刺老苞根皮水提物对成骨细胞TGF-β/BMPs信号通路的影响

目的 研究刺老苞根皮水提物对成骨细胞TGF-β/BMPs信号通路的影响。方法 建立大鼠骨折模型,随机分为模型组,刺老苞根皮水提物低、中、高剂量（3.6、1.8、0.9 g/kg）组,ig给药7 d后腹主动脉取血,分离血清;培养大鼠原代成骨细胞,经碱性磷酸酶染色、茜素红染色鉴定合格后,分别以对应组别的动物血清连续培养48 h,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blotting技术分别检测各组细胞中骨形态发生蛋白质-2（BMP-2）、转化生长因子-β（TGF-β）、Smad家族相关蛋白1、2（Smad-1、Smad-2）mRNA和蛋白表达。结果 与模型组比较,刺老苞根皮水提物不同浓度的含药血清组BMP-2、TGF-β、Smad-1 mRNA表达均显著升高（P<0.05、0.01）,中、高剂量含药血清组Smad-2 mRNA表达显著升高（P<0.05）;低、中、高剂量含药血清组的BMP-2、TGF-β、Smad-1、Smad-2蛋白表达均显著升高（P<0.05）。结论 刺老苞根皮水提物通过上调TGF-β/BMPs信号传导通路中的BMP-2、TGF-β、Smad-1、Smad-2表达,促进成骨细胞增殖。     

淫羊藿苷介导PI3K/Akt信号通路干预大鼠早期激素性股骨头坏死的研究

目的 探讨淫羊藿苷调控磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路干预大鼠早期激素性股骨头坏死的作用机制。方法 50只SD大鼠随机分为对照组、模型组和淫羊藿苷10、20、40mg/kg组,每组10只。除对照组外,其余各组ip脂多糖和im甲泼尼龙制备激素性股骨头坏死大鼠模型。淫羊藿苷组大鼠分别ig10、20、40mg/kg的淫羊藿苷,对照组、模型组均ig等量生理盐水,每天1次,连续6周。采用Micro-CT评估造模是否成功并分析骨密度（BMD）、骨体积密度（BV/TV）、骨表面积密度（BS/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁分离度（Tb.Sp）;ELISA法检测血清中血管内皮生长因子（VEGF）、一氧化氮（NO）水平;Western blotting法检测股骨头PI3K、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白的表达。结果 与对照组比较,模型组BMD、Tb.Th、BV/TV、Tb.N、BS/TV、VEGF和NO水平明显降低,Tb.Sp明显增高（P＜0.05）;与模型组比较,淫羊藿苷组的BMD、Tb.N、BV/TV、Tb.Th、BS/TV、VEGF和NO水平明显增高,Tb.Sp明显降低（P＜0.05）。与对照组比较,模型组PI3K和p-Akt蛋白表达均减少（P＜0.05）;与模型组比较,淫羊藿苷组PI3K和p-Akt蛋白表达均增加（P＜0.05）。结论 淫羊藿苷能够有效缓解激素性股骨头坏死的进展,其机制可能与调节血清中VEGF、NO水平和增加骨组织中PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达有关,从而诱导血管修复与新生,促进骨形成和愈合。     

组分配伍四逆汤抑制ERK/cPLA2信号通路改善大鼠膜性肾病

目的 研究组分配伍四逆汤对大鼠膜性肾病的治疗作用及机制。方法 将45只雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组和组分配伍四逆汤组,除对照组外,其余各组尾iv兔抗大鼠Fx1A抗血清制备大鼠膜性肾病模型。造模成功后,组分配伍四逆汤组大鼠ig 9.6 g/kg组分配伍四逆汤,模型组和对照组ig等量蒸馏水,连续给药12周。试剂盒法检测大鼠血清中肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）以及白蛋白（Alb）含量;取肾脏检测肾指数,苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织的病理情况;ELISA法检测肾组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）、纤维连接蛋白（FN）以及IV型胶原（Col-IV）含量;采用Western blotting法检测肾脏中ERK1/2和胞浆型磷脂酶（cPLA2）蛋白磷酸化水平。结果 与对照组比较,模型组血清中Scr、BUN水平以及肾指数明显升高（P<0.05、0.01）,血清Alb水平明显降低（P<0.01）,肾组织中TGF-β1、FN和Col-IV含量以及ERK1/2、cPLA2磷酸化蛋白表达均显著升高（P<0.05、0.01）;与模型组比较,组分配伍四逆汤显著降低血清中Scr、BUN水平以及肾指数（P<0.05、0.01）,升高血清中Alb水平（P<0.01）,降低肾组织中TGF-β1、FN、Col-IV含量,减少肾组织中ERK1/2和cPLA2磷酸化蛋白表达（P<0.05、0.01）;HE染色结果显示,组分配伍四逆汤可以改善膜性肾病大鼠肾脏的病理变化。结论 组分配伍四逆汤对膜性肾病大鼠发挥明显治疗作用,其作用机制可能与抑制ERK/cPLA2信号通路激活相关。     

