磁性纳米颗粒载ABCG2-siRNA逆转乳腺癌细胞对阿霉素耐药性的研究

目的：研究抑制乳腺癌耐药蛋白（ABCG2）表达对乳腺癌细胞耐药性的逆转作用,为乳腺癌基因靶向治疗提供新思路。方法：通过透射电镜和纳米粒度电位分析仪对磁性纳米颗粒（polyMAG）的粒径、电位进行表征,利用凝胶电泳阻滞实验检测polyMAG 与siRNA的结合情况,并用polyMAG携载不同浓度（5、10、20、50、100 nmol/L）ABCG2-siRNA,将其转染入乳腺癌细胞耐药株（MCF-7/ADR）后,采用CCK-8检测siRNA转染后细胞的存活率,荧光定量PCR和Western blotting分别检测ABCG2 mRNA和蛋白表达水平,Calcein-AM/PI染色观察细胞凋亡。结果：polyMAG粒径约100 nm,呈正电荷,表面电位29.6 mV。当polyMAG与ABCG2-siRNA的比为1：1和1：2时ABCG2-siRNA可完全结合。当20~100 nmol/L polyMAG-siRNA干扰ABCG2表达后,细胞存活率较未转染组明显降低（P < 0.05）。20 nmol/L polyMAG-siRNA转染组ABCG2 mRNA表达显著下调,约为未转染组的1/8（P < 0.05）,且凋亡细胞较其他组明显增多;50 nmol/L polyMAG-siRNA转染后可明显干扰ABCG2蛋白表达（P < 0.05）。结论：polyMAG-siRNA能高效干扰ABCG2表达,增加MCF-7/ADR细胞对阿霉素敏感性,逆转细胞耐药。     

miR-490-3p逆转MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的影响

【摘 要】目的 探讨miR-490-3p在阿霉素（ADM）耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADM中的表达情况及其对MCF-7／ADM细胞增殖、凋亡和ADM耐药的影响。方法 以野生型人乳腺癌细胞系MCF-7及其耐药型细胞系MCF-7／ADM为研究对象,用实时荧光定量PCR（qPCR）比较两种细胞中miR-490-3p的表达水平,将miR-490-3p的过表达载体pcDNA1（+）miR-490-3p瞬时转染至MCF-7／ADM细胞（过表达组）后采用qPCR检测转染效果,同时设pcDNA3.1（-）空载体对照组和空白对照组;采用MTT法测定转染pcDNA3.1（+）miR-490-3p对各组MCF-7/ADM细胞增殖能力的影响,测定ADM对MCF-7／ADM细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）及逆转倍数以评价对ADM敏感性的变化;分别于瞬时转染48 h后用Annexin V／FITC流式细胞术检测各组MCF-7/ADM细胞的凋亡率,Western blotting检测耐药蛋白P-糖蛋白（P-gp）,乳腺癌耐药蛋白（BCRP）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达,荧光分光光度计检测胞内ADM药物浓度,流式细胞仪检测P-gp活性。结果 MCF-7／ADM细胞中miR-490-3p的表达水平为0.24±0.07,显著低于野生型MCF-7细胞的1.02±0.03（P＜0.05）;过表达组瞬时转染24～96 h的miR-490-3p水平持续升高,均高于空载体对照组和空白对照组（P＜0.05）;过表达组的增殖抑制率随转染时间的延长而增加,转染24、48、72和96 h的增殖抑制率依次为（17.52±1.87）％、（31.67±2.79）％、（45.09±1.88）％和（61.82±2.52）％,高于空载体对照组（P＜0.05）;ADM对过表达组的IC50值为（11.27±2.34）μg／ml,低于空白对照组的和空载体对照组（P＜0.05）,且过表达组相对于空白对照组和空载体对照组的逆转倍数分别为3.35倍和3.39倍;与其余两组相比,过表达组的MCF-7/ADM细胞早、晚期凋亡率和细胞内药物浓度均升高,P-gp、BCRP和MRP1表达及P-gp活性均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-490-3p可逆转MCF-7／ADM细胞对ADM的耐药性,可能通过降低耐药蛋白表达及抑制P-gp活性有关,且升高其水平可抑制细胞增殖并诱导凋亡。     

