大蒜素对兔血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的探讨大蒜素(Allicin)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法组织贴块法体外原代培养兔主动脉VSMCs,由Hcy诱导建立细胞增殖模型,将细胞随机分为6组,对照组、Hcy刺激组(Hcy 1 mmol/L)、Allicin大剂量组(Allicin10μg/ml+Hcy 1 mmol/L)、Allicin中剂量组(Allicin 5μg/ml+Hcy 1 mmol/L)、Allicin小剂量组(Allicin 2.5μg/ml+Hcy1 mmol/L)、叶酸组(叶酸5 mmol/L+Hcy 1 mmol/L)。通过MTT比色法检测细胞的增殖活度,免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及RTPCR技术观察对c-myc mRNA表达的影响。结果与对照组相比,Hcy刺激组的增殖活度、PCNA及c-myc mRNA的表达均显著升高(P<0.01);与Hcy刺激组比较,Allicin大、中、小剂量组细胞增殖活度减低,PCNA及c-myc mRNA的表达均下降(P<0.01),并呈现剂量依赖性,且Allicin大、中剂量组的抑制作用优于叶酸组(P<0.01或...     

吡哆胺对血管紧张素Ⅱ诱导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨吡哆胺对血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其作用机制.方法:原代培养自发性高血压大鼠胸主动脉VSMCs,选3～4代处于对数生长期的细胞进行药物干预.以未加任何干预的自发性高血压大鼠VSMCs为对照组,以10-7 mol/L AngⅡ刺激作为AngⅡ组,以不同浓度(0.1 mmol/L、1.0 mmol/L、10.0 mmol/L)吡哆胺预处理作为吡哆胺组.采用四唑盐比色法检测吡哆胺对VSMCs增殖的影响,酶联免疫吸附法检测细胞上清液晚期糖基化终末产物(AGEs)水平,流式细胞仪分析细胞内活性氧簇(ROS)水平,实时荧光半定量PCR检测晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、核因子κB( NFκB)P65、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)氧化酶P47phox的mRNA水平.结果:与对照组相比,Ang Ⅱ组促进细胞增殖(P＜0.01),升高细胞上清液中AGEs浓度(P＜0.01),使细胞内ROS生成增多(P＜0.01),胞内RAGE、NF-κB P65、NADPH氧化酶P47phox mRNA相对量的表达均较对照组显著升高(P＜0.01);1.0mmol/L和10.0 mmol/L吡哆胺预处理可以逆转AngⅡ作用下的细胞增殖(P＜0.01),降低细胞上清液中AGEs 浓度(P＜0.01),减少ROS生成(P＜0.01),使RAGE、NF-κB P65、NADPH氧化酶P47phoxmRNA表达下降(P＜0.01),且吡哆胺10 mmol/L作用比1 mmol/L更显著(P＜0.01).结论:毗哆胺可能通过抑制AGEs的形成、降低胞内ROS水平,减少RAGE、NF-κB P65、NADPH氧化酶P47phox表达,从而有效抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖作用.     

阿齐沙坦对转化生长因子诱导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响

目的探讨阿齐沙坦对转化生长因子-β（TGF-β）诱导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖及迁移的影响。方法采用组织块贴壁培养法进行血管平滑肌细胞的原代培养,取3～5代细胞用于实验。用MTT法测定细胞增殖情况,用Boyden小室测试细胞迁移情况。采用10ng/ml TGF-β刺激VSMCs,并用阿齐沙坦干预,24h后用Western blot和RT-PCR检测VSMCs中MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白和mRNA的表达。结果 TGF-β可促进大鼠VSMCs的增殖及迁移,并增加大鼠VSMCs的MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达。阿齐沙坦则可抑制TGF-β诱导的大鼠VSMCs的增殖和迁移,并降低大鼠VSMCs的MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达。结论阿齐沙坦可能通过下调MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表达来抑制TGF-β诱导的自发性高血压血管平滑肌细胞的增殖及迁移。     

