人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值.方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射一胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力.根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率.结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P＞0.05),但是受精率存在显著性差异(P＜0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P＞0.05),但受精率存在显著性差异(P＜0.05).成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P＜0.05).程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例.获得1例生化妊娠.结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力.玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势.     

人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究

目的:研究人类成熟卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液,探讨人类卵母细胞玻璃化冷冻保存的方法及临床应用价值。方法:运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,复苏后行胞浆内单精子注射-胚胎移植或培养至囊胚形成,观察复苏后卵母细胞受精及发育能力。根据冷冻方法分为程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,又将玻璃化冷冻组分为自配液冷冻组和成品液冷冻组,比较各组存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:程序化冷冻组和玻璃化冷冻组间存活率、卵裂率、囊胚形成率均无显著性差异(P>0.05),但是受精率存在显著性差异(P<0.05);程序化组与自配液组、成品液组间存活率、卵裂率均无显著性差异(P>0.05),但受精率存在显著性差异(P<0.05)。成品液组与自配液组、程序化组间囊胚形成率存在显著性差异(P<0.05)。程序化组移植4例,获得临床妊娠并分娩1例,玻璃化组移植7例,获得1例生化妊娠。结论:程序化冷冻与玻璃化冷冻法均可应用于人类成熟卵母细胞,冻融后卵母细胞具备正常受精能力及卵裂能力。玻璃化冻存人类卵母细胞具有更大发展趋势。     

Hemi-straw玻璃化与程序化冷冻小鼠不同发育阶段胚胎的效果

目的:探讨半细管(Hem i-straw)玻璃化方法与程序化方法冷冻不同发育阶段小鼠胚胎的效果。方法:采用慢速程序化方法与玻璃化方法冷冻小鼠原核期胚胎、卵裂期及早期囊胚期胚胎。解冻后观察存活率、囊胚形成率。结果:采用玻璃化方法冷冻小鼠卵裂期与早期囊胚期胚胎的存活率为92.7%与95.5%,显著高于玻璃化冷冻原核期胚胎的存活率79.8%与程序化冷冻的各组(均P<0.01)。程序化冷冻早期囊胚的存活率仅为50.2%,显著低于其他组(均P<0.01)。经培养后囊胚的形成率比较,程序化冷冻组内无显著性差异(P>0.05),但均显著低于玻璃化冷冻组(均P<0.01)。玻璃化冷冻卵裂期与早期囊胚组的囊胚形成率高达90.1%与92.2%,显著高于原核期胚胎玻璃化冷冻组69.5%(均P<0.01)。结论:胚胎行冷冻保存时,玻璃化冷冻效果较程序化冷冻好,且选择早期囊胚可获最佳冷冻效果。     

OPS法玻璃化冷冻未成熟卵母细胞的效果观察

目的:探讨OPS(open pu lled straw,开放式拉细麦管)法玻璃化冷冻技术冻存未成熟卵母细胞的效果。方法:小鼠GV期卵母细胞用OPS法玻璃化冷冻复苏后行体外成熟培养(in-vitro m aturation,IVM)或直接行IVM,所获成熟卵行体外受精(IVF)和胚胎的体外培养(IVC)。以体内成熟卵行IVF/IVC作为in-vivo对照组。结果:GV期卵冻融后65.11%存活,IVM后成熟率为52.86%,其成熟率显著低于IVM对照组。冻融卵成熟后受精、卵裂率(33.78%、76.00%)低于IVM对照组和in-vivo对照组,培养后未见囊胚形成。结论:OPS法玻璃化冷冻技术可有效冻存GV期卵母细胞,复苏后可发育成熟,但卵的受精和继续发育能力欠佳。     

海藻糖用于玻璃化冷冻卵母细胞的研究

海藻糖的发现为低温保存卵母细胞提供可利用的价值,其作为冷冻保护剂对卵母细胞进行玻璃化冷冻成为新的冷冻技术方法.海藻糖的作用原理包括:"水替代"假说、"玻璃态"假说、"优先排阻"假说.在高温、高寒、高渗透压及干燥、脱水、冷冻时等恶劣环境条件下,海藻糖在细胞表面能形成独特的保护膜,有效地保护蛋白质分子不变性失活,从而维持生命体的生命过程和生物特征.目前海藻糖已用于多种生物细胞研究,如:红细胞、血小板及生殖细胞等的离体长期保存,且均表现出独特的功能.     

