梓醇-川芎嗪方干预APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠的作用机制研究

目的:探究梓醇-川芎嗪方干预APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠的作用机制。方法:将3月龄C57BL/6J野生型小鼠为对照组(control组),构建阿尔茨海默病模型后,将同月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组(model组)、梓醇-川芎嗪方低剂量组(CT-L组)、梓醇-川芎嗪方中剂量组(CT-M组)、梓醇-川芎嗪方高剂量(CT-H组)、安理申组,对照组及模型组均给予生理盐水灌胃,各用药组以相应药物灌胃,每日灌胃1次,连续8周。对各组小鼠进行行为学观察,检测各组小鼠海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)及血清中β淀粉样蛋白42(Aβ42)。结果:行为学观察：与model组比较,CT-M组、CT-H组、Arceipt组长时程学习和参考记忆能力、自主探究能力、情景识别记忆能力、短期工作记忆能力、条件恐惧记忆能力,缓解焦虑、抑郁状态等7项行为学指标均明显好转(P<0.01);与CT-L...     

Calbindin D28k对帕金森病模型小鼠纹状体凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察1-甲基4-苯基1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)致帕金森病(PD)模型小鼠黑质多巴胺能神经细胞过表达Calbindin D28k(CB)时,纹状体细胞抗损伤作用机制。方法选择C57BL/6小鼠连续5 d腹腔注射MPTP,构建成功PD模型小鼠30只,随机分为模型组,人类免疫缺陷病毒(HIV)Ⅰ组(注射HIV Ⅰ)和CB-HIV-Ⅰ组(注射CB-HIV-Ⅰ),每组10只,连续6周对各组小鼠行为学检测,Western blot法检测各组小鼠CB,Bcl 2和Bax的表达变化。结果与模型组和HIV-Ⅰ组比较,CB-HIV-Ⅰ组小鼠各时间点移动格子次数,第1、2、5和6周站立次数,第6周时游泳和悬挂时间,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);CB-HIV Ⅰ组小鼠中脑黑质中CB的表达量显著升高(P0.05),纹状体细胞中Bcl-2的表达量亦明显升高(P0.01),而Bax的表达量明显降低(P0.01)。模型组和HIV-Ⅰ组上述指标差异无统计学意义(P0.05)。结论黑质多巴胺能神经细胞过表达CB时,纹状体细胞Bcl-2/Bax表达上调,提示其与纹状体细胞抗凋亡能力增强有关。     

APP/PS1双转基因小鼠阿尔茨海默病模型研究进展

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小鼠病毒性心肌炎细胞凋亡相关蛋白的表达

目的 探讨嗜鼠心肌Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ Ｂ３病毒（ＣＶＢ３ｍ）诱导的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠病毒性心肌炎（ＶＭＣ）细胞凋亡的机制。方法 给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹腔接种０．１ｍｌ１００ＴＣＤ５０ＣＶＢ３ｍ,感染后批断脊处死小鼠,应用双重荧光染色技术、原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和共聚焦显微镜对小鼠心肌细胞凋亡及部分相关蛋白表达进行检测。结果 ＣＶＢ３ｍ可诱发小鼠ＶＭＣ。感染病毒后９～１２ｄ病变达到高峰,检出率达１     

应用CRISPR/Cas9技术制备阿尔茨海默病小鼠模型

目的敲除α7烟碱型胆碱能受体(α7nAChR)基因构建阿尔茨海默病(AD)小鼠模型,验证成年敲除(KO)鼠是否有AD表征。方法利用CRISPR/Cas9技术,针对α7nAChR基因靶序列设计单链向导RNA(sgRNA),将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵。通过检测DNA序列,鉴定和筛选出KO小鼠进行行为学测试。结果 KO鼠α7nAChR基因有531 bp片段敲除;与野生型(WT)组相比,KO组有高架十字迷宫开壁区活动时间短、条件性恐惧表现出僵直时间百分比增高的趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。结论成功制备AD模型鼠,成年KO鼠学习记忆功能正常,但有焦虑样行为趋势。     

