姜黄素调节HL-60细胞周期蛋白表达的研究

目的 :探讨姜黄素对 HL- 6 0细胞周期的影响。方法 :选取 HL- 6 0细胞系 ,作细胞培养 ,采用 SABC法测定分化抗原 CD1 1 a和 CD1 4 阳性率 ,用 TU NEL 法判定细胞凋亡 ,用 FCM法分析细胞周期 ,检测 p2 7kip1、p2 1waf1、cyclin D3及 p Rb P-表达率。结果 :姜黄素呈时间及剂量依赖性抑制 HL- 6 0细胞增殖 ,用 5、10、2 5 μmol/ L 作用 18h,增殖抑制率为 4.7± 1.2 %、18.0± 2 .0 %和 37.5± 2 .4% ;2 4h后抑制率达 6 .3± 1.9%、2 5 .0± 2 .2 %和 43.8±2 .0 % ,可增加 p2 7kip1、p2 1waf1表达 ,降低 cyclin D3表达 ,使去磷酸化 p Rb(p Rb P- )表达量增高 ;用 10 μmol/ L 姜黄素作用 4d,p2 7kip1 、p2 1waf1 、p Rb P- 阳性率为 47.8± 3.6 %、42 .7± 2 .2 %和 2 3.5± 1.5 % ,FCM进一步发现姜黄素作用后 ,p2 7kip1 、cyclin D3荧光强度分别较对照组增高 7倍及降低 74.93%。细胞周期被阻滞于 G0 / G1 和 G2 / M期 ,进而走向凋亡 ,且此能力呈时间及剂量依赖性。结论 :姜黄素能干扰细胞周期进程 ,诱导 HL - 6 0细胞凋亡 ,其作用机制与上调 p2 7kip1 、p2 1waf1 及下调 Cyclin D3蛋白表达 ,增加 p Rb P- 表达水平 ,调控 G1 / S和 G2 / M期检测点功能有关。     

姜黄素调节HL—60细胞周期蛋白表达的研究

目的探讨姜黄素对HL-60细胞周期的影响.方法选取HL-60细胞系,作细胞培养,采用SABC法测定分化抗原CDna和CD14阳性率,用TUNEL法判定细胞凋亡,用FCM法分析细胞周期,检测p27kipl、p21wafl、cyclinD3及pRbp-表达率.结果姜黄素呈时间及剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖,用5、10、25μmol/L作用18h,增殖抑制率为4.7±1.2%、18.0±2.0%和37.5±2.4%;24h后抑制率达6.3±1.9%、25.0土2.2%和43.8±2.0%,可增加p27kip1、p21wafl表达,降低cyclinD3表达,使去磷酸化pRb(pRbp-)表达量增高;用10μmol/L姜黄素作用4d,p27kip1、p21waf1、pRbp-阳性率为47.8±3.6%、42.7±2.2%和23.5±1.5%,FCM进一步发现姜黄素作用后,p27kip1、cyclinD3荧光强度分别较对照组增高7倍及降低74.93%.细胞周期被阻滞于G0/G1和G2/M期,进而走向凋亡,且此能力呈时间及剂量依赖性.结论姜黄素能干扰细胞周期进程,诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制与上调p27kip1、p21wa1及下调CyclinD3蛋白表达,增加pRb.表达水平,调控G1/S和G2/M期检测点功能有关.     

内质网应激对γ射线照射诱导肿瘤细胞死亡的影响

目的探讨内质网应激反应下肿瘤细胞对辐射敏感性的影响。方法将人宫颈癌HeLa细胞置于^60Co设备行γ射线照射;采用反转录PCR方法检测内质网应激反应标志分子X盒结合蛋白1（XBP1）mRNA剪切;细胞克隆形成试验检测内质网应激反应剂二硫苏糖醇（DTT）作用后对HeLa细胞的生存变化。结果DTT作用后XBP1 mRNA出现剪切;克隆形成试验发现HeLa细胞存活率明显提高。结论在内质网应激反应下,增加肿瘤细胞的辐射抵抗性。     