肾素通过非血管紧张素Ⅱ途径促进大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的 探讨肾素通过非血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)途径对大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及其可能的分子机制.方法 采用组织块贴壁法培养原代大鼠主动脉平滑肌细胞,利用β-甘油磷酸钠联合丙酮酸钠制备血管平滑肌细胞钙化模型.细胞随机分为6组:空白对照组(予常规培养基)、钙化组(予钙化培养基)、钙化+ AngⅡ受体阻断剂组(予钙化培养基,再予氯沙坦10-6 mol/L和PD123,31910-5 mol/L分别阻断AngⅡ受体AT1、AT2)、钙化+肾素(10-10、10-9和10-8 mmol/L)组(于钙化培养基中,先加入氯沙坦10-6 mol/L和PD123,319 10-5 mol/L,再分别予10-10、10-9和10-8 mmol/L肾素).用Von Kossa染色鉴定钙化细胞,测定各组细胞中钙含量、碱性磷酸酶(ALP)活性判断钙化程度.用RT-PCR检测成骨细胞标志物核结合因子α1(Cbfα1)和转化生长因子β1 (TGF-β1) mRNA表达,Western blot测定各组细胞Cbfα1蛋白含量.结果 与空白对照组相比,钙化组钙含量、ALP活性显著增加,Cbfα1和TGF-β1 mRNA及Cbfα1蛋白表达明显增加(P＜0.01).与钙化组相比,钙化+AngⅡ受体阻断剂组对钙化的影响无统计学差异.与钙化+ AngⅡ受体阻断剂组相比,钙化+肾素(10-10、10-9和10-8 mmol/L)组呈剂量依赖地促进大鼠血管平滑肌细胞的钙含量、ALP活性,以及Cbfα1和TGF-β1 mRNA及Cbfα1蛋白表达(P＜0.05).结论 肾素可通过非AngⅡ途径作用促进β-甘油磷酸钠诱导的血管平滑肌细胞钙化,其作用可能与TGF-β1、Cbfα1表达上调有关.     

白细胞介素-6对兔血管平滑肌细胞产生C反应蛋白的影响

目的:探讨白细胞介素-6(IL-6)能否诱导体外原代培养的兔血管平滑肌细胞(VSMCs)产生C反应蛋白(CRP)。方法:体外原代培养新西兰兔腹主动脉VSMCs。分别用白细胞介素(IL)-6(10 ng/ml)、IL-1β25 ng/ml或IL-6(10 ng/ml)+IL-1β(25 ng/ml)刺激VSMCs 48 h。对照组用等体积的IL-6的溶剂孵育48 h。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测培养细胞CRP mRNA和蛋白的表达情况。结果:对照组的原代VSMCs未见CRP的产生。VSMCs与IL-6单独孵育48 h后,CRP mRNA的表达量是对照组的(3.50±1.17)倍,能产生少量CRP,与对照组相比有差异。单独应用IL-1β不能诱导VSMCs产生CRP,但是在IL-1β和IL-6的联合刺激下,CRP mRNA表达量是对照组的(5.92±1.30)倍,CRP的合成亦达最大值。结论:IL-6能诱导原代培养的兔VSMCs产生CRP。尽管单独应用IL-1β不能刺激VSMCs产生CRP,但是它却能显著增强IL-6诱导CRP的表达。     

新型KATP开放剂埃他卡林对原代培养人肺动脉平滑肌细胞TGF-β1、PCNA mRNA表达的影响

目的 观察新型ATP敏感性钾(KAPT)开放剂埃他卡林(IPT)对原代培养人肺动脉平滑肌细胞转化生长因子β1(TGF-β1)和增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达的影响.方法 分离3～4级人肺小动脉,按照组织贴块法原代培养人肺动脉平滑肌细胞,用内皮素1(ET-1)诱导细胞增殖,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RQ-RT-PCR)技术检测TGF-β1和PCNA目的 mRNA表达变化.结果 ET-1(10 nmol/L)诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖的同时,TGF-β1、PCNA mRNA 表达均增加;在相同条件下,加入ET-1(10 nmol/L)的同时,分别在培养基中加入IPT 10-7、10-6、10-5 mol/L 作用 24 h 后,IPT呈浓度依赖性地抑制TGF-β1、PCNA mRNA表达;加入ET-1(10 nmol/L)、IPT(10-5 mol/L)前30 min,预先加入特异性KATP拮抗剂格列本(Glibenclimide,GLI)10-7、10-6、10-5 mol/L,GLI呈浓度依赖性地拮抗IPT的抑制作用.结论 IPT通过开放KATP通道,浓度依赖性地抑制原代培养人肺动脉平滑肌细胞TGF-β1、PCNA mRNA表达,抑制人肺动脉平滑肌细胞增殖,有望今后成为治疗缺氧性肺动脉高压(HPH)、肺血管重构的药物.     