MiR-34a对乳腺癌Mcf-7／ADR细胞株多柔比星敏感性影响研究

目的：探讨乳腺癌细胞株MCF7和耐药株MCF7／ADR中miR-34a的表达差异及miR-34a对于多柔比星化疗敏感性的影响。方法：采用实时定量PCR技术检测MCF-7细胞及MCF-7／ADR细胞中miR-34a的表达差异。采用转染技术,以脂质体为载体,在MCF_7／ADR细胞株中过表达miR-34a后,检测其对于多柔比星耐药活性的影响,同时采用实时定量PCR技术和蛋白质印迹法技术检测靶基因的表达变化。结果：MCF-7细胞株和耐药株MCF-7／ADR中miR-34a的相对表达量分别为1．01±0．03和0．76±0．04,在耐药细胞株中呈现下调表达,P=0．007。MTT结果显示,MCF7及其耐药株MCF-7／ADR细胞多柔比星半数抑制浓度Ic5。分剐为（0,22±0．02）和（18．7±0．09）ftmol／L。对耐药株MCF-7／ADR过表达miR34a后,MCF-7／ADR细胞对多柔比星的ICso降低为（10．7士0．11）mol／L,明显增强此细胞株对于多柔比星的耐药敏感性。实时定量PCR结果显示,与转染阴性对照RNA相比,于耐药株MCF7／ADR细胞中转染miR--34a后耐药相关靶基因Bcl-2和CCNDl的mRNA水平分别降低了0．46±0．02（P=0．002）和0．33±0．02（P=0．008）。蛋白质印迹结果显示,过表达miR-34a后,可明显下调靶基因Bcl-2和CCNDl的表达。结论：上调表达miR34a可以增加耐药细胞株MCF-7／ADR对于多柔比星的耐药敏感性。     

siRNA逆转乳腺癌细胞系MCF-7/ADR耐药

背景与目的：肿瘤的多药耐药性常导致乳腺癌化疗失败,多约耐药基因1(multidrug resistance 1、mdr1)编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein．P-gP)过度表达是重要的耐药机制。本研充拟探讨siRNA抑制耐药乳腺癌细胞系MCF-7／ADR mdr1基因表达的可行性。方法：选择耐阿毒素人乳腺癌细胞系MCF-7／ADR技其敏感细胞系MCF-7作为研究对象,将预先设计的siRNA包装入质粒载体,然后转化质粒刮大肠杆菌中,经过克隆、扩增、纯化后转染到MCF-7／ADR细胞中,潮霉素筛选,流式细胞仪检测P-gP的表达率,实时定量PCR俭测,mdr1基因的表达率,并对转染后的细胞作阿霉素耐药实验。结果：流式细胞仪榆测结果显示,MCF-7／ADR细胞经特异性siRNA作用后,P-gP的表达率由99．8％下降到12．3％：实时相对定量PCR检测结果显示．MCF-7／ADR细胞经特异性siRNA作用后其Ct值由25．22增加到30．64．阿霉素耐药实验显示,转染siRNA的MCF-7／ADR细胞IC50为0．51μmol／L,而术转染组的IC50为17．88μmol／L。结论：siRNA能引发人乳腺癌多耐药细胞系MCF-7／ADR内mdr1基因沉默,从而为siRNA作为一种可能的治疗手段提供了理论依据。     

EZH2过表达在MCF-7获得性耐药中的作用

目的 探讨EZH2过表达在MCF-7/ADR获得性耐药中的作用。方法 应用荧光定量PCR技术和Western blot技术分别检测EZH2在MCF-7和MCF-7/ADR中的mRNA和蛋白的相对表达量。将带有报告基因eGFP的EZH2 shRNA、EZH2 shRNA-scramble质粒分别转染MCF-7/ADR细胞后,用G418筛选获得稳转细胞株,应用荧光定量PCR技术验证EZH2 shRNA组EZH2 mRNA表达是否被抑制。采用WST-1方法检测EZH2 shRNA、EZH2 shRNA-scramble和阴性对照组细胞对阿霉素敏感性的变化情况。结果 MCF-7/ADR中EZH2 mRNA相对表达量约为MCF-7的2.52±1.523倍,MCF-7/ADR中EZH2蛋白相对表达量约为MCF-7的1.58±0.58倍,差异均有统计学意义(P＜0.05)。EZH2 shRNA组稳转的细胞株EZH2 mRNA的抑制率约为84%(P＜0.05),加入阿霉素后细胞增殖能力约下降25%(P＜0.05),而EZH2 shRNA-scramble组和阴性对照组加入阿霉素后细胞增殖能力无明显变化。结论 在MCF-7/ADR细胞中EZH2 mRNA和蛋白的相对表达量较MCF-7细胞高。沉默EZH2的表达有可能逆转MCF-7/ADR细胞对阿霉素的耐药性。     

