甲基转移酶SETDB2对肝癌侵袭迁移的影响及其机制研究

摘要：目的 检测甲基转移酶SETDB2对肝癌侵袭转移的影响并探讨其机制。方法 应用Western blot、免疫组 化以及 Real-time PCR 等方法检测 37 例肝癌及对应癌旁组织标本中 SETDB2 蛋白及 mRNA 表达情况。将靶向 SETDB2 的短发卡 RNA（sh-SETDB2）和空载体（sh-NC）分别转染至人肝癌 MHCC97H 细胞构建稳转细胞系,应用 Tanswell侵袭实验、细胞划痕实验检测2组细胞的侵袭和迁移能力。通过基因芯片检测敲低SETDB2后表达有变化 的基因。敲低SETDB2后,运用Real-time PCR检测PTEN的mRNA的表达变化以及Western blot检测PTEN和组蛋白 H3第9位赖氨酸的三甲基化（H3K9me3）的表达变化,CHIP 检测H3K9me3在PTEN 的启动子区域的变化。在敲低 SETDB2的同时敲低PTEN的表达,Tanswell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 （1）Western blot和Real-time PCR的结果均表明肝癌组织中SETDB2蛋白及mRNA表达水平均高于癌旁组织;SETDB2表达的高低与肝癌组织学 分级和TNM分期有关。（2）转染sh-SETDB2的MHCC97H细胞的侵袭和迁移能力均明显低于sh-NC组。（3）基因芯 片、Western blot以及Real-time PCR等实验结果显示敲低SETDB2后PTEN表达上调。（4）在敲低SETDB2后H3K9me3 表达下调,PTEN启动子区域的H3K9me3减少。（5）与敲低SETDB1组相比,敲低SETDB2的同时敲低PTEN后细胞的 侵袭能力恢复。结论 SETDB2通过下调PTEN的表达促进肝癌细胞的侵袭迁移。     

长链非编码 RNA MIR4435-2HG靶向微小 RNA-1-3p调控信号通路磷脂酰肌醇激酶 /蛋白激酶 B对胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA MIR4435-2HG(LncRNA MIR4435-2HG)通过调控微小RNA-1-3p(miR-1-3p)的表达对胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制.方法 体外培养正常胰腺细胞系hTERT-HPNE与胰腺癌细胞系PANC-1、SW1990、PaTu8988、BxPC-3,将胰腺癌PaTu8988细胞按照随机数字表法分为si-MIR4435-2HG组(转染MIR4435-2HG siRNA)、si-con组(转染siRNA Control)、miR-1-3p组(转染miR-1-3p mimics)、miR-con组(转染miR-1-3p阴性对照)、si-MIR4435-2HG+an-ti-miR-1-3p组(共转染MIR4435-2HG siRNA与miR-1-3p抑制剂)、si-MIR4435-2HG+anti-miR-con组(共转染MIR4435-2HG siR-NA与miR-1-3p抑制剂的阴性对照),同时将未经任何处理的细胞作为NC组.采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中MIR4435-2HG与miR-1-3p的表达;双荧光素酶报告基因检测MIR4435-2HG与miR-1-3p的相互作用.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析敲低MIR4435-2HG及上调miR-1-3p表达对胰腺癌细胞增殖的影响;Transwell迁移及侵袭实验检测MIR4435-2HG及上调miR-1-3p表达对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响.蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)及磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白的表达.结果 MIR4435-2HG在胰腺癌细胞中的表达水平明显高于正常胰腺细胞;MIR4435-2HG可特异性结合miR-1-3p并调控其表达活性;敲低MIR4435-2HG与上调miR-1-3p表达后,可抑制胰腺癌PaTu8988细胞增殖,明显减弱细胞迁移及侵袭能力[其中NC组、miR-con组、si-MIR4435-2HG组增殖活性分别为48 h:(1.21±0.10)、(1.18±0.12)、(0.86±0.09),细胞迁移数量分别为(90.56±9.16)、(88.56±8.91)、(26.49±2.10),细胞侵袭数量分别为(160.79±16.12)、(155.09±15.49)、(69.23±7.10),均P<0.05],下调PaTu8988细胞中cyclin D1、MMP2、MMP9、p-Akt、PI3Kp110α、PI3Kp110β的表达;抑制miR-1-3p表达可促进胰腺癌PaTu8988细胞增殖、迁移及侵袭.结论 敲低LncRNA MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-1-3p表达并抑制PI3K/Akt信号通路活化而降低细胞增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达,进而减弱胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.     

