丁型肝炎

丁型肝炎病毒基因组RNA包埋锤头状核酶的活性研究——李晓娟等（广东深圳市东湖医院、深圳市肝病研究所518020）：《中华实验和临床病毒学杂志》，2005，19（1）：12-15[目的：探讨用丁型肝炎病毒（HDV）基因组来包埋HBV靶向性核酶对核酶体内外活性产生的影响。方法：用和HBV靶基因体外转录产物在不同反应条件下温育对HDV-核酶重组体的体外切割活性定量分析：     

乙型肝炎病毒特异性核酶与丁型肝炎病毒重组体的体外转录及切割活性

研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）特异性核酶（简称ｒＲＺ）体外转录及切割ＨＢＶ的活性。方法将８３１ｂｐ的ＨＢＶＣ基因片段克隆于Ｔ载体Ｔ７启动子下游，３２Ｐ标记转录后作为靶ＲＮＡ（３２Ｐ－ｒＨＢＶ）。ｒＲＺ、ｒＨＤＶＲＺＡ插入有核酶结构的丁型肝炎病毒基因组重组体）和ｒＨＤＶＲＺＰ（部分ＨＤＶ基因组重组体）进行非标记的大量转录，转录产物经凝胶纯化后，与３２Ｐ－ｒＨＢＶ按一定比例和条件保温切割，电泳后放射自显影。结果ｒＲＺ，ｒＨＤＶＲＺＰ，ｒＨＤＶＲＺＡ在３７Ｃ有活性，并随温度升高而提高，体外观察到重组体的切割活性，证明所设计的核酶结构是正确的。结论将核酶基因插人到ＨＤＶ基因组中，使其具有特异性切割ＨＢＶ的活性，可实现核酶的保护性和靶向性运载，为下一步重组体的体内应用研究奠定了基础。     

HDV核酶对乙型肝炎病毒抑制作用的研究

目的研究HDV核酶在细胞内对乙型肝炎病毒(HBV)复制及其抗原表达的抑制作用。方法1)以HBV前基因组mRNA为靶基因,体外筛选出HDV核酶有效作用位点,构建HDV核酶并进行体外测活;2)分别选用tRNA-Val、U6和hCMV 3种真核启动子,重组构建HDV核酶真核表达载体ptVHRz、pSURz和pcDHRz,分别用3种载体转染HepG2.2.15细胞;3)用点杂交、ELISA和实时荧光定量PCR方法分别检测核酶在细胞内的表达及对HBV的抑制作用。结果在HBV C基因区筛选到一位点,所构建的HDV核酶在体外条件下对该位点能产生有效切割。3种核酶表达载体在细胞内均能高效表达,在转染48 h后,ptVHRz和pcDHRz对HBeAg的表达产生了明显的抑制作用,而对HBsAg没有抑制作用。三者对HBV的复制均未产生明显影响。结论HDV核酶在细胞内对HBV抗原的表达能产生特异性抑制作用,但未能有效抑制HBV的复制,对其原因需进一步深入研究。     

特异性脱氧核酶对丙型肝炎病毒的体外消化作用

目的研究特异性脱氧核酶对丙型肝炎病毒（HCV）的体外消化作用。方法设计3个分别作用于HCV RNA 5＇非编码区（5＇ NCR）上157、168、173位点的脱氧核酶（DRz），分别命名为DRz1，DRz2,DRz3，均以5＇GGCTAGCTACAACGA-3’为脱氧核酶的催化活性中心，用内切酶XbaⅠ将含有HCV病毒序列的质粒pCMV/T7 NCRC,△Luc消化成线性，以此为模板体外转录出用α-^32PIUTP进行标记的靶HCV RNA。在37℃,PH7.5，Mg^2 10mmol/L等条件下，将HCV RNA（10nmol/L）与3个脱氧核酶（1μmol/L）分别混合进行切割反应，并进一步比较不同Mg^2浓度下DRz3的切割反应效率，反应产物在8%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离并行放射自显影，应用凝胶成像分析仪评价脱氧核酶的切割效率。结果在设定反应条件下，3个脱氧核酶对HCV病毒均有切割活性，随着Mg^2浓度的增加，DRz3的切割活性增强，结论特异性脱氧核酶可有效切割HCV RNA 5＇NCR的RNA，且切割效率与Mg^2浓度呈正相关。     

