副干酪乳杆菌副干酪亚种L1的培养条件及絮凝活性研究

酸浆是我国传统的鲜薯(或绿豆)淀粉生产工艺中用于淀粉分离净化的生物絮凝剂。本实验对从自然发酵的甘薯酸浆中分离的、对甘薯淀粉具有高絮凝活性的副干酪乳杆菌副干酪亚种L1的培养条件和絮凝活性进行了研究。结果表明,副干酪乳杆菌副干酪亚种L1为兼性厌氧菌,在改良TJA培养基初始pH为7.0,在25℃培养48～60h时,菌体的生长状况和絮凝活性最好;Na+、K+对L1的絮凝活性有显著的增强作用,但对高温和胰蛋白酶敏感。     

副干酪乳杆菌对甘薯浆液中淀粉絮凝机理研究

为探讨酸浆法分离甘薯淀粉传统工艺中的淀粉沉降分离机理,进一步制备高效生物絮凝剂。本实验采用Zeta 电位测定、粒度分析及离子键检测研究副干酪乳杆菌对甘薯淀粉絮凝沉淀的作用。结果表明：絮凝过程基于“架桥”机理,淀粉颗粒与菌体间靠离子键结合,絮凝作用使悬浊液中淀粉平均粒径减小,密度增大,导致淀粉颗粒凝聚沉降;通过热处理和酶处理实验分析菌体起絮凝作用的活性成分组成,表明副干酪乳杆菌活性成分为蛋白类物质。     

副干酪乳杆菌Q-1-4的筛选鉴定及抗菌物质特性分析

为获得应用潜力较高的抗菌菌株,对内蒙古地区传统乳制品中分离的8株乳酸杆菌进行抗菌菌株筛选,获得了一株具有广谱抗菌活性的菌株(编号为Q-1-4)。经常规生理生化及分子生物学实验,鉴定该菌为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)。通过实验排除有机酸和过氧化氢干扰后,L.paracasei Q-1-4发酵离心后的无细胞发酵上清液(cell-free fermentation supernatant,CFS)对鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium CMCC50115仍具有抑制作用,且经蛋白酶处理后抗菌活性下降,说明L.paracasei Q-1-4所产抗菌物质中含有蛋白类物质。其在pH 2.0~5.5范围内对鼠伤寒沙门氏菌有抑制作用,且在此pH值范围内该抗菌物质对热稳定,对紫外线不敏感;与十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸共同作用效果好于单一作用,而其他的表面活性剂、有机溶剂、金属离子对其无明显影响;该抗菌物质具有一定的贮藏稳定性且抑菌谱较广。     

利用甘薯酸浆中分离的乳酸菌发酵薯汁酸奶的研究

以自然发酵甘薯酸浆中分离的乳酸菌L.paracasei subsp.paracasei L1发酵薯汁,研究利用 L.paracasei subsp.paracasei L1发酵薯汁生产薯汁酸奶的条件,开发出具有独特风味、良好保健作用和广阔市场前景的乳酸菌饮品.     

用于低脂干酪开发的附属发酵剂的筛选

目的筛选出生产低脂干酪所需添加较为适宜的附属发酵剂。方法选择7株乳酸菌作为研究对象,测定其总肽酶活力、菌株生产能力、产酸能力、产粘能力、菌体自溶度、产胞外多糖数量、蛋白质水解能力等7种指标。结果 7株乳酸菌中嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus,LA)总肽酶活力最高,为(256.46±11.88)μg/L,植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,LP)最低;菌株生长能力LA最好;菌株副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei,LPC)在发酵10 h后的产酸能力最强且趋于稳定,pH在3.8左右;LP菌株产粘能力最优,为(168.10±14.72)mPa·s;瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus,LH)菌株自溶度最好,达到35%;产胞外多糖数量最优菌株是LP,含量为(792.69±35.94)mg/L;LH的蛋白质水解能力最高,水解产生的游离氨基酸含量为(94.78±2.82)mg/L。结论 LH作为低脂干酪的附属发酵剂较好。     