慢病毒介导的PRL-3 shRNA对结肠癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响

目的 观察慢病毒介导的 shRNA 沉默肝再生磷酸酶-3（PRL-3）基因对结肠癌 SW480 细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法 实验分组为空白对照组、阴性对照组、转染组。将携带 PRL-3 shRNA 的慢病毒载体转染结肠癌SW480 细胞,建立稳定沉默 PRL-3 的细胞株,real-time PCR 检测转染后 PRL-3 mRNA 的相对表达水平。采用 MTT法、平板克隆形成实验检测转染后细胞增殖能力;采用 Transwell 侵袭实验、侵袭小室法检测转染后细胞迁移及侵袭能力;采用流式细胞术检测转染后细胞凋亡率变化。结果 稳定沉默 PRL-3 的细胞株构建成功,转染组 PRL-3mRNA 的相对表达水平低于空白对照组、阴性对照组（P＜0.05）,空白对照组、阴性对照组比较差异无统计学意义。PRL-3 shRNA 转染 SW480 细胞 72 h 后,转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞增殖能力受到抑制,转染 120 h时最明显（P＜0.05）。转染组克隆形成能力较空白对照组、阴性对照组下降（P＜0.05）。转染组与空白对照组、阴性对照组比较,细胞迁移、侵袭能力下降,凋亡率增加（P＜0.05）。结论 结肠癌 SW480 细胞转染 PRL-3 shRNA 可减少 PRL-3 的表达,有效抑制 SW480 细胞增殖,促进其凋亡,PRL-3 可能成为治疗结肠癌的靶基因。     

牛磺酸对胰腺癌细胞系BxPC-3和PANC-1细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨牛磺酸（Tau）对胰腺癌导管细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 体外培养胰腺癌BxPC-3和PANC-1细胞，采用不同浓度Tau(0、10、20、40、80、160 mmol/L)进行预处理。采用CCK-8、细胞划痕实验、TUNEL法观察Tau对BxPC-3和PANC-1细胞增殖、迁移和凋亡的影响；实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）和蛋白质免疫印迹法检测Tau影响BxPC-3和PANC-1细胞中相关细胞凋亡及细胞周期分子mRNA和蛋白表达的情况。结果 Tau可抑制BxPC-3和PANC-1的细胞增殖和迁移活性；同时，Tau能够促进BxPC-3和PANC-1细胞凋亡。与对照组相比，Tau处理后的BxPC-3细胞中相关凋亡因子P53、P21、Bcl-2关联X蛋白（BAX）表达水平呈上升趋势，而增殖细胞核抗原（PCNA）的表达降低；Tau处理后的PANC-1细胞中B淋巴细胞瘤-2蛋白（Bcl-2）、PCNA、细胞周期蛋白CyclinA2、CyclinB1、CyclinE、周期蛋白依赖性激酶CDK1、CDK2、CDK4、CDK6等的表达较对照组均下降，而相关凋亡蛋白P53、P21的表...     

百里醌抑制体内外胰腺癌转移作用

为探讨百里醌抑制体内外胰腺癌转移的作用及其机制,本研究应用不同浓度百里醌作用人胰腺癌Panc-1细胞后,观察百里醌对体外Panc-1细胞迁移和侵袭的作用;Western blotting检测胰腺癌细胞中NF-κB和MMP-9表达的变化。体内建立起裸鼠胰腺癌原位移植瘤模型,分成对照组和百里醌组,实验结束后观察百里醌对裸鼠胰腺癌转移的抑制作用,同时免疫组织化学法检测裸鼠胰腺肿瘤组织中CD34、NF-κB和MMP-9的阳性表达。结果表明,百里醌可浓度依赖性抑制体外人胰腺癌Panc-1细胞迁移和侵袭,同时可下调人胰腺癌Panc-1细胞中NF-κB和MMP-9的表达;另外,与对照组相比较,百里醌可明显抑制荷瘤裸鼠中胰腺癌转移,并下调CD34、NF-κB和MMP-9在胰腺肿瘤组织中的阳性表达。总之,结果提示百里醌可抑制体内外胰腺癌转移,该作用可能通过下调NF-κB和MMP-9的表达而实现。     