抗血小板衍生生长因子受体β亚单位核酶的体外制备与活性鉴定

目的 研究针对血小板衍生生长因子（PDGF）受体β亚单位基因的核酶的制备与体外切割活性鉴定。方法 将大鼠PDGF受体β亚单位基因的PCR片段克隆于T载体T7启动子下游,^32P标记的体外转录物作为靶RNA;设计并合成针对大鼠PDGF受体β亚单位胞外区的核酶,将核酶基因克隆于自我切割核酶载体P1．5的5′－cis核酶和3′-cis核酶之间,并进行^32P标记的转录。核酶与靶RNA按一定比例和条件进行切割反应电泳,放射自显影。结果 核酶制备正确,在最适条件下具有切割活性。其Km=13.20nM,Kcat=0.28min^-1。最高切割效率达78．3％。结论 体外制备的核酶具有良好的特异催化切割活性。     

乙型肝炎病毒特异性核酶与丁型肝炎病毒重组体的体外转录及切？…

日的 研究乙型肝炎病毒特异性核酶体外转录及切割ＨＢＶ的活性。方法 将８１ｂｐ的ＨＢＶ Ｃ基因片段克隆于Ｔ载体Ｔ７启动子下游，＾３２Ｐ标记转录后作国靶ＲＮＡ（＾３２Ｐ－ｒＨＢＶ）。ｒＲ２，ｒＨＤＶＲＺＡ（插入有核酶结构的丁型肝炎病毒基因组重组体）和ｒＨＤＶＲＺＰ（部分ＨＤＶ基因组重组体）进行非标记的大量转录，转录产物经凝胶纯化后，与＾３２Ｐ－ｒＨＢＶ按一定比例和条件保温切割，电泳后放射自显影。     

U1 snRNA嵌合体核酶的抗丙型肝炎病毒作用

目的鉴定特异性抗丙型肝炎病毒(HCV)核酶与具有细胞核靶向性的U1 snRNA组成的嵌合体在体外切割HCV RNA的活性。方法通过聚合酶链反应及克降的力。法用HCV特异性核酶(Rz)序列戢代质粒pBSIISK U1(含有人类野生型U1 snRNA基因全序)中U1 snRNA第三个茎环结构，重组质粒命名为pBSIISK (U1-Rz)。再将pBSIlSK (U1-Rz)中核酶与U1 snRNA组成的嵌合体基因止向充隆于pGEM-T载体T7启动子的下游，重组质丰立命名为pGFM(U1-Rz)。质粒pGEM-(U1-Rz)和pGEM Rz[含有与pGEM(U1-Rz)相同的核酶序列]体外转录后，转录产物与靶RNAs在一定条件下进行切割反应，电泳后放射自显影。结果U1 snRNA嵌合体核酶构建成功。嵌合体核酶与核酶对靶RNAs均有切割活性，且二者的切割活性相似。随着时间的延长和工具酶体积比的增加切割效率增加。结论特异性抗HCV核酶与U1嵌合体在体外具有良好的持异性催化切割活性。     

丁型肝炎病毒载体携带核酶在小鼠体内抑制乙型肝炎病毒复制

目的:研究用丁型肝炎病毒(HDV)作为载体携带乙型肝炎病毒(HBV)特异性的锤头状核酶所构建的重组体,在细胞体系及转染动物模型中对HBV基因表达和复制的影响.方法:将HDV-核酶重组体和HBV的共表达质粒转染Huh-7细胞以分析HDV-核酶重组体对HBV基因表达的影响;用小鼠尾静脉快速注射法将共表达质粒转染到小鼠体内,检测重组体在动物体内对HBV基因表达和复制的抑制作用.结果:转染细胞中,重组体对HBsAg的抑制与HDV重组位点和核酶靶位都有关;水压法注射的质粒在小鼠肝内得到表达,与对照相比重组HDV-核酶可有效抑制在肝和血清中HBV的基因表达以及复制,与细胞中的结果一致.结论:此项体内实验为进一步构建治疗性重组HDV病毒,发现靶向性抗病毒基因治疗手段奠定基础.     

不同启动子驱动HDV核酶的逆转录病毒载体构建

目的分别构建CMV、H1、tRNA、U2、U3和U6启动子驱动反式丁型肝炎病毒核酶（HDV核酶）的逆转录病毒表达载体。在这些载体中,HDV核酶设计为靶向HBV基因序列PreS2和C区。方法用PCR技术分别扩增CMV、U2和U3启动子,并连入pMD18-T载体。合成靶向PreS2和C区HDV核酶并利用SalⅠ和H indⅢ的酶切位点分别连入逆转录病毒表达载体pLEGFP（pLEGFP-R z）。然后利用BamHⅠ和SalⅠ的酶切位点分别把CMV、H1、tRNA、U2、U3和U6启动子连入重组载体pLEGFP-R z。所有的重组载体经PCR和酶切的方法验证。结果成功地构建了分别含有6种启动子驱动HDV核酶的逆转录病毒载体。结论这些重组载体的构建为筛选高效表达核酶的启动子奠定基础。同时这些重组载体也可用于进一步研究HDV核酶抑制HBV复制的效率。     