~(60)Coγ射线照射对血管内皮细胞生物学作用的影响

目的观察~(60)Coγ射线照射对血管内皮细胞生物学作用的影响。方法用不同剂量~(60)Coγ射线照射人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),通过细胞生长曲线和克隆形成实验观察细胞增殖存活情况;流式细胞术检测照射后细胞周期的变化;中性单细胞凝胶电泳及蛋白印迹法(Western blot)观察细胞照射后DNA分子损伤及修复情况。结果 ~(60)Coγ射线照射后,HUVEC细胞生长速度及增殖率降低,降低程度与照射剂量呈正相关;HUVEC细胞周期出现G_2/M期阻滞;HUVEC细胞出现明显的DNA双链断裂,γH2AX和DNA-PKcs表达增加。结论 ~(60)Coγ射线照射抑制血管内皮细胞增殖,导致G_2/M期阻滞,促进DNA断裂,相关修复蛋白表达增加。     

不同方式的低能量激光照射对MG-63细胞周期和细胞凋亡的影响

目的 探讨不同方式的低能量激光照射(LLLI)对MG-63细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 将对数生长期的人成骨样细胞MG-63随机设为3组,采用Ga-Al-As半导体激光器(808 nm,66 mW)进行照射.照射Ⅰ组照射3 d,每天照射剂量1.25 J/cm~2;照射Ⅱ组照射1 d,照射剂量3.75 J/cm~2;两组的照射总剂量均为3.75 J/cm~2;对照组不进行激光照射.照射后72 h,采用流式细胞术分别检测各组的细胞周期和细胞凋亡率.结果 与对照组相比,照射Ⅰ组和照射Ⅱ组的S期细胞数增加,G_1期细胞数减少,细胞增殖指数增加(P＜0.05),且两个照射组之间无明显差异(P＞0.05).与对照组相比,照射Ⅰ组和照射Ⅱ组的细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),且两个照射组之间无明显差异(P＞0.05) .结论 总剂量为3.75 J/cm~2的LLLI可以通过改变细胞周期时相促进细胞增殖,并能抑制细胞凋亡.在相同的照射剂量下,多次照射和单次照射无明显差别.     

高血压相关基因hrg-1对血管平滑肌细胞周期蛋白E和P27蛋白表达及细胞增殖的影响

目的　研究hrg 1对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的抑制作用是否与调节细胞周期调节蛋白 (cyclin)表达活性有关。 方法　采用pcD2 hrg 1真核表达质粒转染体外培养的VSMCs,Westernblot、MTT法、流式细胞术观察该基因过表达对细胞周期蛋白E(cyclinE)、P2 7表达及细胞增殖和细胞周期的影响。结果　转染pcD2 hrg 1后 ,与对照组细胞相比 ,G1期细胞比例上升 ,S期细胞比例下降 ,细胞生长速率明显减慢 ;而转染hrg 1反义RNA表达载体的细胞生长速率明显加快。转染hrg 1 2 4h后cyclinE表达开始降低 ,之后呈持续下降趋势 ;至 72h ,其表达量约为对照组的 1 /2。P2 7的表达则呈上升趋势 ,转染hrg 1 2 4h后 ,其表达活性显著增加 (为对照组的 2 6倍 ) ;转染后 48h达高峰 ,为对照组的 3 3倍 ;在转染后72h仍维持在较高水平。结论　hrg 1通过上调P2 7和下调cyclinE表达而发挥抑制VSMC增殖的作用     

刺参黏多糖对Hela细胞PCNA表达及细胞周期的影响

目的研究刺参黏多糖（SJAMP）对体外培养的Hela细胞增殖细胞核抗原（PCNA）表达及细胞周期的影响。方法用免疫组织化学法测定SJAMP对体外培养的Hela细胞作用后的PCNA表达水平，用流式细胞术测定细胞周期变化，并与甲氨蝶呤（MTX）比较。结果SJAMP、MTX均可使体外培养的Hela细胞PCNA表达水平明显降低，还可以使细胞周期发生明显的变化，干预组Hela细胞停留在G．期的比例要比未干预组明显增加（P〈0．05），而S、G2期的细胞比例比未干预组则明显减少（P〈0．05）。结论SJAMP有下调Hela细胞PCNA表达水平，阻滞细胞周期的作用。     

担载丝裂霉素纳米纤维对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的抑制作用及对细胞周期相关蛋白的影响

