同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清肌酐

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清肌酐的候选参考方法.方法 以[2H3]肌酐为内标,用无水乙醇沉淀血清中的蛋白质,用氯仿纯化上清液,用液相色谱串联质谱分离测定,以包括法定量.结果 血清肌酐测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.57%(范围0.52%～0.61%)、0.43%(范围0.11%～0.59%)和0.73%(范围0.62%～0.83%).加样回收试验的回收率范围为99.09%～101.13%.分析两种参考物质SRM909b和SRM 967b,测定结果与认定值的偏差小于0.4%.结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清肌酐的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清肌酐测定的参考方法.     

血清尿素同位素稀释气相色谱质谱法的建立和研究

目的 建立一种基于同位素稀释/气相色谱/质谱技术(isotope dilution/gas chromatography/mass spectrometry,ID/GC/MS)的血清尿素候选参考方法.方法 以[13C,15N2]尿素为内标,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白类物质,依次使用丙二醛-二甲基缩醛和N-甲基-(三甲基硅烷基)-三氟乙酰胺(MSTFA)将尿素衍生成为三甲基硅烷氧基嘧啶,用气相色谱/质谱(GC/MS)分析衍生产物,以包括法定量.结果 血清尿素测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.38%(范围0.12%～0.47%)、0.62%(范围0.49%～0.87%)和0.73%(范围0.51%～0.93%),回收率范围为99.37%～100.95%,分析美国国家标准和技术研究院(NIST)2个水平的血清标准物质SRM 909b,测定结果与靶值的偏差小于0.2%.结论 建立了ID/GC/MS技术测定血清尿素的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清尿素测定的参考方法.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清葡萄糖

目的 建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清葡萄糖的候选参考方法.方法 以[~(13)C_6]葡萄糖为内标,用重量法准确地与血清混合,除去蛋白后在碱性条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮反应,用LC/MS/MS测定葡萄糖和内标衍生产物,以包括法定量.结果 血清葡萄糖测定的批内、批间和总变异系数的平均值分别为0.36%(范围0.28%-0.42%)、0.47%(范围0.20%-0.67%)和0.61%(范围0.42%-0.76%).加样回收试验的回收率范围为99.0%-100.9%.分析参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的平均偏差为-0.20%(范围-0.39%-+0.11%).结论 建立了ID-LC/MS/MS法测定血清葡萄糖的方法,方法准确、精密、简便,可望作为血清葡萄糖测定的参考方法.     

血清葡萄糖参考方法的复现及与临床常用检测方法的比对研究

目的 复现血清葡萄糖测定己糖激酶的参考方法 (紫外分光光度法),对此方法 进行性能验证,并评价5种临床常用检测方法 .方法 按照美国CDC推荐的血清葡萄糖测定己糖激酶参考方法 的要求,建立参考方法 ;通过测定标准参考物质(SRM),以及参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)主办的参考实验窒间的国际环形比对试验(ring-trial),来验证参考方法 的准确性;按照美国临床和实验室标准委员会(CLSI)EP9-A2试验方案,己糖激酶参考方法 作为比对方法 ,5种临床常用检测方法 作为待评方法 ,同时测定40份血清样品.结果 用己糖激酶参考方法 测定SRM965a,水平2和水平3与靶值的偏倚分别为0.93%、-0.23%;参加参考实验室国际比对,血清葡萄糖检测结果 在可接受范围内;5种常用检测方法 在医学决定点(Xc=6.11 mmol/L)预期偏差的95%可信区间在实验窜定义的可接受偏差(10%)范围内,也在生物学变异的可接受偏差(6.9%)范围内.结论 本室已复现并验证了血清葡萄糖测定己糖激酶参考方法 ;5种常用血清葡萄糖检测方法 的测定结果 与参考方法 的测定结果 有差异,但误差在临床可接受范围,不会影响临床检测结果 .     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清睾酮

目的建立一种用同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清睾酮的候选参考方法。方法以[16,17,17-d3]睾酮为内标,用重量法准确地与血清混合,用乙酸乙酯-正己烷混合溶剂提取,以羟丙基-β-环糊精水溶液对提取液作净化处理,用液相色谱串联质谱分析,质谱选择离子监测模式检测睾酮与内标的特定碎片离子,用包括法定量。结果血清睾酮测定的批内、批间和总变异系数(CV)的均值(范围)为0.84%(0.22%~2.00%)、1.01%(0.48%~2.37%)和1.37%(0.53%~3.09%)。参考物质ERM DA-345a和NIST SRM 971测定结果与认定值的平均偏差范围为-2.0%~+1.8%。结论用ID-LC/MS/MS建立了血清睾酮的测定方法,方法准确、精密、简便,有望作为血清睾酮测定的参考方法。     