一株假单胞菌的分离鉴定及其产絮凝剂絮凝特性的研究

目的:获得高效廉价的微生物絮凝剂。方法:利用常规筛选技术从宜州龙江河沿岸排污口污泥中分离筛选菌株,菌种鉴定是经形态观察、理化特性分析以及分子水平16S rDNA系统进化分析进行的;按照常规方法考察了絮凝剂在高岭土、活性炭及酵母悬浮液中的絮凝性能和影响絮凝性能的因素。结果:获得一株产絮凝剂的菌株L2019-2,该絮凝活性菌株鉴定为维罗纳假单胞菌(Pseudomonas veronii)。其产生的生物高分子絮凝剂在无机悬浮液和有机悬浮液中均具有絮凝活性。在高岭土悬浮液中,pH为5.0、温度为30 ℃、助凝剂为Fe3+时,絮凝剂的絮凝活性较高,絮凝率达98.30%。经化学组成分析,该絮凝剂为酸性糖蛋白。结论:L2019-2所产絮凝剂具有很好的絮凝性能,可为研究微生物絮凝剂提供良好的菌种资源,在污水处理中更具有很好的应用潜力。     

浓香型窖泥中高产细菌素乳酸菌的鉴定及特性

以双层琼脂扩散法从浓香型窖泥中筛选出1株(LP16)具有高抑菌活性的菌株,研究其代谢产物在窖泥中的作用。结果表明:经形态观察、生理生化试验和16S rRNA鉴定出菌株LP16为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei);其发酵上清液在排除有机酸、过氧化氢干扰后仍有明显抑菌效果,而经胰蛋白酶、蛋白酶K、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶处理后残余抑菌率分别为40.43%、43.48%、47.83%和51.30%,抑菌活性部分丧失,说明抑菌成分包含蛋白属性的细菌素;菌株LP16所产细菌素分别经高温、低pH(pH<5)、紫外线照射、表面活性剂处理均能保持抑菌活性,且在pH2~10范围内具有pH耐受性;抑菌谱较广,对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌以及部分乳酸菌有明显的抑制作用,但对霉菌和酵母菌无抑制作用。因此在浓香型白酒生产中该菌产生的细菌素不仅能抑制病原菌的生长,也能控制乳酸的过多生成。     

一株高产胞外多糖降血糖副干酪乳杆菌JY062(TD062)的黏附性与耐受性评价

以分离自西藏传统发酵乳制品中的副干酪乳杆菌JY062（原副干酪乳杆菌TD062）为试验菌株,测定此菌株的胞外多糖产量、对Caco-2细胞的黏附性以及对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,并分析测定其体外耐受性能。结果表明副干酪乳杆菌JY062的胞外多糖的产量为0.69 g/L,黏附性为91.2%,对α-葡萄糖苷酶的抑制率为57.36%。综合判定副干酪乳杆菌JY062为高产胞外多糖的菌株,此菌株黏附性能好,具有较高的α-葡萄糖苷酶抑制活性,说明该菌株可以利用其分泌的胞外多糖,提高黏附在宿主肠道的性能,进而发挥降血糖的功能活性。且该菌株具有较高水平的环境耐受能力,是一株具有广阔应用前景的潜在功能性益生菌。     

微生物絮凝剂产生菌的筛选及培养条件的研究

从活性污泥及污水中筛选出一株产絮凝剂的霉菌,该菌所产絮凝剂对高岭土的絮凝活性接近90％。该菌的培养实验表明,其适宜生长的碳源为葡萄糖或蔗糖,氮源为豆芽汁或马铃薯汁：适宜的初始pH值为6．0：生长与分泌絮凝剂的合适温度范围为30—35℃;受培养温度的影响,絮凝效果最好的培养时间在50—60h。     

分离自人体肠道的副干酪乳杆菌K56和ET-22的菌株鉴定

以婴儿和成人肠道来源的菌株K56和ET-22为研究对象,选取8株其他来源菌株作为参考,采用形态学、生理生化、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱、全基因组测序、多位点序列分型分析和单核苷酸多态性(single nucleotide polymophism, SNP)分析,建立了适用于菌株K56和ET-22的鉴定方法。结果表明,菌株K56和ET-22及参考菌株的基质辅助激光解吸/电离飞行时间鉴定比对值大于2,平均核苷酸一致性值(average nucleotide identity, ANI)达到95%以上,在种水平均鉴定为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei);对副干酪乳杆菌K56、ET-22和参考菌株的1 701个共有核心基因开展基于全基因组测序的多基因序列位点分析,菌株K56和ET-22可与其他参考菌株有效区分,SNP分析表明不同培养代数间副干酪乳杆菌K56的SNP差异为103、ET-22的SNP差异为49,系统发育分析表明该方法可以有效区分副干酪乳杆菌K56、ET-22与其他参考菌株。益生菌的安全性和功能性均在菌株水平具有特异性,已成为业内新的科学共识。该研究...     