miR-155对乳腺癌细胞增殖、凋亡及耐药蛋白表达的调控作用研究

目的 探讨microRNA-155（miR-155）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及乳腺癌耐药相关蛋白表达的调控作用。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测MCF-7细胞和人乳腺正常上皮细胞中miR-155的表达水平。将MCF-7细胞分为4组：对照组、空转染组、抑制（转染miR-155 inhibitor）组和过表达（转染miR-155 mimics）组,采用qRT-PCR检测转染24、48、72及96 h后各组的转染效果,噻唑蓝（MTT）法检测各组转染24、48、72及96 h的增殖能力,采用流式细胞仪PI／Annexin V双染色法检测各组转染24、48 h后的凋亡率,Western blotting法检测各组转染48 h后乳腺癌耐药蛋白（BCRP）、P-糖蛋白（P-gp）及多药耐药相关蛋白1（MRP1）的表达水平。结果 乳腺癌MCF-7细胞中的miR 155水平高于人乳腺正常上皮细胞（P＜0.05）,且转染miR-155 inhibitor或mimics可呈时间依赖的方式降低或升高MCF-7细胞的miR-155水平（P＜0.05）。与对照组相比,抑制组转染后的细胞增殖率及BCRP、P-gp和MRP1的表达水平均降低,凋亡率升高（P＜0.05）;而过表达组的细胞增殖率及BCRP、P gp和MRP1的表达水平均升高,凋亡率降低（P＜0.05）。结论 MCF-7细胞中miR-155呈高表达,下调miR-155表达可抑制其增殖及耐药相关蛋白的表达,同时诱导凋亡。     

逆转胶囊含药血清对人乳腺癌耐药株MCF-7／ADR细胞P—gp蛋白表达的影响

目的探讨逆转胶囊在乳腺癌多药耐药中的应用。方法应用流式细胞技术。测定逆转胶囊含药血清对人乳腺癌耐药株MCF-7／ADR细胞P—gp蛋白表达的影响。结果阿霉素单用对P—gp表达无明显影响,其余各处理组与对照组（正常鼠血清组）比较P-gp的荧光表达率均有所下降;逆转胶囊含药血清能显著抑制MCF-7／ADR细胞P—gp表达;阿霉素与10％含药鼠血清合用,对人乳腺癌耐药MCF-7／ADR细胞P—gp蛋白表达的抑制效果良好,P—gp荧光表达率的下降幅度大,与异博定＋阿霉素＋10％正常鼠血清组无明显差异。结论逆转胶囊含药血清能显著抑制MCF-7／ADR细胞P—gp表达;并有耐药逆转作用。     

