川芎嗪对骨髓移植小鼠CD44表达的作用研究

为探讨川芎嗪对骨髓移植小鼠早期造血重建过程中黏附分子CD44表达水平的影响，将BALB／c小鼠随机分为3组：正常对照组，骨髓移植对照组(简称对照组)和骨髓移植 川芎嗪治疗组(简称川芎嗪组)，对照组和川芎嗪组每天分别胃饲生理盐水和川芎嗪。于骨髓移植(BMT)后第7，14，21，28天处死小鼠，计数外周血细胞、骨髓有核细胞，分析骨髓中造血组织面积及成熟红细胞容量，用流式细胞术和免疫组织化学检测骨髓细胞上CD44的表达水平．并于第10天取小鼠脾脏，计数脾集落形成单位。结果显示，骨髓移植后第7，14，21，28天川芎嗪组外周血白细胞、血小板、骨髓有核细胞计数、骨髓中造血组织面积均显著高于移植对照组，外周血红细胞计数在第7，14，21天也较对照组为高；同时．川芎嗪组CFU-S计数明显高于同期移植对照组，骨髓中成熟红细胞容量则显著低于对照组，川芎嗪组C44的表达在第7，14，21，28天明显高于对照组。结论：川芎嗪可提高骨髓移植小鼠骨髓细胞表面CD44的表达水平，促进造血干／祖细胞的归巢，加速移植后骨髓的造血重建。     

川芎嗪对同基因骨髓移植小鼠骨髓细胞PECAM-1/CD31分子表达与造血重建的作用

本研究通过观察骨髓移植后小鼠骨髓中血小板内皮细胞间黏附分子 (PECAM 1/CD31)的表达水平变化及川芎嗪对其表达的调节作用 ,进一步探讨川芎嗪促进骨髓造血微环境修复、改善造血重建的作用机制。将BALB/c小鼠随机分为正常对照组 ,单纯BMT对照组和川芎嗪治疗组 (骨髓移植 川芎嗪 ) ,接受 7.5Gy60 Coγ射线一次性全身均匀照射 ,照射后进行同基因小鼠骨髓移植 ,并分别胃饲等量生理盐水与川芎嗪注射液 ,2次 /天。骨髓移植后第 7,14 ,2 1天 ,采用流式细胞术检测小鼠骨髓有核细胞表面CD31分子表达水平 ,计数外周血白细胞、血小板及骨髓有核细胞数 ,并做骨髓组织学检查。结果表明 :骨髓移植后第 7,14 ,2 1天川芎嗪治疗组的CD31表达水平 ,外周血白细胞、血小板和骨髓有核细胞计数以及骨髓细胞增生程度均高于骨髓移植对照组 (P <0 .0 1或P<0 .0 5 )。结论 :川芎嗪可以明显促进骨髓移植后骨髓有核细胞表面黏附分子CD31的表达水平 ,这可能是其促进造血重建的作用机制之一。     

川芎嗪对急性放射性损伤小鼠骨髓单个核细胞淋巴细胞功能相关抗原-1表达的作用研究

目的:检测川芎嗪对急性放射性损伤小鼠骨髓单个核细胞淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)表达变化的影响,探讨放射损伤后骨髓造血功能恢复的可能机制.方法:42只小鼠随机分为正常组、对照组和川芎嗪组.对照组和川芎嗪组首先进行总剂量为6.0 Gy 60Coγ射线一次性全身均匀照射;照射后川芎嗪组每只小鼠立即喂饲盐酸川芎嗪注射液2 mg,对照组喂饲生理盐水0.2 ml,均每日2次.照射后第7、14和21 d测定各组小鼠的外周血细胞计数、骨髓单个核细胞计数、骨髓巨核细胞计数、骨髓造血组织面积和骨髓单个核细胞LFA-1的表达水平.结果:照射后第7、14和21 d川芎嗪组外周血细胞计数、骨髓单个核细胞计数、巨核细胞计数和骨髓造血组织面积均显著高于对照组(P<0.05或 P<0.01);7 d和14 d川芎嗪组及对照组骨髓单个核细胞LFA-1表达水平呈进行性增高,且川芎嗪组LFA1表达水平显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);21 d川芎嗪组骨髓单个核细胞LFA-1的表达水平已开始下降,且低于对照组(P<0.05).结论:急性放射损伤早期骨髓单个核细胞LFA-1呈高表达;川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓造血功能恢复起促进作用的机制之一可能是通过增强受照射小鼠骨髓单个核细胞LFA-1表达实现.     