Production of hard cheese from caprine milk by the use of two types of probiotic cultures as adjuncts

Hard cheeses (Kefalotyri-like) were manufactured from caprine milk with yoghurt as a starter (A), and with its partial replacement with the probiotic adjuncts Lactobacillus rhamnosus LC 705 (B) and/or Lactobacillus paracasei ssp. paracasei DC 412 (C). Both adjuncts retarded the growth of enterococci, and the environment in cheese B did not favour the recovery of lactic acid bacteria (LAB) on Rogosa agar. However, better recovery of the LAB population on M17 agar from cheeses B and C made with adjuncts was recorded early in ripening, and this was accompanied by a greater decrease in pH. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) of whole-cell protein demonstrated that cheese C, made with Lb. paracasei ssp. paracasei as adjunct, is a better vehicle for delivery of live probiotic cells (10 ⁷   cfu/g) to the gastrointestinal tract than cheese B, made with Lb. rhamnosus ; the latter did not belong to the predominant microflora of one out of the two B cheeses. Urea-PAGE electrophoresis results indicated that adjunct lactobacilli enhanced the degradation of both α _S -casein (α _S -CN) and β-casein (β-CN). In the fresh cheese, hydrolysis of α _S -CN was more rapid than β-CN, and the free amino acid content of B and C was higher than in A. Lipolysis products were also higher in B and C than in A as ripening progressed, and the organoleptic characteristics of these cheeses resulted in higher scores, in the order C > B > A. Thus, making Kefalotyri-like cheese from caprine milk with probiotic lactobacilli, particularly Lb. paracasei ssp. paracasei, as adjunct can be considered an effective way of producing a cheese with a large number of probiotic cells.     

副干酪乳杆菌X12抑制N-二甲基亚硝胺诱导IEC-6细胞损伤作用研究

目的 探究副干酪乳杆菌X12(Lactobacillus.paracaseisubsp.paracaseiX12)抑制N-二甲基亚硝胺(N-nltrosodimethylamine,NDMA)诱导IEC-6细胞(大鼠肠道黏膜细胞)毒性损伤作用。方法 通过胃液、肠液耐受性实验、扫描电镜法分析副干酪乳杆菌X12益生功能和菌株的形态;通过CCK-8实验对副干酪乳杆菌X12抑制NDMA诱导IEC-6细胞毒性作用进行分析。结果 胃肠道耐受性实验显示,副干酪乳杆菌X12可耐受胃肠液的消化,但对胆盐的耐受性略差;扫描电镜下副干酪乳杆菌X12菌体呈短而圆的杆状结构,无鞭毛;CCK-8实验结果显示,在MRS培养基中NDMA (0～80μg/mL)对副干酪乳杆菌X12的生长无显著影响(P>0.05);副干酪乳杆菌X12可抑制NDMA致大鼠肠道黏膜细胞IEC-6毒性的作用,且该作用与副干酪乳杆菌X12的剂量有关。结论 副干酪乳杆菌X12可抑制NDMA诱发的IEC-6细胞毒性损伤。     

Impact of native Lactobacillus paracasei subsp. paracasei and Pediococcus spp. as adjunct cultures on sensory quality of Iranian white brined cheese

Paired wild‐type cultures consisting of a Lactobacillus paracasei subsp. paracasei (three strains) or Pediococcus pentosaceus (one strain) and a Pediococcus inopinatus (five strains) were used as adjunct cultures in the production of Iranian white brined cheese. After 8 weeks of ripening, adjunct‐treated cheeses produced by L. paracasei subsp. paracasei and P. inopinatus received significantly higher scores for flavour/taste, aroma, texture and overall preference than those produced by P. pentosaceus and P. inopinatus as well as the control cheese (P < 0.05). In conclusion, a greater improvement of sensory quality of cheeses was strongly associated with the presence of L. paracasei subsp. paracasei rather than pediococci.     

副干酪乳杆菌诱导Caco-2细胞凋亡及其发酵乳贮藏品质的研究

以新疆马奶酒中自行分离得到的副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）M5L为对象,研究该菌株对结肠癌Caco-2细胞的抑制作用并分析发酵乳贮藏品质变化。结果表明,副干酪乳杆菌M5L可以在一定的盐浓度、胆盐浓度及酸性环境中较好的生长。当菌体以100∶1的感染系数作用于Caco-2细胞72 h后抑制率最佳;显微镜下观察活菌处理后的细胞发生明显的凋亡现象;流式细胞仪检测到副干酪乳杆菌M5L可以诱导Caco-2细胞内活性氧显著增加,并将细胞周期阻滞在合成期,且通过增大Caspase-3和Bax基因表达量,降低Bcl-2基因表达量来促进肿瘤细胞的凋亡。其发酵酸乳贮藏5 d时品质较佳,长时间的贮存会导致酸乳品质的劣变。     