BMP-2 TGF-β1和VEGF在骨性关节炎滑膜组织中的表达

目的 探讨骨形成蛋白-2（BMP-2）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）和血管内皮生长因子（VEGF）在人膝关节骨性关节炎（OA）各期滑膜组织中的表达及作用。方法 收集2012~2014年内蒙古自治区人民医院骨关节科原发性膝关节OA患者滑膜组织标本,男性35例,女性45例,作为试验组,根据Kellgren-Lawrence（K-L）分级标准将试验组分为OA1组（10例,K-LⅠ级）、OA2组（16例,K-LⅡ级）、OA3组（28例,K-LⅢ级）、OA4组（26例,K-LⅣ级）。另选取4例正常膝关节滑膜作为对照组。采用免疫组织化学法观察BMP-2、TGF-β₁和VEGF在各组滑膜中的表达情况。结果 与对照组各细胞因子的表达（BMP-2：0.087±0.015,TGF-β₁：0.103±0.018,VEGF：0.095±0.017）比较,试验组4组滑膜中BMP-2、TGF-β₁和VEGF表达率（OA1组,BMP-2：0.112±0.022,TGF-β₁：0.173±0.019,VEGF：0.135±0.008;OA2组,BMP-2：0.214±0.012,TGF-β₁：0.288±0.03,VEGF：0.271±0.021;OA3组,BMP-2：0.298±0.030,TGF-β₁：0.416±0.032,VEGF：0.368±0.025;OA4组,BMP-2：0.330±0.024,TGF-β₁：0.471±0.020,VEGF：0.300±0.033）增高（P<0.05）。OA1、OA2、OA3、OA4各组滑膜中BMP-2、TGF-β₁和VEGF表达水平依次递增,且差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 滑膜中高表达的BMP-2、TGF-β₁和VEGF可能是OA的病理进程中的重要因素之一。     

全反式维甲酸对兔颈动脉粥样硬化斑块中TGF-β1、IL-10、MMP-2和MMP-9表达的影响

目的 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法探索全反式维甲酸（ATRA）对兔颈动脉粥样硬化斑块组织炎症因子表达的影响。方法 选取24只纯种雄性新西兰白兔随机分为对照组、模型组、ATRA组。对照组给予基础饲料、其余两组给予高脂饲料，共饲养12周。饲养4周后，ATRA组ig 5 mg/kg的ATRA，模型组和对照组ig等量溶剂，每天1次，至12周末处死各组动物。取颈动脉粥样硬化斑块组织，进行HE染色，显微镜下观察管壁结构；提取组织RNA，qRT-PCR法测定组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-10（IL-10）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9） mRNA的相对表达量。结果 模型组可见典型的AS斑块，可见薄层的纤维帽及大的脂质核心，以及大量炎症细胞浸润，内弹力纤维膜断裂；ATRA组内皮细胞形态基本完整，可见少量炎性细胞浸润。与对照组比较，模型组中TGF-β1和IL-10 mRNA的相对表达量明显降低（P<0.05），而MMP-2和MMP-9 mRNA的相对表达量明显升高（P<0.05）；与模型组比较，ATRA组的TGF-β1和IL-10 mRNA的相对表达量明显升高（P<0.05），MMP-2和MMP-9 mRNA的相对表达量明显降低（P<0.05）。结论 ATRA可通过调节炎症因子的表达抗动脉粥样硬化。     