吡格列酮对高糖诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞晚期糖基化终末产物受体表达的影响及机制

目的探讨吡格列酮(PIO)对高糖诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)晚期糖基化终末产物受体(RAGE)表达的影响及其作用机制。方法原代培养小鼠主动脉VSMCs分为5组:(1)5. 5 mmol/L葡萄糖(正常浓度葡萄糖组,NG);(2)25 mmol/L葡萄糖(高浓度葡萄糖组,HG);(3)25 mmol/L葡萄糖+10μmol/L PIO(HG+PIO);(4)25 mmol/L葡萄糖+10μmol/L PIO+10μmol/L GW9662 (HG+PIO+GW9662);(5) 25 mmol/L葡萄糖+10μmol/L GW9662 (HG+GW9662)。应用RT-PCR及Western blot检测VSMCs中RAGE及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的表达。结果高糖增加VSMCs中RAGE的mRNA(P=0. 001)和蛋白(P=0. 002)表达;PPAR-γ激动剂PIO可抑制高糖增加VSMCs中RAGE的mRNA(P=0. 014)和蛋白(P=0. 006)表达的作用;加用PPAR-γ抑制剂GW9662后可明显减弱PIO对RAGE的mRNA(P=0. 001)和蛋白(P=0. 004)表达的抑制作用。结论 PIO可通过激活PPAR-γ,抑制高糖诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞RAGE的表达。     

花姜酮通过抗氧化应激抑制人气道平滑肌细胞的增殖

目的 探讨花姜酮对转化生长因子β (transforming growth factor-β,TGF-β)诱导人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMCs)增殖的抑制作用及其机制.方法 用CCK-8的方法检测细胞增殖;用荧光显微镜观察2,7-二氯荧光乙酰乙酸(DCFH-DA)染色后细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS);用流式细胞术检测细胞内ROS水平.结果 TGF-β1(1μg/L)作用72 h后可以明显促进HASMCs的增殖(P＜0.05);花姜酮可以呈浓度依赖性的抑制HASMCs的增殖(P＜0 05),抑制细胞内ROS的水平,以花姜酮组(30 mmol/L)的抑制作用最明显(P＜0.01).结论 花姜酮可以抑制HASMCs的增殖,其机制可能是通过抑制细胞内的ROS产生.     

内质网应激PERK途径在高糖诱导血管平滑肌细胞向成骨样细胞转化中的作用

目的：研究高糖刺激SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）向成骨样细胞转分化中内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）途径的作用。方法原代培养VSMCs,分为正常对照组（5mmol/L D-葡萄糖）,甘露醇组（5mmol/L D-葡萄糖＋25mmol/L甘露醇）,高糖组（30mmol/L D-葡萄糖）,高糖＋PERK-小干扰RNA（siRNA）转染组（30mmol/L D-葡萄糖＋PERK-siRNA转染）,高糖＋RNA干扰阴性对照组（30mmol/L D-葡萄糖＋乱序RNA转染）。分别作用48和72h。逆转录-聚合酶链反应及Western blot分别从信使RNA（mRNA）和蛋白质水平检测不同时间点内质网应激相关分子GRP78、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4的改变,以及成骨样细胞标志性分子核心转录因子（Cbfα-1）、骨钙素以及平滑肌细胞标志性分子α-SMA的改变情况。应用碱性磷酸酶（ALP）活性检测试剂盒检测ALP的活性。结果与正常对照组和甘露醇组比较,在mRNA水平,高糖组和高糖＋RNA干扰阴性对照组PERK和eIF2α表达升高（P＜0.05）,PERK-siRNA转染后其表达水平均降低（P＜0.05）,在蛋白质水平,PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α表达升高（P＜0.05）,PERK-siRNA干预后其表达均降低（P＜0.05）。高糖刺激VSMCs后ALP活性升高（P＜0.05）,PERK-siRNA转染后其表达均降低（P＜0.05）。结论内质网应激PERK途径在高糖诱导VSMCs由收缩表型向成骨样细胞表型转化中发挥作用,抑制PERK途径可以部分阻止这一转化过程。     