腺病毒介导的hVEGF165基因转移促进小鼠骨髓移植后造血重建

本研究探讨内皮细胞生长因子对骨髓移植小鼠造血重建的影响。重组腺病毒AdEGFP/hVEGF165经尾静脉注射给同基因骨髓移植BALB/c小鼠;在移植后10、20和30天时检测hVEGF165在小鼠体内的表达,同时测定外周血白细胞、血小板、红细胞计数和骨髓单个核细胞数;对分离移植后30天的骨髓单个核细胞进行脾集落形成试验。结果显示:重组腺病毒成功介导了hVEGF165在骨髓移植小鼠各脏器和血浆中的长期表达;移植后各时间点,接受hVEGF165治疗组小鼠外周血白细胞、血小板、红细胞计数及骨髓单个核细胞数虽然低于正常对照组,但高于其它实验组(P<0.05);移植后30天时hVEGF165治疗组小鼠骨髓单个核细胞形成的脾集落数(21.4±2.67)恢复正常水平(19.50±2.46)(P>0.05),较其它实验组显著增加(P<0.05)。结论:腺病毒介导的VEGF基因转移具有促进骨髓移植小鼠造血功能重建的作用。     

川芎嗪对同基因骨髓移植小鼠骨髓中VCAM-1/VLA-4表达的影响

为了探讨同基因骨髓移植 (BMT)小鼠骨髓细胞表面黏附分子VCAM 1 VLA 4 (CD4 9d)的表达及川芎嗪对其影响 ,取健康BALB c小鼠 ,随机分为 3组 :正常组 (不做处理 ) ,骨髓移植对照组 (简称BMT组 )和骨髓移植 川芎嗪治疗组 (简称川芎嗪组 )。BMT组和川芎嗪组分别胃饲生理盐水 0 .2ml 只和川芎嗪注射液每次 2mg 只 ,2次 天。在BMT后第 7、14、2 1、2 8天处死小鼠 ,采用免疫组织化学方法检测骨髓基质细胞VCAM 1蛋白表达水平 ,用RT PCR检测骨髓基质细胞VCAM 1mRNA表达水平 ;用流式细胞术检测骨髓有核细胞表面VLA 4的表达水平。结果发现 :BMT后第 7、14、2 1、2 8天川芎嗪组VCAM 1 VLA 4的表达水平、骨髓有核细胞计数均高于BMT组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论 :川芎嗪能提高BMT小鼠骨髓造血细胞和基质细胞黏附分子的表达 ,促进造血干 祖细胞的归巢 ,加速移植后骨髓的造血重建。     

川芎嗪对骨髓移植后小鼠LFA-1和ICAM-1表达的影响

本研究探讨川芎嗪对骨髓移植 (BMT)后小鼠骨髓中LFA 1和ICAM 1表达水平的影响及其促进骨髓造血重建的机制。 15 0只BALB/c小鼠随机分为正常组、生理盐水组和川芎嗪组。正常组未作任何处理 ,生理盐水组和川芎嗪组在BMT后分别喂饲相同剂量的生理盐水 ( 0 .2毫升 /只 ,每天 2次 )和川芎嗪 ( 2毫克 /只 ,每天 2次 ) ,并分别于BMT后第 7,14 ,2 1,2 8天统计存活率 ,计数脾集落形成单位 (CFU S)、外周血细胞、骨髓单个核细胞 (BMM NC) ,分析骨髓组织学变化及LFA 1和ICAM 1表达水平。结果表明 :川芎嗪组小鼠在BMT后第 10天CFU S计数和BMT后第 7,14 ,2 1,2 8天存活率、外周血白细胞、血小板、BMMNC计数、骨髓造血组织容量以及LFA 1表达水平均显著高于生理盐水组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ,成熟红细胞容量和ICAM 1表达水平均明显低于生理盐水组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。川芎嗪组小鼠脂肪组织容量在BMT后第 7、14天明显高于生理盐水组 (P <0 .0 1) ,在第 2 1,2 8天明显低于生理盐水组 (P <0 .0 1)。结论 :川芎嗪改善骨髓微环境 ,促进造血重建。     