鼻咽清颗粒对鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的放疗增敏作用及机制研究

目的 体内考察鼻咽清颗粒对人鼻咽癌细胞（CNE-2）裸鼠种植瘤的放疗增敏作用并对其可能机制进行初步探索。方法 建立CNE-2细胞的裸鼠种植瘤模型,取荷瘤成功裸鼠30只,随机分成5组,分别为模型组,鼻咽清颗粒低、高剂量（生药剂量5.2、10.4 g/kg）组,放疗组,鼻咽清颗粒（生药剂量5.2 g/kg）+放疗组,每天2次ig给药;放疗照射剂量为4 GY,隔日1次,连续2周。给药期间每5天测量肿瘤体积,至给药30 d处死,取瘤组织,称质量并计算抑瘤率;免疫组化检测P53、Bcl-2蛋白表达。结果 与模型组比较,各治疗组均对移植瘤体积、质量发挥显著抑制作用（P<0.05、0.01）;鼻咽清颗粒+放疗组瘤体积、质量均显著低于放疗组（P<0.05、0.01）。免疫组化结果提示,与模型组比较,各治疗组移植瘤组织中P53、Bcl-2蛋白表达阳性细胞率均显著降低（P<0.05、0.01）;与放疗组比较,鼻咽清颗粒+放疗组P53、Bcl-2蛋白表达阳性细胞率显著降低（P<0.01）。结论 鼻咽清颗粒抑制鼻咽癌的生长且具有放疗增敏作用,可能与同时抑制突变性P53和Bcl-2蛋白表达相关。     

载骨碎补总黄酮磷酸钙骨水泥对骨缺损模型大鼠诱导膜中成骨细胞分化的影响及其机制研究

目的:探究载骨碎补总黄酮磷酸钙骨水泥对骨缺损模型大鼠诱导膜成骨分化的作用及其机制。方法:分别以磷酸钙骨水泥(CPC)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)骨水泥为载体,以强骨胶囊内容物(有效成分为骨碎补总黄酮)制备载药CPC和载药PMMA骨水泥。选取64只雄性SD大鼠,随机分为载药CPC组、载药PMMA骨水泥组、未载药CPC组、未载药PMMA骨水泥组,每组16只。分离大鼠股骨并行截骨,以制备骨缺损模型,然后分别植入相应骨水泥。造模4周后,各组大鼠切开并保护好诱导膜,取出骨水泥,植入自体松质骨。于造模后第4周对大鼠后肢骨进行X射线拍片;于造模后第4周和植骨后第6周时分别取大鼠骨缺损区诱导膜和新生骨,采用苏木精-伊红染色法观察诱导膜组织形态学,并测定新生骨组织的骨小梁宽度及成骨细胞数;采用免疫组化法检测诱导膜中人骨成型蛋白2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达水平;采用Western blotting法检测新生骨组织中Smad1、Smad4、Smad7的蛋白表达水平。结果:与其余3组比较,载药CPC组大鼠骨缺损区的骨水泥降解更明显,且可见诱导膜组织形成,骨缺损区域更小;诱导膜中毛细血管内皮细胞丰富、排列有序;新生骨组织中骨小梁宽度及成骨细胞数均显著增加(P<0.05);诱导膜中BMP-2、VEGF的蛋白表达水平和新生骨组织中Smad1、Smad4、Smad7的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论:载骨碎补总黄酮CPC具有促进骨缺损模型大鼠诱导膜成骨的作用。这可能是通过激活BMP-2/Smad通路,从而调节成骨细胞分化;同时通过提高VEGF表达,促进血管内皮细胞分化,加快形成毛细血管网,从而促进骨愈合。     

栀子苷介导GLP-1R/Akt信号通路改善大鼠脑缺血再灌注损伤和神经元凋亡的研究

目的 观察栀子苷对脑缺血再灌注损伤（CIRI）模型大鼠的神经保护作用及对胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）/蛋白激酶B（Akt）信号通路的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,栀子苷低、高剂量组及尼莫地平片组,每组10只。采用线栓法制备CIRI大鼠模型,缺血2 h再灌注24 h后,栀子苷低、高剂量组大鼠分别ig给予10、40 mg·kg^-1的栀子苷,尼莫地平片组大鼠ig给予8.1 mg·kg^-1尼莫地平,假手术组和模型组大鼠ig等体积生理盐水,每天1次,连续7 d。造模后及给药结束后,分别对各组大鼠进行神经功能缺损评分;给药结束后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）及白细胞介素-6（IL-6）水平,苏木素-伊红（HE）染色检测脑组织病理学变化,尼氏染色检测神经元与尼氏小体变化,免疫组化染色检测脑组织B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2关联X蛋白（Bax）表达,蛋白质印迹法（Western blotting）检测脑组织细胞色素C（Cyt-C）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）、胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）及磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高（P＜0.05）,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高（P＜0.05）;皮质细胞间质疏松、增宽,有大量神经元细胞质萎缩和细胞核损伤;脑神经元皱缩,尼氏小体变小,数目明显减少。大鼠脑组织Bcl-2表达显著降低（P＜0.05）,Bax表达显著升高（P＜0.05）;脑组织中Cyt-C、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,GLP-1R和p-Akt蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与模型组比较,栀子苷高剂量组和尼莫地平片组大鼠神经功能缺损评分均显著降低（P＜0.05）,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低（P＜0.05）,皮质细胞较为整齐,神经元细胞和尼氏小体损伤减小,Bcl-2表达显著升高（P＜0.05）,Bax表达显著降低（P＜0.05）,同时,Cyt-C、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降（P＜0.05）,GLP-1R和p-Akt蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。结论 栀子苷能够改善大鼠CIRI,减少神经元凋亡,其作用机制可能与激活GLP-1R/Akt信号通路有关。     

