去卵巢后大鼠基底前脑NOS阳性神经元的变化及雌激素的作用

目的　研究基底前脑NOS阳性神经元在大鼠去卵巢之后的时程变化 ,为雌激素类药物替代防治绝经后老年性痴呆提供理论依据。方法　将 6 9只 3月龄雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢对照组及雌激素替代治疗组 ,各 2 3只 ,分别在术后 3d、1周、2周、4周、8周处死 ,脑切片用NADPH d组化方法染色 ,观察并和计数基底前脑各区NOS阳性神经元 ,并进行统计分析。结果　各组大鼠基底前脑各区NOS阳性神经元数目在去卵巢后先上升 ,2周时达到高峰 ,以后假手术组及雌激素替代组NOS阳性神经元数目逐渐下降 ,8周时达正常水平。去卵巢对照组斜角带核水平支及垂直支NOS阳性神经元数目却保持较高水平 ,在 8周时与假手术组及雌激素替代治疗组之间差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　去卵巢后基底前脑NOS阳性神经元表达增加 ,而雌激素替代治疗对其有保护作用。     

植物雌激素对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响

目的：观察植物雌激素对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元表达的影响，探讨植物雌激素在中枢神经系统的保护作用及机制。方法：采用乙酰胆碱转移酶(ChAT)免疫组织化学ABC法，观察去卵巢大鼠5w后各组基底前脑内侧隔核(MS)，斜角带垂直支(VDB)胆碱能神经元的数目。结果：与去卵巢对照组相比，植物雌激素用药组、雌激素用药组的内侧隔核，斜角带垂直支胆碱能神经元数目明显升高(P＜0．05)，与假手术组差别不明显。结论：本研究提示植物雌激素能明显增加去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元的表达，从而对中枢神经系统退行性病变起保护作用，并有望预防和治疗老年性痴呆。     

脑室内注射BDNF抗体对大鼠海马NOS表达的影响

探讨脑室内注射脑源性神经营养因子 (BDNF)抗体阻断内源性BDNF对大鼠海马一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元的影响。脑室内注射BDNF抗体一周后 ,采用Morris水迷宫进行行为检测 ;并用NADPH 黄递酶组化染色方法观察海马NOS阳性神经元数目的变化。与对照组相比 ,实验组大鼠空间学习和记忆能力明显下降 (P <0 0 1) ;实验组大鼠海马CA1区NOS阳性神经元数目 (38 37± 5 2 3)明显少于对照组 (4 9 5 3± 5 74 ) (P <0 0 1) ;实验组DG区NOS阳性神经元数目 (4 8 77± 5 5 1)明显少于对照组 (6 0 4 0± 7 39) (P <0 0 1)。脑室内注射BDNF抗体可导致大鼠空间学习记忆能力下降 ,海马NOS阳性神经元数目减少 ,提示BDNF对学习和记忆的影响可能与海马NOS阳性神经元数目的变化有关     

植物雌激素对去卵巢大鼠海马神经元线粒体超微结构的保护作用

采用去卵巢(OVX)SD大鼠模拟女性绝经后神经元的退变来观察雌激素、植物雌激素对海马神经元线粒体的保护作用。雌性SD大鼠分为5组:(1)正常对照组;(2)去卵巢对照组;(3)雌激素治疗组;(4)金雀异黄酮治疗组;(5)依普拉芬治疗组,并于术后12d取材进行超微结构观察和体视学定量分析。结果显示:(1)去卵巢后海马神经元的线粒体肿胀明显,嵴断裂明显,空泡化显著;3个治疗组细胞和线粒体相对于去卵巢对照组均有明显改善;(2)与去卵巢对照组相比较,3个治疗组线粒体的体积密度(Vv)、平均直径(D)、平均表面积(S)明显减小(P<0.05);3个治疗组的比表面(δ)、数密度(Nv)和粒子分散度(Cλz)较去卵巢对照组明显增大(P<0.05)。以上结果表明:雌激素和植物雌激素对去卵巢后大鼠的海马神经元线粒体具有保护作用。本研究结果为雌激素和植物雌激素以线粒体为靶点防治女性更年期后神经元的退变及老年性痴呆可能的作用机制提供了一定的形态学资料。     