卵母细胞玻璃化冷冻损伤相关因素及进展

卵母细胞玻璃化冷冻损伤的机制及影响因素的研究是近年来关于生殖能力贮存的研究热点.近年来随着细胞生物学及分子生物学的迅速发展,对卵母细胞冷冻损伤的影响因素研究取得了巨大进展.综述冷冻保护剂、卵母细胞特点及发育阶段、降温速率、卵母细胞的外围结构、冷冻方法等因素对卵母细胞冷冻损伤的影响机制及降低卵母细胞冷冻损伤的最近进展.     

卵母细胞玻璃化冷冻损伤相关因素及进展

卵母细胞玻璃化冷冻损伤的机制及影响因素的研究是近年来关于生殖能力贮存的研究热点。近年来随着细胞生物学及分子生物学的迅速发展,对卵母细胞冷冻损伤的影响因素研究取得了巨大进展。综述冷冻保护剂、卵母细胞特点及发育阶段、降温速率、卵母细胞的外围结构、冷冻方法等因素对卵母细胞冷冻损伤的影响机制及降低卵母细胞冷冻损伤的最近进展。     

海藻糖用于玻璃化冷冻卵母细胞的研究

海藻糖的发现为低温保存卵母细胞提供可利用的价值,其作为冷冻保护剂对卵母细胞进行玻璃化冷冻成为新的冷冻技术方法。海藻糖的作用原理包括:"水替代"假说、"玻璃态"假说、"优先排阻"假说。在高温、高寒、高渗透压及干燥、脱水、冷冻时等恶劣环境条件下,海藻糖在细胞表面能形成独特的保护膜,有效地保护蛋白质分子不变性失活,从而维持生命体的生命过程和生物特征。目前海藻糖已用于多种生物细胞研究,如:红细胞、血小板及生殖细胞等的离体长期保存,且均表现出独特的功能。     

玻璃化冷冻卵母细胞及卵巢组织研究进展

玻璃化冷冻技术近年已广泛应用于生殖领域,尤其是在女性生育力的储备方面展示其特有的优势.目前胚胎玻璃化冷冻已较成熟,并应用于临床.首次卵母细胞玻璃化冷冻的成功以及实验动物卵巢组织成功移植并获得分娩给研究带来无限希望,但目前仍处于实验阶段,研究者企图从不同角度解决难题.卵母细胞冷冻后,细胞结构的易损伤性造成的低复苏率.以及对卵巢组织玻璃化冷冻的可行性探索,对生殖领域提出新挑战.由于卵巢组织冻存与卵母细胞的冻存有着密不可分的联系,就两者国内外新进展做综述.     

玻璃化解冻和慢速解冻在程序化冷冻胚胎解冻移植中的比较研究

目的 探讨玻璃化解冻(vitrificative thawing,VT)和慢速解冻(slow thawing,ST)对程序化冷冻胚胎解冻移植的影响,优化程序化冷冻胚胎的解冻方案,从而提高不孕不育临床治疗效果.方法 选取2016年1月至2018年12月解放军第九六〇医院生殖医学中心行解冻胚胎移植的400例患者,使用随机数...     