穿山龙复方水煎液对痛风性关节炎合并高尿酸血症诱导痛风性肾病大鼠肾脏的保护作用

目的 探讨穿山龙复方水煎液对痛风性关节炎（GA）合并高尿酸血症（HUA）诱导痛风性肾病（GN）大鼠肾脏的保护作用。方法 将48只雄性SD大鼠分为6组：对照组、模型组、秋水仙碱（阳性对照,0.03 mg·kg⁻¹）组及穿山龙复方水煎液高、中、低剂量（6.300、3.150、1.575 mg·kg⁻¹）组。各给药组连续7 d ig 10 mL·kg⁻¹相应药液;对照、模型组各ig生理盐水10 mL·kg⁻¹。给药过程中,除对照组外,其余建立GA合并HUA诱导的GN模型：每天2次ip 3%的氧嗪酸钾溶液（10 mL·kg⁻¹）,连续1周;在大鼠右侧踝关节后侧沿跟腱内侧以30°～40°方向插入至关节腔,将0.2 mL尿酸钠溶液（25 mg·mL⁻¹）注入到关节腔内,以关节囊对侧鼓起为注入标准,饲养过程中给予10%酵母饲料。称双侧肾脏质量,计算肾脏系数;HE染色后观察肾脏组织病理学变化;自动生化分析仪检测大鼠血尿酸（SUA）、血肌酐（SCr）、血清尿素氮（BUN）水平以及尿液尿酸（UUA）、尿肌酐（UCr）水平;试剂盒法检测血清中巨噬细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、环氧合酶-2（COX-2）、β₂-微球蛋白（β₂-Mg）及尿液中β₂-Mg水平;以实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法测定大鼠肾脏尿酸转运蛋白1（URAT1）、有机阴离子转运体1（OAT1）、有机阴离子转运体3（OAT3）、葡萄糖转运体9（GLUT9）、ABC转运蛋白G家族成员2（ABCG2）mRNA表达。结果 与模型组比较,穿山龙复方水煎液各剂量组和秋水仙碱组的肾脏系数显著降低（P＜0.01）,肾损伤明显减轻;穿山龙复方水煎液各剂量组及秋水仙碱组血清SUA、SCr、BUN、MCP-1、COX-2、β₂-Mg水平及尿液β₂-Mg水平显著降低（P＜0.05、0.01）,UUA和UCr水平显著升高（P＜0.05、0.01）;肾脏URAT1、GLUT9mRNA表达显著降低（P＜0.05、0.01）,OAT1、OAT3、ABCG2 mRNA表达显著升高（P＜0.05、0.01）。结论 穿山龙复方水煎液改善GN大鼠肾损伤,作用机制与抗炎,上调OAT1、OAT3、ABCG2 mRNA水平,促进UA排泄,下调URAT1、GLUT9 mRNA水平抑制UA重吸收相关。     