川芎嗪对骨髓移植小鼠骨髓造血的影响

目的 探讨川芎嗪对同基因骨髓移植（Bone Marrow Transplantation,BMT)小鼠骨髓移植后骨髓造血的影响。方法 建立典型同基因BMT小鼠模型，随机分成两组：骨髓移植对照组（BMT组）和骨髓移植＋川芎嗪处理组（川芎嗪组），另外设正常一组为未做任何处理的小鼠，共3组。BMT组胃饲生理盐水0．2ml／只、次。每天2次，川芎嗪组胃饲磷酸川芎嗪注射液2mg/只、次、每天2次。分别于BMT后第1、7、14天观察外周白细胞，骨髓单个核细胞（CMMNC），使用免疫组化SABC－AP法测定骨髓组织切片中硫酸肝素（HS）表达水平；基质细胞来源因子－1（stro-maeel derived factor,SDF-1)的表达水平；CXC趋化因子受体4（CXCR4）表达水平。结果 川芎嗪组第7、14天外周白细胞、血小板、CMMMNC、CXCR4表达水平、HS表达水平、SDF－1均显著高于BMT组（P＜0．05）。结论 川芎嗪能在骨髓移植造血重建早期促进骨髓造血。     

川芎嗪促进同基因骨髓移植小鼠骨髓造血重建机制的探讨

本研究探讨川芎嗪对骨髓移植（BMT）后小鼠骨髓中干细胞因子（stem cell factor，SCF）mRNA表达水平的影响及其促进骨髓造血重建的机制。BMT后统计小鼠存活率和计数脾集落形成单位（CFU—S），并采用RT—PCR方法从mRNA水平动态检测骨髓基质细胞中SCF的表达。结果表明：川芎嗪组小鼠在BMT后第10天CFU—S计数、第7、14、21天存活率及川芎嗪组干细胞因子的表达水平均显著高于对照组（p〈0．01或p〈0．05）。结论：）川芎嗪能够促进骨髓造血细胞的恢复，改善骨髓微环境，促进骨髓造血重建。     

血必净注射液对异基因骨髓移植小鼠造血重建的影响

目的为了探讨血必净注射液对异基因骨髓移植（allo-BMT）小鼠造血重建的影响及其机制。方法取128只SPF级BALB／c小鼠,随机分为正常组（不做任何处理）,生理盐水对照组和血必净治疗组。生理盐水组在BMT后腹腔注射生理盐水0．4mL／只,每日1次,血必净组腹腔注射血必净注射液和生理盐水各0．2mL／只,每日1次。BMT后第7、14、21、28d统计小鼠存活率,计数外周血细胞、骨髓单个核细胞,采用流式细胞术分析骨髓单个核细胞VLA-4表达水平,采用免疫组化法分析骨髓基质中VCAM-1表达水平。第14d时分别计数脾集落形成单位（CPU-S）和粒-单系集落形成单位（CFU-GM）。结果血必净组BMT后第7、14、21、28d小鼠存活率,外周血细胞,骨髓单个核细胞,骨髓组织中VLA-4和VCAM-1表达水平,第14dCFU-S和CFU-GM均显著高于生理盐水组（P〈0．01或P〈0．05）。结论血必净注射液能促进异基因骨髓移植小鼠造血重建的恢复,该作用可能是通过提高造血细胞和基质细胞粘附分子的表达实现的。     

转染IL-3基因的骨髓基质细胞促进骨髓移植小鼠造血功能重建

为了探讨可调控表达IL 3基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠造血功能重建的促进作用 ,建立了可诱导表达IL 3基因的工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,加入多西环素 (Dox)诱导骨髓基质细胞系表达IL 3并检测其活性。C5 7BL/ 6 (H 2 b)小鼠经γ射线致死剂量照射后 ,输入供体BALB/C(H 2 d)小鼠去除T细胞的骨髓细胞 1× 10 7/只 ,同时输注骨髓基质细胞QXMSC1tet on +IL 35× 10 5/只 ,并灌服多西环素诱导IL 3表达。在第 30天 ,6 0天检测骨髓移植小鼠外周血红细胞 ,白细胞数 ,骨髓有核细胞数 ,骨髓CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM数。结果表明 :成功建立可诱导表达IL 3基因的骨髓基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3,异基因骨髓移植共输注基质细胞系QXMSC1tet on +IL 3可使异基因骨髓移植小鼠外周血红细胞、血小板、白细胞明显恢复 ,骨髓中有核细胞数 ,CFU S ,CFU GM ,CFU E ,CFU GMEE明显增加。结论 :输注基因工程化基质细胞 ,并诱导细胞因子IL 3基因表达可以进一步促进异基因骨髓移植小鼠造血功能重建     

骨髓移植小鼠骨髓基质细胞内皮抑制素(endostatin)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达相关性研究

