蚕蛹多肽制备工艺及其体外抗氧化活性

采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶水解蚕蛹蛋白,以水解度和清除DPPH·能力为指标对酶解过程进行分析,并研究水解产物多肽的体外抗氧化活性。结果表明,碱性蛋白酶对蚕蛹蛋白具有较好的水解效果,其水解产物有较高抗氧化活性,对DPPH·、超氧阴离子自由基(O2·)和羟自由基(·OH)都具有较强的清除能力。     

香菇肽提取优化及其体外抗氧化醒酒活性

为探索香菇肽的提取工艺及其体外醒酒活性,深入开发利用香菇的营养功能价值,通过比较香菇不同部位干粉的总抗氧化能力,同时分别采用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、复合蛋白酶等蛋白酶水解香菇伞粉、足粉、全粉,以水解度和DPPH自由基清除率为指标,选取效果最佳的酶与底物组合,用正交方法分析最佳水解条件。将水解后的多肽进行超滤,选择活性最高肽段,并对此肽段进行体外抗氧化试验,针对其乙醇脱氢酶(ADH)、乙醛脱氢酶(ALDH)的体外激活作用进行研究。结果表明,香菇足柄干粉的总抗氧化能力虽稍次于香菇全粉,但复合蛋白酶水解后的DPPH自由基清除率最高;选用复合蛋白酶水解香菇足柄蛋白的最佳条件为:酶量0.2%,水解温度50℃,水解时间3 h,初始p H 6.0,此酶解条件下氨基含量为29.23%;其中分子质量为5~10ku的肽段具有最高体外抗氧化活性与体外醒酒活性,此肽段清除DPPH自由基能力IC50为0.152 mg/m L,清除·OH能力的IC50为0.190 mg/m L;30 mg/m L香菇肽样品(5~10 ku)对ADH的激活率为(94.58±0.74)%,当其质量浓度为180 mg/m L时对ALDH激活率为(70.69±1.25)%。本研究结果表明香菇肽具有良好的醒酒应用前景。     

鸭蛋清蛋白多肽体外抗氧化活性的研究

对经"蛋清水解专用蛋白酶-碱性蛋白酶"和"碱性蛋白酶-胰蛋白酶"双酶分步酶解鸭蛋清蛋白得到的多肽的抗氧化活性进行了研究。结果表明,当"蛋清水解专用蛋白酶-碱性蛋白酶"酶解蛋清蛋白的水解度为21%时,多肽的抗氧化活性最高,其对二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子(O2-·)的清除率和对大豆卵磷脂过氧化作用的抑制率分别为75.76%、84.17%、72.73%和47.59%;当"碱性蛋白酶-胰蛋白酶"酶解蛋清蛋白的水解度为15%时,多肽的抗氧化活性最高,其对DPPH·、·OH、O2-·的清除率和对大豆卵磷脂过氧化作用的抑制率分别为75.15%、93.84%、58%和40.51%。产物肽的分子量均分布在小于5300D的范围内。     

蛋清酶解多肽的制备及其清除自由基活性

为探索蛋清酶解多肽体外清除自由基活性,开发功能性蛋制品,本文采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶,通过对比实验、单因素实验和正交实验确定了蛋清酶解多肽的制备方法,采用体外清除自由基对比实验研究了蛋清酶解多肽的体外清除自由基活性。结果表明:蛋清蛋白浓度调整至4 g/100 mL(m/V),用18000 U/g蛋白的碱性蛋白酶在pH9.0于60 ℃水解7 h,制备的蛋清多肽清除DPPH自由基能力最强;用碱性蛋白酶制备的蛋清多肽在体外对超氧阴离子、羟自由基、DPPH自由基清除能力和Fe3+还原能力均明显优于蛋清,但远不及V_C。证明蛋清经碱性蛋白酶控制水解能明显增强其清除自由基能力,提高其保健性能。     

南瓜籽多肽的制备及其对人体皮肤细胞的体外作用

以南瓜籽为原料制备南瓜籽蛋白。分别采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶-胰蛋白酶、碱性蛋白酶-风味蛋白酶酶解南瓜籽蛋白得到南瓜籽多肽。结果表明:碱性蛋白酶-胰蛋白酶酶解南瓜籽蛋白,水解度为27. 23%、多肽产率为39. 20%,均为5种酶解产物中最高;碱性蛋白酶-胰蛋白酶酶解制备的南瓜籽多肽中小于1 000 Da的多肽含量高达92. 72%,其具有较好的促进人体皮肤细胞增殖的性能及清除自由基作用,可降低细胞内活性氧含量,在人体皮肤细胞受到氧化损伤时,能起到良好的修复作用。     