大黄-丹参药对对慢性肾衰竭大鼠结肠黏液屏障功能的影响

目的 研究大黄-丹参药对对慢性肾衰竭（CRF）模型大鼠结肠黏液屏障功能的影响。方法 70只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、尿毒清颗粒组（2.5 g·kg^-1）和大黄-丹参药对高、低剂量组（生药6.0、3.0 g·kg^-1）,每组14只。除假手术组外,其余各组大鼠采用5/6肾切除法制备CRF模型。连续ig给药12周后,腹主动脉取血测定血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;剖取残存肾脏和结肠组织,HE和Masson染色观察大鼠肾组织形态学和纤维化改变;阿利新蓝-过碘酸-雪夫（AB-PAS）染色观察结肠黏液层厚度和杯状细胞数量变化;免疫组化观察大鼠结肠组织黏蛋白2（Muc2）阳性表达;采用实时荧光定量（qRT-PCR）法和蛋白免疫印记（Westernblotting）法检测大鼠结肠组织Muc2的mRNA和蛋白表达情况。结果 与假手术组相比,模型组大鼠血清Scr、BUN、IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显升高（P＜0.01）;肾组织中肾小球硬化、肾小管扩张,肾间质可见炎性细胞浸润和纤维化,纤维化评分显著增加（P＜0.01）;结肠黏液层变薄,杯状细胞减少;结肠组织Muc2阳性表达降低,结肠组织Muc2的mRNA和蛋白表达水平均降低（P＜0.01）。与模型组比较,大黄-丹参药对高、低剂量组能显著降低模型大鼠血清Scr、BUN、IL-1β、IL-6和TNF-α水平（P＜0.01）;肾组织形态明显改善,肾纤维化评分显著降低（P＜0.01）;结肠黏液层厚度增加,杯状细胞增多;结肠组织Muc2阳性表达升高,结肠组织Muc2的mRNA和蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）。结论 大黄-丹参药对能够有效保护CRF大鼠的残存肾功能,延缓CRF进展;其机制可能与恢复CRF大鼠结肠黏液屏障功能,改善机体炎症状态有关。     

糖尿病大鼠骨折愈合过程中 VEGF、BMP-2及BMP-7的动态观察

目的：动态观察糖尿病模型大鼠骨折愈合过程中的血管内皮细胞生长因子（ VEGF）、骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、骨形态发生蛋白-7（BMP-7）的变化趋势,探索影响糖尿病骨折愈合的机制。方法选取Wester 雄性大鼠70只,采用随机数字表法分为糖尿病组[（腹腔注射链脲佐菌素（ STZ）造模]和对照组,每组35只。采用线锯锯断2组大鼠的左侧胫骨,采用外固定复位处理,观察2组大鼠术后第1、3、5、7周的血清及骨痂中VEGF、BMP-2、BMP-7的表达变化。结果糖尿病组大鼠术后第1周、术后第3周的VEGF、BMP-2、BMP-7的表达水平均显著低于对照组（ P＜0构．05）,术后第5、第7周2组大鼠骨痂组织中的VEGF、BMP-2、BMP-7的表达水平差异无统计学意义（ P ＞0．05）。糖尿病组与对照组大鼠的血清中VEGF、BMP-2、BMP-7在术后第1～7周差异无统计学意义（ P ＞0．05）,糖尿病大鼠术后第1、第3周BMP-7的表达水平显著低于对照组大鼠,差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论糖尿病大鼠血清、骨痂组织中BMP-7、BMP-2及VEGF表达减少可能是其延迟愈合的一个重要原因。     

何首乌肝损伤模型大鼠胆汁淤积现象及相关蛋白表达研究

目的 观察经脂多糖（LPS）诱导后连续给予何首乌醇提液（AEP）7 d大鼠的肝损伤程度及胆汁淤积相关指标的变化。方法 将雄性SD大鼠随机分为5组：对照组、LPS组、LPS+对乙酰氨基酚（APAP）组、AEP组、LPS+AEP组,LPS、LPS+APAP、LPS+AEP组按大鼠体质量分别尾iv给予4 mg/kg LPS,对照组与AEP组给予等体积生理盐水;2 h后LPS+APAP组ig给予625 mg/kg APAP,AEP组与LPS+AEP组ig给予12 g/kg,每天1次,连续给药7 d,建立特异质肝损伤炎症模型。观察体质量变化,并分别于造模后2 h、14 h、5 d、8 d检测血清生化中肝功能相关指标的变化,同时收集胆汁,计算胆汁流速与密度,并检测胆汁中主要成分变化。进行肝脏系数及组织病理学检查,并对胆汁淤积相关蛋白胆盐输出泵转运蛋白（BSEP）、多药耐药蛋白2（MRP2）及多药耐药蛋白3（MRP3）进行Real-Time PCR检测。结果 经过LPS诱导2 d后,LPS+AEP组与对照组、AEP组比较体质量明显下降,5、8 d肝脏系数显著增加（P＜0.05）;血清生化指标分析结果显示,与对照组比较,LPS+AEP组丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平无明显变化;造模后8 d的总胆红素（TBIL）明显降低（P＜0.05）,ALP明显升高（P＜0.05）;可观察到胆汁密度和胆汁流速明显降低（P＜0.05）,对胆汁成分分析显示,与对照组比较,LPS+AEP组总胆固醇（TCHO）显著升高、TBIL显著降低（P＜0.05）;病理结果显示,AEP组出现轻微肝细胞变性,而LPS+AEP组可见严重局灶坏死;转录水平结果发现,LPS诱导后可使得BSEP、MRP2在14 h时出现短期抑制（P＜0.05）,单独给予AEP可使BSEP、MRP2和MRP3的表达水平短时显著升高（P＜0.05、0.01）,而LPS+AEP给药第8 d对大鼠肝脏BSEP、MRP2无显著性影响,可使MRP3转录水平升高（P＜0.05）。结论 经LPS诱导的AEP可明显损伤大鼠肝细胞并干扰胆汁分泌功能,引起胆汁成分相关生化指标的改变,对BSEP与MRP2水平无显著影响,MRP3出现代偿性升高,提示确实存在胆汁淤积症状,但可能是存在其他机制。     