MEF2C在APP/PS1双转基因小鼠脑中表达及对炎症的调节作用

目的 探讨肌细胞增强因子(Mef)2c在APPswe/PSEN1dE9(以下简称APP/PS1)转基因小鼠中表达及对小鼠大脑中炎症的调节作用。方法 采用免疫组织化学方法,检测APP/PS1转基因小鼠中Mef2c和β淀粉样蛋白(Aβ)的表达及分布;Western印迹检测APP/PS1转基因小鼠脑中Mef2c蛋白表达;将沉默病毒Ad-shRNA-Mef2c及空载病毒Ad-shRNA-NC通过侧脑室注射方法分别处理6月龄和10月龄的APP/PS1转基因小鼠和C57BL/6J(以下简称C57)野生小鼠;刚果红染色检测各组脑组织皮质中老年斑变化;免疫荧光检测各组小胶质细胞特异性蛋白(IBA)1、白细胞介素(IL)-6在各组脑皮质中的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠皮质中IL-6表达水平。结果 与同月龄C57野生小鼠相比,6月龄和10月龄APP/PS1转基因小鼠皮质中,免疫组化结果显示,Mef2c表达显著降低,Aβ沉积明显(P<0.05,P<0.01);Western印迹结果显示,小鼠皮质中Mef2c蛋白表达显著降低(P<0.05);刚果红染色显示,皮质中老年斑沉积明...     

急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的研究

目的　探讨急性心肌梗死 (AMI)大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白P5 3、Fas、Bax和Bcl 2的表达。方法　雄性SD大鼠 10 9只 ,其中 10 1只结扎冠状动脉左前降支 ,80只术后存活分入 10个时点 ,每时点 8只 ,另 8只大鼠开胸暴露左冠状动脉但不结扎作假手术组。于AMI后 1、3、6、12及 2 4h和 2、3、5、7及 14d分别以原位末端标记(TUNEL)法和免疫组织化学方法检测心肌细胞凋亡和心肌组织P5 3、Fas、Bax和Bcl 2蛋白的表达。结果　 8只假手术大鼠心肌组织仅有少量的凋亡细胞 ,P5 3、Fas和Bcl 2的免疫反应阳性 ,而Bax的免疫反应为阴性。AMI后 1h梗死区周围心肌的凋亡细胞阳性指数开始升高 ,3d达高峰 ,14d仍高于假手术组 ;P5 3、Fas、Bax和Bcl 2分别于 6h、12h、12h和 3h开始升高 ,于 2d、3d、2 4h和 2d达高峰 ,然后逐渐下降 ,14d与假手术组比较差异无显著性意义。结论　AMI大鼠心肌细胞凋亡增加 ,心肌组织的凋亡相关蛋白P5 3、Fas、Bax和Bcl 2的表达也增加     

氟对软骨细胞凋亡因子bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 观察氟对体外培养软骨细胞中凋亡相关因子bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨氟在致软骨细胞凋亡中的作用机制.方法 采用软骨细胞体外培养方法,原代培养乳鼠关节软骨细胞,传第3代后按染氟剂量不同分为0(对照)、5、20、40mg/L组,培养10 d后,透射电镜下观察软骨细胞的超微结构改变,采用Western印迹法检测软骨细胞bcl-2和Bax蛋白表达.结果 透射电镜下,对照组和5 mg/L组软骨细胞呈球形,粗面内质网发达,线粒体膜性结构完整;20、40 mg/L组软骨细胞内可见脂滴增多,胞质内出现大量空泡类物质,细胞内膜结构不清,部分细胞出现核固缩.20、40 mg/L组软骨细胞bcl-2蛋白表达(0.626±0.042、0.531±0.039)较对照组(0.876±0.035)明显降低(P均＜0.01);而Bax蛋白表达(0.966±0.047、1.289±0.156)较对照组(0.642±0.050)明显增加(P均＜0.01).5 mg/L组软骨细胞bcl-2、Bax蛋白表达(0.885±0.065、0.657±0.045)与对照组比较,差异无统计学意义(P均＞0.05).此外,40 mg/L组与20 mg/L组比较,bcl-2、Bax蛋白表达差异有统计学意义(P均＜0.01).结论 染氟20、40 mg/L可对软骨细胞超微结构造成损伤,其通过减少抑凋亡因子bcl-2的表达和增加促凋亡因子Bax的表达,从而产生促进软骨细胞凋亡的作用.