低密度脂蛋白诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用机制研究

目的探讨低密度脂蛋白(LDL)对大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化的影响及其作用机制。方法将体外培养的NRK-52E细胞分为4组:正常对照组、洛伐他汀(Lov,1μmol/L)组、LDL(250 mg/L)刺激组、LDL(250mg/L)+Lov(1μmol/L)组。应用倒置显微镜观察细胞形态学改变;RT-PCR检测NRK-52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3和整合素链接酶(ILK)mRNA表达;West-ern blot检测α-SMA、E-cadherin及磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)蛋白表达;ELISA检测上清液TGF-β1。结果加入LDL培养24 h后,NRK-52E细胞由立方形或多角形变为长梭形,α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3和ILK mRNA的表达上调,E-cadherin mRNA的表达下调,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.01);α-SMA和p-Smad2/3蛋白表达量显著高于对照组(P0.01),E-cadherin蛋白表达量显著低于对照组(P0.01);细胞上清液TGF-β1浓度显著高于对照组(P0.01)。LDL+Lov组与LDL组比较,NRK-52E细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、ILK mRNA的表达及α-SMA、p-Smad2/3的蛋白表达均明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白表达明显增强。结论LDL可诱导肾小管上皮细胞转分化,其机制可能是激活TGF-β1/Smads/ILK信号通路,而Lov能部分阻断LDL诱导的小管上皮细胞转分化。     

银杏叶提取物对肾间质成纤维细胞中AGEs诱导的TGF-β1CTGF表达及氧化应激的抑制作用

目的探讨银杏叶提取物(EGb)在培养的正常大鼠肾间质成纤维细胞系(NRK-49F)中对糖基化终产物(AGEs)诱导的转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达及氧化应激作用的影响。方法于2005-01～2005-07以同济大学附属东方医院肾内科选用NRK-49F细胞为对象,以单纯培养基和高糖培养基(葡萄糖浓度25mmol/L)作为对照,用含AGEs的低糖(葡萄糖浓度5.5mmol/L)或高糖(葡萄糖浓度25mmol/L)DMEM培养液培养24h;并用不同质量浓度EGb(50,100mg·mL-1)预处理细胞以观察EGb的干预作用。采用流式细胞仪检测细胞内活性氧水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞TGF-β1和CTGFmRNA表达。结果与正常对照组相比,AGEs可显著增强NRK-49F细胞中TGF-β1和CTGFmRNA的表达和细胞内氧化水平,而与AGEs和高糖组分别相比,AGEs与高糖共同作用可使NRK-49F细胞中TGF-β1和CTGFmRNA的表达和细胞内氧化水平显著增加;银杏叶提取物预处理可抑制AGEs诱导的细胞内活性氧产生增加,同时阻断AGEs诱导的TGF-β1和CTGFmRNA表达上调。结论银杏叶提取物可能通过清除自由基,抑制氧化应激反应而拮抗肾间质成纤维细胞中AGEs诱导的TGF-β1和CTGFmRNA过表达,可能是EGb防治DN的作用机制之一。     

睾酮对心脏老化过程中心肌纤维化的干预研究

目的观察睾酮对心脏老化过程中心肌纤维化的干预效应。方法差速贴壁法培养雄性昆明白乳鼠心肌成纤维细胞,并分为4组:A组(培养液)、B组(60 μmol/L H_2O_2)、C组(30 nmol/L 睾酮+B组)、D组(氟他胺1μmol/L+C组)。用β半乳糖苷酶染色检测细胞的阳性率,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,二氯荧光黄荧光显色检测细胞内活性氧(ROs)。α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫化学染色反应细胞的表型转化,RT-PCR法检测转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA、P16 mRNA和cyclin D1 mRNA的表达。结果与A组比较.B组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞增加,ROS水平增加,P16 mRNA、cyclin D1 mRNA、TGF-β1 mRNA表达上调,细胞增殖能力明显下降,G_0/G_1期细胞比例增多,同时α-SMA免疫组织化学染色出现明显强阳性;与B组比较,C组上述各项指标下降;与C组比较,D组能部分阻断睾酮的各种保护作用。结论睾酮通过受体机制干预氧化应激诱导的心肌成纤维细胞的衰老,这可能是睾酮抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制之一。     