调经赞育丸对戊酸雌二醇诱导的大鼠无排卵型功能失调性子宫出血的改善作用

目的探讨调经赞育丸对大鼠无排卵性型功能失调性子宫出血的改善作用及其作用机制。方法将雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组。模型组大鼠ig戊酸雌二醇2.8mg/(kg·d),对照组ig等容积生理盐水,连续3周。再将模型组大鼠随机分为模型组、肾上腺色腙组和调经赞育丸155、310、620 mg/kg组,每组各10只。给药组均按10 mL/kg的ig相应药物,对照组、模型组ig等体积的生理盐水,连续7 d。计算各组大鼠的子宫系数,采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清中雌二醇和孕酮水平。观察子宫内膜组织病理学形态,并采用免疫组化法检测子宫内膜组织中VEGF表达。结果与模型组比较,调经赞育丸620 mg/kg组大鼠的子宫系数均明显升高(P0.05);各给药组大鼠血清中雌二醇和孕酮水平均没有明显变化。与模型组比较,调经赞育丸620 mg/kg组大鼠的子宫内膜增生病理改变均明显减轻(P0.05)。与模型组比较,调经赞育丸310、620 mg/kg组大鼠子宫内膜组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达量均明显升高(P0.05、0.01)。结论调经赞育丸对无排卵型功能失调性子宫出血具有明显的改善作用,其机制可能与升高子宫内膜VEGF蛋白表达量有关。     

刺老苞根皮总提物对去势大鼠骨质疏松的影响

目的 研究刺老苞Araliae Echinocaulis Radicis et Cortex根皮总提取物对去势雌性大鼠骨质疏松症的影响。方法 75只SD雌性大鼠随机分成对照组、假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组和刺老苞根皮总提取物组,每组15只。经去势手术2周后,仙灵骨葆胶囊组、刺老苞根皮总提取物组ig相应药物悬液(20 mg/kg),每天1次,连续12周。观察大鼠给药前后体质量变化;试剂盒法检测血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、碱性磷酸酶(ALP)水平;取右侧股骨检测骨密度、骨微量元素和羟脯氨酸(Hyp)水平;取左侧股骨进行骨力学测定。结果 与对照组比较,模型组大鼠血清TC、LDL-C水平均显著升高(P<0.01),血清HDL-C、ALP、骨微量元素(钙、磷、镁、锰)、Hyp水平,骨密度、骨力学指标均显著下降(P<0.01);与模型组比较,刺老苞根皮总提取物组与仙灵骨葆胶囊组TC、LDL-C水平均显著降低(P<0.05),血清HDL-C、ALP、骨微量元素(钙、磷、镁、锰)、Hyp水平,骨密度、骨力学指标均显著升高(P<0.05)。结论 刺老苞根皮总提取物有效改善去势雌性大鼠骨质疏松症的发生。     