雌激素对去卵巢大鼠基底前脑胆碱能神经元及一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的　探讨雌激素补充治疗对去卵巢大鼠胆碱能神经元及一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元表达的影响及剂量效应关系。方法　 2 0只去卵巢SD大鼠分成 4个不同剂量组 :0 μg(对照组 )、2 0 μg(0 0 8mg/kg)、5 0 μg(0 2 0mg/kg)、10 0 μg(0 4 0mg/kg)组 ;1周后 ,用乙酰胆碱转移酶 (ChAT)免疫化学方法及尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶 (NADPH d)组织化学方法研究。结果　NOS阳性神经元在内侧隔核 (MS) ,其数目在各组间无明显差异 (P >0 0 5 )。在斜角带垂直支 (VDB) ,5 0 μg剂量组与对照组相比有明显差异 (P <0 0 5 ) ;ChAT阳性神经元在内侧隔核 (MS) ,其 2 0 μg、5 0 μg剂量组数目出现剂量递增效应 ,与对照组比较有明显差异 (P <0 0 5 ) ,但 10 0 μg剂量组与对照组比较没有明显差异 (P >0 0 5 ) ,同时 5 0 μg与 10 0 μg剂量组比较有明显差异 (P <0 0 5 )。ChAT阳性神经元在斜角带水平支 (HDB) ,各组间均无明显差异 (P >0 0 5 )。结论　雌激素补充治疗能选择性影响基底前脑各亚区NOS和胆碱能神经元 ,并有可能影响学习和记忆能力。     

β-淀粉样蛋白诱导大鼠行为学改变及星形胶质细胞变化

为了探讨不同剂量β-淀粉样蛋白 2 5 -3 5片段 ( Aβ2 5- 35)诱导老年性痴呆 ( AD)大鼠动物模型中星形胶质细胞变化与大鼠行为学改变之间的关系 ,在大鼠双侧海马内注射不同剂量 Aβ2 5- 35( 2 .5、5、10和 2 0 μg)制作大鼠 AD模型 ,注射一周后采用胶质原纤维酸性蛋白 ( GFAP)免疫组化染色、NOS组化染色及 NOS组化和 GFAP双重染色分析大鼠海马 GFAP与 NOS的表达。结果发现海马内注射 Aβ2 5- 35剂量≥ 10 μg时 ,模型组大鼠出现学习记忆减退 ,海马星形胶质细胞增生、肥大 ,数目明显多于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;海马 NOS阳性神经元数较对照组显著减少 ( P<0 .0 5 ) ;并出现 NOS阳性星形胶质细胞。结论 :星形胶质细胞参与Aβ神经毒性导致 NOS阳性神经元损伤 ,间接导致大鼠学习记忆能力下降 ,在 AD模型大鼠早期学习记忆功能减退中起重要作用     

去卵巢后雌性大鼠下丘脑视前区NOS阳性神经元形态学和突触素表达的变化

目的：为解释围绝经期的精神、神经症状提供实验依据。方法：采用免疫细胞化学方法显示去卵巢雌性大鼠下丘脑视前内侧区(MPA)和视前外侧区(LPA)内NOS阳性神经元，形态学改变以及突触素表达。结果：(1)去卵巢组和对照组大鼠的视前内、外区内可见大量NOS阳性神经元；(2)去卵巢动物的下丘脑内NOS阳性神经元突起长度比对照组的明显变短，分支明显变少；(3)去卵巢组动物下丘脑内突触素表达比对照组的明显减少。结论：大鼠去卵巢后，由于雌激素分泌减少，导致了NOS阳性神经元的突起减少和突触减少，结果NO介导的神经元信号传导失常，这些变化可能是引发围绝经期的精神、神经症状的原因之一。     