硫酸氨基葡萄糖抑制白介素1β诱导的人骨关节炎软骨细胞合成一氧化氮研究

目的 研究硫酸氨基葡萄糖(GS)对白介素1β(IL-1β)诱导体外培养的人骨关节炎软骨细胞(HOC)合成一氧化氮(NO)的影响及其作用机制. 方法 取10例骨关节炎患者行全膝关节置换术的软骨标本获取软骨细胞进行培养.在HOC培养液中加入IL 1β(5μg/L)和不同浓度的GS(0.2 mmol/L,2.0 mmol/L,20.0 mmol/L)作用24 h,酶联免疫吸附(ELISA)测定检测细胞上清中的NO的含量,反转录聚合酶链反应(RT PCR)法和蛋白印迹法分别检测HOC中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA和蛋白的表达. 结果 IL-1β刺激后HOC合成NO增加,iNOS mRNA和蛋白表达上调(t=-14.81,-45.38,均P＜0.01).2.0 mmol/L和20.0 mmol/L GS浓度依赖式抑制IL-1β诱导HOC合成NO(F=12.43,P＜0.05),抑制IL-1β诱导HOC中iNOS mRNA(F=142.28,P＜0.05)和蛋白的上调(F=78.08,P＜0.01).单独使用20.0 mmol/L的GS对HOC合成NO无影响(t=-0.17,P＞0.05). 结论 GS通过下调HOC细胞内iNOS mRNA和蛋白的表达从而抑制IL-1β诱导的NO合成.     

瓜蒌皮提取物对PDGF-BB所致血管平滑肌细胞增殖周期的影响

目的 研究瓜蒌皮提取物对血小板源生长因子BB所致血管平滑肌细胞增殖周期的影响并探讨其可能机制.方法 组织块贴块法培养SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞,3H-TdR掺入观察瓜蒌皮提取物(10、20和30mg/L)对血小板源生长因子BB(20 μg/L)所致血管平滑肌细胞DNA合成的影响;流式细胞仪分析细胞增殖周期;real time RT-PCR检测血管平滑肌细胞中c-fos、c-myc mRNA表达.结果 血小板源生长因子BB可明显升高细胞每分钟脉冲数(P＜0.01),并增加S期细胞比例而降低G0/G1期细胞比例(P＜0.01),并上调c-fos、c-myc mRNA表达(P＜0.01).瓜蒌皮提取物各浓度组均明显抑制血小板源生长因子BB诱导的每分钟脉冲数升高(P＜0.01),降低S期细胞比例而升高G0/G1期细胞比例,明显下调血小板源生长因子BB所致的c-fos、c-myc mRNA高表达(P＜0.01).结论 瓜蒌皮提取物通过阻止血管平滑肌细胞由G0/G1期进入S期而抑制血小板源生长因子BB所致的增殖,其作用机制可能与降低细胞内c-fos、c-myc mRNA高表达有关.     

依折麦布联合罗格列酮对平滑肌源性泡沫细胞小凹蛋白-1 mRNA表达的影响

目的探究依折麦布、罗格列酮及二者联合对氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的平滑肌源性泡沫细胞小凹蛋白-1(Caveolin-1)表达的影响及其可能机制。方法将原代大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs)培养至3～5代用于实验,实验分为空白对照组(正常培养的平滑肌细胞)、泡沫细胞组(用50μg/mL浓度ox-LDL诱导VSMCs泡沫化,建立动脉粥样硬化模型)、依折麦布组(在泡沫细胞组的基础上,分别用3μmol/L、10μmol/L、30μmol/L浓度进行干预)、罗格列酮组(在泡沫细胞组的基础上,用25μmol/L浓度进行干预)、联合组(在泡沫细胞组的基础上,依折麦布30μmol/L+罗格列酮25μmol/L进行干预),采用逆转录聚合酶链反应测定不同干预条件下Caveolin-1 mRNA表达水平。结果泡沫细胞组Caveolin-1的mRNA表达水平明显低于空白对照组(P0.05);不同浓度依折麦布及罗格列酮干预后Careolin-1 mRNA表达水平均较未干预的泡沫细胞组增加(P0.05),且依折麦布组的表达呈一定浓度依赖性(P0.05);与泡沫细胞组相比,联合组Caveolin-1 mRNA表达增高(P0.05),且联合组Caveolin-1 mRNA表达比单药组增高(P0.05)。结论依折麦布及罗格列酮均可提高泡沫细胞中Caveolin-1 mRNA的表达水平,可以认为这两种药物通过促进小凹蛋白的表达,增加平滑肌细胞表面胆固醇逆向转运,减少细胞内蓄积的胆固醇,从而降低动脉粥样硬化的发生;且两者联合可进一步上调Caveolin-1的表达,降低胆固醇积累,起到抗动脉粥样硬化的作用。     