京万红软膏上调PDGF mRNA表达改善大鼠缺血合并外伤型糖尿病足的研究

目的考察京万红软膏对大鼠缺血合并外伤型糖尿病足的疗效及作用机制。方法建立糖尿病大鼠模型,在此基础上建立大鼠缺血合并外伤型糖尿病足模型。实验设置4组,每组大鼠15只,分别为假手术组、模型组、京万红软膏组、重组人表皮生长因子外用溶液(rhEGF)组。给药14 d,记录给药前后大鼠体质量、血糖、足部形态及溃疡面积的变化情况。并于给药后取足部溃疡部位组织行HE染色,采用RT-PCR法检测京万红软膏对血小板源性生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体FLT-1 mRNA表达的影响。结果京万红软膏对大鼠缺血合并外伤型糖尿病足具有消肿生肌,促进创面愈合的功效。与模型组相比,京万红软膏组给药14 d后可极显著减少大鼠足部外伤部位的溃疡面积(P0.01);可极显著上调PDGF mRNA的表达(P0.01)。结论京万红软膏对大鼠缺血合并外伤型糖尿病足具有促进伤口愈合的功效,可能与上调PDGF mRNA的表达相关,但对VEGF及其受体Flt-1 mRNA的表达没有影响。     

何首乌乙醇提取液对LPS诱导大鼠肝脏CYP450酶的影响

目的 基于脂多糖(LPS)诱导大鼠肝脏损伤建立何首乌肝毒性模型,探究何首乌乙醇提取液(AEP)对大鼠细胞色素P450(CYP450)酶主要亚型活性及蛋白表达的影响。方法 雄性SD大鼠100只,随机分为6组:对照组、LPS组、对乙酰氨基酚(APAP)组、(LPS+APAP)组、AEP组和(LPS+AEP)组。尾iv 4 mg/kg LPS,2 h后,按组别分别ig 625 mg/kg APAP和6 g/kg AEP,每天1次,连续给药7 d,每天观察大鼠体质量变化。在建模过程中,取第2、14小时和5、8天4个不同时间点,分别对各组别动物麻醉后取血,检测肝功能生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性;解剖,记录肝脏质量;苏木精-伊红(HE)染色进行组织病理学检查;试剂盒法测定肝细胞中细胞色素CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1活性的变化;提取肝脏蛋白,应用Western blotting法检测CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1蛋白表达情况。结果 与对照组比较,第2和14小时,LPS组、(LPS+APAP)组和(LPS+AEP)组ALT、AST和ALP活性显著升高;组织病理学检查发现,肝细胞灶状坏死,伴炎细胞浸润;给药后第8天,LPS组组织病理学检查正常,但(LPS+AEP)组可见显著肝细胞变性,局部慢性炎性灶。第8天,AEP组大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1的活性明显降低;Western blotting法检测发现,AEP能显著降低大鼠肝脏CYP1A2蛋白的表达,而对CYP2E1和CYP3A1蛋白表达没有显著影响。结论 经LPS诱导,AEP对SD大鼠产生明显的肝脏毒性,毒性的发生及LPS诱发的免疫作用与抑制CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1的活性和抑制CYP1A2蛋白表达有关。     

硫辛酸对脑缺血再灌注损伤大鼠RAGE/LRP1通路及神经血管单元重塑的影响

目的 探究硫辛酸对脑缺血再灌注损伤大鼠神经血管单元重塑的作用及对晚期糖基化终产物受体（RAGE）/低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP1）的影响。方法 108只雄性Wistar大鼠,除18只作为假手术组外,其余大鼠采用线栓法制备大脑中动脉短暂缺血再灌注（tMCAO）模型。模型成功大鼠根据神经评分分为模型组、FPS-ZM1 （RAGE抑制剂,1 mg·kg^-1）组和硫辛酸高、中、低剂量组（40、20、10 mg·kg^-1）,再灌注2 h后ip给药,假手术组和模型组注射等量生理盐水,每天1次,连续给药14 d。术后1、7、14 d对大鼠进行神经功能缺损程度评分（mNSS）和激光散斑成像仪监测脑血流量（CBF）。术后14 d,2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法检测大鼠脑梗死面积;伊文思蓝（EB）检测血脑屏障通透性;免疫荧光染色检测脑微血管密度并采用免疫组化法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经元核抗原（NeuN）表达;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测血管内皮生长因子（VEGF）、促血管生成素1（Ang-1）、促血管生成素2（Ang-2）的mRNA表达; Western blotting检测基质金属蛋白酶9（MMP9）、紧密连接相关蛋白5（claudin5）、RAGE、LRP1蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分、脑梗死百分比、EB含量、GFAP阳性细胞数、脑组织Ang-2 mRNA水平、MMP9和RAGE蛋白表达显著升高（P<0.05）,CBF、NeuN阳性细胞数、VEGF和Ang-1 mRNA水平、claudin5和LRP1蛋白表达显著降低（P<0.05）;与模型组比较,硫辛酸高、中剂量组大鼠mNSS评分、脑梗死百分比、EB含量、GFAP阳性细胞数、脑组织Ang-2 mRNA、MMP9和RAGE蛋白表达显著降低（P<0.05）,CBF、脑微血管密度、NeuN阳性细胞数、VEGF和Ang-1 mRNA、claudin5和LRP1蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论 硫辛酸可降低BBB的通透性,促进血管新生,对神经血管单元起着修复和保护作用;其作用机制可能与下调RAGE的表达,上调LRP1的表达有关。     