Abstract：

Objective To study the effect of fluoride on the expression of bcl-2 and Bax in chondrocyte in vitro, and investigate the mechanism of action of chondrocyte apoptosis induced by fluoride. Methods Articular chondrocytes of neonate rat were cultured in vitro and treated with 0(control),5,20,40 mg/L of fluoride,respectively, for 10 days. Then observed the u]trastructure of chondrocytes under eletronicmicroscope, and tested the expression of bcl-2 and Bax in chondrocyte in different groups by Western blotting. Results Abundant rough endoplasmic reticulums (RERs) and complete structure of mitochondria membranes were presented in globular chondrocytes in the control group and 5 mg/L group; but more lipid droplets and vacuoles were seen in the cytoplasm, and the structure of intracellular membranes became incomplete, and some shrieked chromatin and pyknosis were seen in the chondrocytes of the 20,40 mg/L groups. The expression of bcl-2 markedly decreased in 20 mg/L group(0.626 ± 0.042) and 40 mg/L group(0.531± 0.039) compared to the control group(0.876 ± 0.035,all P ＜ 0.01 ). And the expression of Bax significantly increased in 20 mg/L group(0.966 ± 0.047) and 40 mg/Lgroup ( 1 .289 ± 0.156) compared to the control group(0.642 ± 0.050, all P ＜ 0.01). But there was no statistical significant difference of the expression of bcl-2 or Bax between 5 mg/L group(0.885 ± 0.065,0.657 ± 0.045) and control group (all P ＞ 0.05 ). However there were statistical differences of expressions of bcl-2 and Bax between 20 and 40 mg/L groups(all P ＜ 0.01 ). Conclusions Twenty and 40 mg/L fluoride can cause damage to the ultrastructure of chondrocyte, and fluoride possibly promotes chondrocyte apoptosis by reducing the expression of antiapoptotic factor bcl-2 and increasing the expression of Bax.     

糖尿病合并阿尔茨海默病患者血清可溶性凋亡相关因子及其配体的表达及临床意义

目的 探讨糖尿病合并阿尔茨海默病(AD)患者血清可溶性凋亡相关因子(sFas)和sFasL配体(sFasL)表达及临床意义。方法 选取2020年5月至2021年12月鄂州市中心医院老年病科老年2型糖尿病(T2DM)患者130例,根据是否合并AD分为合并组65例和未合并组65例,另选取同期单纯AD患者65例作为单纯AD组,老年健康体检者65例为对照组。检测各组血清sFas、sFasL水平。结果 合并组血清sFas、sFasL水平高于单纯AD组、未合并组及对照组,单纯AD组血清sFas、sFasL水平高于未合并组及对照组,未合并组血清sFas、sFasL水平高于对照组(P<0.05);合并组痴呆重度患者血清sFas、sFasL水平高于中度患者及轻度患者,中度患者血清sFas、sFasL水平高于轻度患者(P<0.05);血清sFas、sFasL水平与T2DM患者临床痴呆评定量表评分呈正相关(r=0.773、r=0.689,P<0.01);血清sFas、sFasL联合检测诊断T2DM合并AD的ROC曲线下面积(AUC)为0.836(95%CI:0.761～0.895),明显高...     

三种阿尔茨海默病小鼠模型的建立和比较

目的 建立并比较3种阿尔茨海默病( Alzheimer＇s disease,AD)小鼠模型的各自特点.方法 90只昆明小鼠随机分组,分别采用侧脑室Aβ25-35注射、侧脑室AlCl3注射、海马物理损伤的方法复制出3种不同的小鼠AD模型,通过Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,组织切片观察海马的形态学改变,Aβ1-40免疫组化染色观察海马CAI区老年斑形成情况.结果 侧脑室注射AlCl3组和海马物理损伤组小鼠学习记忆能力比对照组明显降低(P＜0.05,P＜0.01),物理损伤组小鼠海马神经元丢失明显,Aβ1-40免疫组化染色阴性;侧脑室注射AlCl3组小鼠海马CAI区偶见神经元排列稀疏,在神经元胞体和突起周围可见Aβ1-40免疫组化反应阳性的棕黄色斑块;侧脑室注射Aβ25-35组小鼠学习记忆能力、海马CAI区形态均与对照组无明显差异,海马区可观察到Aβ1-40免疫组化反应阳性的细小斑块.结论 上述三种模型均为AD研究常用,但各自模拟AD的侧重点不同,技术要求、成本价格、造模时间、持续时间等也不尽相同,研究中需灵活选择.     