ML-9调节STIM1在下咽癌中的表达及作用机制

目的 分析ML-9调节STIM1在下咽癌中的作用机制。方法 选取90只饲养裸鼠作为研究对象,应用随机法分为对照组及ML-9组,各45例。比较两组治疗前后细胞增殖、凋亡、侵袭、裸鼠体重、瘤体大小、细胞转移、蛋白表达量情况。结果 治疗前,两组裸鼠各项指标比较,差异无统计学意义（P> 0.05）;治疗后,ML-9组裸鼠蛋白表达量、瘤体体积、瘤体重量情况均低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;ML-9组细胞增殖、凋亡、侵袭情况低于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 敲减下咽癌FaDu细胞中的STIM1基因后,下咽癌细胞的增殖、侵袭、转移能力也被显著抑制,并能够抑制下咽癌的细胞生物学行为,说明STIM1是调控下咽癌发生发展的关键因子。     

金丝桃苷抑制鼻咽癌细胞生物学行为的分子机制研究

目的 探讨金丝桃苷对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响和机制。方法 采用10、20及40 mg/L金丝桃苷的培养液孵育SUNE1细胞，依次记为低、中、高剂量组；将长链非编码RNA(lncRNA)配对盒基因8反义RNA 1(PAX8-AS1)过表达或敲低质粒、miR-494-3p模拟物及其阴性对照分别转染至40 mg/L金丝桃苷处理的SUNE1细胞，采用CCK-8实验、平板克隆实验、Transwell实验检测SUNE1细胞活力、克隆形成以及迁移和侵袭。蛋白质印记法分析基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9蛋白表达。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p表达。双荧光素酶报告实验分析lncRNA PAX8-AS1和miR-494-3p靶向关系。结果低、中、高剂量金丝桃苷降低SUNE1细胞活力、迁移数和侵袭数，下调MMP-2蛋白、MMP-9蛋白以及miR-494-3p表达水平，上调lncRNA PAX8-AS1表达水平（P<0.05）。lncRNA PAX8-AS1靶向负调控miR-494-3p表达。过表达lncRN...     

miR-208a促进非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的功能和机制研究

目的　探讨miR-208a对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法　（1）分别用miR-208a mimic、NC mimic、miR-208a inhibitor和NC inhibitor转染A549细胞。采用荧光定量PCR（qPCR）检测A549细胞中miR-208a过表达和干扰效率;采用CCK-8实验、Transwell实验和划痕实验检测miR-208a对A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响。利用生物信息学网站PicTar、miRanda、Targetscan和miRDB预测与miR-208a结合的下游靶基因;构建蛋白酪氨酸磷酸酶受体G（PTPRG）的3′UTR野生型和突变型双荧光素报告酶基因载体,和miR-208a共转染到HEK-293T细胞后观察荧光素酶活性变化。（2）取对数生长期的A549细胞,设置阴性对照组（si-NC组）、PTPRG敲低组（si-PTPRG组）和PTPRG敲低组＋miR-208a干扰组（si-PTPRG＋miR-208a inhibitor组）,采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测PTPRG对A549增殖、侵袭和迁移的影响,qPCR和Western blot检测3组细胞PTPRG的mRNA和蛋白表达变化。结果　（1）miR-208a mimic组miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均高于NC mimic组（P＜0.05）;miR-208a inhibitor组的miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均低于NC inhibitor组（P＜0.05）。生物信息学分析显示PTPRG是miR-208a的靶基因,双荧光素报告酶实验结果显示miR-208a过表达能够降低PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,而敲低miR-208a能够增加PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,miR-208a能够与PTPRG的3′UTR序列结合。（2）与si-NC组相比,si-PTPRG组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力明显增高,PTPRG基因和蛋白表达水平下降（P＜0.05）;而与si-PTPRG组相比,si-PTPRG＋miR-208a inhibitor组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力下降,PTPRG基因和蛋白表达水平升高（P＜0.05）。结论　miR-208a可能通过靶向调控PTPRG来促进A549细胞的增殖、侵袭和迁移。     