反相高效液相色谱紫外法检测人血清尿酸

目的探讨日本临床化学会(JSCC)推荐的检测人血清尿酸(UA)的反相高效液相色谱紫外(HPLC-UV)法是否可作为候选参考方法来验证同位素稀释质谱法、评价常规方法。方法对反相HPLC-UV法进行复现并进行方法学评价。观察尿酸酶处理人血清样本后的色谱以评价其特异性;检测系列标准液的UA水平并绘制标准曲线,观察线性范围;用朗道公司质控品评价精密度;用UA标准液评价回收率;分别用有证参考物SRM 909b(Ⅰ和Ⅱ)、国家一级标准物质GBW 09176、GBW 09175、GBW 09174评价正确度,并与2008年国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室RELA(ring trials for reference labora-tories)结果进行比对;用改良Bland-Altman图评价5种常规检测系统与反相HPLC-UV法间的偏差。结果尿酸酶处理后UA色谱峰消失;本法的线性范围为2.08～1 785μmol/L;批内变异系数(CV)均<0.3%,批间CV均<0.4%,日间CV均<2.3%,总CV均<2.7%;平均相对回收率为96.0%～100.6%;与SRM909bⅠ和Ⅱ靶值的偏移分别为-2.5%、-2.3%;与GBW09176、GBW 09174、GBW 09175靶值的偏移分别为0.29%,-0.74%和0.06%;与参加RELA比对的另3家实验室的平均值进行比较,水平1偏移为0.35%,水平2为-0.69%;Hitachi、Beckman Coulter、Roche、Dade、Vitros常规检测系统检测人血清UA与反相HPLC-UA法的相关系数分别为0.998 9、0.996 5、0.999 2、0.999 2和0.998 7,与反相HPLC-UA法的偏差均小于5%的生物学变异。结论本法特异、简便、快速,精密度好,正确度高,与具有良好溯源的常规测定系统具有良好的相关性和一致性,可推荐作为人血清UA测定的候选参考方法。     

高效液相色谱法测定血清葡萄糖

摘要：目的:建立一种测定血清葡萄糖（glucose,Glu）的高效液相色谱法（HPLC）,探讨其能否作为血清Glu测定的参考方法。 方法:以D-半乳糖（D-galactose）为内标物,用无水乙醇沉淀、去除血清中的蛋白质,在pH 9.1条件下与1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）反应,用HPLC测定血清Glu衍生产物、D-半乳糖衍生产物,用标准曲线法定量;对建立的方法进行方法学评价。 结果:本法测定血清Glu的批内变异系数（CV）为0.33%～0.67%,平均0.51%;批间CV为0.02%～0.85%,平均0.38%;总CV为0.47%～1.03%,平均0.68%。回收率为98.22%～101.96%。分析Glu的参考物质SRM 965a,测定结果与认定值的偏差为-0.928%～0.347%,平均偏差为-0.072%。 结论:初步建立了测定血清Glu的HPLC法;该法准确、精密,有望作为血清Glu测定的候选参考方法。     

常规方法测定血清尿素和肌酐正确度的验证和溯源性评价

目的 验证常规方法测定血清尿素、肌酐浓度的正确度,以评价其校准溯源性.方法 选择20份经同位素稀释气相色谱质谱法(ID-GC/MS)进行尿素定值的新鲜冰冻患者血清作为标本,用常规方法测定尿素浓度;另选择20份经同位素稀释液相色谱串联质谱法(IlD-LC/MS/MS)进行肌酐定值的新鲜冰冻患者血清作为标本,用待评价系统测定肌酐浓度;分别将尿素和肌酐的测定结果与质谱法认定值进行线性回归分析,计算百分偏倚并评估预期偏倚.结果 常规方法测定尿素结果与认定值间线性回归方程为y =0.9890X +0.0192(R2 =0.9990,P＜0.01,n=20);测定肌酐结果与认定值间线性回归方程为Y=0.9815X-6.4794(R2 =0.9989,P＜0.01,n=20);尿素、肌酐测定结果的平均百分偏倚分别为-0.41％ (P ＞0.05)和-4.20％ (P ＜0.05);通过线性回归方程计算出在3个医学决定水平的预期百分偏倚分别为尿素:-0.46％、-0.83％、-0.96％;肌酐:-15.90％、-5.87％、-2.95％.结论 常规方法定尿素结果和参考方法一致,结果可溯源至ID-GC/MS方法;肌酐测定结果与参考方法之间的偏倚符合根据生物学变异导出的“最低性能规范要求”,但是其特异性有改进的余地.     