丁型肝炎病毒载体携带核酶在小鼠体内抑制乙型肝炎病毒复制

目的：研究用丁型肝炎病毒（HDV）作为载体携带乙型肝炎病毒（HBV）特异性的锤头状核酶所构建的重组体，在细胞体系及转染动物模型中对HBV基因表达和复制的影响。方法：将HDV-核酶重组体和HBV的共表达质粒转染Huh-7细胞以分析HDV-核酶重组体对HBV基因表达的影响；用小鼠尾静脉快速注射法将共表达质粒转染到小鼠体内，检测重组体在动物体内对HBV基因表达和复制的抑制作用。结果：转染细胞中，重组体对HBsAg的抑制与HDV重组位点和核酶靶位都有关；水压法注射的质粒在小鼠肝内得到表达，与对照相比重组HDV-核酶可有效抑制在肝和血清中HBV的基因表达以及复制。与细胞中的结果一致。结论：此项体内实验为进一步构建治疗性重组HDV病毒，发现靶向性抗病毒基因治疗手段奠定基础。     

临床肝病患者中庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)的感染

本文应用抗-HGV酶联免疫法(EIA)和逆转录套式聚合酶链反应法(RT-PCR)检测150份乙型、120份丙型、15份戊型和49份非甲-戊型肝炎患者血清。结果显示:乙肝、丙肝、戊肝和非甲-戊型肝炎患者中抗-HGV抗体的阳性率分别为22.0％(33/150)、25.0％(30/120)、33.3％(5/15)和40.1％(20/49)。其中乙型、丙型、戊型和非甲-戊型肝炎的抗-HGV抗体阳性者中,HGV RNA的阳性率分别为58.3％(7/12)、60.0％(6/10)、40.0％(2/5)和45.5％(9/12)。说明GBV-C/HGV可与HBV、HCV或HEV合并感染,该病毒可能引起临床型肝炎。     

各型肝炎病毒单纯及重叠感染的研究

目的 探讨病毒性肝炎患者甲～戊，庚型肝炎病毒(HAV-HEV，HGV)单纯感染及重叠感染情况。方法 采用EIA法检测病毒性肝炎患者血清抗-HAV IgM，HBV标志物、抗-HCV IgM、抗-HDV IgM、抗-HEV IgM、抗-HGV IgM。结果 共检测210例病毒性肝炎患者HAV-HEV、HGV血清标志物，20例未检出(9．5％)，190例患者检出标志物阳性(90．5％)。HBV感染率89，5％(188／210，其中有34例为既往感染，占16．2％，现症感染154例，占73．3％)；HAV感染率29．0％(61／210)，HCV、HDV感染率均为8．1％(17／210)、HEV、HGV感染率依次为10．0％(21／210)、7．1％(15／210)。各临床类型中单纯感染占61．4％(129／210)，二重感染占32．4％(68／210)，以HAV HBV、HBV HDV、HBV HEV感染模式最常见，三重感染占6．2％(13／210)，以HAV HBV HDV感染模式最常见；临床上以肝炎肝硬化、重型肝炎重叠感染常见，急性肝炎最少见。结论 病毒性肝炎中HBV感染最常见，其次为HAV感染；单纯感染、二重感染多见，三重感染少见；重叠感染发生率随病情加重而增加。     

Update on the management and treatment of viral hepatitis

This review aims to summarize the current evidence on the treatment of viral hepatitis, focusing on its clinical management. Also, future treatment options and areas of potential research interest are detailed. PubMed and Scopus databases were searched for primary studies published within the last ten years. Keywords included hepatitis A virus, hepatitis B virus (HBV), hepatitis C virus, hepatitis D virus (HDV), hepatitis E virus, and treatment. Outcomes reported in the studies were summarized, tabulated, and synthesized. Significant advances in viral hepatitis treatment were accomplished, such as the advent of curative therapies for hepatitis C and the development and improvement of hepatitis A, hepatitis B, and hepatitis E vaccination. Drugs that cure hepatitis B, going beyond viral suppression, are so far unavailable; however, targeted antiviral drugs against HBV (immunomodulatory therapies and gene silencing technologies) are promising approaches to eradicating the virus. Ultimately, high vaccination coverage and large-scale test-and-treat programmes with high screening rates may eliminate viral hepatitis and mitigate their burden on health systems. The development of curative hepatitis C treatment renewed the enthusiasm for curing hepatitis B, albeit further investigation is required. Novel therapeutic options targeting HDV life cycle are currently under clinical investigation.     