胡黄连苷Ⅱ对非小细胞肺癌恶性进展的影响

目的 探讨胡黄连苷Ⅱ对非小细胞肺癌（NSCLC）恶性进展的影响及机制。方法 将A549细胞分组为对照组,胡黄连苷Ⅱ低、中、高浓度组,K6PC-5[鞘氨醇激酶1(SPHK1)激活剂]组,胡黄连苷Ⅱ高剂量+K6PC-5组,检测细胞增殖、迁移、侵袭情况,以及细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、SPHK1、1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)及胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的表达情况。以BALB/c裸鼠为对象,通过皮下接种A549细胞悬液建立NSCLC裸鼠移植瘤模型,并将其分为裸鼠-对照组,裸鼠-胡黄连苷Ⅱ低、中、高剂量组,裸鼠-K6PC-5组,裸鼠-胡黄连苷Ⅱ高剂量+K6PC-5组（每组5只）,考察胡黄连苷Ⅱ对其瘤体质量及体积的影响。结果 与对照组比较,胡黄连苷Ⅱ低、中、高浓度组的细胞OD450值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率、细胞侵袭数及PCNA、MMP-2、MMP-9、SPHK1、S1PR3、ERK1/2蛋白的相对表达量均显著降低;与裸鼠-对照组比较,裸鼠-胡黄连苷Ⅱ低、中、高剂量组裸鼠体内的瘤体质量及体积均显著降低或缩小,上述指标均呈...     

趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12在肝癌侵袭 转移中的作用及机制

目的 探讨趋化因子受体 CXCR4 及其配体 CXCL12（CXCL12/CXCR4）在原发性肝癌侵袭转移中的作用 及机制。方法 分别采用 Western blot、免疫组化和 Real-time PCR 等方法检测 60 例肝癌及对应癌旁组织标本中 CXCL12/CXCR4 蛋白及 mRNA 表达水平。常规培养 4 种肝癌细胞（Huh7、MHCC97h、HepG2、Hep3B）和正常肝细胞 （7702）,Real-time PCR 检测上述细胞中 CXCL12、CXCR4 mRNA 的表达,筛选合适的实验细胞。将 CXCR4 干扰质 粒（sh-CXCR4）和对应空载体（sh-control）分别转染至 MHCC97h 构建稳转细胞系。Transwell 侵袭实验、细胞划痕实 验、MTT 实验分别检测 2 组细胞的侵袭、迁移和增殖能力。取稳定表达的 sh-control 和 sh-CXCR4 MHCC97h 细胞, 接种至 6 只裸鼠皮下,观察瘤体生长情况。Western blot 检测 sh-control 和 sh-CXCR4 MHCC97h 细胞及对应裸鼠移 植瘤中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达,同时对转染 CXCR 过表达质粒的 MHCC97h 中 VEGF-C 的表达水平 进行检测。结果 （1）Western blot、免疫组化和 Real-time PCR 的结果均证实肝癌组织中 CXCL12/CXCR4 蛋白及 mRNA 表达水平均高于癌旁组织。（2）Huh7、MHCC97h、HepG2、Hep3B 细胞中 CXCL12/CXCR4 mRNA 表达水平均高 于 7702 细胞,选取 MHCC97h 为实验细胞。转染 sh-CXCR4 的 MHCC97h 细胞的侵袭、迁移和增殖能力均明显低于 sh-control 组,同时接种含 sh-CXCR4 的 MHCC97h 细胞的裸鼠移植瘤的生长速度也明显小于 sh-control 组。（3）体外 和体内实验均证实 sh-CXCR4 组的 VEGF-C 表达水平均低于 sh-control 组,而过表达 CXCR4 后,VEGF-C 的蛋白表 达明显上调。结论 CXCL12/CXCR4 在原发性癌组织和肝癌细胞中呈现高表达,CXCL12/CXCR4 可能通过调控 VEGF-C 蛋白表达从而抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和转移。     

