Amiloride预防性给药对压力超负荷心肌肥厚大鼠左室肥厚形成及心肌细胞内游离钙的影响

采用压力超负荷心肌肥厚模型,以Fura-2/AM作为荧光指示剂,观察Amiloride(Ami)和Enalapril(Ena)预防性给药对压力超负荷左室肥厚(IVH)大鼠心肌肥厚的形成及心肌细胞[Ca2+]i的影响.结果表明,压力超负荷时,左心室重与体重之比(LVWW/BW)明显增加(P<0.01),左室心肌细胞内确有钙超载现象;Ami和Ena组的LVWW/BW较IVH组明显降低(P<0.01),左室心肌细胞[Ca2+]i亦明显降低(P<0.01).给予KCl 40 mmol·L-1、NE 20μmo1*L-1,预防给药组左室心肌细胞[Ca2+]i的增加值明显低于LVH组.     

吡那地尔对低氧/复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的 :研究低氧 /复氧 (H/R)对心肌细胞内Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)的影响以及吡那地尔 (Pinacidil)减轻H/R过程中钙超载的作用。　方法 :采用新生SD大鼠进行心肌细胞培养 ,建立心肌细胞H/R模型。实验分 :①正常对照组 ;②H/R组 :细胞低氧 30min/复氧 30min ;③吡那地尔组 :先加入终浓度为 2 5 μmol/L的吡那地尔 ,再行低氧 30min/复氧 30min。以Fluo 3/AM荧光指示剂负载 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞 [Ca2 ]i变化。　结果 :对照组心肌细胞 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值较低。低氧 30min后复氧即刻 ,[Ca2 ]i荧光光密度值开始增加 ,复氧 30min后 [Ca2 ]i荧光强度和荧光光密度值显著增高 (与对照组相比 ,P <0 .0 1 )。而吡那地尔组细胞内荧光光密度值较H/R组显著降低 (P <0 .0 1 )。　结论 :心肌细胞H/R导致钙超载 ;而吡那地尔有明显减轻心肌细胞H/R时Ca2 超载的作用     

Na+/H+交换体阻滞剂在培养乳鼠心肌细胞/复氧损伤中的保护作用及其机制

目的:探讨在缺氧/复氧损伤中Na+/H+交换体阻滞剂在不同时相用药的心肌细胞保护作用及其机制。方法:应用乳鼠心肌细胞建立心肌缺血-再灌注(I/R)损伤模型,实验分为对照组、缺氧/复氧全程给药组(EIPA-I组)、复氧前给药1组(EIPA-R1组)和复氧前给药2组(EIPA-R2组)进行缺氧/复氧处理,动态检测单个心肌细胞在缺氧/复氧时细胞胞质Ca2+浓度(即[Ca2+]i)的变化及细胞挛缩程度,并观察细胞的存活率。结果:EIPA-I组和EIPA-R2组显著抑制了[Ca2+]i上升及细胞的挛缩,并提高了细胞存活率。结论:在复氧前给予增大剂量的EIPA与缺氧时常规剂量用药同样有效地抑制复氧期Na+/H+的交换,减轻细胞内钙超载,抑制细胞的挛缩,提高心肌细胞的存活率。     

人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+变化的影响

目的 研究人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+浓度变化的影响.方法 以0、6.25、12.5、25、50、100μg/L人参皂苷Rg1预处理细胞24 h,采用Ca2+荧光染料探针Fluo-3/AM负载细胞1 h后,50 mmol/L H2O2刺激细胞,多功能酶标仪测定荧光强度,激光共聚焦显微镜实时监测[Ca2+]i变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 H2O2可诱导细胞内Ca2+浓度增加(P<0.01),并增加细胞凋亡率(P<0.01).不同浓度人参皂苷Rg1可呈剂量依赖性的抑制H2O2诱导的HT22[Ca2+]i增加(P<0.01),抑制细胞凋亡(P<0.01),以50μg/L的作用为最强(P<0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过降低H2O2诱导的HT22细胞内Ca2+水平的升高,抑制氧化应激引起的细胞凋亡.     