本研究探讨内皮抑制素（endostatin）及血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）在骨髓移植（BMT）小鼠骨髓基质细胞中表达的相关性及川芎嗪对其表达的影响。取健康BALB／c小鼠，随机分为3组：正常组（不做处理），骨髓移植对照组（简称生理盐水组）和骨髓移植＋川芎嗪治疗组（简称川芎嗪组）。生理盐水组和川芎嗪组分别胃饲生理盐水0．2毫升／只和川芎嗪注射液每次2毫影只，2次／天。在BMT后第7、14、21、28天处死小鼠，用间接免疫荧光法和RT—PCR法检测骨髓基质细胞endostatin mRNA及其蛋白、VCAM-1 mRNA及其蛋白的表达情况，并探讨二者表达的相关性。结果表明：endostatin蛋白主要表达于骨髓基质细胞核内，VCAM-1蛋白主要表达于细胞浆内。BMT后第7、14、21天川芎嗪组和生理盐水组endostatin mRNA和蛋白的表达水平显著低于正常组（P〈0．01或P〈0．05），且川芎嗪组低于生理盐水组（P〈0．01或P〈0．05）；到第28天生理盐水组已基本恢复正常，而川芎嗪组仍未恢复正常水平。BMT后第7、14、21天川芎嗪组和生理盐水组VCAM-1 mRNA和蛋白的表达均明显低于正常组（P〈0．01或P〈0．05），且川芎嗪组明显高于生理盐水组（P〈0．01或P〈0．05），到第28天，川芎嗪组VCAM-1的表达已基本恢复正常，而生理盐水组仍未恢复正常，两组之间有显著性差异（P〈0．01）。相关分析显示，生理盐水组骨髓基质细胞endostatin和VCAM-1 mRNA及其蛋白表达呈负相关（P〈0.01或P〈0．05），而川芎嗪组endostatin和VCAM-1 mRNA及其蛋白表达呈正相关（P〈0．01或P〈O．05）。结论：内皮抑制素可通过影响骨髓基质细胞表面VCAM-1的表达水平，阻碍基质细胞与造血细胞之间和细胞外基质与造血细胞之间的联系而影响骨髓造血；川芎嗪能提高BMT小鼠骨髓基质细胞表面黏附分子的表达，加快BMT后HSPC的归巢及在骨髓中的增殖，并通过反馈调节BMT小鼠骨髓基质细胞新血管生成抑制因子内皮抑制素的表达，促进骨髓微环境的修复，加速移植后骨髓的造血重建。     

造血干细胞联合AGM基质细胞移植对骨髓移植小鼠造血重建的影响

目的探讨造血干细胞与主动脉-性腺-中肾(Aorta-gonad-mesonephros,AGM)区来源的基质细胞联合移植对同基因骨髓移植(bone marrow transplantation,BMT)小鼠BMT后骨髓造血的影响。方法建立同基因骨髓移植小鼠模型,随机分成4组:空白对照组、BMT组、BMT联合AGM基质细胞移植组(联合移植组)及川芎嗪组,另设正常组。分别于BMT后第7、14、21、28d检测外周血细胞、骨髓单个核细胞(bone marrow mono-nuclear cells,BMMNC)、第3、7、10、14、 21、28d检测骨髓组织学变化。结果联合移植组骨髓单个核细胞较川芎嗪组恢复快,联合移植组及川芎嗪组外周血血细胞、骨髓单个核细胞、骨髓组织恢复均较单纯BMT组快,有显著性差异。结论 BMT联合AGM基质细胞移植对骨髓移植造血重建具有促进作用。     

川芎嗪对BMT后小鼠骨髓基质细胞bFGF表达水平的影响

本研究探讨川芎嗪对骨髓移植（BMT）后小鼠骨髓基质细胞bFGF表达水平的影响及其促进骨髓造血重建的机制。取健康BALB／c小鼠，随机分为3组：正常组（不做处理），BMT＋生理盐水组（简称生理盐水组）和BMT＋川芎嗪治疗组（简称川芎嗪组）。生理盐水组和川芎嗪组分别胃饲生理盐水0．2毫升／只和川芎嗪注射液每次2毫克／只，2次／天，直至处死为止。在BMT后第7、14、21、28天处死小鼠，用RT—PCR和Western blot方法检测骨髓基质细胞bFGF mRNA及其蛋白表达水平。结果表明：BMT后第7、14、21天川芎嗪组和生理盐水组骨髓基质细胞bFGF mRNA及其蛋白的表达均明显低于正常组（P〈0．01或P〈0．05），但川芎嗪组明显高于生理盐水组（P〈0．01或P〈0．05），到第28天，川芎嗪组bFGF mRNA及其蛋白的表达已恢复正常，而生理盐水组仍未恢复正常，两组之间有显著性差异（P〈0．01）。结论：川芎嗪可能通过增加bFGF的表达水平而促进骨髓微环境的修复，加速BMT后骨髓的造血重建。