HDV感染后乙型肝炎患者血清肝炎病毒标志物的变化

目的　分析HDV感染患者血清病毒性肝炎标志物的变化和意义 ,探讨HDV致病机理。方法　对 469例HDV阳性乙型肝炎患者常见各类型病毒性肝炎血清标志物的变化等作统计分析 ,以 2 13例HDV( -)乙型肝炎患者作对照。结果　HDV感染后血清HBeAg检出率降低 (P <0 .0 1)。在HDV ( +)HBVDNA( -)组 ,HBeAg( -)的机会大 (P <0 .0 1)。在急性肝炎、重型肝炎和肝硬化患者HDAg( +)HBeAg( -)为主要血清病毒表现形式 (P <0 .0 1或 0 .0 5 )。HDV感染后合并其它肝炎病毒感染率高于乙型肝炎组。结论　HDV感染可抑制HBV复制或HBeAg表达 ,混合感染HDV的乙型肝炎中HDV的直接细胞毒性作用可能起主要致病作用。重叠感染HDV的乙型肝炎患者其病情重、病死率高和容易慢性化。     

Viral hepatitis update: Progress and perspectives

Viral hepatitis, secondary to infection with hepatitis A, B, C, D, and E viruses, are a major public health problem and an important cause of morbidity and mortality. Despite the huge medical advances achieved in recent years, there are still points of conflict concerning the pathogenesis, immune response, development of new and more effective vaccines, therapies, and treatment. This review focuses on the most important research topics that deal with issues that are currently being solved, those that remain to be solved, and future research directions. For hepatitis A virus we will address epidemiology, molecular surveillance, new susceptible populations as well as environmental and food detections. In the case of hepatitis B virus, we will discuss host factors related to disease, diagnosis, therapy, and vaccine improvement. On hepatitis C virus, we will focus on pathogenesis, immune response, direct action antivirals treatment in the context of solid organ transplantation, issues related to hepatocellular carcinoma development, direct action antivirals resistance due to selection of resistance-associated variants, and vaccination. Regarding hepatitis D virus, we describe diagnostic methodology, pathogenesis, and therapy. Finally, for hepatitis E virus, we will address epidemiology (including new emerging species), diagnosis, clinical aspects, treatment, the development of a vaccine, and environmental surveillance.     

江门市120例静脉吸毒者HBV、HCV和HGV感染状况

目的 了解静脉毒瘾者乙型肝炎病毒(HBV),丙型肝炎病毒(HCV)及庚型肝炎病毒的感染状况。方法 对广东省江门市120例静脉毒瘾者血浆的HBV、HCV和HGV的标记物进行了检测,采用ELISA法检测HBsAg,HBeAg,抗-HBc,抗-HBe,抗-HBs,抗-HCV;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HGV RNA。结果 120例静脉毒瘾者中HBsAg阳性有13例(10.83％),抗-HBs阳性41例(34.71％),单项抗-HBc阳性7例(5.83％),抗-HCV阳性89例(74.17％),HGV RNA阳性28例(23.33％)。13例HBsAg阳性中9例抗-HCV阳性,3例HGV RNA阳性;7例单项抗-HBc阳性中5例抗-HCV阳性,2例HGV RNA阳性;28例HGV RNA阳性中20例抗-HCV阳性;2例HBsAg、抗-HCV、HGV RNA同时阳性。结论 静脉毒瘾者是HCV和HGV的高危感染人群;HBV,HCV和HGV三种病毒的感染之间在静脉毒瘾者中无相关性。     

Hepatitis C virus micro-elimination: Where do we stand?

Hepatitis C virus (HCV) elimination by 2030, using direct-acting antiviral treatments, has been promoted by the World Health Organization. This achievement is not attainable, however, particularly after the 2020 pandemic of the coronavirus disease 2019. Consequently, the more realistic objective of eliminating HCV from population segments for which targeted strategies of prevention and treatment are easily attained has been promoted in Europe, as a valid alternative. The underlying idea is that micro-elimination will ultimately lead to macro-elimination. The micro-elimination strategy may target different specific populations and at-risk groups. Different settings, including prisons and hospitals, have also been identified as micro-elimination scenarios. In addition, dedicated micro-elimination strategies have been designed that are tailored at the geographical level according to HCV epidemiology and individual country’s income. The main elements of a valid and successful micro-elimination project are reliable epidemiological data and active involvement of all the stakeholders. Community involvement represents another essential component for a successful program.     