转化生长因子β1对大鼠血管平滑肌细胞Smurf2和Ⅰ型胶原表达的影响

目的探讨体外条件下转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)Smad泛素调节因子2(Smurf 2)以及Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响。方法应用RT-PCR法检测Smurf2 mRNA的表达,Western印迹法检测Smurf2蛋白的表达,ELISA检测ColⅠ的表达。结果不同浓度TGF-β1(1、5、10μg/L)作用于VSMCs后,细胞中Smurf2的表达量均低于对照组(P<0.05),且5、10μg/L组同对照组相比差异显著(P<0.01),ColⅠ的浓度高于对照组(P<0.05),且5μg/L组同对照组相比差异显著(P<0.01)。结论 TGF-β1呈浓度依赖性抑制Smurf2的表达,促进ColⅠ的产生。     

乙酰半胱氨酸抑制人肺成纤维细胞增殖及胶原合成机制的初步探讨

目的 研究乙酰半胱氨酸(NAC)抑制人肺成纤维细胞增殖和胶原合成的机制.方法 分离培养人肺成纤维细胞,并以肺泡上皮来源的细胞系A549作为对照.将细胞分为对照组(不加任何处理)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)组(TGF-β_1为5μg/L)、NAC组(NAC为20 mmol/L)和联合组(5μg/L的TGF-β_1刺激24 h后换用不同浓度NAC继续作用24 h).用不同浓度NAC处理后,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期;采用TGF-β_1刺激后加用NAC刺激,逆转录-PCR法检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化,Western blot法检测cyclin E、α-肌动蛋白及信号转导与转录激活因子-3(STAT-3)蛋白的表达.结果 5、10、20、40 mmol/L的NAC对人肺成纤维细胞生长均有明显抑制作用,呈剂量依赖关系,而20 mmol/L的NAC对A549细胞无明显作用.10、20、40 mml\L的NAC可使G_0/G_1期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低.经TGF-β_1刺激后,成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达明显增加,而NAC可抑制TGF-β_1诱导或未经诱导的Ⅰ型前胶原表达.TGF--β_1可诱导cyclin E和α-肌动蛋白的表达,其相对密度分别为0.98±0.09和1.56±0.23,20 mmol/L的NAC能明显抑制cyclin E的表达,其相对密度为0.52±0.04,但却小能抑制α-肌动蛋白的表达.TGF-β_1组和NAC组α-肌动蛋白的表达(相对密度分别为1.56 ±0.23和1.63±0.20)无明显差别.结论 NAC能够抑制人肺成纤维细胞cyclin E蛋白的表达,使细胞增殖阻滞于G_1期,从而抑制成纤维细胞发生增殖,抑制其胶原合成.对TGF-β_1刺激前后α-肌动蛋白的表达无明显抑制作用.     

不同浓度转化生长因子β1体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的研究

目的:研究不同浓度转化生长因子-β1(TGF-β1)在体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的能力。方法:取SD大鼠四肢骨骨髓,密度梯度离心法分离大鼠BMSCs,以TGF-β1 5μg/L(低剂量组)、10μg/L(高剂量组)对第3代BMSCs进行体外诱导,未诱导的骨髓间充质干细胞做对照。相差显微镜观察细胞形态,MTS试剂盒检测细胞活性。分化14天后,流式细胞仪分析三组细胞DNA周期;免疫荧光法鉴定心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin,c Tn I)、心肌平滑肌肌动蛋白(aactin)和心肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)的表达率。结果:三组细胞均呈对数生长趋势,诱导组细胞数量增长较对照组缓慢(P0.05),诱导组之间比较,细胞增长无明显差异。分析细胞DNA周期显示:诱导14天后,对照组增殖指数明显高于诱导组(P0.05),不同浓度诱导组之间比较,细胞增殖指数无明显差异。免疫荧光法检测结果显示:诱导14天后,诱导组细胞均部分表达c Tn I、α-actin及MHC,TGF-β1高剂量组细胞转化率高于低剂量组;对照组均不表达c Tn I、α-actin及MHC。结论:10μg/L TGF-β1与5μg/L TGF-β1比较,更有效促进BMSCs体外向心肌样细胞分化,且对细胞增殖活性无明显影响。     