长链非编码 RNA组蛋白去乙酰化酶 3通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路调控肝癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡

目的 研究长链非编码RNA组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的调控机制.方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常肝细胞MIHA、肝细胞癌细胞SK-Hep1中HDAC3的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-HDAC3组(转染si-HDAC3)、si-HDAC3+DMSO组[转染si-HDAC3并用二甲基亚砜(DMSO)处理]、si-HDAC3+MHY1485组[转染si-HDAC3并用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制剂MHY1485处理]用脂质体法转染至SK-Hep1细胞;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot?ting)检测细胞中Akt激酶、翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)、核糖体p70S6激酶蛋白(S6K1)、磷酸化核糖体p70S6激酶蛋白(p-S6K1)的蛋白表达.结果 与正常肝细胞MIHA(1.00±0.06)相比,肝细胞癌细胞SK-Hep1中HDAC3表达(4.38±0.34)显著上调(P<0.05).敲减HDAC3后,SK-Hep1细胞的增殖、迁移、侵袭能力均得到明显下调,凋亡能力得到明显上调.有趣的是,敲减HDAC3后,SK-Hep1细胞中mTOR信号通路关键基因Akt、4E-BP1、p-S6K1的表达均明显下调,并且激活mTOR信号通路可部分逆转敲减HDAC3对肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡调控作用.结论 长链非编码RNA HDAC3可调控肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,其机制可能与mTOR信号通路相关,可为肝癌的治疗提供新的作用靶点.     

靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA,采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞,细胞分3组:对照组、空白转染组、转染组.Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化.CCK-8法检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位.划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力.Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况.结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达.与对照组和空白转染组比较,转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低,G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时细胞增殖相关基因PCNA、凋亡抑制基因Bcl-2、转移相关基因MMP-9蛋白表达显著下调,凋亡诱导基因Bax蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 靶向沉默SSBP1基因能够通过线粒体途径抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移,并诱导其凋亡.     

EBF1-shRNA对肺腺癌A549细胞体内外增殖能力的影响

目的 研究EBF1基因下调对肺腺癌A549细胞体内外增殖的影响,并初步探讨其机制。方法 通过免疫组化和RT-PCR检测EBF1在肺癌组织和肺癌细胞系中的表达情况。根据本实验室设计的针对EBF1的小干扰RNA(shRNA)序列,选择一条已经证实最有效的序列作为靶序列和一条随机序列作为阴性对照,构建重组逆转录病毒shRNA表达载体并将其转染入A549细胞中;应用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测对EBF1基因的沉默效果;应用MTT比色法及BrdU染色法实验检测EBF1-shRNA对A549细胞体外增殖的影响;利用Transwell实验及划痕实验检测EBF1-shRNA对A549细胞体外侵袭及迁移能力的影响;利用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期;通过裸鼠腋窝皮下接种各组细胞,观察EBF1-shRNA对A549细胞在裸鼠体内的致瘤能力的影响;Western blot检测CDK6、P21、P27蛋白表达。结果 EBF1在癌旁组织及肺癌组织中的基质细胞中不表达,在NSCLC及SCLC癌细胞细胞核中表达。EBF1-shRNA有效地沉默了EBF1基因mRNA和蛋白的表达;沉默EBF1基因的表达能够抑制A549细胞的体内外增殖能力,使实验组细胞的细胞周期阻滞于G 1 期;沉默EBF1基因的表达后,实验组细胞中CDK6蛋白表达降低,P21、P27蛋白增加。结论 EBF1-shRNA通过使细胞周期阻滞于G 1 期来抑制肺腺癌A549的体内外增殖能力,这种抑制作用涉及CDK6表达下降以及P21/P27的表达上调。     