参三七皂甙Rb1、Rg1预适应对肥厚心肌细胞缺氧复氧损伤细胞凋亡的影响

目的：研究参三七皂苷Rb1、Rg1药理性预适应对乳鼠肥厚心肌细胞缺氧／复氧损伤（A／R）细胞凋亡的影响。方法：采用血管紧张素Ⅱ诱导的肥厚心肌细胞A／R模型,心肌细胞随机分组：空白对照组,A／R模型对照组（组）,参三七皂苷Rb1、Rg10．01—10μmol／L药物预适应组（预适应48h后进行A／R处理）;用流式细胞术观察心肌细胞凋亡率,电镜观察细胞超微结构。结果：与A／R对照组相比参三七皂苷Rb1、Rg10．0110μmol／L预适应48h后,细胞凋亡率呈浓度依赖性下降,Rb1、Rg1最大凋亡抑制率分别为86．68％和85．26％（P〈0．01）。电镜超微结构观察显示参三七皂苷Rb1、Rg1组细胞凋亡明显减轻,细胞结构完整,细胞基本结构无损害。结论：参三七皂苷Rb1、Rg1药理性预适应具有明显抑制细胞凋亡、改善心肌细胞缺氧／复氧损伤作用。     

M_3受体激动剂胆碱对大鼠心肌细胞内钙离子的影响

目的研究M3受体激动剂胆碱对大鼠心肌细胞内钙离子的影响。方法采用钙荧光染料Fluo-3/AM负载心肌细胞,在激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)上测定细胞[Ca2+]i的变化。结果胆碱不影响静息状态下的细胞[Ca2+]i,对咖啡因和三磷酸肌醇(IP3)介导的细胞内钙的释放均无作用。5.0 mmol/L胆碱可以抑制KCl除极诱导的心肌[Ca2+]i的升高幅度,2.0 nmol/L 4-DAMP可以阻断这一作用。结论 M3受体激动剂胆碱通过阻断心肌细胞膜电压依赖性钙通道降低心肌细胞[Ca2+]i,从而发挥心肌保护作用。     

依托咪酯对过氧化氢损伤PC12细胞株的保护作用

目的 研究依托咪酯对过氧化氢损伤神经元样嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)的游离Ca2+作用.方法 PC12细胞株接种于6孔细胞培养板,随机分为损伤组(I组)和依托咪酯3 μmol/L组(E1组)、6 μmol/L组(E2组)和15 μmol/L组(E3组).分别加入含标记Ca2+ 的荧光染色剂Fluo3 10 μmol/L的培养基,37 ℃孵育30 min,置入激光共聚焦显微镜扫描仪连续扫描,并于开始连续扫描2次后加入100 μmol/L H2O2,动态观察各组细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化.结果 I组加入H2O2后,90%的细胞立即有反应,细胞[Ca2+]i荧光密度即开始增高(P<0.05),并在10 s后呈现明显变化(P<0.01), 80 s达到峰值并呈持续稳定状态.依托咪酯各浓度组在加入H2O2后约10%细胞有反应,但其细胞[Ca2+]i荧光密度呈现平稳波动.E1和E2组在50 s后,细胞[Ca2+]i荧光密度开始下降(P<0.05),但不呈继续降低趋势.结论 依托咪酯通过抑制H2O2损伤引起的神经细胞内[Ca2+]i持续增高,而发挥其神经保护作用.     