目的评价担载丝裂霉素的可生物降解载药纳米纤维对膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的抑制作用及对细胞周期相关蛋白的影响。方法采用胰酶消化后人工计数法及MTT法检测对T24细胞增殖率的影响;采用Western印迹方法检测细胞周期素依赖激酶(cyclin dependent ki-nase4,CDK4)、WAF1/p21、细胞周期蛋白(cyclin D1)的含量变化。结果 (1)与空白对照组相比,2、4、8 mg的担载丝裂霉素的纳米纤维在24 h后显著地降低了T24细胞数目;载药纤维以剂量-时间依赖的方式,使细胞存活率(OD值)显著下调。(2)随载药剂量逐渐增加,WAF1/p21含量增加,cyc-lin D1和CDK4蛋白含量逐渐降低。结论 (1)担载丝裂霉素的纳米纤维材料以时间和剂量依赖的方式能显著地抑制T24细胞的增殖。随药物剂量升高(0.1～0.8 mg),作用时间延长(12～48 h),抑制作用增强。(2)担载丝裂霉素的纳米纤维对细胞周期相关蛋白的影响表现为剂量依赖的方式(药物剂量0.1～0.8 mg),显著地增强了WAF1/p21的表达,降低了cyclin D1和CDK4的表达。     

AEG-1表达对老年宫颈癌SiHa细胞周期的影响及相关机制

目的探讨星形细胞上调基因(AEG)-I表达的变化对宫颈癌鳞癌SiHa细胞周期的影响以及相关的分子机制。方法使用Western印迹对宫颈鳞癌组织、宫颈鳞癌SiHa细胞及正常宫颈组织中AEG-1蛋白的表达进行检测,分析三组样品中的AEG-1蛋白表达差异。将AEG-1-siRNA以及对照组siRNA转染进入SiHa细胞中,同样采用Western印迹检测两组SiHa细胞中AEG-1的表达差异,并采用流式细胞仪对细胞周期分布进行测定,对比AEG-1表达变化对细胞周期的影响。采用Western印迹对两组细胞中细胞周期蛋白(cyclin D1)以及CDK2的表达进行检测。结果正常宫颈组织的AEG-1蛋白表达量显著低于宫颈鳞癌组织中(P<0.05);SiHa细胞中的AEG-1蛋白表达量显著高于对照细胞中(P<0.05)。此外,AEG-1-siRNA对SiHa细胞中AEG-1表达有显著下调作用(P<0.05);AEG-1表达的下调可以显著增加SiHa细胞在G0/G1期的数量(P<0.05)。且AEG-1-siRNA组细胞中cyclin D1以及CDK2等蛋白的表达显著低于对照siRNA组(P<0.05)。结论 AEG-1在宫颈鳞癌组织以及细胞中有较高的表达,这种高表达显著影响SiHa的周期,使其在G0/G1期比例显著增加,其分子机制可能与cyclin D1以及CDK2的表达下调有关。     

热休克蛋白60及重组热休克蛋白60对U937细胞IL-6分泌量的影响

目的观察重组热休克蛋白60（hsp60）对U937细胞分泌细胞因子IL-6的影响。方法对幽门螺杆菌标准株26695的基因进行定点突变,利用重叠延伸PCR法使1398和1399位点的AG突变为GC,获得重组hsp60基因片段并构建原核表达质粒pEASY-E1-rhsp60,经IPTG诱导在大肠杆菌表达突变型rhsp60,将50、100、200μg／mL的rhsp60（rhsp60组）、hsp60（hsp60组）分别与U937细胞共培养,于12、18、24h收集上清液,ELISA法检测上清中细胞因子IL-6水平,设PBS对照组。结果rhsp60组、hsp60组IL-6分泌水平均明显高于对照组（P均〈0．05）,且同时点同浓度下rhsp60组IL-6分泌水平明显高于hsp60组（P均〈0．05）,IL-6的分泌随着蛋白刺激浓度的升高而增高。结论rhsp60与hsp60皆可促进U937细胞分泌IL-6,胃癌来源的rhsp60使IL-6分泌量更多。     

HL-6O细胞株经顺铂和电离辐射作用后细胞周期阻滞变化

目的观察HL-60细胞株经顺铂作用和60Co照射后其细胞周期阻滞的动态变化.方法用60Co分别以6,10 Gy的吸收剂量照射HL-60肿瘤细胞株,并于照射后6、12、24及60 h测量其细胞周期变化,同样使用化疗药物顺铂分别以10 μmol/L,20 μmol/L浓度梯度作用HL-60细胞株,并于作用后4、8、12及24 h测量其细胞周期变化.结果HL-60细胞株在受到小剂量外界作用后,如6 Gy60Co照射和10 μmol/L顺铂作用,表现有G2/M期崩溃现象,而在大剂量外界作用后,如10 Gy60Co照射和20 μmol/L顺铂作用,未表现G2/M期崩溃现象,而是表现持续的细胞周期阻滞现象.结论在一定范围的外界剂量作用下,HL-60细胞株的细胞周期阻滞现象即自我保护机制呈剂量依赖性增强.小剂量外界刺激可导致其凋亡增加,而大剂量反而使其表现较强的细胞周期阻滞现象.     