miR-149抑制结直肠癌细胞迁移的分子机制研究

目的 探讨miR-149对结直肠癌（CRC）细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及其作用机制。方法 实时荧 光定量PCR（q-PCR）方法检测miR-149在CRC细胞SW620、LS174T和人结肠上皮细胞FHC中的表达水平;荧光素酶 分析法验证 STAT3 与 miR-149 之间的靶向结合关系;q-PCR 和 Western blot 检测 miR-149 过表达对 CRC 细胞中 STAT3、p-STAT3 mRNA和蛋白表达的影响。将miR-149 mimics与STAT3过表达质粒单独或者共转染至CRC细胞 中,并分为miR-NC组、miR-149 mimics组、miR-149 mimics+pEGFP/STAT3组。采用CCK-8法、Transwell法、细胞划 痕法、流式细胞术分别检测各分组CRC细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡情况。结果 与正常结肠上皮细胞FHC相比, CRC 细胞 SW620、LS174T 中 miR-149 表达水平受到抑制（P＜0.01）。荧光素酶实验证实,在 CRC 细胞中 STAT3 是 miR-149的一个直接靶基因。过量表达miR-149抑制STAT3、p-STAT3 mRNA和蛋白的表达,降低CRC细胞增殖能 力、侵袭能力以及迁移能力（P＜0.01）。同时,过量表达 miR-149 也可促进 CRC 细胞的凋亡（P＜0.01）。但过表达 STAT3可解除miR-149对CRC细胞增殖、侵袭以及迁移能力的抑制作用。结论 miR-149通过靶向STAT3抑制结直 肠癌细胞的增殖、侵袭与迁移,同时促进细胞的凋亡。     

蝎毒多肽提取物体外抑制胰腺癌细胞侵袭转移及相关机制

目的研究蝎毒多肽提取物PESV对人高转移胰腺癌细胞MIA-PaCa2-3转移相关能力的影响及其作用的机制。为PESV在临床上治疗胰腺肿瘤提供理论根据。方法以高转移的人胰腺癌细胞系MIA-PaCa2-3为研究对象,通过细胞增殖实验(MTT法)观察在PESV影响下肿瘤细胞活性及增殖情况,通过细胞黏附实验、细胞划痕实验及Transwell体外侵袭实验检测PESV干预后细胞的黏附、侵袭及运动能力变化。免疫细胞化学实验及Western blot检测胰腺癌细胞的E-钙粘蛋白、纤粘蛋白和基质金属蛋白酶-9的表达。结果细胞增殖实验结果显示,PESV对胰腺癌细胞呈明显剂量及时间效应关系的增殖抑制作用,与对照组比较细胞增殖抑制作用明显(P<0.05);黏附实验表明PESV可降低胰腺癌细胞的黏附力,侵袭实验及划痕实验的结果表明PESV可以使细胞的侵袭力和运动能力下降,PESV(40mg.L-1)干预8h后,黏附力、侵袭力和运动能力的抑制率分别为(30.3±4.7)%、(42.1±3.7)%、(47.6±3.3)%,与对照组比较差异均有显著性(P<0.05);免疫细胞化学及Western blot实验检测均显示,PESV干预后,胰腺癌细胞E-钙粘蛋白阳性表达细胞数量上升,灰度值明显上调(P<0.05),FN及MMP-9蛋白阳性表达数量减少,灰度值明显下调(P<0.05)。结论PESV能够明显抑制胰腺癌细胞的增殖、黏附力、侵袭及运动能力,其机制可能是通过提高E-cad表达、降低FN和MMP-9表达而实现的。     

羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞生物学行为的影响

目的 探讨羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）NCI-H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将体外培养的NCI-H1299细胞分为正常对照（NC）组（未处理）、低剂量组（12.5μmol/L羽扇豆醇）、中剂量组（25μmol/L羽扇豆醇）、高剂量组（50μmol/L羽扇豆醇）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-100-5p组（转染miR-100-5p）、anti-miR-NC+高剂量组（转染anti-miR-NC后用50μmol/L羽扇豆醇处理）、anti-miR-100-5p+高剂量组（转染anti-miR-100-5p后用50μmol/L羽扇豆醇处理）。CCK-8和克隆形成实验检测NCI-H1299细胞增殖;Transwell法检测NCI-H1299细胞迁移和侵袭。荧光定量PCR(q PCR)检测miR-100-5p表达;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9蛋白的表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组NCI-H1299细胞活力、细胞克隆数、迁移数、侵袭数、CyclinD1、...     