三七总皂苷对缺氧再给氧血管内皮细胞损伤保护效果研究

目的探讨发生缺氧再给氧损伤（H/R）对人脐静脉内皮细胞株（ECV304）的功能影响并探讨三七总皂苷抗血管内皮细胞H/R损伤的作用效果和作用机制。方法体外培养的ECV304,将之分为7个研究组,分别为代号A-G的对照组、H/R组、PDTC组、维拉帕米组、不同浓度（0.781mg/L,1.563mg/L,3.125mg/L）的三七总皂苷组;培养1h后通过观察细胞内Ca2＋浓度,一氧化氮（NO）和前列环素（PGI2）的含量,超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和还原型谷胱甘肽（GSH）含量,细胞间黏附分子ICAM-1的表达、核因子kB（NF-kB）的活性等,来确定H/R对ECV304的离子转运功能、细胞分泌功能、氧自由基清除功能、黏附功能及细胞活力的影响,并通过三七总皂苷组与PDTC组、维拉帕米组进行比较,观察三七总皂苷抗血管内皮细胞H/R损伤的作用效果和作用机制。结果 H/R可激活ECV304,使细胞氧自由基清除功能明显降低,NF-κB及ICAM-1的表达明显升高,细胞肌浆网Ca2＋-ATP酶活性、一氧化氮（NO）及前列环素（PGI2）含量、细胞活力明显降低,[Ca2＋]i明显升高;tPNS能有效改善细胞氧自由基清除功能,降低NF-kB、ICAM-1活性,改善肌浆网Ca2＋-ATP酶活性,减轻细胞内钙超载,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC。结论三七总皂苷能有效降低NF-κB活性及ICAM-1表达,减轻细胞内钙超载,减轻血管内皮细胞缺氧再给氧损伤;高浓度三七总皂苷与钙拮抗剂维拉帕米、抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂相比作用较强,效果更好。     

牛磺酸对低氧-复氧乳鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的:研究低氧-复氧对心肌细胞内Ca2+浓度([Ca2+]I)的影响,以及牛磺酸减轻模拟心肌缺血-再灌过程中钙超载的作用. 方法: 采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立模拟心肌缺血-再灌注模型. 实验分3组:①正常对照组;②模拟缺血-再灌注组:细胞低氧30 min-复氧30 min; ③牛磺酸+缺血-再灌组:先加入终浓度为20 mmol*L-1的牛磺酸,再行低氧30 min-复氧30 min. 以Fluo-3/AM荧光指示剂负载, 应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞 [Ca2+]I变化. 结果: 对照组心肌细胞[Ca2+]I荧光强度(650±41) U和荧光光密度较低. 低氧30 min后复氧即刻,[Ca2+]I荧光强度开始增加,复氧30 min后[Ca2+]I荧光强度(2537±187) U和光密度显著增高(P<0.01 vs对照组). 而牛磺酸组细胞内荧光强度和光密度较模拟缺血-再灌组显著降低[(895±50) U vs (2537±187) U, P<0.01]. 结论: 心肌细胞低氧-复氧导致钙超载;而牛磺酸有明显减轻心肌细胞低氧-复氧时Ca2+超载的作用.     

人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度(intracellular free Ca2+concentration,[Ca2+]i)的影响。方法采用荧光钙离子指示剂Fluo-3/AM,利用激光扫描共聚焦显微镜观察低剂量(1μmol/L)、中剂量(10μmol/L)、高剂量(100μmol/L)人参皂苷Rg1处理吗啡依赖原代培养大鼠海马神经元后[Ca2+]i的改变。结果低、中、高剂量人参皂苷Rg1单独处理海马神经元前后并没有引起胞内[Ca2+]i的显著改变(P>0.05),而吗啡依赖海马神经元胞内[Ca2+]i较正常海马神经元细胞明显增高(P<0.01)。此外,低、中、高剂量人参皂苷Rg1处理吗啡依赖海马神经元细胞后,均能显著抑制胞内[Ca2+]i的升高(P<0.01),并呈剂量依赖性,Rg1剂量越大,抑制作用越明显(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可以抑制吗啡依赖海马神经元细胞内[Ca2+]i的增高,对吗啡的成瘾性具有明显的拮抗作用,为合理安全有效地应用人参戒毒提供了实验依据。     

The antiapoptotic effect of insulin against anoxia/reoxygenation injury in cultured cardiomyocyte of neonatal rat

Objective： To study protective effect of insulin against cardiomyocyte apoptosis in anoxia/reoxygenation （A/R） injury of neonatal rat. Methods： The model of A/R injury was finished through receiving anoxia for 2h and reoxygenation for 4h in cultured cardiomyocytes of neonatal rat. The cardiomyocytes were divided randomly into 3 groups： control group （CON）, anoxia/reoxygenation group （A/R） and insulin-treated group （INS）. At the end of reoxygenation of 4 hours, activities of lactate dehydrogenase （LDH）, contents of malondiaidehyde （MDA）, were assessed through spectrophotometric procedures, myocyte apoptosis were detected through TUNEL and DNA Ladder. Results： MDA, LDH, and Apoptosis Index were significantly decreased in INS group compared with A/R group （P〈0.01）. Conclusion： Insulin has a protective effect against A/R injury in cultured cardiomyocyte of neonatal rat; the protective mechanism may contribute to antiapoptosis of insulin.     