玻璃化冷冻卵母细胞及卵巢组织研究进展

玻璃化冷冻技术近年已广泛应用于生殖领域,尤其是在女性生育力的储备方面展示其特有的优势。目前胚胎玻璃化冷冻已较成熟,并应用于临床。首次卵母细胞玻璃化冷冻的成功以及实验动物卵巢组织成功移植并获得分娩给研究带来无限希望,但目前仍处于实验阶段,研究者企图从不同角度解决难题。卵母细胞冷冻后,细胞结构的易损伤性造成的低复苏率,以及对卵巢组织玻璃化冷冻的可行性探索,对生殖领域提出新挑战。由于卵巢组织冻存与卵母细胞的冻存有着密不可分的联系,就两者国内外新进展做综述。     

人类卵母细胞玻璃化冷冻的研究进展

玻璃化冷冻技术已逐渐成为辅助生育技术中重要的应用技术之一，玻璃化冷冻可避免冻融过程中细胞内冰晶的形成，降低细胞损伤，在人类配子、胚胎的冷冻保存中取得了不少进展。近十几年来，玻璃化冷冻技术已成功应用于成熟卵母细胞、未成熟卵母细胞等方面的冷冻保存并取得成功。该技术操作简单、迅速快捷，正逐渐成为人类辅助生殖技术中重要的应用技术之一。本文综述了玻璃化冷冻技术在保存人类不同发育阶段卵细胞方面的研究进展。     

玻璃化冷冻技术的研究进展

玻璃化冷冻技术是一种快速冷冻细胞或组织的方法,随着辅助生殖技术的发展而受到广泛关注.该项技术具有冷冻速度快、冻融损伤小,操作简单等优点,能够提高冷冻复苏后的存活率和妊娠成功率.玻璃化冷冻技术在临床应用中主要受到冷冻保护剂的类型和浓度、冷冻温度、冷冻速度及冷冻承载工具等一系列因素的影响.由于冷冻对象的不同,所实施的具体方法也不尽相同.该技术目前尚未成熟,如何优化人卵母细胞、胚胎及卵巢组织的玻璃化冷冻方案仍需要进行深入的研究.     

玻璃化冷冻技术的研究进展

玻璃化冷冻技术是一种快速冷冻细胞或组织的方法,随着辅助生殖技术的发展而受到广泛关注。该项技术具有冷冻速度快、冻融损伤小,操作简单等优点,能够提高冷冻复苏后的存活率和妊娠成功率。玻璃化冷冻技术在临床应用中主要受到冷冻保护剂的类型和浓度、冷冻温度、冷冻速度及冷冻承载工具等一系列因素的影响。由于冷冻对象的不同,所实施的具体方法也不尽相同。该技术目前尚未成熟,如何优化人卵母细胞、胚胎及卵巢组织的玻璃化冷冻方案仍需要进行深入的研究。     

采用简化电镜铜网玻璃化冷冻鼠成熟卵母细胞是方便有效的方法

卵母细胞冷冻是辅助生殖技术中非常重要的一部分。由于鼠卵细胞冷冻可以为人类卵母细胞冷冻提供原始数据，故对其研究十分重要。在卵母细胞移入之前传统的电镜铜网玻璃化冷冻的冷冻液需要从电镜网转移到无菌的过滤板上，而此研究的简化电镜铜网玻璃化冷冻则省略了这一步，这样既节省时间同时也方便有效。此研究比较了简化电镜铜网玻璃化冷冻与传统电镜铜网玻璃化冷冻及慢速冷冻、超快速冷冻在对老鼠成熟卵母细胞的复苏率、存活率、受精率和孵化率之间的差异性。     

囊胚玻璃化冷冻的研究进展

随着序贯培养液的出现，囊胚移植被认为是提高胚胎种植率、降低多胎妊娠率的有效方法．因此囊胚冷冻愈显重要。囊胚的玻璃化冷冻因其简化了冷冻过程；避免细胞内冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤：并且在冷冻过程中可迅速通过临界温度区，减轻了胚胎冷冻中常见的冻伤现象，使存活率提高等优点，近几年得到逐步发展。现对囊胚玻璃化冷冻（vitrification）的原理、要领、现状及应用前景进行综述。     