乳腺癌中miR-221、miR-222表达水平对GATA3和FOXA1蛋白的影响及其作用机制

目的： 探讨乳腺癌中miR-221和miR-222（miR-221/222）表达水平对GATA结合蛋白3（GATA3）和叉头框蛋白A1（FOXA1）表达的影响及其作用机制。方法： 收集汕头大学医学院附属肿瘤医院2020年1月—2021年5月经手术切除的86例乳腺浸润性导管癌及其癌旁组织标本,分别采用茎环引物实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫组织化学方法检测癌组织和相应癌旁组织中miR-221/222的表达水平及GATA3、FOXA1蛋白的表达水平,分析其与临床病理指标的关系。进一步在5种乳腺癌细胞系（MCF-7、T47D、SKBR3、MDA-MB-231和BT-549）中转染miR-221/222 mimics后,采用qPCR检测各细胞中miR-221/222的表达水平;采用Western blot检测转染后MCF-7细胞中GATA3、FOXA1、雌激素受体-α（ER-α）和钙黏蛋白E（E-cadherin）的表达;用细胞划痕和迁移侵袭实验检测转染后MCF-7细胞修复和迁移侵袭能力。结果： 在乳腺癌组织中,miR-221/222的表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织（P=0.00）。miR-221/222表达水平在FOXA1、GATA3、ER-α及孕激素受体（PR）阴性表达组均显著高于阳性表达组（P<0.01）;在Her-2阳性和高表达Ki-67的乳腺癌中较Her-2阴性和低表达Ki-67组显著升高（P<0.05）;在三阴性和Her-2阳性亚型乳腺癌中显著高于Luminal A和Luminal B1型乳腺癌（P=0.00）;而miR-221/222水平与患者年龄、月经状况、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及TNM分期无显著相关关系（P>0.05）。在5种乳腺癌细胞系中,miR-221/222在MCF-7细胞中均低表达。与对照组相比,在MCF-7细胞中瞬时转染miR-221/222 mimics后miR-221/222表达显著升高（P<0.05）,且内源性的GATA3和FOXA1蛋白表达被抑制（P<0.01）,上皮细胞相关分子ER-α和E-cadherin表达显著下降（P<0.01）;划痕修复能力和迁移侵袭能力均显著增强（P<0.01）。结论： miR-221/222可能通过下调GATA3和FOXA1的表达促进乳腺癌的迁移和侵袭。     

多药耐药相关蛋白1在三种乳腺癌细胞系中表达差异的研究

 目的　比较多药耐药相关蛋白1（MRP1）在人类乳腺癌敏感细胞（MCF-7／S）和耐药细胞（MCF-7／TAM、MCF-7／ADR）中的表达差异。初步探索乳腺癌细胞对三苯氧胺（TAM）和多柔比星（ADR）的耐药性的发生机制。方法　分别采用实时荧光定量PCR、Western blot技术检测MRP1基因和MRP1蛋白在3种乳腺癌细胞中的表达差异。结果　MRP1 mRNA在MCF-7／TAM和MCF-7／ADR细胞中表达量分别是MCF-7／S细胞的（2.63±0.18）倍和（8.38±0.76）倍,差异均有统计学意义（P＝0.004,P＝0.003）。MRP1蛋白在MCF-7／TAM细胞和MCF-7／ADR细胞中表达均高于MCF-7／S细胞,与MRP1 mRNA的趋势相一致。结论　MRP1的高表达可能是乳腺癌细胞对TAM和ADR产生耐药的共同发生机制。     

LncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴对人乳腺癌细胞增殖的影响

目的 探究lncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法 通过在线生物软件分析TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库比较lncRNA NBAT1在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达量。RT-qPCR方法比较正常细胞株MCF-10A和乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231及MDA-MB-453中lncRNA NBAT1的表达水平。生物信息学预测lncRNA NBAT1、miR-3664-5p、Caspase 9三者之间关系,并进一步通过荧光素酶报告系统进行验证;lncRNA NBAT1过表达载体转染乳腺癌MCF-7细胞株,RT-qPCR检测转染后lncRNA NBAT1的表达,qPCR检测miR-3664-5的表达,Western blot检测Caspase 9的蛋白表达水平;CCK-8和克隆形成实验检测细胞的增殖能力;同时将lncRNA NBAT1过表达载体和mimics miR-3664-5p转染MCF-7细胞,观察mimics miR-3664-5p对lncRNA NBAT1抑制细胞增殖能力产生的缓解效应。结果 TCGA数据库分析发现,lncRNA NBAT1在乳腺癌组织中的表达量显著低于正常组织(P＜0.001);qPCR检测发现lncRNA NBAT1在正常细胞株MCF-10A细胞中表达量最高(P＜0.001),MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞中表达量比MCF-10A细胞低(P＜0.001),MCF-7细胞表达量最低(P＜0.001);通过生物信息学预测lncRNA NBAT1可以吸附miR-3664-5p,Caspase 9是miR-3664-5p的靶基因,并进一步通过荧光素酶报告系统进行验证;lncRNA NBAT1过表达载体转染乳腺癌细胞株MCF-7,qRT-PCR检测发现pc-NBAT1组比pc-NC组LncRNA NBAT1的表达增高(P＜0.001),miR-3664-5的表达降低(P＜0.001),Western blot检测发现pc-NBAT1组比pc-NC组Caspase 9的表达增高(P＜0.001)。CCK-8和克隆形成实验发现pc-NBAT1组比pc-NC组细胞的增殖能力降低(P＜0.001);同时将lncRNA NBAT1过表达载体和mimics miR-3664-5p转染MCF-7细胞,发现mimics miR-3664-5p能够对lncRNA NBAT1抑制细胞增殖能力产生缓解效应(P＜0.001)。结论 lncRNA NBAT1通过调控miR-3664-5p/Caspase 9分子轴抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌治疗提供新的潜在靶点。     

