田蓟苷预处理对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究

目的观察田蓟苷对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用,并探讨其机制。方法制备H9c2心肌细胞H/R损伤的模型,MTS比色法观察田蓟苷与H9c2心肌细胞活力的量效关系,明确田蓟苷的保护作用。实验分正常对照组、模型组(H/R)及H/R+田蓟苷不同浓度组,试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH),Hoechst 33342染色检测细胞核变化,Western blot检测田蓟苷抗H9c2心肌细胞H/R损伤中对cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果与对照组相比,H/R组细胞活力水平显著降低(P0.001),LDH释放量明显增多(P0.001),细胞核呈现明显的固缩、碎裂征象,平均荧光强度显著增加(P0.001),cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低;与H/R组相比,田蓟苷能够显著提高细胞的活力(P0.001)。显著减少LDH的释放(P0.001),维护细胞膜的稳定性。田蓟苷干预后,可以缓解细胞核的损伤状态,并显著降低细胞核平均荧光强度。cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著升高(P0.05)。结论田蓟苷对H/R诱导的H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制细胞凋亡有关。     

香青兰总黄酮对阿霉素心肌毒性的保护机制研究

目的 探讨香青兰总黄酮（TFDM）对阿霉素心脏毒性的保护作用及相关机制。方法 大鼠心肌细胞H9c2细胞随机分为对照组、模型组和TFDM治疗组（5、25、50、100 μg/mL）。药物干预后,除对照组外,其余各组细胞采用阿霉素1 μmol/L作用24 h制备心脏毒性模型。采用CCK-8法测定TFDM干预后阿霉素损伤对H9c2细胞活力的影响;采用试剂盒法测定各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放情况及细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平;采用Annexin-V FITC/PI双染法通过流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用DCFH-DA、JC-1探针检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位;采用Western blotting检测各组细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,阿霉素诱导的模型组细胞活力下降,LDH、MDA水平升高,SOD活性降低,细胞凋亡率升高,ROS释放显著增多,线粒体膜电位显著下降,而TFDM则剂量依赖性地使细胞活力升高,LDH、MDA水平下降,SOD活性升高,细胞凋亡率降低,ROS释放显著减少,线粒体膜电位显著升高;Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞p-PI3K、p-Akt、p-ERK、Bcl-2蛋白表达水平降低,p-p38MAPK、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高;与模型组比较,TFDM使细胞中p-PI3K、p-Akt、p-ERK、Bcl-2蛋白表达水平升高,p-p38MAPK、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低。结论 TFDM能够保护心肌细胞,可能通过抗氧化应激,保护心肌细胞线粒体,调节MAPK、PI3K/Akt凋亡通路及其下游凋亡分子的表达抑制细胞凋亡。     

黄精多糖对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的:探究黄精多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharides,PSP)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用。方法:体外无菌培养H9c2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。应用A0-EB和Hoechst33324染色法观察心肌细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用MTT法检测心肌细胞存活率,Westen Blot法检测H9c2心肌细胞Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果:缺氧/复氧模型组中H9c2细胞存活率明显降低,细胞核浓染致密、固缩,细胞凋亡率明显增加,Caspase-3的表达和Bax/Bcl-2比率显著上调;与模型组比较,黄精多糖1.0、1.5、2.0mg/ml药物组中细胞存活率均明显升高,细胞核淡染,轻微缩小,细胞凋亡率降低,Bax/Bcl-2比率明显下调,Caspase-3表达水平被显著抑制。结论:黄精多糖对H/R诱导的H9c2心肌细胞具有保护作用,其作用可能与抑制心肌细胞凋亡有关。     

二参颗粒对氯化钴诱导的H9C2细胞氧化应激介导的细胞凋亡的保护作用

目的:通过观察二参颗粒对氯化钴(CoCl_2)诱导的缺氧损伤和大鼠心肌细胞H9C2凋亡的影响,阐明二参颗粒对心脏的保护作用。方法:以500μmol/L的CoCl_2与H9C2细胞共同作用24 h,建立心肌细胞缺氧缺血模型。将H9C2细胞分为空白对照组、模型对照组、二参颗粒50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组。酶联免疫法检测胞外培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)和凋亡水平,蛋白质印迹分析法检测细胞内Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞活力下降、活性氧(ROS)荧光表达值升高、线粒体膜电位JC-1单体阳性细胞显著升高以及细胞培养液中LDH含量升高,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,二参颗粒能有效改善细胞活力,降低LDH的含量,显著降低胞内ROS荧光表达值,改善线粒体膜电位和凋亡水平,下调凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达,升高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05或P<0.01)。结论:二参颗粒可以抑制CoCl_2诱导的心肌细胞ROS水平,减少氧化应激发生,进而改善氧化应激介导的心肌细胞的细胞凋亡。     

