基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测华法林代谢酶基因多态性

目的用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术建立检测人群中华法林代谢酶基因多态性的方法。方法选取2011年1月至2013年1月北京安贞医院心脏外科心脏机械瓣膜置换术后接受华法林抗凝治疗的患者10例,采集外周血,提取全血基因组DNA,用MALDI-TOF-MS技术检测10例患者华法林代谢酶基因CYP2C9*2(rs1799853)、CYP2C9*3(rs1057910)、CYP2C9*6(rs9332131)、VKORC1 CT(rs9923231)(-1639GA)、GGCX GC(rs11676382)的单核苷酸多态性(SNP)位点,并用Sanger测序法进行验证。结果用MALDI-TOF-MS技术可以同时完成10份标本3个华法林代谢酶基因5个SNP位点的检测。10名服华法林的心脏机械瓣膜置换术患者中,发现VKORC1-1639GA AG型2例,AA型8例,A等位基因频率为90%。未发现CYP2C9*2(rs1799853)、CYP2C9*3(rs1057910)、CYP2C9*6(rs9332131)和GGCX GC(rs11676382)突变。经与Sanger测序法比较,符合率为100%。结论成功建立MALDI-TOF-MS技术检测华法林代谢酶基因多态性的平台,该法具有高通量、快速、准确的特点,在个性化医疗上有较大的推广应用价值。     

单核苷酸多态性与华法林初始抗凝疗效和维持剂量的研究

目的：筛选华法林初始抗凝治疗疗效和华法林维持剂量存在显著影响的基因因素。方法初始抗凝疗效组：选取进行心脏瓣膜置换的汉族患者212例,以术后4 d为观测期限,根据设立初始抗凝疗效的观测指标△INR4-1[即观测期结束时的国际标准化比值（ INR）与初始INR的差值],筛选出对于该指标存在显著影响的基因因素。同时观查上述因素与其它终点事件如INR＞3、INR＞4和3 d内是否入窗等是否相关。维持剂量组：选取服用华法林3个月以上的门诊患者266例,需满足相隔7 d以上、在服用相同剂量华法林的情况下,2次INR检测结果均在治疗窗内。筛选显著影响的基因因素。结果在初始抗凝疗效组中, CYP2C9（ rs1057910）、VKORC1（rs9923231）和VKORC1（rs2292566）对△INR4-1有明显影响;CYP2C9（rs1057910）和EPHX1（rs2292566）对3 d内INR是否进入治疗范围有明显影响（P＜0．001、P＜0．05）。在维持剂量组中,CYP2C9（rs1057910）和VKORC1（rs9923231）对每日及每周华法林剂量均有明显影响（P ＜0．001）。结论 CYP2C9（rs1057910）、VKORC1（rs9923231）和EPHX1（rs2292566）对于华法林初始抗凝疗效有明显影响。 CYP2C9（rs1057910）、VKORC1（ rs9923231）对华法林维持剂量有明显影响。     

华法林药物遗传学基因CYP2C9和VKORC1单核苷酸多态性在广东汉族人群的分布研究

目的探讨细胞色素P450(cytochrome P450, CYP450)家族中CYP2C9的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNP)位点rs1057910和rs1799853以及维生素K环氧化物还原酶复合物亚基1(vitamin K epoxide reductase complex subunit 1, VKORC1)的rs9923231 SNP位点在广东汉族的分布,为华法林(warfarin)个体化用药(personalized medicine)提供循证医学依据.方法利用Sequenom MassArray? iPLEX GOLD系统对215例广东地区人群的rs1057910,rs1799853和rs9923231三个位点进行基因分型,并分析各基因型分布频率.结果 rs1799853和rs9923231在广东汉族中无多态性分布,分别只有CC基因型和CT基因型.rs1057910在广东汉族中有两种基因型AA和AC,分布频率分别为0.921和0.079;等位基因A的频率为0.9605,C的频率为0.0395.结论在本研究中由于rs1799853和rs9923231在广东汉族中无多态性分布,基于本研究数据建议广东汉族华法林药物的检测位点应以rs1057910为主.     