缺氧、缺氧再给氧对培养乳鼠心肌细胞PPARα表达的影响

目的:研究缺氧、缺氧再给氧对培养乳鼠心肌细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的表达影响,并观察给予PPARα激动剂Wy14643后对缺氧再给氧心肌细胞成活率的影响。方法:采用体外培养的乳鼠心肌细胞随机分为四组:正常对照组,缺氧组,缺氧再给氧组,缺氧再给氧+Wy14643组。运用半定量RT-PCR方法对心肌PPARαmRNA的表达情况进行分析,运用Western-blotting方法检测PPAR蛋白表达情况,台盼蓝染色法测定各组心肌细胞成活率。结果:缺氧及缺氧再给氧组PPARαmRNA水平较正常对照组显著减少(P<0.01);缺氧及缺氧再给氧组蛋白表达较正常对照组显著减少(P<0.01);缺氧再给氧+Wy14643组PPARαmRNA及蛋白表达较正常对照组显著升高(P<0.01)。缺氧组及缺氧再给氧组心肌细胞成活率较正常对照组显著降低。缺氧再给氧+药物组心肌细胞成活率较缺氧组及缺氧再给氧组显著升高(P<0.01)。结论:缺氧可显著下调培养乳鼠心肌细胞中PPARαmRNA及蛋白的表达,缺氧再给氧后mRNA及蛋白的表达未能恢复至正常水平,使用PPARα激动剂后mRNA及蛋白的表达得到显著改善并使心肌细胞成活率显著提高。     

钙敏感受体在缺氧复氧大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:观察钙敏感受体(CaSR)在乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型中对细胞凋亡的影响.方法:利用原代培养的SD乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤(H/R)模型,分正常对照组、缺氧复氧组、激动剂组、阻断剂组、肝细胞生长因子(HGF)小(10 ng/m1)、中(20 ng/m1)大剂量(40 ng/ml)组.运用TUNEL染色方法检测心肌细胞凋亡率,RT-PCR检测心肌细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定培养液LDH含量.结果:与对照组相比,H/R组细胞凋亡率、LDH和TNF-α表达增高(p<0.01),给予CaSR激动剂后这三者的表达均进一步升高(P<0.01).而给予阻断剂后这三者的表达与激动剂组相比,差别无统计学意义(P>0.05),而HGF小、中和大剂量组这三者的表达较阻断剂绢进一步下降,且呈剂量依赖性.结论:CaSR激活后可能通过引起细胞内钙超载、自由基产生增多、TNF-α等炎性因子合成增多,参与了心肌缺血再灌注损伤,促进心肌细胞凋亡.而HGF预处理可以明显降低缺血再灌注心肌细胞的凋亡,减轻缺氧复氧心肌细胞损伤,保护心肌,且呈量效关系.     

七氟烷预处理对缺氧/复氧损伤的心肌细胞H9c2 LC3蛋白表达的影响

目的观察七氟烷预处理对缺氧/复氧（H/R）损伤的H9c2大鼠心肌细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响,探讨自噬在七氟烷预处理延迟性保护中的作用。方法 H9c2心肌细胞随机分为5组：空白对照组（CON）;缺氧/复氧组H/R（缺氧2 h,复氧1 h）;七氟烷预处理组（SEVO）予2.5%七氟烷预处理1 h,24 h后进行H/R;3-MA＋SEVO组,七氟烷预处理前15 min在培养液内加入3-MA（10 mmol/L）,24 h后进行H/R;3-MA组,即在培养液内加入3-MA（10 mmol/L）,25 h后进行H/R。取复氧后心肌细胞,MTT法检测各组H9c2心肌细胞存活率,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达。结果与CON组相比H/R组和SEVO组细胞存活率均降低（均P〈0.05）;与H/R组相比SEVO组、3-MA组和3-MA＋SEVO组细胞存活率均增高（均P〈0.05）。Western blot结果显示,与CON组相比SEVO组、H/R组自噬蛋白LC3-Ⅱ表达均上调（均P〈0.05）,与H/R组相比SEVO组LC3-Ⅱ蛋白表达均下调（均P〈0.05）,而3-MA组和3-MA＋SEVO组表达均显著下调（均P〈0.01）。结论七氟烷预处理对H/R损伤H9c2心肌细胞具有延迟性保护作用,自噬可能参与了七氟烷预处理的延迟性保护机制。     