西红花酸对阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤的影响

目的观察西红花酸对阿霉素诱导的大鼠心肌细胞损伤的影响,从线粒体角度探讨其作用机制。方法培养H9c2大鼠心肌细胞,阿霉素诱导建立心肌细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组(阿霉素10μmol/L)、西红花酸高剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸20μmol/L)、西红花酸低剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸10μmol/L),给药6 h后CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达,免疫荧光检测Caspase-8蛋白表达。结果与正常组比较,模型组H9c2细胞存活率降低(P0.01),细胞内ROS水平升高(P0.001),线粒体膜电位降低(P0.001),细胞凋亡率升高(P0.001),cleaved Caspase-3蛋白表达升高,cleavedCaspase-3/proCaspase-3比值升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.001),Caspase-8蛋白表达明显升高(P0.001);与模型组比较,西红花酸高、低剂量组H9c2细胞存活率显著升高(P0.01,P0.05),ROS水平显著降低(P0.001),线粒体膜电位升高(P0.001),细胞凋亡率降低(P0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达降低,cleaved Caspase-3/pro Caspase-3比值降低(P0.001,P0.05),Caspase-8蛋白表达显著降低(P0.001),西红花酸高剂量组Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(P0.01)。结论西红花酸可保护阿霉素致心肌细胞损伤,其机制可能与保护线粒体、抑制细胞凋亡相关。     

黄芩茎叶总黄酮对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(scutellaria baicalelensis stem leaf total flavonoid SSTF)对培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧时凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,缺氧(hypoxia H)2h后,复氧(reoxygenation R)4h制备缺氧/复氧损伤模型。以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化。心肌细胞损伤程度以心肌细胞存活率表示。结果:缺氧2h再复氧4h,心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达指数(positive expressionindex PEI)显著低于对照组(P<0.01),Bax蛋白PEI显著高于对照组(P<0.01)。细胞存活率明显低于对照组(P<0.05)。SSTF干预组Bcl-2蛋白PEI明显高于缺氧/复氧组(P<0.05),Bax蛋白PEI显著低于缺氧/复氧组(P<0.05),细胞存活率明显高于缺氧/复氧组(P<0.05)。结论:心肌细胞缺氧再复氧时,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增强;细胞存活率降低。SSTF可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,减少细胞凋亡,从而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:探究荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:利用氯化钴(CoCl_2)建立缺氧复氧损伤H9c2细胞模型,实验分正常对照组、模型组及荭草花提取物不同浓度组。应用MTS检测细胞存活率;生化试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)释放量及细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot测定cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:利用800μmol/L CoCl_2缺氧22 h,复氧2 h可建立缺氧复氧损伤心肌细胞模型。与模型组比较,荭草花提取物能显著升高心肌细胞存活率,降低LDH、CK释放量及细胞内MDA含量,提高细胞内SOD、CAT活性,并呈浓度依赖性抑制CoCl_2诱导的缺氧复氧损伤。荭草花提取物能下调促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、Bax的表达,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡。结论:荭草花提取物对心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制细胞凋亡有关。     

反式油酸对H9c2心肌细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的研究

目的研究反式油酸(9t-C18:1)对H9c2心肌细胞增殖抑制及诱导凋亡作用并探寻其可能的机制。方法体外培养H9c2大鼠心肌细胞,9t-C18:1高、中、低剂量组及阴性对照组(NC)分别作用于随机分组的H9c2细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖能力;AO-EB染色后观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)及细胞凋亡情况;实时定量PCR(QRTPCR)法检测Bcl-2、Bax基因表达,免疫荧光染色后流式细胞仪检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果荧光显微镜下可见,9t-C18:1作用后的H9c2细胞出现典型的凋亡形态学特征;与NC组比较,随着9t-C18:1剂量的增加细胞增殖抑制作用明显,ROS、细胞凋亡率显著升高,Bcl-2基因及蛋白表达下调,Bax基因及蛋白表达上调(P <0. 05,P <0. 01)。结论 9t-C18:1能抑制H9c2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与促进细胞线粒体凋亡通路有关。     