老年患者CYP4F2（rs2108622）基因多态性对华法林剂量的影响

目的：观察 CYP4F2（rs2108622）基因多态性对房颤老年患者（65～75岁）口服华法林剂量的影响。方法选择60例老年房颤患者,服用华法林后国际标准化比值（INR）维持在1．6～2．5之间3个月后,用 PCR 检测 CYP4F2（rs2108622）基因序列。结果具有 CYP4F2（rs2108622）C/C 等位基因的患者服用华法林的剂量明显低于具有 C/T 和 T/T 变异体等位基因的患者（P ＜0．05）。结论CYP4F2（rs2108622）基因的多态性影响老年患者口服华法林的剂量。     

非瓣膜病心房颤动患者VKORC1及CYP2C9基因多态性与华法林临床应用的关系的探究

探究非瓣膜病心房颤动患者VKORC1及CYP2C9基因多态性与华法林临床应用的关系。回顾性分析我院2014年5月~2016年5月收治的140例非瓣膜病心房颤动患者的一般资料,测定华法林初始剂量和基础国际标准化比率(INR),抽取静脉血检测CYP2C9与VKORC1基因多态性,通过随访记录华法林初始服用至INR达标时间、华法林平均日用量及总用量。本组CYP2C9和VKORC1等位基因A型、基因型AA型较多;CYP2C9和VKORC1不同基因型患者体质指数及INR的对比无统计学差异(P0.05);CYP2C9AA型INR达标时间长,华法林总用量较高,与AC型和CC型比较具有显著差异(P0.05);VKORC1 AA型INR达标时间短,华法林总用量较低,与AG型和GG型比较具有显著差异(P0.05)。非瓣膜病心房颤动患者初次服用华法林进行抗凝治疗,VKORC1基因AA型和CYP2C9基因AC/CC患者INR达标时间短,华法林总用量较少。非瓣膜性房颤患者华法林口服剂量个体差异较大,用药前应进行基因多态性检测,以此为临床用药进行指导。     

中国汉族人群CYP2C9和VKORC1基因多态性对华法林用药的影响

目的 探讨中国汉族人群细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因以及维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因多态性对华法林用药的影响。方法 首先抽取无抗凝障碍的汉族人群受试者200例利用基因测序法进行CYP2C9 和VKORC1基因分型(正常对照组)。并收集临床使用华法林稳定维持剂量的汉族人群患者114例(服用华法林药物组),记录患者年龄、性别、身高、体质量以及体表面积等,检测基因型并结合体征差异及临床稳定剂量进行分析。结果 正常对照组的CYP2C9基因型检测有CYP2C9*1/*1型186例(93%),未发现CYP2C9*1/*2型,CYP2C9*1/*3型14例(7%); VKORC1-1639A/G基因型:AA型179例(89.5%),GA型21例(10.5%),未发现GG型(0.0%); 服用华法林药物组的CYP2C9*1/*1型104例(91.2%),CYP2C9*1/*3型10例(8.8%),CYP2C9*1/*1型患者华法林平均维持剂量高于CYP2C9*1/*3型患者[(2.13±0.83)mg/dvs(1.61±1.17)mg/d,P＜0.05]。VKORC1(-1639G＞A)基因型检测有102例患者为突变纯合子AA型(89.5%),12例患者为杂合子GA型(10.5%),未发现纯合子GG型患者,GA型患者华法林平均维持剂量明显高于AA型[(3.34±1.07)mg/d vs(1.63±0.45)mg/d,P＜0.01]。正常人群组与服用华法林药物组基因型在CYP2C9*3(1075C/A)(P=0.926)和VKORCl -1639A/G突变上的差异无统计学意义(P=0.812)。结论 中国汉族人群存在CYP2C9*3 A/C 和VKORC1-1639G/A 的基因多态性,且不同基因型患者间华法林用量存在差异。     

新疆汉族GGCX基因rs11676382位点多态性与心房颤动的相关性研究

目的研究汉族GGCX基因rs11676382位点多态性与心房颤动(AF)的相关性。方法以200例汉族未服用华法林的心房颤动患者作为研究组,200例健康汉族患者作为对照组,所有患者均采集外周血提取基因组DNA,采用聚合酶链反应,限制性片段长度多态性技术(PCRRFLP)检查患者GGCX基因rs11676382多态性的基因型和等位基因频率分布,观察GGCX基因rs11676382多态性与心房颤动的关系。结果GGCX基因rs11676382位点在入选人群中的基因型及等位基因分别为CC、CG和GG型,其基因型频率在心房颤动组和对照组分别依次为82.5%、16.5%、1.0%和85.0%、0.5%、14.5%,分布趋势相同,差异无统计学意义(P0.05);C和G等位基因频率在心房颤动组和对照组分别为99.0%,1.0%和99.5%,0.5%,C和G等位基因频率在两组间的差异无统计学意义(P0.05)。结论 GGCX基因rs11676382多态性与未服用华法林的心房颤动无相关性。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测药物代谢酶基因多态性平台的建立