雌激素对SAMP8小鼠学习记忆及海马CA1区神经元的影响

目的 观察雌激素对SAMP8鼠学习记忆及海马神经元的影响. 方法 将6月龄SAMP8鼠45只分为假手术组(sham组)、去卵巢组(OVX组)和去卵巢+雌激素组(OVX+E组)3组,并用同龄正常老化SAMR1小鼠作为同源对照组.采用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,苏木素-伊红染色和免疫组织化学显示海马CA1区神经元及神经型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元的变化,流式细胞术检测其nNOS的表达量. 结果 OVX组与sham组相比,逃避潜伏期明显延长(P<0.05),跨越平台次数显著减少(P<0.05).雌激素补充治疗能改善学习记忆能力,与sham组比较差异无统计学意义(P>0.05);OVX组海马CA1区神经元病变严重,且CA1区nNOS阳性神经元的数量、吸光度和海马nNOS荧光指数(FI)值均低于sham组(P<0.05);给予雌激素后,OVX+E组各项实验结果与OVX组相比差异有统计学意义(P<0.05),与sham组相比,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 雌激素能够改善小鼠的学习记忆能力,有效保护海马CA1区的神经元,提高海马CA1区nNOS阳性神经元的表达.     

大鼠海马和颞叶一氧化氮合酶阳性神经元在学习记忆时的表达

目的　对获得空间辨别性学习记忆大鼠的海马结构和颞叶皮质内一氧化氮合酶 (NOS)免疫阳性神经元系统的观察 ,为一氧化氮 (NO)在学习记忆活动中的作用提供形态学依据。方法　以经水迷宫训练获得空间辨别性学习记忆的大鼠为模型组 ,建立游水对照组和空白对照组。用免疫组化的方法观察 3组大鼠海马和颞叶的NOS阳性神经元的形态学特征及测定免疫反应阳性产物的光密度值 (OD )。结果　 (1)NOS阳性神经元在 3组大鼠海马和颞叶呈散在分布。在海马CA1、CA2、CA3、CA4及龄状回 (DG)都有少量分布 ,颞叶以Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ层分布为主。神经元胞体形态有锥体形 ,圆形或椭圆形 ,梭形3种。 (2 )模型组大鼠海马和颞叶皮质NOS阳性神经元较对照组明显增多。 (3)其免疫反应阳性产物的OD值也较对照组明显增大。结论　NOS阳性神经元形态发生了可塑性变化 ,参与了学习记忆     

外源性雌激素对去势后大鼠下丘脑视上核一氧化氮合酶阳性神经元分布的影响

目的观察外源性雌激素对去势后雌性大鼠下丘脑视上核(SON)一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元分布的影响。方法选用2～3月龄、健康未交配的雌性大鼠40只;动物分组如下:对照组大鼠20只,分为正常对照组(n=10)和实验对照组(卵巢切除术后,n=10)。实验组(即卵巢切除术后肌肉注射雌激素组)20只,造模成功后,分别于术后40d(即给药一个月)和术后70d(即给药两个月)陆续灌注取材。采用SABC法在光学显微镜下对下丘脑视上核内NOS阳性神经元进行形态学观察和细胞计数,采用图像分析系统测定NOS阳性神经元内免疫反应产物的平均灰度值。结果卵巢切除术后对照组大鼠下丘脑视上核NOS阳性神经元的密度明显增高,细胞比正常对照组有所增大(P0.05)。去势后补充雌激素1个月组的大鼠与正常对照组和卵巢切除组相比较,视上核内NOS阳性神经元的密度及形态均无明显改变(P0.05)。去势后补充雌激素两个月组与实验对照组相比较,无论NOS阳性神经元的密度还是阳性神经元胞体的大小均显著下降(P0.05),细胞着色变浅。结论外源性雌激素可能影响去势雌性大鼠下丘脑视上核NOS阳性神经元的分布和表达。     