胍丁胺鞘内注射对骨癌痛大鼠痛行为及脊髓CXCL13表达的影响

目的 探讨胍丁胺鞘内注射对骨癌痛大鼠痛行为及脊髓趋化因子CXC配体13（CXCL13）表达的影响。方法 成年雌性SD大鼠60只,体质量200~220 g,采用随机数字表法分为3组：假手术组（A组）、骨癌痛组（B组）、骨癌痛+胍丁胺组（C组）,各20只。B、C组采用大鼠胫骨上端骨髓腔内注入Walker 256癌细胞的方法建立骨癌痛模型,A组胫骨髓腔内注射等量生理盐水,B、C两组鞘内置管。造模成功后,C组鞘内注射胍丁胺160 mg/kg,连续6天;B组鞘内给予等量生理盐水,连续6天;A组不作处理。于造模后第12天用von Frey丝测定3组大鼠机械缩足反射阈值（MWT）;痛阈测定结束后,麻醉处死大鼠,取脊髓组织,采用免疫荧光法检测CXCL13在神经元中的表达;采用Western blot法分析CXCL13蛋白表达及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测CXCLl3 mRNA的表达。结果 建模后12天,与A组比较,B、C组大鼠MWT明显低于A组,与B组比较,C组MWT高于B组,差异均有统计学意义（P<0.05）。建模后12天,与A组比较,B、C组大鼠CXCL13在脊髓背角神经元中表达增加,CXCL13蛋白及其mRNA表达明显增加（P<0.05）;与B组比较,C组大鼠CXCL13在脊髓背角神经元中表达降低,CXCL13蛋白及其mRNA表达明显减少（P<0.05）。结论 鞘内注射胍丁胺可有效改善大鼠骨癌痛痛觉过敏行为,其机制可能与抑制大鼠脊髓CXCL13表达有关。     

丁公藤注射液促进骨质疏松性大鼠骨折愈合的作用机制研究

目的 研究丁公藤注射液(injection erycibe，IE)对骨质疏松性大鼠骨折愈合的促进作用及其作用机制。方法 通过卵巢切除术和骨折术建立骨质疏松性骨折大鼠模型，50只健康SD大鼠(♀)随机分为假手术组、模型组和1，2，4mL·kg^-1 IE组，检测大鼠股骨骨密度、生物力学指标和血清钙、碱性磷酸酶含量，HE染色观察大鼠骨骼病理组织学变化。对分离的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)进行药物干预，分为对照组、5，10，20mg·L^-1 IE组、诱导组(成骨诱导培养基诱导分化)、NC siRNA组、NCK1 siRNA组、IE+NC siRNA组和IE+NCK1 siRNA组，采用MTT检测MSCs增殖，RT-qPCR检测成骨分化相关基因ALP、Runx2和Osterix mRNA水平，Western blotting检测NCK1和p-AKT蛋白表达水平，茜素红染色观察MSCs钙结节数量。结果 与模型组比较，2，4mL·kg^-1 IE组大鼠股骨骨密度、生物力学指标、血清生化指标均明显升高(P<0.05)，且呈剂量依赖性，4mL·kg^-1 IE组效果最佳。与对照组比较，10，20mg·L^-1IE组MSCs增殖和成骨分化相关基因表达量明显升高(P<0.05或P<0.01)，NCK1和p-AKT蛋白表达水平明显升高(P<0.05)，MSCs内钙结节量明显增加，且呈剂量依赖性，20mg·L^-1 IE组效果最佳。与IE+NC siRNA组比较，IE+NCK1 siRNA组成骨分化相关基因表达量明显降低(P<0.01)，NCK1和p-AKT蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论 IE通过促进NCK1蛋白表达，激活AKT信号通路，对骨质疏松性大鼠骨折愈合起到一定促进作用。