目的 建立基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测患者体内药物代谢酶基因多态性的平台。方法 选取2013年10月～2014年6月在北京协和医院门诊就诊患者53例EDTA抗凝外周血,提取全血基因组DNA,用MALDI-TOF-MS技术检测53例患者药物代谢酶基因CYP2C9*2(rs1799853),CYP2C9*3(rs1057910),CYP2C19*2(rs4244285),CYP2C19*3(rs4986893),CYP2C19*4(rs28399504),CYP2C19*5(rs56337013)和CYP2C19*17(rs12248560)的单核苷酸多态性(SNP)位点,并用Sanger测序法进行验证。结果 用 MALDI-TOF-MS 技术可以同时完成53份样本,2个药物代谢酶基因,7个SNP位点的检测。53例患者中,发现CYP2C19*2(rs4244285)AG型25例,AA型6例,GG型22例,A等位基因频率为34.9%。CYP2C19*3(rs4986893)AG型4例,GG型49例,A等位基因频率为3.8%。CYP2C9*3(rs1057910)CA型5例,AA型48例,C等位基因频率为4.7%。未发现 CYP2C9*2(rs1799853),CYP2C19*4(rs28399504),CYP2C19*5(rs56337013)和CYP2C19*17(rs12248560)位点突变。经与Sanger测序法比较,两种检测方法结果的符合率为100%。结论 成功建立MALDI-TOF-MS技术检测药物代谢酶基因多态性的平台,该平台具有高通量、准确的特点,对个性化用药治疗具有重要的临床应用价值。     

云南汉族人群VKORC1￣1639A/G基因多态性与华法林抗凝治疗剂量的相关性研究

目的研究云南汉族人群维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1)-1639A/G基因多态性的分布及与其他民族间的差异,为临床应用华法林初始剂量及维持剂量提供分子遗传学依据,以提高病人应用华法林的依从性。方法采集300例心脏机械瓣膜置换术后服用华法林,INR值在1.5~3.0患者的外周血液,通过聚合酶链式反应(英简PCR)结合限制性片段长度多态性(英简RFLP)分析技术,评价VKORC1-1639 A/G基因的基因型。结果所有样本中,AA型为204例(占68%)、AG型为87例(占29%)、GG型为9例(占3%),等位基因A占82.5%,等位基因G占17.5%。所需华法林维持剂量GG型(4.83±1.15 mg/d)AG型(3.57±1.62mg/d)AA型(2.72±1.35)mg/d。此外,云南汉族人群VKORC1-1639A/G基因多态性分布在性别和年龄上无差异,但与高加索等欧美人群相比存在较大的差异,与VKORC1 1173 C/T及VKORC1 3730 A/G存在高度连锁不平衡。结论 VKORC1基因多态性是一项对华法林个体间用量之间的差异有所影响的重要遗传因素,其还能够对患者VKORC1-1639位点给予准确基因分型,可指导华法林个体化用药的治疗。     

中国汉族人群CYP2C9及VKORC1基因多态性及其对华法林用药剂量的相关性研究

目的分析中国汉族人群CYP2C9和VKORC1的基因多态性及其与华法林稳定维持剂量的相关性。方法回顾性研究。收集2017年10月至2018年4月在北京大学人民医院进行凝血分析检测的458例中国汉族患者,男性213例,女性245例,年龄范围26~94岁。采用PCR-荧光探针法检测CYP2C9*3位点和VKORC1-1639A>G位点基因多态性,458例患者中服用华法林进行抗凝治疗且凝血酶原时间国际标准化比值(INR)达标(在2.0~3.0范围内)的患者130例,记录患者基本信息、华法林用药剂量及凝血酶原时间国际标准化比值(INR),应用SPSS统计分析数据,与美国FDA推荐的不同基因型患者华法林推荐剂量的参考表格进行对比,并且对华法林预测剂量公式进行简单验证。结果458例抗凝患者中CYP2C9*1/*1(AA)基因型频率90.8%,CYP2C9*1/*3(AC)基因型频率8.5%,CYP2C9*3/*3(CC)基因型频率0.7%;VKORC1-1639GG基因型频率0.9%,VKORC1-1639AG基因型频率14.2%;VKORC1-1639AA基因型频率84.9%。在达到抗凝指标(国际标准化比值INR 2.0~3.0)后,结果显示CYP2C9*1/*3与*3/*3基因型患者平均每日剂量为(2.92±1.29);3(2.75,3.375)mg,低于野生型CYP2C9*1/*1基因型患者所需的平均每日华法林剂量(3.91±1.63);3(3,5)mg,差异有统计学意义(P=0.018)。VKORC1纯合突变基因型VKORC1-AA患者平均每日剂量为(3.68±1.64);3(3,4.31)mg,低于杂合基因突变型的平均每日剂量(4.54±1.29);4.5(3.28,6)mg,差异有统计学意义(P=0.001)。不同VKORC1+CYP2C9基因型患者的华法林应用剂量与美国FDA参考表格的推荐剂量具有一致性。Miao2007公式的预测准确度较IWPC公式低,且94.1%的患者华法林剂量被低估。结论携带CYP2C9*3突变基因或VKORC1-AA纯合突变基因型的患者所需华法林剂量较低,CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法林稳定维持剂量具有一定的相关性。     