微小RNA-148a-3p靶向调控MRAS表达及其对胃癌HGC-27细胞侵袭迁移的影响

目的 探讨微小RNA-148a-3p（miR-148a-3p）对胃癌HGC-27细胞侵袭迁移及肌 RAS癌基因同源基因（MRAS）表达的影响。方法 将冻存的胃癌细胞株HGC-27复苏并常规培养至对数生长期,将miR-148a-3p模拟物及其阴性对照（miR-NC）分别转染HGC-27细胞（miR-148a-3p转染组和miR-NC组）,以未行转染的HGC-27细胞为空白对照（未转染组）,采用实时定量PCR（QPCR）检测各组转染48 h后的miR-148a-3p水平,划痕实验和Transwell侵袭实验分别比较各组HGC-27细胞转染48 h后的迁移相对距离和穿膜细胞数目以评价迁移和侵袭情况,QPCR和Western blotting分别检测各组转染48 h后MRAS的mRNA和蛋白水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与MRAS之间的靶向调节作用。结果 QPCR检测显示转染48 h后miR-148a-3p转染组的miR-148a-3p水平为2.612±0.213,高于未转染组的0.954±0.098和miR-NC组的0.983±0.196,差异有统计学意义（P<0.05）;划痕实验结果显示,miR-148a-3p转染组的相对迁移距离为0.615±0.019,低于未转染组的1.021±0.019和miR-NC组的0.948±0.022,Transwell侵袭实验显示miR-148a-3p转染组的穿膜细胞数目为（83±17）个,少于未转染组的（124±17）个和miR-NC组的（136±26）个,差异有统计学意义（P<0.05）。QPCR和Western blotting结果显示,miR-148a-3p转染组MRAS mRNA和蛋白水平分别为0.614±0.057和0.553±0.049,均低于未转染组的1.106±0.024和0.824±0.091及miR-NC组的1.095±0.031和0.784±0.121,差异有统计学意义 （P<0.05）。miR-148a-3p显著降低野生型MRAS-3′非翻译区质粒转染细胞的荧光素酶活性,但对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性无明显影响。结论 MiR-148a-3p可能通过靶向调控MRAS来抑制胃癌HGC-27细胞的侵袭和迁移。     

miR-26b靶向GSK-3β发挥抗乳腺癌细胞干性的作用研究

目的 探讨miR-26b对乳腺癌细胞增殖、凋亡及干性的影响并探讨其相关机制。方法 采用无血清悬浮培养法培养MCF-7细胞以获得MCF-7干细胞,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测MCF-7及其干细胞中的miR-26b水平,根据实验将MCF-7干细胞分为3组：对照组、空转染组（转染con-mimics）和miR-26b过表达组（转染miR-26b mimics）,MTT法检测各组转染24、48、72及96 h的增殖能力,流式细胞仪检测各组转染后的凋亡水平及侧群（SP）细胞数量,体外干细胞成球培养实验检测各组转染后的成球率情况,qRT-PCR检测转染后各组干细胞标记物CD44、ALDH 1、BMI 1、OCT-4和Lin-28B的mRNA水平,生物信息学及Western blotting法分析验证miR 26b对靶基因糖原合成酶激酶 3β（GSK-3β）的调控机制。结果 MCF-7干细胞的miR-26b水平低于MCF-7细胞（P＜0.05）,且转染miR-26b mimics可升高MCF-7干细胞的miR-26b水平（P＜0.05）;与对照组相比,过表达组转染后增殖抑制率和凋亡率均升高,SP细胞数量和成球率均降低（P＜0.05）;转染miR-26b mimics可导致CD44、ALDH-1、BMI-1、OCT-4和Lin-28B的mRNA水平降低（P＜0.05）。生物信息学软件预测GSK-3β是miR-26b的潜在靶基因,转染miR-26b mimics可显著降低GSK-3β的表达,双荧光素酶报告基因检测证明miR-26b 可作用于GSK-3β 基因 mRNA的 3’ UTR区预测靶位。结论 MCF-7干细胞中miR-26b呈低表达,过表达miR-26b可抑制细胞增殖、诱导凋亡并负性参与了乳腺癌细胞的干性调节,可能与其下调GSK-3β表达有关。     