橄榄苦苷对APP/PS1双转基因小鼠淀粉样斑块沉积、神经炎症和记忆损伤的保护作用

目的 探讨橄榄苦苷(OP)对淀粉样前体蛋白(APP)/PS1双转基因小鼠淀粉样斑块沉积、胶质细胞反应性增生炎症反应和记忆损伤的作用。方法 采用OP治疗APP/PS1双转基因小鼠,并以野生型C57BL/6J小鼠为对照。通过水迷宫实验研究APP/PS1双转基因小鼠记忆受损情况及OP在其中的改善作用。通过免疫荧光和硫黄素-S染色观察OP对APP/PS1双转基因小鼠皮层中淀粉样斑块沉积的影响。Western印迹检测OP对APP/PS1双转基因小鼠皮层中β淀粉样蛋白(Aβ)代谢相关蛋白表达的影响。通过免疫荧光和酶联免疫吸附试验(ELISA)研究OP对APP/PS1双转基因小鼠胶质细胞增生反应性炎症的影响。结果 OP可缩短APP/PS1双转基因小鼠逃避潜伏期及找到平台前的游泳距离,增加穿越隐藏平台次数(均P<0.05)。OP可减少APP/PS1双转基因小鼠皮层中淀粉样斑块沉积,降低Aβ代谢相关蛋白糖基化末端终产物受体(RAGE)、β分泌酶(BACE)1和APP的表达(均P<0.05)。OP可减少APP/PS1双转基因小鼠皮层和海马中星形胶质细胞和小胶质细胞数量,降低炎症因子肿瘤坏死因子...     

槲皮素调控Wnt信号通路对阿尔茨海默病模型小鼠海马神经的影响

目的 探讨槲皮素调控Wnt信号通路对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠海马神经的影响.方法 选取SPF级6周龄小鼠60只,随机分为假手术组、模型组及实验组,每组20只.模型组和实验组小鼠双侧海马区注射Aβ25?35建立小鼠AD模型,实验组小鼠灌胃槲皮素(50 mg·kg-1·d-1),假手术组、模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,...     

APP swe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠生物学特征

<正>阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种以进行性认知功能障碍和记忆损害为特征的中枢神经系统常见的退行性疾病。AD的主要病理特征为大脑萎缩,脑组织内形成老年斑、神经纤维缠结及神经元丢失。AD的病因和发病机制目前虽未完全明了,但与一些基因的遗传突变密切相关。因此,AD转基因动物模型应运而生,拓展了对该模型鼠的认识,从而对进一步深入探讨AD的发病机制及治疗途径大     

凋亡相关基因caspase-9,bax及bcl-2在大肠癌中的表达及其意义

目的探讨凋亡相关基因easpase-9,bax和bel-2在大肠癌中的表达及其在大肠癌发生、发展中的可能作用及相互关系。方法应用免疫组化S-P法检测20例正常大肠黏膜、48例大肠腺瘤及56例大肠癌中的caspase-9、bax和bcl-2蛋白的表达。用TUNEL 法检测细胞凋亡。结果正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌中caspase-9的阳性表达率分别为5．00％、33．33％、64．29％,其表达率在三者间差异有显著性(P<0．01)。bax在三种组织中的表达率分别为5．00％、35．42％、62．50％,三者间差异有显著性(P<0．01)。bcl-2 在三者中的阳性表达率分别为15．00％、87．50％、60．71％,三者间差异亦有显著性(P<0．01)。caspase-9,bax和bcl-2的表达与大肠癌的分化程度有关(P<0．01),与Dukes分期无关(P>05)。正常大肠黏膜、腺瘤和大肠癌中细胞凋亡指数差异有显著性(P<0．01),细胞凋亡指数与肿瘤的分化程度有关(P<0．01),与Dukes分期无关(P>0．05)。caspase-9、bax和bcl-2的表达与细胞凋亡指数有密切联系 (P<0．01)。结论肿瘤早期阶段的细胞凋亡异常,可能是大肠癌的发病原因之一。bcl-2和bax通过调节caspase-9参与大肠癌的发生。     