Influence of genetics and non-genetic factors on acenocoumarol maintenance dose requirement in Moroccan patients

What is known and Objective: Coumarin derivatives such as acenocoumarol represent the therapy of choice for the long‐term treatment and prevention of thromboembolic diseases. Many genetic, clinical and demographic factors have been shown to influence the anticoagulant dosage. Our aim was to investigate the contribution of genetic and non‐genetic factors to variability in response to acenocoumarol in Moroccan patients. Methods: Our study included 114 adult Moroccan patients, receiving long‐term acenocoumarol therapy for various indications. Tests for VKORC1 ‐1639G>A promoter polymorphism (rs9923231), CYP2C9*2 rs1799853, CYP2C9*3 rs1057910, and CYP4F2 rs2108622 alleles were undertaken using Taq Man^® Pre‐Developed Assay Reagents for allelic discrimination. The statistical analysis was performed using the SAS V9 statistical package. Results and Discussion: Genotyping showed that the allele frequencies for the SNPs studied were no different to those found in Caucasians population. A significant association was observed between the weekly maintenance dose and the VKORC1 (P = 0·0027) and CYP2C9 variant genotypes (P = 0·0082). A final multivariate regression model that included the target International Normalized Ratio, VKORC1 and CYP2C9 genotypes explained 36·2% of the overall interindividual variability in acenocoumarol dose requirement. What is new and Conclusion: Our study shows large interindividual variability in acenocoumarol maintenance dose requirement in our population. VKORC1 and CYP2C9 variants significantly affected acenocoumarol dose, in‐line with results in other populations. For the Moroccan population, the SNPs that have the largest effect on acecoumarol dose are CYP2C9 rs1799853, CYP2C9 rs1057910 and VKORC1 rs9923231.     

Pharmacogenetics of acenocoumarol in patients with extreme dose requirements

Summary. Background: There is currently intense debate as to whether pharmacogenetic algorithms for estimating the initial dose of coumarins provide a more accurate dose than the fixed‐dose approach. Recently, it has been suggested that the greatest benefit of pharmacogenetic algorithms is observed in patients with extreme dose requirements. Objectives: To identify clinical and genetic factors that better characterize patients who need extreme acenocoumarol doses for steady anticoagulation state. Patients/methods: We reviewed 9538 patients with a steady acenocoumarol dose from three Spanish hospitals, selecting 83 who took ≤ 5.00 mg week^?1 (percentile 5, p5) and 203 taking ≥ 30.00 mg week^?1 (p95). We also selected patients matched by gender and age taking 13.50–14.00 mg week^?1 (p50). We genotyped VKORC1 (rs9923231), CALU (rs1043550), GGCX (rs699664), CYP2C9 (rs1799853; rs1057910), CYP4F2 (rs2108622) and F7 (rs5742910) single‐nucleotide polymorphisms (SNPs). Results: Comparison between p5 and p95 revealed five parameters with significant differences: body surface area (BSA) (P = 0.006), age, VKORC1, CYP2C9 and CYP4F2 genotypes (all P < 0.001). First VKORC1, and second, CYP2C9 SNPs played a strong effect by determining extreme doses, particularly in p95. Only one out of 203 p95 had the VKORC1 A‐1639A genotype, but this subject was CYP2C9*1/*1. In contrast, nine out of 83 p5 carried the VKORC1 G‐1639G genotype, although six of them were CYP2C9*3 homozygotes and another two were heterozygotes. Surprisingly, CYP4F2 V433M SNP displayed prevalences that suggest that its influence might only be evident when patients are treated with high doses. Conclusion: Two clinical data, age and BSA, and three SNPs in the VKORC1, CYP2C9 and CYP4F2 genes strongly predict outlier patients treated with acenocoumarol.     