石菖蒲不同药效部位改善阿尔茨海默病模型小鼠的认知功能

目的: 探讨石菖蒲不同药效部位改善阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)模型小鼠认知功能的机制。方法: 雄性NIH小鼠,采用双侧海马CA1内注射淀粉样β蛋白(Aβ_1-42,2 g/L,每侧2 μL)制备AD小鼠动物模型,并以生理盐水模拟注射和不注射的正常组小鼠为对照。通过水迷宫测试,筛选出与两对照组均有显著差异的认知障碍小鼠,留作AD动物模型。AD动物模型又随机分为生理盐水灌胃组、石菖蒲水煎液灌胃组、石菖蒲去油水煎液灌胃组和石菖蒲挥发油灌胃组。每组6只,共4组。以生理盐水灌胃组为对照,石菖蒲不同药效部位灌胃组每天对应灌胃1次(0.2 g 石菖蒲/10 g体重),连续3周。灌胃结束,Morris水迷宫检测小鼠的空间学习记忆能力,测定小鼠大脑和海马中一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)活性,免疫组织化学方法检测脑中NOS的表达。结果: 水迷宫测试结果表明,石菖蒲不同药效部位(水煎液和挥发油)灌胃2组模型小鼠与生理盐水灌胃组小鼠相比,60 s内跨越平台的次数和在目标象限的探索时间均明显增加(P<0.05);大脑和海马内NOS活性检测显示,石菖蒲不同药效部位灌胃3组AD模型小鼠和其对照组相比,大脑和海马内NOS活性下降,NOS阳性神经元数量明显减少(P<0.05)。结论: 石菖蒲不同药效部位能显著改善Aβ_1-42致AD模型小鼠的学习记忆能力,其疗效可能与降低大脑和海马中的NOS活性有关。     

咯利普兰对局灶性脑缺血-再灌注损伤大鼠学习记忆及海马PDE4活性的影响

目的： 观察咯利普兰对局灶性脑缺血-再灌注损伤大鼠学习记忆能力及海马PDE4活性的影响。方法: 采用线栓法阻断大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血-再灌注损伤模型，将大鼠随机分成假手术组、模型组和咯利普兰治疗组 （1 mg·kg-1），术后6 h腹腔注射首次给药，连续2周。通过水迷宫和避暗实验测试其学习记忆水平，且应用高效液相法（HPLC）检测大鼠海马组织PDE4活性。结果: 水迷宫测试中，与假手术组相比，模型组的寻台时间和游泳距离显著增加（P<0.05），与模型组比较，咯利普兰治疗组寻台时间和游泳距离显著缩短（P<0.05）；在避暗测试中，模型组的平均潜伏期比假手术组显著减少（P<0.01），错误次数显著增加（P<0.05），与模型组比较，咯利普兰治疗组的平均潜伏期显著增加（P<0.05），错误次数也明显减低；HPLC检测结果显示：模型组大鼠海马组织PDE4活性显著升高（P<0.01）；咯利普兰组大鼠海马组织PDE4活性明显降低（P<0.05）。结论: 咯利普兰能降低局灶性脑缺血-再灌注损伤大鼠海马PDE4活性，并减弱局灶性脑缺血-再灌注大鼠的学习记忆功能障碍。     

银杏叶提取物对拟血管性痴呆大鼠海马CA1区的保护作用

为了观察银杏叶提取物(EGb761)对拟血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马CA1区神经细胞的保护作用,本研究通过反复夹闭再通大鼠双侧颈总动脉,同时腹膜腔内注射硝普钠制作拟血管性痴呆大鼠模型,选出造模成功者随机分为模型组及用药组,各为30只。另以条件匹配的30只大鼠为假手术组。采用Morris水迷宫和尼氏染色方法分别观察大鼠空间学习记忆能力及海马CA1区细胞形态学改变和细胞数目。结果显示:模型组大鼠在1、2和4月不同时间点测得的Morris水迷宫逃避潜伏期(EL)均较假手术组明显延长(P<0.01),药物组EL均显著短于模型组,但仍长于假手术组(P<0.05或P<0.01);各时间点模型组海马CA1区锥体细胞及其树突丢失,但药物组锥体细胞数多于模型组。上述结果说明EGb761对海马CA1区的保护作用可能是其改善VD大鼠学习记忆障碍的重要机制。     