红景天破壁饮片与传统饮片对缺血缺氧H9c2心肌细胞Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达的影响比较

目的:通过研究红景天破壁饮片与传统饮片对缺血缺氧H9c2心肌细胞的增殖及B细胞白血病-淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、B细胞白血病淋巴瘤相关蛋白基因(Bax)mRNA和蛋白表达的影响,初步探讨红景天心肌保护作用机制,并对两种饮片的效应差异性进行对比。方法:以H9c2心肌细胞为研究对象,分为正常组、模型组、红景天传统饮片低、中、高剂量组(0.002、0.020、0.200 mg/mL)、红景天破壁饮片低、中、高剂量组(0.002、0.020、0.200 mg/mL);H9c2心肌细胞给药后在缺血缺氧条件下培养8 h,试剂盒检测各组细胞存活率;PCR法检测各组细胞Bcl-2、Bax mRNA相对表达量;Western Blot法检测各组细胞Bax、Bcl-2蛋白相对表达量。结果:与模型组比较,红景天破壁饮片低、中、高剂量组及红景天传统饮片高剂量组均可显著提高H9c2细胞的存活率(P0.05),相同剂量下,给予红景天破壁饮片的H9c2细胞存活率在不同程度上优于红景天传统饮片;红景天破壁饮片与传统饮片均可显著降低缺血缺氧H9c2细胞Bax mRNA及蛋白相对表达量(P0.05),升高Bcl-2 mRNA及蛋白相对表达量(P0.05)。结论:红景天改善缺血缺氧H9c2心肌细胞存活率、抗细胞凋亡作用具有剂量依赖性,且红景天破壁饮片的保护作用优于传统饮片,其作用机制与调节H9c2心肌细胞Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达有关。     

重楼皂苷Ⅱ对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的观察重楼皂苷Ⅱ对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法不同浓度重楼皂苷Ⅱ作用于A549细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率;将细胞分为对照组和重楼皂苷Ⅱ低、中、高剂量组,JC-10荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),Fluo-4 AM荧光探针检测细胞内Ca2+水平,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,各浓度重楼皂苷Ⅱ可降低A549细胞存活率,差异均有统计学意义(P0.01);重楼皂苷Ⅱ低、中、高剂量组A549细胞MMP显著降低,Ca2+、ROS水平显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,重楼皂苷Ⅱ高剂量组Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论重楼皂苷Ⅱ可能通过降低细胞MMP,提高细胞内Ca~(2+)水平,增加细胞内ROS含量,调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3表达,促进A549细胞凋亡。     

红参对H_2O_2诱导H9c2大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨红参有效成分对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法过氧化氢(H_2O_2)诱导H9c2大鼠心肌细胞建立体外心肌细胞氧化应激损伤模型;MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞因子LDH释放、SOD活性和MDA含量;流式细胞术检测ROS、细胞凋亡;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达。结果与模型组相比,红参有效成分预处理后,心肌细胞存活率显著提高,LDH水平下降,SOD活性显著提高,MDA水平受到抑制,ROS水平显著降低,细胞凋亡率显著降低。同时红参干预后心肌损伤细胞促凋亡蛋白Bax下调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bax比值升高。结论红参通过降低ROS水平和细胞凋亡保护心肌细胞氧化应激损伤。     

山柰酚对多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨山柰酚对多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法 培养多囊肾囊肿衬里上皮细胞,使用不同浓度山柰酚(5、10、20μmol/L)进行处理。采用MTT、克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、p-ERK1、p-p38 MAPK蛋白表达。结果 与对照组比较,各浓度山柰酚组多囊肾囊肿衬里上皮细胞克隆细胞数、CDK2、PCNA、Bcl-2、p-ERK1、p-p38 MAPK蛋白表达降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达升高(P<0.05)。结论 山柰酚可能通过抑制MAPK信号通路抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖,并诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。     