微小RNA-148a-3p靶向调控MAP3K9表达及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-148a-3p（miR-148a-3p）对丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9（MAP3K9）的靶向调控作用及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 向对数生长期胃癌细胞株MGC-803转染miR-148a-3p模拟物（mimics组）和阴性对照（NC组），以未转染的MGC-803细胞为对照组；采用实时定量PCR（QPCR）检测各组miR-148a-3p水平以评价转染效率，MTT法检测各组细胞增殖能力，流式细胞术检测各组细胞凋亡情况，分别采用QPCR和Western blotting检测Bcl-2、Bax、caspase-3及MAP3K9 mRNA和蛋白水平，同时采用双荧光素酶报告实验验证miR-148a-3p与MAP3K9的靶向作用关系。结果 QPCR结果显示，对照组、NC组和mimics组的miR-148a-3p水平分别为1.021±0.123、1.087±0.196和2.854±0.368，与对照组和NC组比较，mimics组的miR-148a-3p水平升高（P＜0.05）。mimics组MGC-803细胞的增殖活力较其余两组减弱（P＜0.05）。mimics组MGC-803细胞凋亡率为（15.2±1.6）％，高于对照组的（3.5±0.9％）％和NC组的（4.5±1.1）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）。与对照组和NC组比较，mimics组的MAP3K9和Bcl-2的mRNA和蛋白水平均下调，而Bax和caspase-3的mRNA和蛋白水平均上调（P＜0.05）；双荧光素酶报告实验证实MAP3K9是miR-148a-3p的直接作用靶点。结论 MiR-148a-3p可抑制胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡，可能通过靶向MAP3K9来发挥抑癌作用，调控miR-148a-3p／MAP3K9轴在胃癌防治中有一定应用前景。     

miRNA-93对结肠癌HT-29细胞株化疗敏感性的影响

目的 探讨miR-93与结肠癌HT-29细胞株对氟尿嘧啶（5-FU）敏感性的影响及可能机制。方法 miR-93抑制物转染HT-29细胞,同时设置空白对照组和阴性对照组（NC）,采用MTT法检测细胞增殖活性。流式细胞术、Transwell细胞侵袭实验和划痕实验分别检测miR-93抑制物组、空白对照组和NC组HT-29细胞凋亡、侵袭和迁移。双荧光素酶报告实验验证PTEN与miR-93的关系。采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测3组细胞miR-93表达,以及对p-VEGFR2、p-Akt、PTEN mRNA表达的影响。结果 miR-93抑制物组中miR-93的相对表达量为0.40±0.05,显著低于空白对照组和NC组的1.13±0.08、1.12±0.09,差异有统计学意义（P＜0.05）。经1、4、16、64、256 μg／ml的5-FU处理后,miR-93抑制物组HT-29细胞的增殖抑制率高于同浓度下NC组和空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。经16 μg／ml 5-FU处理后,miR-93抑制物组HT-29细胞凋亡率、侵袭率和愈合率分别为（52.75±7.44）％、（45.76±15.85）％、（12.64±3.29）％,与空白对照组和NC组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验分析PTEN可能是miR-93的下游靶基因。miR-93抑制物组p-VEGFR2、p-Akt和PTEN表达水平分别为1.28±0.09、0.85±0.08、1.22±0.09,与空白对照组和NC组比较,VEGFR2和Akt磷酸化水平下调,PTEN表达上调。结论 下调miR-93可以增加PTEN的表达,抑制VEGFR-2和Akt磷酸化水平,从而提高结肠癌细胞对5-FU的敏感性。     