HL60细胞株经顺铂和电离辐射作用后细胞周期阻滞变化

目的：观察HL-60细胞株经顺铂作用和^60Co照射后其细胞周期阻滞的动态变化。方法：用^60Co分别以6，10Gy的吸收剂量照射HL-60肿瘤细胞株，并于照射后6、12、24及60h测量其细胞周期变化，同样使用化疗药物顺铂分别以10μmol／L，20μmol／L浓度梯度作用HL-60细胞株，并于作用后4、8、12及24h测量其细胞周期变化。结果：HL-60细胞株在受到小剂量外界作用后，如6Gy^60Co照射和10μmol／L顺铂作用，表现有G2／M期崩溃现象，而在大剂量外界作用后，如10Gy^60Co照射和20μmol／L顺铂作用，未表现G2／M期崩溃现象，而是表现持续的细胞周期阻滞现象。结论：在一定范围的外界剂量作用下，HL-60细胞株的细胞周期阻滞现象即自我保护机制呈剂量依赖性增强。小剂量外界刺激可导致其凋亡增加，而大剂量反而使其表现较强的细胞周期阻滞现象。     

曲格列酮抑制宫颈癌SiHa细胞增殖中的作用

目的观察曲格列酮对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响,并探讨S期激酶相关蛋白2（s-phase kinase associated protein 2,skp2）、p27在此过程中的作用。方法曲格列酮（0、100、200、400μg/ml）处理人宫颈癌SiHa细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖活性,膜联蛋白-V（Annexin V）-FITC法检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;倒置显微镜观察SiHa细胞形态学变化;构建skp2表达质粒并转染SiHa细胞,Western blot检测蛋白的表达。结果曲格列酮明显抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,且呈明显时间及浓度依赖性（P〈0.05）;曲格列酮增加SiHa细胞周期G1/S期阻滞,细胞凋亡率未见显著性变化（P〉0.05）;曲格列酮上调SiHa细胞p27表达,下调skp2表达;过表达skp2可明显抑制曲格列酮对p27表达的升高作用,同时抵消曲格列酮对细胞周期抑制的作用。结论曲格列酮通过调节细胞周期而非凋亡途径,抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,其机制可能与调节skp2、p27蛋白表达有关。     

白藜芦醇对人肾癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨白藜芦醇（Res）对人肾癌细胞786-0（以下简称肾癌细胞）增殖和周期的影响。方法分别采用12.5、25、50、100μmol/L的白藜芦醇（Res）作用于肾癌细胞24 h;并设空白对照组。流式细胞仪检测细胞细胞周期。结果各浓度Res对肾癌细胞增殖均具有明显的抑制作用,表现为G1期及G2期细胞比例明显降低,S期比例明显升高,与对照组比较,P均〈0.05。Res 12.5μmol/L与25、50及100μmol/L比较,P均〈0.05;但25μmol/L与50、100μmol/L比较,P〉0.05。12.5μmol/L的Res抑制作用明显,当浓度达到25μmol/L时,抑制作用达最强;而继续升高浓度不能提高抑制作用。结论 Res对人肾癌细胞增殖有抑制作用,且具有剂量依赖性。     

NSCLC survivin表达特点及其与细胞周期的关系研究

目的探讨survivin在非小细胞肺癌(NSCLC)中和正常肺组织中的表达,以及survivin与NSCLC临床病理特征、肿瘤细胞周期分布之间的关系。方法应用免疫组化SP方法检测43例NSCLC组织和10例正常肺组织中survivin的表达,分析survivin与NSCLC临床病理学特征的关系。同时应用流式细胞术(FCM)检测NSCLC细胞survivin阳性组与survivin阴性组细胞周期分布状态,计算S期细胞比例(SPF)和增殖指数(PI)。结果(1)NSCLC组织中survivin的阳性表达率为51.2%,正常肺组织无survivin表达,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)survivin的表达与患者性别和淋巴结转移情况明显相关(P0.05);survivin的表达与患者年龄、病理类型、T分期均无明显相关(P0.05)。(3)通过使用流式细胞术对6例survivin表达阳性的NSCLC组织以及6例survivin表达阴性的NSCLC组织的细胞进行细胞周期检测,结果发现,survivin阳性组PI值为11.80±4.25,阴性组为5.68±2.56,差异有统计学意义(P0.05);survivin阳性组SPF为13.93±3.21,阴性组为6.44±2.52,差异有统计学意义(P0.05)。结论(1)Survivin在NSCLC组织中的表达明显高于正常肺组织。(2)Survivin在NSCLC中的表达与性别、淋巴结转移状态明显相关。(3)NSCLC组织中survivin阳性表达组SPF、PI均高于阴性表达组,提示survivin阳性表达通过抑制细胞凋亡提高了肿瘤细胞的增殖活性。     

