SnoN蛋白在全脑缺血大鼠海马组织中的表达及意义

目的 通过观察全脑缺血大鼠海马组织中转录共轭因子SnoN表达水平的变化,探讨其在脑缺血中的作用.方法 30只雄性SD大鼠随机分成手术组和假手术组,假手术组、手术1、3 d组各10只.手术组采用Pulsinelli四血管结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,假手术组仅暴露第一椎间孔及颈动脉.免疫组织化学法检测海马组织神经元及SnoN的表达;Western blot检测SnoN及TGF-β蛋白水平的变化.结果全脑缺血再灌注后1、3 d海马CA1区部分神经元缺失,与假手术组相比,手术组术后1、3 d海马区SnoN、TGF-β表达量明显升高(P＜0.05).结论 大鼠全脑缺血后海马组织SnoN表达增高,可能通过激活TGF-β通路参与神经元缺血性凋亡过程.     

Effects of extinction training on conditioned fear behaviour and synaptic structure in hippocampal CA1 area in fear conditioned rats

目的 研究消退训练对大鼠条件性恐惧行为和海马CA1区突触超微结构的影响.方法 成年雄性SD大鼠40只,简单随机抽样分为正常组(n=8)、消退对照组(n=16)和消退组(n=16).在训练后不同时间(消退后7、21 d,恐惧建立后8、22 d)进行恐惧行为测试.采用透射电镜观察各组大鼠海马CA1区突触超微结构.结果 ①在消退后7d和21 d,消退组的消退保持成绩显著高于消退对照组(P＜0.05,P＜0.01),而与正常组无显著差异(P＞0.05).②消退训练后7d,消退组海马突触数密度显著高于消退对照组(P＜0.05),与正常组之间无显著差异(P＞0.05);消退训练后21 d,3组之间均无显著差异(P＞0.05).③消退训练后7d和21 d,消退组海马突触间隙宽度显著低于正常组(P＜0.05,P＜0.01),并且在消退训练后21 d,消退组突触间隙宽度显著低于消退对照组(P＜0.05).④与正常组相比,消退训练后7d和21 d,消退组PSD厚度均显著升高(P＜0.01);且在消退训练后21 d,消退组PSD厚度显著高于消退对照组(P＜0.05).⑤各组之间活性区长度均无显著差异(P＞0.05).结论 恐惧建立后24h进行消退训练能够部分改变条件性恐惧引起的海马CA1区突触超微结构的变化,减轻条件性恐惧大鼠的僵立行为.     

跑台训练对脑梗死大鼠海马5-HT、5-HT1A受体及突触素的影响

目的：探讨脑梗死后跑台训练对神经功能评分及大鼠缺血侧海马５-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）含量、5-HT1A受体及突触素表达的影响。方法：采用SD大鼠60只,随机分为模型组、运动训练组及假手术组,每组各20只。采用大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）方法造成局灶性脑梗死模型。训练组于造模后第3天进行16 d的跑台训练。运用改良神经功能缺损程度评分（modified neurological severity scores,mNSS）对模型组及运动训练组进行神经功能评分。采用HE染色及尼氏染色观察各组海马CA2区神经细胞形态。高效液相色谱-电化学法检测海马组织5-HT含量。运用Western blot检测各组海马5-HT1A受体及突触素的蛋白水平,逆转录PCR方法检测5-HT1A受体mRNA水平变化。结果：MCAO术后19 d,运动训练组mNSS评分较模型组明显改善（P＜0.001）。HE染色及尼氏染色显示假手术组中海马CA2区细胞形态完整;模型组细胞形态不规则,细胞受损明显;运动训练组细胞受损减轻。运动锻炼组5-HT含量（14.5±1.71） ng/ml较模型组（7.13±0.71） ng/ml有明显增高（P<0.001）。运动训练组5-HT1A受体蛋白及mRNA表达水平较模型组明显增加（P＜0.05）,突触素蛋白表达在运动训练组也较模型组明显增加（P＜0.05）。结论：跑台训练可改善局灶性脑梗死大鼠神经功能评分,增加海马组织5-HT含量及5-HT1A受体表达,提高突触可塑性。     