多宝鱼不同水解物肽段组成及体外抗氧化活性比较

为研究熟化、模拟消化和酶解对多宝鱼肉水解物抗氧化活性的影响,本研究分别采用碱性蛋白酶和胃蛋白酶-胰蛋白酶水解多宝鱼生肉和熟肉,制备生肉碱性蛋白酶水解物、熟肉碱性蛋白酶水解物、生肉体外模拟消化产物和熟肉模拟消化产物,并评价其水解度、相对分子质量分布、氨基酸组成、肽段组成和体外抗氧化活性的差异。结果表明:生肉碱性蛋白酶水解物的水解度最高,为20.18%;4种水解物的分子质量分布差异明显,共有肽段仅有1条,但氨基酸组成没有显著性差异;碱性蛋白酶水解物以肽段小于1000 Da的组分为主,2～4肽的含量达64.57%～51.73%,而模拟消化产物中1000～3000 Da的组分占比超过50%,以多肽(>10)为主,熟化过程会减少小肽(<6)的比例;体外抗氧化活性分析显示,碱性蛋白酶水解物的抗氧化活性均高于模拟消化样品,熟化会降低生肉碱性蛋白酶水解物的抗氧化能力,生肉碱性蛋白酶水解物具有最高的超氧阴离子和羟基自由基清除能力,以及最佳的铁离子还原能力。因此,碱性蛋白酶是优于模拟消化的多宝鱼蛋白水解方式,鱼肉的熟化总体上会降低水解物的抗氧化能力。     

核桃多肽体外抗氧化活性研究

以提取油脂后的核桃渣为原料分离出核桃蛋白,利用酸性、碱性、中性3种蛋白酶复合酶解核桃蛋白,制备水解度高的核桃多肽。通过测定核桃多肽的总还原能力、超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力、羟自由基(·OH)清除能力、二苯代苦味酰基自由基(DPPH)清除能力,研究核桃多肽的抗氧化活性大小。结果表明,3种酶协同对核桃蛋白进行水解,水解度可达到45.58%,核桃多肽有一定的体外抗氧化活性,其总还原能力、对羟基自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除率与质量浓度呈量效关系。     

扇贝边活性肽的分离及其对羟自由基的清除活性研究

目的:确定扇贝边酶解产物中对羟自由基(·OH)具有清除作用的活性肽的分布及活性肽分子量的大小。方法:采用葡聚糖凝胶G-25和G-200分别对扇贝边酶解产物进行分离,用标准分子量作为参照,检测各分离组分对羟自由基的清除率及活性肽分子量的大小。结果表明:枯草杆菌蛋白酶酶解扇贝边的酶解产物中,有两个分离组分具有羟自由基清除活性,其对应的活性肽分子量为8000Da和1800Da,这两种活性肽对羟自由基的清除率分别为73.6%和64.3%;木瓜蛋白酶酶解扇贝边的酶解产物中,也有两个分离组分具有羟自由基清除活性,其对应的活性肽分子量为9000Da和1400Da,这两种活性肽对羟自由基的清除率分别为72.7%和66.1%。结论:用枯草杆菌蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解扇贝边所得的酶解产物中分别含有两种对羟自由基具有清除作用的活性肽。     

豌豆蛋白水解物的分离及其抗氧化活性的研究

将豌豆蛋白用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶水解0.5～6 h,用pH-Stat法测定其水解度;测定水解物的还原能力、清除自由基能力来分析豌豆蛋白水解物的抗氧化作用模式。将4 h的豌豆蛋白碱性蛋白酶水解产物采用葡聚糖凝胶G-25分离豌豆肽,测定各片段的抗氧化活性,以确定豌豆抗氧化肽的分子量。结果得出豌豆蛋白水解产物的自由基清除能力、还原能力都是随着水解时间的延长而增大。底物浓度为7%、水解4 h的豌豆蛋白水解产物与其它水解条件下的水解产物相比,具有较高的抗氧化活性。采用G-25分离豌豆肽的结果表明,抗氧化活性较高的豌豆肽的平均分子量约640Da左右,其抗氧化能力是豌豆肽原液的2倍。     

米糠的蛋白酶水解提取物抗氧化活性及分子量分布研究

研究了四种不同的蛋白酶水解工艺所得米糠提取物的抗氧化活性及分子量分布。结果表明,米糠的蛋白酶水解提取物均具有较强的抗氧化能力,约为VC的2.7倍,不同蛋白酶水解提取物之间的抗氧化能力差异不显著;四种提取物对.OH均具有一定的清除作用。在浓度为5mg/mL时,先碱性蛋白酶后木瓜蛋白酶分步酶水解提取物对.OH的清除效果最好,清除率可达76.20%。米糠蛋白酶水解提取物中米糠多肽的分子量主要集中在500~750μ之间,其总含量在84.74%以上。     