PI3K/Akt信号通路在瓜蒌皮保护心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的研究PI3K/Akt信号通路在瓜蒌皮保护心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法以2.5 mmol/L Na_2S_2O_4诱导心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常组、模型组、瓜蒌皮提取物组及抑制剂组。应用MTT法检测细胞活力;流式细胞术观察细胞凋亡情况;Western Blot测定Akt、p-Akt(Ser 473)、Bax、Bcl-2的蛋白表达水平。结果与模型组相比,瓜蒌皮提取物预处理24 h后能改善心肌细胞形态,明显提高心肌细胞活力。瓜蒌皮提取物能促进Akt、p-Akt(Ser 473)及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制促凋亡蛋白Bax的表达,减少心肌细胞凋亡。PI3K抑制剂LY294002与瓜蒌皮提取物联合处理后,逆转了瓜蒌皮提取物对心肌细胞的上述作用,导致细胞凋亡率上升。结论瓜蒌皮提取物可能通过激活PI3K/Akt信号通路改善缺氧/复氧损伤诱导的心肌细胞凋亡。     

miR-19b参与山楂叶总黄酮调控缺氧复氧PC12细胞损伤和缺血性大鼠脑损伤的研究＊

目的 研究miR-19b参与山楂叶总黄酮对氧化损伤途径的作用机制研究。方法 构建缺氧复氧（H/R）PC12细胞模型，给予山楂叶总黄酮处理，细胞计数（CCK-8）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，蛋白质印迹（Western blot）检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达，试剂盒测定乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-19b表达水平。在PC12细胞中转染miR-19b inhibitor，给予缺氧复氧和山楂叶总黄酮处理，同样检测细胞增殖、凋亡和LDH、MDA、ROS、SOD水平。同时，构建脑缺血性模型大鼠，用不同剂量山楂叶总黄酮处理，连续4周后，对各组大鼠的神经功能缺损进行评估，并对各组大鼠海马组织CA1区锥体细胞层进行染色，在光学显微镜下观察其细胞学形态。再通过qRT-PCR检测各组大鼠脑细胞海马组织中miR-19b的表达。结果 缺氧复氧处理以后的PC12细胞增殖能力下降，LDH漏出率升高，细胞凋亡率升高，细胞中Bax蛋白表达增多，Bcl-2蛋白表达减少，MDA、ROS水平升高，SOD水平降低，miR-19b表达水平减少。山楂叶总黄酮处理后的缺氧复氧PC12细胞增殖能力升高，LDH漏出率降低，细胞凋亡率降低，细胞中Bax蛋白表达减少，Bcl-2蛋白表达增多，MDA、ROS水平降低，SOD水平升高，miR-19b表达水平升高。转染miR-19b inhibitor可以逆转山楂叶总黄酮对缺氧复氧PC12细胞增殖、凋亡和LDH、MDA、ROS、SOD水平影响。脑缺血模型大鼠实验结果发现，山楂叶总黄酮能够明显改善脑缺血模型大鼠的神经功能缺损症状，减轻脑神经元海马组织的细胞损伤，qRT-PCR检测各组大鼠脑组织中miR-19b表达，结果与PC12细胞中一致。结论 miR-19b参与山楂叶总黄酮对氧化损伤途径的作用。     

哈巴苷对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞毒性的保护作用

目的探讨哈巴苷对β淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞毒性的影响。方法 PC12细胞以哈巴苷(20、40、80μmol/L)预孵育3 h后以Aβ25-35(30μmol/L)损伤24 h;MTT法检测细胞增殖;检测细胞上清液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;检测活性氧(ROS)的生成;Western blotting法检测Akt、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,Aβ25-35使PC12细胞的存活率显著降低(P0.01),细胞上清液中MDA水平显著升高(P0.01)、GSH和SOD水平显著降低(P0.01),细胞内ROS水平显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著增加(P0.01),细胞内p-Akt、Bcl-2蛋白表达下调(P0.01),Bax蛋白表达显著上调(P0.01);哈巴苷预孵育PC12细胞3 h,使细胞上清液中的MDA水平降低,GSH和SOD水平显著升高(P0.05、0.01);明显剂量依赖性抑制细胞凋亡;上调p-Akt和Bcl-2蛋白表达(P0.05、0.01),并下调Bax蛋白表达(P0.05、0.01)。结论哈巴苷改善Aβ25-35诱导的PC12细胞毒性,可能通过激活PI3K/Akt信号通路和上调细胞内SOD水平发挥作用。     