人卵母细胞玻璃化冷冻的分子表达变化

卵母细胞冷冻技术是体外受精助孕的重要组成部分,是保存女性生育力的主要途径,卵母细胞冷冻保存易对卵母细胞造成不可逆损伤。卵丘细胞对卵母细胞体外成熟过程具有重要作用,在冷冻过程也可能受损伤。目前已知玻璃化冷冻/解冻对卵母细胞（包括成熟与未成熟卵母细胞）的影响,可改变卵母细胞正常发育必需基因的表达,如卵母细胞成熟（GDF9、BMP15）、凋亡（Bax、Bcl-2）、细胞骨架（CK8、ACTB）、细胞周期（CCNA1、MCM10）、缝隙连接（GJA1）、发育能力（HDAC1、STAT3、SMARCAL1和DNMT3B）、脂质代谢（cGMP）等方面的改变。就卵母细胞玻璃化冷冻前后的分子及基因变化进行阐述,为卵母细胞玻璃化冷冻提供更好的理论基础和实验依据。     

玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻技术中的应用

目的:探讨玻璃化冷冻法在未成熟卵子冷冻方面的应用价值。方法:选取GV期卵母细胞744枚,随机分为5组,A组(128枚),GV期卵子直接进行未成熟卵母细胞体外培养(IVM);B组(220枚),GV期卵子直接行玻璃化冷冻;C组(155枚),GV期卵子直接行IVM,待培养至MⅡ期,再行玻璃化冷冻;D组(112枚),GV期卵子去除冠-丘细胞,行玻璃化冷冻;E组(129枚),GV期卵子保留除冠-丘细胞行玻璃化冷冻。比较各组卵母细胞的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:与A组相比,B组和C组的成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率均降低(P<0.05);B组与C组间存活率、成熟率、受精率、卵裂率和囊胚形成率无差异(P>0.05)。E组的成熟卵子率较D组提高(P<0.05),但两组在解冻卵子存活率、受精率、2细胞数和>2细胞数方面无差异(P>0.05)。结论:未成熟卵子的玻璃化冷冻保留冠-丘细胞可显著提高冻融效果。     

人未成熟卵玻璃化冷冻初步实验探讨

目的:对人未成熟卵母细胞玻璃化冷存保存技术进行初步实验探讨。方法:采用OPS玻璃化冷冻方法,对未成熟的卵子进行冷冻,解冻后体外成熟培养,ICSI受精,观察胚胎培养情况,并对某些影响因素进行探讨。结果:冷冻了GV期卵62个,M I期卵40个。两期卵细胞复苏后存活率、成熟率、受精率和卵裂率分别为:80.65%、77.50%,52.00%、41.94%,57.69%、61.54%,60.00%、62.50%,两组间比较无统计学差异(P>0.05);采用HTF或G-Mops两种缓冲液配制玻璃化冷冻液冷冻解冻未成熟卵效果无统计学差异(P>0.05);未成熟卵解冻后置于含性激素的TCM199与单纯IVF30中成熟培养效果无统计学差异(P>0.05)。结论:应用OPS玻璃化冷冻方法能够有效冻存未成熟卵母细胞。     

慢速冷冻中糖浓度对卵母细胞纺锤体和染色体构型的影响

卵母细胞冷冻是目前人类体外受精（IVF）和生殖科学的前沿技术，人卵母细胞对冷冻有特异的敏感性，与是否实施慢速冷冻法还是玻璃化冷冻法无关。在实施慢速冷冻过程中，细胞内冰晶的形成、冷冻保护剂的毒性、渗透压、pH值、活性氧等因素均可以破坏卵母细胞的发育潜能。由于目前尚不能解决卵母细胞的安全性问题，所以研究旨在比较运用两种不同糖浓度的非渗透性冷冻保护剂进行慢速冷冻对MⅡ期卵的纺锤体形态及染色体构型的影响。