跑台训练对脑缺血大鼠脑组织Reelin、PI3KCA及突触素表达的影响

目的：观察脑缺血大鼠跑台运动训练后神经功能恢复情况及磷脂酰肌醇-3-激酶α亚单位（phosphatidylinositol-4,５-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform,PI3KCA）、Reelin及突触素表达的变化。方法：选取健康雄性SD大鼠54只,随机分为假手术组、缺血对照组及运动训练组。采用线栓法大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）方法造成局灶性脑缺血模型。运动训练组于造模后第3天进行16 d的跑台训练（15 m/min,每日30 min）。运用改良神经功能缺损评分（modified neurological severity scores,mNSS）对3组动物进行神经功能评分。采用HE染色观察各组海马神经细胞形态;运用免疫组化方法检测各组Reelin及PI3KCA阳性细胞数;Western blot检测各组缺血皮质Reelin及突触素蛋白水平。结果：MCAO术后19 d,运动训练组mNSS评分较缺血对照组明显降低（P<0.05）。HE染色显示,假手术组海马神经细胞结构完整;缺血对照组海马神经细胞出现异常变化,细胞体积缩小,核不规则,细胞排列散乱,大量变性;运动训练组海马神经细胞结构基本正常,细胞排列尚整齐。免疫组化显示,运动训练组大鼠缺血侧脑组织Reelin及PI3KCA阳性细胞数均高于缺血对照组,差异有统计学意义（18.27±4.03 vs. 7.53±2.03,P＜0.01;10.27±1.62 vs. 5.40±1.84,P＜0.01）。Western blot检测运动训练组Reelin及突触素蛋白表达明显高于缺血组和假手术组,差异有统计学意义（P<0.05）;而缺血组较假手术组Reelin及突触素蛋白的表达水平虽增加,但差异无统计学意义（P >0.05）。结论：跑台运动训练可改善局灶性脑缺血大鼠神经功能评分,上调脑组织Reelin、PI3KCA及突触素的表达,促进脑缺血后的神经功能恢复。     

颞叶癫痫大鼠认知功能与海马区NR2B表达的关系

目的〓〖HTK〗研究颞叶癫痫大鼠在Morris水迷宫(MWM)中学习、记忆能力与大鼠海马区N-甲基-D-天门冬氨酸受体2亚基B（NR2B）表达变化的关系，探讨颞叶癫痫学习、记忆等认知功能障碍的可能机制。〖HTW〗方法〓〖HTK〗随机将60只Wistar大鼠分为癫痫组（48只）和对照组（12只）。癫痫组采用海人酸（K A）右侧海马立体定向注射制作颞叶癫痫大鼠模型，又分为：癫痫迷宫训练组（A组），癫痫迷宫未训练组（B组）；对照组即NS迷宫训练组（C组），注射生理盐水。通过MWM测验观察A、C组大鼠在7、14、28、42d时各亚组的学习、记忆能力。采用免疫组化法检测大鼠在7、14、28、42d时各亚组海马CA1、CA3区NR2B的表达。〖HTW〗结果〓〖HTK〗与C组相比，在28、42d时A组学习、记忆功能明显下降，相应海马CA1、CA3区NR2B表达均明显降低(P＜0.05，P＜0.01) ，B组在28、42d时海马CA1、CA3区NR2B表达均明显降低(P＜0.01)；与B组相比，A、C组在28、42d时海马CA1、CA3区NR2B表达均增高(P＜0.05，P＜0.01)。与A7、A14d亚组相比，A28、A42d亚组学习、记忆功能逐渐下降(P＜0.05，P＜0.01)，NR2B的表达逐渐降低(P＜0.05，P＜0.01) ，且A组28d与A组42d亚组相比差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。B组各亚组NR2B表达与A组一致。〖HTW〗结论〓〖HTK〗颞叶癫痫长期反复发作时海马区NR2B表达减少，可能是导致颞叶癫痫学习、记忆等认知功能障碍的机制之一。     

慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损及海马神经元突触素和突触后致密物95表达的变化

目的　了解慢性捆绑应激对大鼠学习记忆能力的影响及可能的神经解剖学机制。方法　将大鼠分为应激组和正常对照组 ,应激组大鼠每天捆绑 6h共 2 1d ,然后用Y迷宫对 2组大鼠进行行为检测 ,运用免疫组织化学方法 ,观察 2组大鼠海马突触素和突触后致密物 95 (PSD 95 )的表达 ,并用计算机图像分析仪对免疫反应结果进行处理。结果　应激组大鼠学习记忆能力明显受损 (P <0 0 5 ) ;其海马CA3 区突触素和PSD 95免疫阳性产物较对照组明显减少 (P <0 0 1)。结论　慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损可能与其海马神经元突触素和PSD 95的表达减少有关。     