The association of CYP2C9 gene polymorphisms with colorectal carcinoma in Han Chinese

BACKGROUND: Cytochrome P450 (CYP) 2C9 is an important enzyme involved in xenobiotics metabolism. This study investigated the association of CYP2C9 gene coding region polymorphisms with colorectal cancer (CRC) in Chinese Han population. METHODS: Four hundred and eighty-three healthy controls and 286 sporadic CRC patients participated in this study. Direct sequencing was used to identify the sequence polymorphisms. RESULTS: We detected the significant association of 2 coding region SNPs, rs1057910 and rs1057911, of CYP2C9 with the risk of developing sporadic CRC for Han Chinese. These 2 SNPs showed a strong linkage disequilibrium (LD) (r(2)=0.97, D'=0.985). Significantly different minor allele frequencies were found for SNPs rs1057910 and rs1057911 between the cases (7% and 7.2%, respectively) and controls (3% and 2.9%, respectively) with adjusted P=0.0004 and 0.0002, respectively. Individuals heterozygous for rs1057910A/C or rs1057911A/T showed 2.589-fold (95% CI: 1.549-4.330) or 2.770-fold (95% CI 1.653-4.643) increased risk of developing sporadic CRC. We did not detect any homozygote minor allele carrier for either rs1057910 or rs1057911 in our study population. The CRC association appeared to be more evident for individuals over age 50 y, for men, and for rectum cancer site. CONCLUSION: There is an association of CYP2C9 coding region polymorphisms with the risk of developing CRC in Han Chinese after genotyping cases and controls recruited from different locations in China.     

荧光PCR-熔解曲线法检测新疆回族人群CYP2C9和VKORC1基因多态性研究

目的应用荧光PCR-熔解曲线法检测新疆回族人群细胞色素P450酶2C9(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1)基因多态性,研究新疆回族人群CYP2C9和VKORC1基因分布及基因突变频率情况,并评价荧光PCR-熔解曲线法临床使用的适用性。方法采用荧光PCR-熔解曲线法和测序法对比检测CYP2C9*2、CYP2C9*3和VKORC1(-1639G/A)的基因多态性。结果 228例新疆回族人群中,共检测出CYP2C9*1/*1标本199例,CYP2C9*1/*2标本2例,CYP2C9*1/*3标本26例,CYP2C9*3/*3标本1例,未检测出CYP2C9*2/*2和CYP2C9*2/*3标本。VKORC1(-1639G/A)检测出2种等位基因G和A,其中VKORC1-1639G/G型标本检出2例,VKORC1-1639G/A型标本检出39例,VKORC1-1639A/A型标本检出187例,与测序法对比检测比较,荧光PCR-熔解曲线法与测序法检测结果完全一致。结论新疆回族人群同样具有CYP2C9基因*2、*3位点和VKORC1基因-1639位点的多态性,其发生频率与新疆维吾尔族及其他地域人群的具有一定差异,所采用的荧光PCR-熔解曲线法用于基因多态性检测可满足临床检测要求。     

CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法林剂量关系的研究

目的研究江苏徐州地区汉族人细胞色素P450(CYP)2C9和维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因型与华法林剂量的关系,为华法林个体化给药方案提供建议。方法采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)技术检测100名汉族健康受试者及200例临床使用华法林的患者CYP2C9和VKORC1基因型。结果健康受试者CYP2C9基因型中91例为*1/*1型,9例为*1/*3型;VKORC1基因型中17例为GA型,83例为AA型。200例临床使用华法林的患者CYP2C9基因型检测有179例为*1/*1型,21例为*1/*3型,未发现*2突变;VKORC1(1639GA)基因型中168例为突变纯合子AA型,32例为杂合子GA型,未发现GG型;VKORC1(1639GA)基因AA型患者的华法林维持剂量为(2.59±0.83)mg/d,明显低于GA型[(4.51±0.79)mg/d];CYP2C9基因*1/1*型华法林维持剂量为(3.01±1.12)mg/d,明显高于*1/*3型[(2.19±0.32)mg/d,P0.05]。结论 CYP2C9和VKORC1基因型的多变量个体化给药方案对临床提高华法林使用的安全性有潜在的意义。