副干酪乳杆菌在绿豆淀粉生产中的应用

为解决传统酸浆法生产绿豆淀粉存在的提取率和质量不稳定的问题,以从甘薯酸浆中分离出来的副干酪乳杆菌的发酵液代替传统的绿豆酸浆来分离绿豆淀粉。通过单因素和正交试验证明,影响副干酪乳杆菌作用效果的主要因素有pH值、温度、磨浆时的料液比和副干酪乳杆菌菌液添加量,各因素之间的显著程度依次为:磨浆时的料液比>温度>菌液添加量>pH值。最佳参数组合为菌液的添加量33%,pH值7.5,温度60℃,料液比1∶3。     

副干酪乳杆菌发酵废液的重复利用

以副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R8为研究对象,采用7.5 L及100 L发酵罐对其发酵废液的重复利用进行了初步研究。在7.5L罐上对副干酪乳杆菌发酵废液的可重复利用性进行了验证,并在100 L罐上进行了应用尝试。研究结果表明,副干酪乳杆菌R8的发酵废液可以重复利用1次,在100 L发酵规模下,废液的重复利用可以节约培养基成本8%,节约发酵液用水43%。     

副干酪乳杆菌乳酸脱氢酶的生物信息学分析

目的：分析和预测副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因及其编码蛋白的结构和特性,以指导其生物学功能的实验研究。方法：利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY)中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析的各种工具,结合其他生物信息学分析软件,如ClustalX、VMD,从数据库中得到乳酸脱氢酶基因,分析、预测该基因编码的蛋白理化性质、翻译后的修饰位点、拓扑结构、二级结构、三级结构和功能域。并与其他微生物的乳酸脱氢酶蛋白序列进行比对,得出它们的保守序列。结果：该基因编码335个氨基酸,其蛋白理论分子质量为36608.8u,预测该蛋白有3个跨膜区。与干酪乳杆菌的乳酸脱氢酶进化关系最近。结论：应用生物信息方法可预测得到副干酪乳杆菌的乳酸脱氢酶的结构与功能方面的信息。     

凝固型绵羊奶酸奶的发酵特性及活菌数变化

研究凝固型的绵羊奶与牛奶酸奶发酵特性和贮存期特性,利用pH计、酸度滴定、质构仪、电子舌、活菌计数及感官评价对其pH值、滴定酸度、质构特性、味觉特点、活菌数和感官评分进行分析。结果表明：在发酵过程中绵羊奶与牛奶有相同的pH值变化规律,即前2.5 h下降非常缓慢,之后迅速下降,在凝乳前0.5 h下降变缓直到凝乳结束,达到发酵终点的时间分别为5 h和4.5 h;在4 ℃贮存0～24 d期间,酸奶的pH值都在逐渐下降,牛奶酸奶比绵羊奶酸奶下降更大;滴定酸度方面起始时绵羊奶比牛奶高,达到发酵终点时也明显高于牛奶;质构测定结果为YSM（添加益生菌干酪-张发酵的凝固型绵羊奶酸奶）、JDM（嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌共同发酵的经典凝固型绵羊奶酸奶）具有更高的硬度和稠度,黏聚性和黏性指数也显著高于JDN（嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌共同发酵的经典凝固型牛奶酸奶）,奶的种类为影响酸奶硬度、稠度、黏聚性和黏性指数的主要因素,益生菌干酪-张的添加对这些指标的影响很小;电子舌测定结果为丰富性味感值绵羊奶酸奶明显高于牛奶酸奶,酸感值则低于牛奶酸奶,甜、苦、咸、涩、鲜感值差异不明显;感官评价方面绵羊奶酸奶综合评分高于牛奶酸奶,差异性主要体现在滋味、组织状态和喜爱程度上,在色泽和气味方差异不明显;在4 ℃、21 d贮存期间酸奶的活菌数都在逐渐降低,添加益生菌干酪-张的绵羊奶酸奶活菌数最多,第21天时活菌数分别是普通绵羊奶酸奶和牛奶酸奶的10 倍和100 倍以上,干酪-张对绵羊奶酸奶4 ℃贮存期间活菌数的维持有较好作用。同时,实验结果表明：益生菌干酪-张可以作为发酵剂之一与经典的酸奶发酵剂嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌搭配用于凝固型绵羊奶酸奶的制作,以增加其功能价值。