黑豆醒酒饮料的研制

采用甲醛滴定法,对中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行筛选,确定最佳酶解黑豆蛋白的酶.结果发现碱性蛋白酶酶解较果最好,且确定了碱性蛋白酶的最适宜酶解条件:时间为5h,温度为50℃,酶的添加量为1200U/g,pH值为9.后采用正交试验的方法,确定了黑豆醒酒饮料调配的最适宜比例:黑豆蛋白肽混合液70％,蜂蜜4g/150mL,白砂糖11g/150mL.最后,根据瓦勒-霍赫法对黑豆醒酒饮料进行体外试验,得出酶解后的黑豆蛋白肽能够激活乙醇脱氢酶(ADH),而ADH能够增强乙醇的代谢,从而降低人体中乙醇的浓度,测得本实验产品对ADH的激活率达到了31.98％.     

抗氧化大豆多肽制备的研究

以还原能力、清除超氧阴离子自由基和过氧化氢能力为指标,筛选制备抗氧化大豆多肽的水解酶及水解条件,得到高效的抗氧化大豆多肽制品。结果表明:选择1000U/g菠萝蛋白酶、2000U/g中性蛋白酶、2000U/g碱性蛋白酶,三酶复合在pH6.0,酶解温度50℃,底物浓度8.0%的酶解条件下,对大豆蛋白酶解4h,多肽的抗氧化能力表现最强,还原能力达到0.898,超氧阴离子自由基的清除率达到40.93%,过氧化氢的清除率达到33.37%。经超滤分离,分子量小于10KDa而大于5KDa的多肽表现出较强的还原能力,而小于5KDa的多肽表现出较强的清除超氧阴离子自由基和过氧化氢的能力。     

山羊乳酪蛋白酶解工艺及抗氧化性研究

为了制备山羊乳酪蛋白活性肽,选用中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶,采用对比和正交试验方法,研究了山羊乳酪蛋白单酶和复合酶的酶解工艺,测定了山羊乳酪蛋白的总肽键摩尔数,优选出了山羊乳酪蛋白的酶解工艺参数。结果表明：山羊乳酪蛋白的总肽键摩尔数为8.5379 mmol/g。单酶中胰蛋白酶和中性蛋白酶对山羊乳酪蛋白的水解度较大,木瓜蛋白酶较小。胰蛋白酶对山羊乳酪蛋白适宜的酶解工艺：加酶量2500 U/g,pH 7.5,50 ℃下酶解2 h。中性蛋白酶和胰蛋白酶复合以及中性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶三种酶复合的水解度较大,其水解度、平均肽链长度和平均相对分子量分别为17.34%、21.16%,5.77、4.73和692、567 u。     

内外源酶制备海参肽的组成及抗氧化性质研究

为了对比不同方法制备海参肽的组成和抗氧化性质差异,采用内源酶（海参自溶）方法制备海参肽,并与外源酶（中性蛋白酶,碱性蛋白酶和胰蛋白酶）酶解制备的海参肽相比较。结果表明,自溶方法制备的海参粗肽水解度从高到低依次为自溶8 h>自溶4 h>自溶2 h,外源酶制备的海参粗肽水解度从高到低依次为胰蛋白酶酶解>碱性蛋白酶酶解>中性蛋白酶酶解;自溶2、4和8 h 产生的海参肽94%以上分子量小于314 Da,酶解制备的海参肽分子量主要分布在1~8.5 kDa;随着自溶时间的增加,自溶制备海参肽的氨基酸种类逐渐增多,且自溶8 h时呈味氨基酸含量较高;自溶2、4和8 h制备的海参肽比酶解法制备的海参肽具有更好的羟基自由基清除能力、DPPH自由基清除能力以及Fe3+还原能力,在浓度10 mg/mL时,自溶8 h羟基自由基清除率为93.4%,DPPH自由基清除率为85.8%,Fe3+还原力为0.740。综上,自溶方法制备的海参肽具有自身独特的优势,本研究可为海参肽的制备提供理论支撑。     