应用反相高效液相色谱内标法测定血清尿酸

目的 评价以5-氟尿嘧啶(5-FU)作内标的反相高效液相色谱(HPLC)测定血清尿酸(UA)的方法 ,拟初步推荐其作为血清UA测定的候选参考方法 ;并应用此方法 评价常规酶比色法测定血清UA的结果 偏倚.方法 对测定血清UA的反相HPLC内标法进行方法 学评价;通过测定有证参考物质(SRM)、参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室考察活动,验证此方法 的准确性及可靠性.以反相HPLC内标法为比较方法 ,以6种常用检测系统中的酶比色法作为实验方法 ,对61份血清样本进行测定.组成6个比对组,对每组比对数据作散点图、偏倚图,计算线性方程和相关系数(R2),进行偏倚评估.结果 反相HPLC内标法测定UA线性范围达1 190 μmol/L,批内变异系数(CV)＜2.1%,日间CV＜3.9%,绝对回收率为96.2%～101.0%,平均相对回收率为95.1%～99.4%.测定SRM的平均相对偏倚为-8.29%;测定IFCC参考实验室考察活动提供的样本,其结果 与同位素稀释质谱(ID-MS)法的相对偏倚范围为-3.45%～-1.26%;在Beckman、Roche、Dade、Vitros封闭系统及Beckman、Roche开放系统中的酶比色法分别与反相HPLC内标法比较,各组中2种方法 均相关良好(R2=0.996 9、0.997 2、0.995 2、0.996 7、0.997 3、0.994 7),在UA为120、470L、630 μmol/L时,预期相对偏倚范围分别为-14.6%～4.3%、-0.4%～8.0%、0.8%～8.8%,其中Beckman封闭系统测定结果 与反相HPLC内标法的一致性好,Roche封闭系统低值偏低,Dade和Vitros封闭系统高值偏高,封闭系统比开放系统结果 略好.结论 拟推荐以5-FU为内标的反相HPLC法作为血清UA测定的候选参考方法 .酶比色法在不同检测系统中所测结果 存在一些差异.     

应用反相高效液相色谱内标法测定血清尿酸

目的评价以5-氟尿嘧啶(5-FU)作内标的反相高效液相色谱(HPLC)测定血清尿酸(UA)的方法,拟初步推荐其作为血清UA测定的候选参考方法;并应用此方法评价常规酶比色法测定血清UA的结果偏倚。方法对测定血清UA的反相HPLC内标法进行方法学评价;通过测定有证参考物质(SRM)、参加国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)参考实验室考察活动,验证此方法的准确性及可靠性。以反相HPLC内标法为比较方法,以6种常用检测系统中的酶比色法作为实验方法,对61份血清样本进行测定。组成6个比对组,对每组比对数据作散点图、偏倚图,计算线性方程和相关系数(R2),进行偏倚评估。结果反相HPLC内标法测定UA线性范围达1190μmol/L,批内变异系数(CV)<2.1%,日间CV<3.9%,绝对回收率为96.2%~101.0%,平均相对回收率为95.1%~99.4%。测定SRM的平均相对偏倚为-8.29%;测定IFCC参考实验室考察活动提供的样本,其结果与同位素稀释质谱(ID-MS)法的相对偏倚范围为-3.45%~-1.26%;在Beckman、Roche、Dade、Vitros封闭系统及Beckman、Roche开放系统中的...     

基于电感耦合等离子体质谱法血清钙离子检测候选参考方法的建立

目的基于电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS),建立一种检测血清钙离子的候选参考方法。方法方法学建立.将从医院收集到的血清标本以0.3%硝酸溶液直接稀释100倍,在血清标本基质溶液中添加不同浓度钙标准溶液,配制含血清基质的标准品溶液。以锗(Ge)为内标,采用标准加入法,计算血清钙离子浓度。对所建立的候选参考方法进行线性、精密度、正确度的性能评估和方法比对。结果血清钙离子浓度在0.000~20.400 mmol/L内(稀释后浓度为0.000~0.204 mmol/L)线性良好(R2>0.9999);批内不精密度为0.22%~0.47%,批间不精密度为0.64%~0.77%,总不精密度为0.98%~1.09%;检测3个浓度SRM 956d,结果均在证书要求的不确定度范围内,相对偏移分别为-0.16%,0.04%,0.23%;该方法参加2017年参考实验室外部质量评价计划(RELA),比对通过。与检验医学溯源联合委员会(JCTLM)所列参考方法进行比较,结果一致性良好。本研究所建立的候选参考方法与临床常规电极方法进行比较,具有良好的相关性。结论成功建立血清钙离子检测候选参考方法,线性范围宽、具有良好的精密度与准确度。     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清总甘油