微小RNA 216影响胰腺癌细胞增殖凋亡及#br# 对吉西他滨耐药的实验研究#br#

目的 探讨微小RNA 216（miR-216）是否影响胰腺癌细胞增殖凋亡及对吉西他滨耐药。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测胰腺癌吉西他滨耐药细胞株BxPC-3和非耐药株CFPAC-1中的miR-216表达水平;采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR 216模拟物（mimics组）及抑制剂（inhibitor组）分别转染BxPC 3细胞,以进行脂质体转染的BxPC 3细胞为对照组,采用QPCR检测转染48 h后各组miR 216表达水平,CCK-8法检测转染24、48、72 h后各组吸光值以评价增殖率,采用AnnexinⅤ FITC／PI双染流式细胞术检测各组转染48 h后的细胞凋亡率,CCK 8法检测各组对吉西他滨的半数抑制浓度（IC50）。利用生物信息学数据库miRBase预测miR 216的靶基因,利用cytoscape 351及其插件CluGO将其进行Gene Oncology（GO）功能注释。 结果BxPC 3细胞中miR 216表达量为3.010±0.901,高于CFPAC 1细胞的1.049±0.074（P＜0.05）;对照组、mimics组和inhibitor组的miR-216表达量依次为1.130±0.145、4.843±0.782和0256±0.145,差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较,mimics组的细胞增殖水平升高而凋亡率降低,inhibitor组的增殖水平降低而凋亡率升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。对照组、mimics组和inhibitor组的IC50值为（2.134±0.591）μg／ml、（4.518±0.862）μg／ml和（0.481±0.073）μg／ml,BxPC-3细胞转染inhibitor 后对吉西他滨的耐药性降低,转染mimics后对吉西他滨的耐药性增强（P＜0.05）。miR 216的预测靶基因共有138个,GO功能主要富集于与肿瘤发生发展相关的细胞增殖、凋亡与侵袭迁移过程。结论 miR-216在胰腺癌耐药细胞株中表达上调且可以诱导胰腺癌细胞增殖,暗示其可以发挥类似促癌基因的作用且参与吉西他滨耐药过程,有可能成为胰腺癌早期诊断和新型生物治疗的靶点。     

微小RNA-96对宫颈癌细胞HeLa增殖凋亡及Spindlin1表达的影响

目的 探讨微小RNA-96（miR-96）对宫颈癌细胞HeLa增殖凋亡及Spindlin1（SPIN1）表达的影响。方法采用脂质体法将miR-96 模拟物（mimics）及阴性对照分别转染至宫颈癌HeLa细胞（miR-96转染组和miR-96对照组）,以未行转染的HeLa细胞为未转染组,实时定量PCR（QPCR）检测各组转染48 h后细胞中miR-96的表达情况,MTT及流式细胞仪分别检测各组转染48 h后的增殖及凋亡情况,分别采用QPCR和Western blotting检测转染48 h后各组细胞的SPIN1 mRNA和蛋白水平,通过双荧光素酶靶标实验验证miR-96与SPIN1之间的关系。结果 转染48 h后未转染组、miR-96对照组和miR-96转染组的miR-96水平依次为1.068±0.053、1.175±0.084和2.434±0.088,miR-96转染组的miR-96水平高于其余两组,差异有统计学意义（P<0.05）;未转染组、miR-96对照组和miR-96转染组的增殖率依次为（99.633±5.059）%、（97.727±3.079）%和（62.023±5.425）%,凋亡率依次为（7.515±0.924）%、（8.123±1.247）%和（26.845±4.126）%,与其余两组相比,miR-96转染组的增殖率降低而凋亡率升高,差异有统计学意义（P<0.05）;未转染组、miR-96对照组和miR-96转染组的SPIN1 mRNA水平依次为0.965±0.046、0.917±0.044和0.549±0.039,SPIN1 蛋白水平依次为0.667±0.042、0.715±0.045和0.384±0.038,miR-96转染组的SPIN1 mRNA和蛋白水平均低于其余两组,差异有统计学意义（P<0.05）。miR-96抑制含有野生型SPIN1-3’UTR质粒细胞的荧光素酶活性,却对含有突变型质粒细胞的荧光素酶活性无影响。结论 过表达miR-96可抑制宫颈癌细胞的增殖凋亡并降低SPIN1表达水平,miR-96对SPIN1有靶向调控作用,可作为治疗宫颈癌的有效靶点。