芸豆蛋白酶解工艺的研究

以芸豆蛋白为原料研究芸豆抗氧化活性肽的酶解工艺。首先以DPPH.清除率和水解度为评价指标筛选最适用酶,并采用单因素及正交实验设计优化酶解工艺。结果表明,Alcalase碱性蛋白酶对芸豆蛋白水解能力最强,酶解产物的抗氧化能力最高;最佳酶解工艺条件为底物浓度4.0%,温度55℃,加酶量2000u.g-1,pH9.0,时间6h,该条件下水解度和DPPH.清除率分别为16.16%和74.10%,比优化前分别提高4.95%和7.63%;芸豆活性肽显示出较强的抗氧化活性。     

青鱼肉活性肽的制备及其抗肿瘤活性研究

以青鱼肉为原料,经二步酶解、凝胶色谱分离纯化制备抗氧化和抗肿瘤活性肽。首先以抗氧化活性和水解度为评价指标,采用单因素和正交试验优化青鱼肉活性肽的制备工艺;然后采用凝胶色谱进行分离纯化,得到不同分子质量多肽组分并分析其氨基酸组成、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力和抗肿瘤活性。结果表明,二步酶解青鱼肉的最优酶解组合为碱性蛋白酶-复合蛋白酶,最佳制备工艺为:pH 8.00、酶解温度50℃、料液比2∶10(g∶mL)、酶添加量6000 U/g、酶解时间3 h,在此条件的二步酶解物清除DPPH自由基的半抑制浓度(half inhibiting concentration,IC 50)为9.52 mg/mL;经Sephadex G-15分离得到5个肽组分,其分子质量范围为130~1397 Da;抗氧化实验表明,组分IV具有最强的DPPH自由基清除能力,其IC ₅₀为3.17 mg/mL,为二步水解物的3倍。细胞增殖抑制实验发现,10 mg/mL组分IV对HepG 2细胞抑制率为92.54%,表明青鱼肉活性肽同时具有抗氧化和抗肿癌活性。     

大口黑鲈鱼皮胶原蛋白肽的制备及抗氧化活性研究

目的：探究酶种类对胶原蛋白肽抗氧化活性的影响。方法：从大口黑鲈(Micropterus salmoides)鱼皮中提取胶原蛋白,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶酶解胶原蛋白,得到碱性蛋白酶酶解胶原蛋白肽(APP)、中性蛋白酶酶解胶原蛋白肽(NPP)、木瓜蛋白酶酶解胶原蛋白肽(PP)、胰蛋白酶酶解胶原蛋白肽(TP),比较其总抗氧化活性、还原活性、对DPPH·、·OH 和O-2·清除能力以及亚铁离子螯合能力和脂质氧化抑制活性。结果：4种蛋白酶酶解胶原蛋白肽都具有抗氧化活性,且抗氧化能力与胶原蛋白肽浓度呈正相关,其中APP的抗氧化活性最佳,总抗氧化活性和还原活性分别为1.725和0.958,对DPPH·和O-2·清除率分别为56.35%和38.41%。结论：碱性蛋白酶酶解的胶原蛋白肽抗氧化活性更佳。     

核桃多肽的抗氧化活性及其分子量、氨基酸组成特性研究

目的:为了提高核桃粕利用价值,阐明核桃多肽抗氧化活性及其构效关系。方法:采用DA 201-C大孔树脂和Sephadex G-15葡聚糖凝胶分离纯化核桃粕蛋白酶解液,分析比较不同疏水性和不同分子量核桃多肽抗氧化活性及氨基酸组成特性。结果:经DA 201-C大孔树脂分离的多肽组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的抗氧化活性随洗脱溶剂疏水性增大而增大。组分Ⅲ经Sephadex G-15分离纯化得到a、b、c、d四个不同分子量多肽组分。分子量分布在400~700 Da的组分c具有最高的羟自由基清除能力,并含有较高的谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸,与组分Ⅲ在氨基酸组成上具有相似性。结论:具有较好抗氧化活性的核桃多肽分子量小于800 Da,并具有疏水性较强,谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸组成含量相对较高的结构特性。     

酶法制备黑豆粕粉多肽的工艺研究

该试验以黑豆粕粉为原料,以蛋白水解度为评价指标,从风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶中筛选水解效果最好的蛋白酶。考察酶解pH、加酶量、酶解温度和酶解时间对黑豆粕粉蛋白质水解度的影响。在单因素试验结果基础上,采用响应面试验对黑豆粕粉多肽的酶解条件进行优化。结果表明,碱性蛋白酶最适合酶解黑豆粕粉多肽,其最佳酶解条件确定为酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶解时间260 min、加酶量4.3%。在此最佳条件下,蛋白水解度为35.23%,较优化前蛋白水解度提高1.93%。