5p表达有关,将为胃癌的治疗提供新思路和新靶点。     

黄芪甲苷调节miR-21基因抑制肾癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的机制探讨

目的:探讨黄芪甲苷对肾癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:用终浓度为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L、160 μmol/L的黄芪甲苷处理肾癌细胞A498作为不同浓度黄芪甲苷处理组，正常培养的细胞作为对照（NC）组；将anti-miR-con、anti-miR-21转染至细胞A498中，记为anti-miR-con组、anti-miR-21组；将miR-con、miR-21转染至细胞A498中再用80 μmol/L黄芪甲苷处理作为HSJG+miR-con组、HSJG+miR-21组。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞存活率；蛋白质印迹（Western Blot）检测裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）蛋白表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-21表达水平。结果:与对照组相比，不同浓度黄芪甲苷处理组肾癌细胞A498中细胞存活率显著降低，Cyclin D1表达水平显著降低，Cleaved-caspase-3表达水平显著升高，细胞凋亡率显著升高，小鼠肿块重量显著降低，miR-21表达水平显著降低（P＜0.05）。miR-21低表达Cyclin D1表达水平显著降低，Cleaved-caspase-3表达水平显著升高，细胞存活率显著降低，细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。miR-21高表达逆转了黄芪甲苷对肾癌细胞A498增殖抑制和凋亡促进的作用。结论:黄芪甲苷可抑制肾癌细胞A498增殖，促进细胞凋亡，抑制肾癌实体瘤的生长，其机制可能与miR-21表达水平有关。