小鼠白血病Cyclin G和其它相关蛋白表达及凋亡研究

目的：探讨在白血病细胞中细胞周期素zCyclin)G,Cyclin D,P16,P21,P53等基因的蛋白表达水平和白血病细胞周期变化。方法：建立白血病模型（L615）；采用免疫组织化学法检测小鼠的Cyclin G、P53、P21、Cyclin D、P16和C－fos、bcl-2的表达；流式细胞术检测小鼠白血病细胞的凋亡率和细胞周期。结果；阳性组和复发组的Cyclin G、Cyclin D、C－fos表达明显高于正常组和化疗组（P＜0．05），P16则相反（P＜0．01）；P21在四组中的表达差异无显著性意义（P＞0．05）；阳性组和复发组P53的表达为阴性，而化疗组与正常组表达差异无显著性意义（P＞0．05）；bcl-2四组表达差异无显著性意义（P＞0．05）；化疗组和阳性组的细胞凋亡率均较正常组增高（P＜0．05），且化疗组的凋亡率比阳性组的明显增高（P＜0．01）。结论：白血病的发生、发展可能与Cyclin G、Cyclin D、C－fos基因的高表达，P16低表达有关。     

瑞舒伐他汀对ApoE-/-小鼠动脉粥样斑块中凋亡相关蛋白的影响

目的观察瑞舒伐他汀对Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化斑块凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法 10只C57小鼠作为对照组,给予普通饮食,同品系22只Apo E-/-小鼠随机分为模型组(n=11)、干预组(n=11),高脂喂养8 w后,干预组给予瑞舒伐他汀悬液灌胃,模型组给予等量生理盐水。继续喂养12 w后所有老鼠处死,全自动生化仪检测血清血脂,光学显微镜观察各组小鼠主动脉斑块形态及面积,免疫组化法检测动脉粥样斑块Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果与对照组相比较,模型组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显升高(P0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低(P0.05);主动脉可见明显粥样斑块;Bcl-2表达明显减少,Caspase-3表达明显增多(P0.05)。与模型组比较,TC、TG、LDL-C明显降低(P0.05);干预组小鼠动脉粥样斑块面积减小(P0.05),Bcl-2表达明显增多,Caspase-3表达明显减少(P0.05)。结论高脂饮食可引起Apo E-/-小鼠主动脉凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase-3的变化,瑞舒伐他汀可以通过上调Bcl-2、下调Caspase-3的表达,抑制Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的进展。     

阿尔茨海默病小鼠与野生型小鼠海马中miRNA表达差异

目的分析D-半乳糖联合Al Cl3诱导阿尔茨海默病(AD)与野生型小鼠海马microRNAs(miRNAs)表达差异。方法昆明种小鼠,随机分成AD模型组和野生型对照组,AD模型组每日腹腔注射D-半乳糖90 mg/kg和Al Cl340 mg/kg溶液,野生型对照组腹腔注射等量的生理盐水,1次/d,连续90 d。物体识别实验测试各组小鼠识别、记忆能力。miRNA芯片检测各组小鼠海马miRNAs的表达,并进行后续的生物信息学分析。结果在物体识别实验中,AD模型组小鼠探索新物体所用的时间较野生型对照组减少(P0.01),分辨指数(8.97±1.33)较野生型对照组(34.42±3.74)减低(P0.001)。在3批次AD模型组和野生型对照组间均有显著变化的17个miRNAs(≥2.0倍上调或下调)的预测靶基因重点分布在AD相关信号通路、神经营养因子信号通路、长时程增强效应相关通路,并处于这些信号通路的关键位置。结论 17个差异表达的miRNAs可能通过调节相关信号通路关键细胞因子的表达,参与AD的进程。     

NSE在阿尔茨海默病模型大鼠脑组织中的蛋白表达变化

目的探讨阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑组织中的蛋白表达变化。方法实验选取Wistar雄性成年大鼠20只,随机分为正常组及AD模型组。切断大鼠双侧海马制备AD动物模型。肽指纹图谱是通过NCBI对特定差异蛋白点进行生物质谱分析、鉴定。对不同实验组海马蛋白进行测定。通过蛋白变化的比较,选取有差异的蛋白点条件:AV Ratio>1.3或<1.3,t检验P<0.05,为有意义蛋白点。结果进一步通过SwissPort蛋白数据库进行鉴定。结果质谱分析发现AD模型组海马内有一表达明显升高的蛋白点,经鉴定为神经元烯醇化酶(NSE)。结论 NSE在AD的病程中,表达发生变化,是在AD疾病中起重要作用的酶。     

tau蛋白相关阿尔茨海默病治疗进展

阿尔茨海默病(AD)为最常见的老年期痴呆类型,目前尚无特效治疗方法。临床上正式批准使用的抗AD药物主要为胆碱酯酶抑制剂及美金刚胺,一般仅能改善临床症状而不能阻滞AD进展。老年斑(SP)及神经原纤维缠结(NFTs)为AD的