阿托伐他汀对肿瘤坏死因子α诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞内皮脂肪酶表达的影响

目的观察阿托伐他汀对肿瘤坏死因子α诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞内皮脂肪酶表达的影响。方法原代培养的大鼠主动脉平滑肌细胞中先加入50μg/L的肿瘤坏死因子α,1h后加入不同浓度(1×10-7mmol/L、1×10-6mmol/L和1×10-5mmol/L)的阿托伐他汀,继续孵育24h后,收集细胞,采用逆转录聚合酶链反应检测培养的平滑肌细胞中内皮脂肪酶mRNA的表达情况。另外,取阿托伐他汀1×10-5mmol/L浓度,分别在6、12和24h用同样的方法检测培养细胞中内皮脂肪酶mRNA表达情况。结果随阿托伐他汀浓度的增加,肿瘤坏死因子α诱导的平滑肌细胞内皮脂肪酶mRNA表达水平呈下降趋势,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),不同浓度组之间比较亦有统计学意义(P<0.05);在1×10-5mmol/L阿托伐他汀作用下,随着作用时间的延长平滑肌细胞内皮脂肪酶mRNA表达水平亦呈下降趋势,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),不同时间组之间比较亦有统计学意义(P<0.05)。结论随着阿托伐他汀浓度的增加与作用时间的延长,肿瘤坏死因子α诱导的平滑肌细胞内皮脂肪酶mRNA的表达均呈下降趋势。     

高糖条件下基质细胞趋化因子1α抑制人肾小管上皮细胞Ⅳ型胶原表达

目的 本文探讨基质细胞趋化因子1α （stromal cell-derived factor-1,SDF-1α）对人肾小管上皮细胞（HK细胞）细胞外基质（Ⅳ型胶原）表达的影响.方法 不同浓度的葡萄糖培养HK细胞,分为正常葡萄糖组（NG组：含5.5 mmol/L葡萄糖）和高糖组（HG组：含25.0 mmol/L葡萄糖）,分别用转化生长因子β1 （TGF-β1）和SDF-1α干预HK细胞12h,再分为空白对照组（NC组）、阴性对照组（DMSO组）、T组（TGF-β1组）、S组（SDF-1α组）、T＋S组（TGF-β1和SDF-1α共同干预组）,采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting分别检测Ⅳ型胶原mRNA和蛋白的表达.两组间比较采用t检验.结果 （1）HK细胞能持续表达SDF-1α和其受体CXCR4 mRNA.高糖条件下SDF-1α和CXCR4mRNA表达呈时间梯度增加,24 h两者表达量达到高峰.24 h CXCR4 mRNA表达量是12h表达量的1.2倍（t=6.08,P＜0.05）,SDF-1αmRNA表达量是12h的1.58倍（t=7.52,P＜0.05）.（2）高糖条件下SDF-1α抑制HK细胞Ⅳ型胶原mRNA和蛋白的表达,并能降低由TGF-β1诱导的Ⅳ型胶原表达.S＋T组Ⅳ型胶原mRNA表达量是T组的0.33倍（t=12.57,P＜0.05）,蛋白表达量是T组的0.47倍（t=14.23,P＜0.05）.但在正常葡萄糖条件下,SDF-1α对由TGF-β1诱导的Ⅳ型胶原表达没有影响.（3）TGF-β1促进HK细胞Ⅳ型胶原mRNA和蛋白表达,高糖条件下其促进作用更为显著.T组Ⅳ型胶原mRNA是正常对照组的6.63倍（t=19.21,P＜0.05）,蛋白表达量是其2.59倍（t=15.71,P＜0.05）.结论 高糖条件下SDF-1α能减轻TGF-β1诱导的HK细胞Ⅳ型胶原表达,可能由此改善肾脏纤维化.TGF-β1促进HK细胞Ⅳ型胶原的表达,促进肾脏纤维化的发生发展.