60Co源照射诱导肺癌细胞凋亡及其凋亡小体体外负载自体及同种异体树突状细胞的实验研究

目的通过放射线诱导肺癌细胞凋亡小体，并使其在体外负载自体及同种异体树突状细胞（DC），为诱导特异性肿瘤细胞免疫治疗提供大量抗原提呈细胞。方法手术切除肺癌组织并分离培养肺癌细胞；利用免疫组化法鉴定肺癌细胞；利用60^Coγ射线照射肺癌细胞诱导凋亡小体；通过流式细胞术（FCM）、DNA琼脂糖凝胶电泳（直接上样法）法检测细胞凋亡；应用共同孵育法使自体及同种异体DC体外负载肺癌细胞凋亡小体，并进行扫描电镜观察。结果通过组织分离法获得单个肿瘤细胞，经60^Coγ射线照射可诱导大量凋亡小体，和自体及同种异体DC共孵育后，凋亡小体被DC吞噬或包裹。结论60^Coγ射线照射诱导的凋亡小体可作为抗原负载自体及异体DC用于诱发特异性抗肿瘤免疫反应，为肿瘤的主动免疫治疗提供了新的途径。     

回转器模拟失重对静脉内皮细胞形态、增殖和周期的影响

目的:探讨回转器模拟失重对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)形态、增殖和周期的影响。方法: 以HUVECs为研究对象,采用回转器模拟失重,在倒置显微镜下观察模拟失重后细胞形态的变化,用细胞计数法测定细胞的增殖情况,用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期。结果: 模拟失重后,HUVECs多呈圆形,可见细胞重叠或聚集生长。回转器模拟失重后12 h、24 h和36 h,细胞周期明显阻滞在G0+G1期（P<0.05）,而细胞计数则无明显改变。结论: 模拟失重可使HUVECs的形态发生一定改变,使HUVECs的细胞周期阻滞。     

刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌细胞ct26体外增殖和细胞周期的影响

目的研究刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌ct26细胞体外增殖和细胞周期的影响,并探讨其作用的分子机制。方法取对数生长期的小鼠结肠癌ct26细胞,建立弓形虫与ct26复合感染度(moi)分别为1∶1、2∶1、4∶1、8∶1、16∶1的共培养试验模型,台盼兰排斥试验连续7d绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测8∶1共培养模型组6h、12h、24h、48h细胞周期改变;采用半定量RT-PCR方法分别检测ct26细胞cyclinB1、cdc2基因转录水平变化;Westernblot方法检测细胞周期蛋白cyclinB1蛋白水平变化。结果台盼兰排斥试验发现各比例组弓形虫均能有效抑制小鼠ct26细胞的体外增殖,且呈现前4d缓慢抑制,4d后细胞大量死亡的现象,以8∶1模型组的增殖抑制作用最明显,感染7d后细胞抑制率达80.77%(P0.01);流式细胞仪检测发现8∶1模型组弓形虫可在各作用时间明显改变ct26细胞周期分布,使G0/G1期细胞百分比下降,G2/M期百分比显著升高(P0.01),24h达到作用高峰,使G2/M期百分比升高12.77%,48h则细胞G2/M期百分比下降;弓形虫感染ct26细胞3～24h,细胞cdc2转录水平在各个时间点未见明显变化,细胞cyclinB1从转录水平和蛋白水平均呈现为感染3h时表达增强,随后各时间点均明显降低的现象,cyclinB1基因转录水平在感染后24h只达到对照组的16.55%。结论弓形虫RH株速殖子可明显抑制小鼠结肠癌ct26细胞体外增殖,感染前期以诱导细胞发生G2/M期阻滞为主要机制,细胞周期蛋白cyclinB1活性下降在G2/M期阻滞中起主要作用。