黄芪多糖抑制缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞凋亡与自噬机制研究

目的:探讨黄芪多糖(APS)对缺氧/复氧(H/R)所致乳鼠心肌细胞凋亡与自噬抑制作用的相关机制。方法:分离并体外培养乳鼠心肌细胞3 d后制备H/R损伤细胞模型,设正常对照组、H/R组、APS低、中、高剂量(20、40、80 μmol/ml)组,各组于造模前30 min给药处理。复氧2 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡水平,Western blot法检测p-Akt、Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax、p-mTOR、Beclin1、LC3、P62蛋白表达。结果:与H/R组比较,APS中、高剂量细胞增殖抑制率和凋亡率显著降低(P<0.01),p-Akt、p-mTOR、Bcl-2表达量显著升高而Cleaved Caspase-3、Bax、Beclin1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、P62表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著升高、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低(P<0.01)。结论:APS可能通过激活Akt/mTOR通路调控凋亡和自噬相关蛋白表达,对H/R所致乳鼠心肌细胞凋亡与自噬起到抑制作用。     

绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响

目的:探讨绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响。方法:取指数生长期细胞,随机分为空白对照组、TGF-β_1组及绿原酸高、中、低浓度组,以MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测α-SMA、Bax、Bcl-2 mRNA的表达,免疫细胞化学检测α-SMA蛋白的表达,Western-blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:10μg/L TGF-β_1刺激HSC细胞后,HSC-LX2细胞中α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bax mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05)。与模型组比较,绿原酸高、中剂量组细胞活力、α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Bax mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01)。结论:绿原酸通过调控Bax、Bcl-2的表达,诱导活化的HSC-LX2凋亡,清除活化的肝星形细胞,抗肝纤维化。     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg·L~(-1)干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L~(-1))干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6 h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析。结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg·L~(-1)干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P0.05,P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P0.05,P0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关。     

黄芩苷对幽门螺杆菌诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞损伤的保护作用及机制

目的:探讨黄芩苷(baicalin)对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞(human gastric epithelial GES-1 cells)损伤的保护作用及机制研究。方法:采用Hp感染GES-1细胞,加入baicalin(15,30,60 mg·L~(-1))和p38分裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580 20μmol·L~(-1)共培养。噻唑蓝(MTT)比色法测细胞增殖、流式细胞术测细胞凋亡、酶联免疫吸附法(ELISA)测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-8水平、比色法测细胞乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性、蛋白免疫印迹法(Western blot)测细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2,p-p38 MAPK及total-p38 MAPK(T-p38 MAPK)蛋白表达。结果:与空白组比较,Hp可抑制GES-1细胞增殖,促进GES-1细胞凋亡,诱导GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8并增加LDH活性,增加GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并降低Bcl-2蛋白表达(P0.01);与Hp感染组比较,中、高浓度baicalin组可促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.01);与高浓度baicalin组比较,SB203580可进一步促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:baicalin可通过抗炎、促增殖并抗凋亡减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤,其机制可能与抑制p38 MAPK通路有关。     

小檗碱抑制p38 MAPK通路降低visfatin诱导HUVEC损伤的研究

目的研究小檗碱(Ber)对内脏脂肪素(visfatin)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路的关系。方法以visfatin不同质量浓度(0,50,100,200μg·L-1)及以100μg·L-1质量浓度的不同时间(0,6,12,24,48 h)作用HUVEC,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western blot法检测HUVEC中p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表达;并以50μmol·L-1 Ber及20μmol·L-1 SB203580(P38分裂原激活蛋白激酶通路抑制剂)检测Ber的干预作用。结果与对照组比较,100μg·L-1 visfatin可显著抑制HUVEC增殖,诱导HUVEC分泌IL-6及TNF-α,上调HUVEC内p-p38 MAPK、Bax蛋白表达及降低Bcl-2蛋白表达以促进细胞凋亡(P0.01);与visfatin组比较,Ber可显著减轻visfatin对HUVEC增殖的抑制、下调HUVEC内p-p38 MAPK、Bax蛋白表达及上调Bcl-2蛋白表达以抑制HUVEC凋亡、减少visfatin诱导HUVEC分泌IL-6及TNF-α(P0.01)。结论 Ber可减轻visfatin诱导的HUVEC损伤,其机制与抑制p38 MAPK通路有关。