目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清总甘油的方法.方法 以[13C3]-甘油作内标,用氢氧化钾异丙醇溶液水解血清甘油酯为游离甘油,将游离甘油转化为苯甲酸酯,用同位素稀释液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)分离检测,用标准曲线法定量.结果 甘油/内标峰面积比与甘油浓度(0.565～4.517 mmol/L)线性相关系数大于0.999 9;测定不同浓度血清总甘油批内变异系数(CV)平均为0.52%(范围0.21%～2.62%),总CV平均为1.15%(范围0.62%～2.00%);分析国际和国家标准物质,测定值与认证值的偏倚小于1%(-0.20%～1.06%).结论 建立同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清总甘油方法,方法特异、精密、准确,可望用作血清总甘油测定参考方法.     

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定人血清尿酸

目的建立一种使用同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC/MS/MS）测定人血清尿酸的候选参考方法。方法用[1,3]1-5N2尿酸作内标,与一定量的血清充分混匀,加入等量乙腈沉淀血清蛋白并提取尿酸,氯仿纯化上清液后用液相色谱串联质谱（LC/MS/MS）分离测定。优化LC/MS/MS的色谱条件,评价该法的精密度、回收率和偏倚,并计算不确定度。结果对3个浓度水平的室间质量评价用质控血清测定3批,批内、批间和总变异系数（CV）的均值（范围）分别为0.54%（0.44%-0.69%）、0.66%（0.45%-0.79%）和0.86%（0.66%-1.02%）。加样回收试验回收率范围为98.38%-102.64%。美国国家标准与技术研究所（NIST）标准物质SRM 909b-Ⅰ、Ⅱ的测定均值与靶值的偏倚分别为0.04%和0.25%。3种质控血清的相对扩展不确定度分别为1.80%、2.19%和2.04%。结论建立的ID-LC/MS/MS测定血清尿酸的方法精密、准确,有望作为血清尿酸测定的参考方法。     

血清尿酸紫外分光光度参考方法的建立及性能评价

目的以尿酸酶紫外光度法为基础,建立血清中尿酸测定的参考方法并评价其性能.方法 用新鲜患者血清样本、迈瑞常规复合校准品等对方法的精密度进行评估;用有证参考物质SRM909bⅠ和Ⅱ、IFCC参考实验室质评样本Rela A/B对方法的准确度进行初步评价,同时测定新鲜人血清并与同位素稀释质谱法进行方法学对比,验证方法准确度.结果 方法对新鲜患者血清、厂家复合校准品等不同类型样本批内不精密度CVintra小于1%,总不精密度CVt小于2%;有证参考物质SRM909bⅠ/Ⅱ测定结果均在参考值范围内,对UA参考实验室能力验证样本Rela A/B测定结果与中心值结果相对偏差小于0.5%;血清样本测定结果与同位素稀释液相质谱法可比,线性回归斜率1.005,相关系数0.999,医学决定水平处引入的相对误差小于3.25%.结论 血清尿酸紫外分光光度法已基本建立,精密度和准确度符合要求,测量结果和同位素稀释液相色谱/质谱法可比,可为常规系统尿酸溯源体系的建立和性能评估提供便捷有效的方法.     

Determination of serum glucose by isotope dilution mass spectrometry: candidate definitive method.

We report a rather simple method to determine glucose concentration in serum, using isotope dilution mass spectrometry and [13C6]glucose as internal standard. The procedure involves a single step of sample purification and the conversion of the analyte into its aldononitrile pentaacetate. The between-day and within-day contribution to total variance for a single measurement was determined by assaying Standard Reference Material (SRM) 909 serum. The method was then applied to measurement of glucose concentration in three lyophilized sera: SRM 909 and two other commercially available sera. In the two studies, the concentration of SRM 909 serum was found to be 0.8% above and 0.3% below the reported value (6.25 mmol/L), respectively; the overall coefficient of variation for determinations in all sera ranged from 0.37% to 0.56%. The precision and the accuracy of the method satisfy the requirements for a Definitive Method.     

高效液相色谱测定血清甘油三酯的研究——一种参考方法的建议

目的　建立特异、精密的血清总甘油和游离甘油测定方法 ,以便甘油三酯测定标准化。方法　以 1,2 ,4 丁三醇作内标 ,用柱前衍生高效液相色谱技术分析血清皂化前后的甘油含量 (两者分别代表血清游离甘油和总甘油浓度 )。结果　测定总甘油相对不精密度小于 2 % ,游离甘油小于 4% ;总甘油平均回收率 10 0 0 % ,游离甘油 99 7% ,与同位素稀释 /质谱法的相对偏差不大于± 2 %。结论方法特异、精密、简单 ,可望用作血清甘油三酯测定参考方法。