丙型肝炎病毒C33c抗原及HBxAg在人原发性肝细胞癌中的分布及意义

作者应用免疫组化法对１０２例人原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）组织进行了ＨＣＶ及ＨＢＶ抗原定位研究。ＨＣＶＣ３３ｃ抗原及ＨＢｘＡｇ在ＰＨＣ中的阳性检出率分别是８１．４％及７４．５％，Ｃ３３ｃ抗原和ＨＢｘＡｇ阳性占所检病例９４．１％，二者同时阳性为６１．８％，１０２例ＰＨＣ中５０例有癌旁肝组织，其Ｃ３３ｃ抗原和ＨＢｘＡｇ的阳性检出率分别是６２％和９２％。ＨＣＶＣ３３ｃ抗原定位于肝癌细胞的胞浆内，在胞浆内局灶分布或充满整个胞浆，有的紧靠核膜，胞核未见阳性信号。Ｃ３３ｃ抗原阳性细胞在ＰＨＣ中呈散在、局灶分布为主，在癌旁肝组织呈弥漫分布为主。     

Global epidemiology of hepatitis C virus infection: an up-date of the distribution and circulation of hepatitis C virus genotypes

AIM To review Hepatitis C virus(HCV) prevalence and genotypes distribution worldwide.METHODS We conducted a systematic study which represents one of the most comprehensive effort to quantify global HCV epidemiology,using the best available published data between 2000 and 2015 from 138 countries(about 90% of the global population),grouped in 20 geographical areas(with the exclusion of Oceania),as defined by the Global Burden of Diseases project(GBD). Countries for which we were unable to obtain HCV genotype prevalence data were excluded from calculations of regional proportions,although their populations were included in the total population size of each region when generating regional genotype prevalence estimates.RESULTS Total global HCV prevalence is estimated at 2.5%(177.5 million of HCV infected adults),ranging from 2.9% in Africa and 1.3% in Americas,with a global viraemic rate of 67%(118.9 million of HCV RNA positive cases),varying from 64.4% in Asia to 74.8% in Australasia. HCV genotype 1 is the most prevalent worldwide(49.1%),followed by genotype 3(17.9%),4(16.8%) and 2(11.0%). Genotypes 5 and 6 are responsible for the remaining 5%. While genotypes 1 and 3 are common worldwide,the largest proportion of genotypes 4 and 5 is in lower-income countries. Although HCV genotypes 1 and 3 infections are the most prevalent globally(67.0% if considered together),other genotypes are found more commonly in lowerincome countries where still account for a significant proportion of HCV cases.CONCLUSION A more precise knowledge of HCV genotype distribution will be helpful to best inform national healthcare models to improve access to new treatments.     

合并乙型肝炎病毒感染对丙型肝炎病毒核心抗原检测的影响

目的 探讨合并HBV感染对慢性HCV感染者血清丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)检出情况的影响. 方法 收集2005年12月-2009年10月慢性丙型肝炎患者和HBV/HCV合并感染者资料,检测血清HCVcAg和HCV RNA,对后者血清进行HBV DNA、HBeAg检测,分析HCVcAg检出率与HBeAg、HBV DNA定量检测的关系.用独立两组多分类的X2检验方法进行统计学分析. 结果 共收集88例慢性丙型肝炎患者和62例HBV/HCV合并感染者资料,血清HCVcAg的检出率分别为72.7％(64/88)和38.7％ (24/62),两者比较,x2= 17.358,P＜0.01,差异有统计学意义.HCV RNA检出率分别为81.8％ (72/88)和53.2％ (33/62),两者比较,x2=20.110,P＜0.01,差异有统计学意义.62例HBV/HCV合并感染者血清中,HBeAg阳性和HBeAg阴性感染者HCVcAg检出率分别为28.6％ (12/42)和60.0％ (12/20),两者比较,x2=5.641,P=0.011,差异有统计学意义.HCV RNA阳性率分别为42.9％ (18/42)和80.0％ (16/20),两者比较,X2=7.547,P＜ 0.01,差异有统计学意义.HBV DNA阳性和阴性时HCVcAg检出率分别为39.1％ (18/46)和37.5％ (6/16),两者比较,P＞0.05,差异无统计学意义.与单纯HCV感染者血清HCVcAg检出率72.7％ (64/88)比较,HBeAg阴性合并感染者为60.0％ (12/20),x2=1.266,P=0.261,差异无统计学意义;HBV DNA阴性合并感染者为37.5％ (6/16),x2=7.635,P＜0.01,差异有统计学意义.结论 HBV/HCV合并感染时HCVcAg检出率较低,可能是由于HBeAg抑制HCV的复制,从而减少HCVcAg的表达所致.