X线照射大脑对幼鼠学习记忆能力的影响

目的：探讨多次临床剂量头颅X线检查对生长发育期大鼠学习记忆能力的影响。方法：取出生后21 d的SD大鼠54只,随机分为照射组（3 d照射组及7 d照射组）和对照组,每组18只。照射组大鼠于35 d龄时每天接受1次临床头颅CT检查剂量［以临床中婴幼儿（0～6岁）所采用剂量为基准,1次扫描剂量为285 mGy］的X线照射,其中3 d照射组连续照射3 d,7 d照射组连续照射7 d;对照组不作X线照射。待大鼠60 d龄时进行Morris水迷宫试验检测其学习记忆能力;之后处死大鼠,免疫荧光染色观察大鼠海马CA1区N-甲基-D-天冬氨酸2B亚基（NR2B）的表达,Fluoro-Jade B（FJB）染色观察神经元退变情况,蛋白质印迹法检测海马总NR2B、突触后膜致密物-95 （PSD-95）蛋白的表达,并通过电镜观察海马CA1区的超微结构。结果：与对照组比较,7 d照射组第1～4天逃避潜伏期均延长（P<0.01）,原站台象限停留时间均缩短、穿越原站台次数均减少（P＜0.01）。7 d照射组海马CA1区退变神经元显著多于对照组（P＜0.01）。7 d照射组海马CA1区NR2B表达增强,海马总NR2B、PSD 95表达明显高于对照组（P＜0.05）。7 d照射组部分突触结构受损。3 d照射组与对照组比较,在Morris水迷宫试验各指标及海马CA1区退变神经元、NR2B表达和海马总NR2B、PSD-95表达方面差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论：头颅X线检查对学习记忆能力损伤属于确定性效应,该损伤与海马区的NR2B、PSD-95过表达导致兴奋性氨基酸毒性作用有关。     

丰富环境对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马突触超微结构及突触素表达的影响

目的探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马CA1区神经元突触超微结构和突触素(p38)表达的影响.方法按Rcie法制作HIBD新生动物模型,共计20只,随机分为干预组和非干预组.同时设假手术对照组10只.干预组大鼠于术后第2天开始给予丰富环境刺激,持续20 d.干预结束后用透射电镜观察各组海马CA1区锥体神经元超微结构,免疫组化和图像分析技术检测p38的表达.结果与对照组比较,非干预组海马CA1区锥体细胞见部分核膜消失、线粒体嵴模糊、神经元突触数量减少,突触间隙增宽,突触囊泡减少,突触后致密物变薄;干预组神经元和突触无明显异常.非干预组海马CA1区突出素光密度值明显低于干预组和对照组(P<0.01),而干预组和对照组之间无显著差异(P>0.05).结论阻止或减轻HI后突触超微结构的损伤、促进突触的重建可能是丰富环境发挥作用的物质基础.     

pERK1／2在大鼠脑内的分布及Y迷宫训练后的时程变化

目的明确pERK1/2在大鼠脑内的分布及Y迷宫训练后的时程变化。方法55只健康成年SD大鼠,分为正常对照组,Y迷宫训练组,假训练组,其中训练组与假训练组再各分为训练后0h、1h、3h、6h、24h亚组,每组动物各5只。训练组动物接受Y-迷宫光电结合训练,假训练组动物接受光电不结合假训练,应用免疫组织化学方法检测各组大鼠脑内各区pERK1/2阳性神经元分布及表达的变化。结果正常对照组pERK1/2免疫阳性神经元分布较少,但在双侧视上核、室旁核表达很丰富,其次在小脑分子层和浦肯野细胞层、杏仁核、纹状皮层表达较多,海马部位偶见2~5个阳性神经元,有较多阳性纤维着色,在纹状体整个区域无阳性神经元表达。在训练后0h纹状体尾壳核和边缘区[(31.2±4.8)个]出现表达,在海马CA2、CA3区出现较多阳性神经元胞体[(44.2±4.2)个],皮层大部、杏仁核的表达也有明显增强,而训练后1h、3h、6h上述各区仍有持续增强,训练后24h表达降至正常,纹状体边缘区阳性神经元消失,海马部位仅有个别阳性神经元[(3.8±3.3)个],P值均小于0.01。假训练组各时间点在海马、纹状体尾壳核、边缘区等部位均无或仅有个别阳性细胞或阳性纤维,与训练组相比差异显著。结论正常状态下pERK1/2在全脑分布较为局限,且表达强度较低。Y迷宫学习可诱导海马、尾壳核、纹状体边缘区等区域的pERK1/2的表达,而且pERK1/2参与了Y迷宫的习得、短期记忆的形成、短期记忆向长期记忆的转换和长期记忆的形成等学习记忆的各个阶段。     

脑力康对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马神经元保护作用的实验研究

采用改良Pulsinelli 4条血管阻断全脑缺血方法,建立血管性痴呆(VD)大鼠动物模型,用Y型迷宫法定量测定其学习记忆能力,计量病理光学显微镜观测其双侧海马CA 1区神经元数目.结果表明,治疗组大鼠学习记忆成绩明显优于模型对照组(P＜0.01);治疗组双侧海马CA 1区神经元存活数较模型对照组明显增多(P＜0.01).说明脑力康对VD大鼠学习和记忆障碍可能有一定的改善作用,对其海马神经元可能有一定的保护作用.