EM患者子宫内膜组织的ESCs中miR-539表达水平及其靶向MMP-9对ESCs侵袭和迁移的影响

目的 探究子宫内膜异位症（EM）患者子宫内膜组织的子宫内膜基质细胞（ESCs）中miR-539表达水平, 以及miR-539靶向基质金属蛋白酶9（MMP-9）对ESCs侵袭和迁移的影响。方法 收集60例EM患者子宫内膜异位 组织及47例正常子宫内膜组织,分离ESCs原代培养,实时荧光定量PCR检测miR-539和MMP-9 mRNA表达水平, 并采用双荧光素酶报告基因检测其靶向关系。利用Lipofectamine 3000试剂转染ESCs,并将其分为miR-539 mimics 组、mimics NC组、miR-539 inhibitors组和inhibitors NC组。CCK-8检测各组细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移; Transwell检测细胞侵袭;Western blot法检测各组细胞中MMP-9蛋白表达水平。结果 EM组miR-539 mRNA水平 显著低于对照组,MMP-9 mRNA水平显著高于对照组（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示miR-539与MMP-9 具有明显的靶向关系（P＜0.05）。与mimics NC组相比,miR-539 mimics组ESCs细胞增殖、划痕愈合率、侵袭细胞数 量及MMP-9蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）;与inhibitors NC组相比,miR-539 inhibitors组ESCs细胞增殖、划痕 愈合率、侵袭细胞数量及MMP-9蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）。结论 miR-539可靶向调节MMP-9表达水 平,影响ESCs的增殖、迁移和侵袭。     

miR-10a在胰腺癌侵袭转移中的作用

目的 探讨microRNA-10a(miR-10a)在胰腺癌侵袭转移中的作用. 方法 选取2014年1月至2016年12月在赣南医学院第一附属医院切除的胰腺癌组织标本68例,同时选取癌旁组织作为对照,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织标本miR-10a表达;同时选取胰腺癌细胞株Capan-1细胞,以脂质体转染法将miR-10a重组正、反义真核表达质粒载体转染Capan-1细胞,采用RT-PCR检测转染细胞miR-10a表达,Transwell和Matrigel试验观察转染细胞的迁移和侵袭能力,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力. 结果 胰腺癌组织miR-10a相对表达量为(0.213±0.024),明显高于癌旁组织(P<0.01);中低分化胰腺癌miR-10a相对表达量为(0.212±0.011),明显高于高分化胰腺癌(P<0.01);有淋巴结转移胰腺癌miR-10a相对表达量为(0.217±0.017),明显高于无淋巴结转移胰腺癌(P<0.05);TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期胰腺癌miR-10a相对表达量为(0.230±0.015),明显高于Ⅰ~Ⅱ期胰腺癌(P<0.01).转染48 h后,正义组miR-10a相对表达量为(0.021±0.010),明显高于反义组、空载组和空白对照组(P<0.05);反义组miR-10a相对表达量为(0.003±0.001),明显低于空载组和空白对照组(P<0.05).正义组24 h和48 h 光密度(OD)值分别为(0.602±0.018)和(0.753±0.041),明显高于反义组、空载组和空白对照组(P<0.05);反义组24 h和48 h OD值分别为(0.451±0.023)和(0.591±0.038),明显低于空载组和空白对照组(P<0.05).正义组迁移和侵袭细胞数分别为(85.22±12.10)个和(140.24±30.54)个,明显高于反义组、空载组和空白对照组(P<0.05);反义组迁移和侵袭细胞数分别为(12.52±3.22)个和(20.41±8.66)个,明显低于空载组和空白对照组(P<0.05). 结论 miR-10a过表达可对胰腺癌有生长促进、增强侵袭和迁移的作用,值得进一步研究.