Urocortin Ⅰ对缺氧/复氧损伤心肌细胞钙离子的影响

目的 观察UcnⅠ对成年大鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞钙离子的影响.方法 通过Langendorff离体心脏灌注系统,用Ⅱ型胶原酶逆行灌注法分离成年大鼠心肌细胞,培养20 h后随机分为正常组(N组)、缺氧/复氧组(L/R组)、UrocortinⅠ组(UcnⅠ组)、5-羟葵酸+UrocortinⅠ组(5- HD+UcnⅠ组).各处理组心肌细胞加入Fluo - 3/AM荧光探针,用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙的荧光强度.结果 I/R组心肌细胞内钙离子浓度较N组高(P＜0.05),UcnⅠ组较N组荧光强度明显增强(P＜0.01),而5- HD+UcnⅠ组心肌细胞内钙离子荧光强度与UcnⅠ组比较明显降低(P＜0.05).结论UcnⅠ可使成年大鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞内钙离子浓度升高,5- HD则可阻断UcnⅠ的作用,提示UcnⅠ导致缺氧/复氧后心肌细胞钙离子浓度的升高可能跟ATP敏感性钾通道开放有关.     

钙敏感受体及钙蛋白酶在大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中的表达及其意义

目的: 探究大鼠脊髓神经元缺氧复氧损伤中钙敏感受体及钙蛋白酶的表达变化及其意义。方法: 将原代培养的新生SD大鼠脊髓神经元随机分成4组：正常对照组、缺氧复氧组、激活组、抑制组。后3组神经元均制备缺氧复氧损伤模型,激活组加入钙敏感受体激动剂GdCl3,抑制组加入受体抑制剂NPS2390。应用Hoechst 33258染色观察各组脊髓神经元凋亡;应用免疫荧光技术分析钙敏感受体及钙蛋白酶蛋白在脊髓神经元的表达定位;采用蛋白质印迹法检测各组钙敏感受体、钙蛋白酶以及Bax蛋白的表达水平。结果： 与对照组比较,缺氧复氧组脊髓神经元凋亡增加,并且钙敏感受体、钙蛋白酶、Bax蛋白的表达明显升高（均P<0.01）;GdCl3可明显增强上述作用,而NPS2390可明显抑制上述作用。结论： 在缺氧复氧损伤过程中,脊髓神经元凋亡增加,钙敏感受体及钙蛋白酶表达增多。     

利多卡因预处理对H9c2心肌细胞缺氧复氧性损伤的保护作用

目的 探讨不同梯度浓度利多卡因预处理对缺氧复氧(H/R)引起的心肌细胞损伤是否具有保护作用。方法 实验随机分为7组：正常对照组(NC组)、缺氧复氧损伤对照组(HR组);利多卡因预处理组（LP组）,根据利多卡因的不同浓度对分为LP1（1μmol/L）、LP2（2.5μmol/L）、LP3（5μmol/L）、LP4（10μmol/L）、LP5（20μmol/L）组,每组6孔。心肌细胞损伤程度以心肌细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)活性来表示,同时检测心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果 与NC组比较,HR组细胞活力显著减弱,LDH释放量显著增加,并且MDA含量增多,SOD活性降低;与HR组比较,L2~5组细胞活力显著增强,LDH释放量显著降低;并且MDA含量下降,SOD活性增强;且细胞活力强弱的变化与LDH释放量、MDA含量呈负相关,与SOD活性呈正相关（P均<0.01）。细胞活力的增强与利多卡因浓度的增加呈正相关,与LDH释放量和MDA含量减呈负相关（均P <0.05）。结论 利多卡因可能通过抑制心肌细胞脂质过氧化,呈浓度依赖性地减轻心肌细胞的缺氧复氧损伤。