细叶远志皂苷对阿尔茨海默病大鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白1水平的影响

目的探讨细叶远志皂苷(TEN)对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)水平的影响。方法 60只SD大鼠随机分组,采用脑立体定位技术将β-淀粉样蛋白(Aβ)1~40注入大鼠右侧海马CA1区制备AD模型并给予细叶远志皂苷治疗4周。术后分别采用Morris水迷宫、Real-time PCR和Western blotting检测大鼠学习记忆能力及海马内LRP1 mRNA及蛋白的表达变化,并行免疫荧光检测海马区LRP1阳性神经元的变化。结果 1.Morris水迷宫:模型组大鼠学习记忆能力较正常组相比明显降低(P0.01),经TEN灌胃治疗后,TEN各剂量组逃逸潜伏期均不同程度缩短、游泳路程缩小、穿越虚拟平台次数增加,中、高剂量组差异具有统计学意义(P0.05,P0.01);2.Real-time PCR和Western blotting:模型组LRP1mRNA和蛋白的相对表达量均明显低于正常对照组(P0.01),给予TEN治疗后,治疗组LRP1mRNA和蛋白相对表达量随着TEN给药剂量的增加逐步升高,低剂量组差异不明显(P0.05),中、高剂量组与模型组之间的差异有统计学意义(P0.01);3.免疫荧光检测结果显示,海马区模型组LRP1阳性细胞明显减少,与正常组差异有统计学意义(P0.01);高剂量组LRP1阳性细胞数量增加明显,与正常组差异没有统计学意义(P0.05)。结论细叶远志皂苷可能通过提高脑内LRP1的含量,从而改善Aβ1~40诱导的AD大鼠的学习记忆能力。     

抗衰益智方Ⅰ对小鼠学习记忆能力以及海马胆碱乙酰转移酶表达的影响

目的：观察抗衰益智方Ⅰ（KYFⅠ）对正常小鼠学习记忆能力和中枢胆碱乙酰转移酶表达的影响。方法:各组小鼠除正常对照组灌服双蒸水外,中药组(分为低、中、高剂量组）灌服相应剂量KYFⅠ,连续灌胃40 d。从第35 d起灌胃结束后进行Morris水迷宫测试,连续5 d。水迷宫测试结束后检测小鼠海马组织胆碱乙酰转移酶（ChAT）和乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性,并分别用免疫组化和Western blotting方法观察小鼠海马ChAT阳性神经元的数量变化以及ChAT蛋白的表达。结果:与对照组比较,KYFⅠ高剂量组小鼠水迷宫学习成绩较好;同时,KYFⅠ高剂量组小鼠海马组织内ChAT活性明显增高,AChE活力降低;免疫组化和Western blotting结果显示KYFⅠ高剂量组小鼠海马CA1区ChAT阳性神经元数量增加,ChAT蛋白表达升高。结论:高剂量KYFⅠ可以提高正常小鼠学习记忆能力,其机制可能与KYFⅠ抑制小鼠海马组织AChE活性,提高ChAT活性、升高ChAT蛋白的表达,从而促进脑内乙酰胆碱（ACh）的合成有关。     

灵芝孢子油与深海鱼油联合应用对小鼠学习记忆及海马神经元表达NOS的影响

目的探讨灵芝孢子油与深海鱼油联合应用对小鼠学习记忆及海马神经元表达NOS的影响。方法将受孕小鼠随机分为4组,自受孕第1天起分别胃饲生理盐水、灵芝孢子油、深海鱼油和灵芝孢子油加深海鱼油。在母鼠分娩21d后改为胃饲其幼鼠,然后将出生后45d的幼鼠处死。处死前进行Morris水迷宫行为学测试,处死后应用酶组织化学法检测海马神经元NOS的表达。结果在Morris水迷宫检测中,灵芝孢子油组、深海鱼油组和灵芝孢子油加深海鱼油组小鼠的逃逸潜伏期明显缩短。灵芝孢子油组和灵芝孢子油加深海鱼油组的小鼠平台象限游泳距离有增加。灵芝孢子油加深海鱼油组的小鼠大脑海马NOS阳性神经元与其它组的小鼠比较有显著性增加。结论灵芝孢子油和深海鱼油联合应用能够促进小鼠学习记忆能力及其大脑海马神经元表达NOS。