MicroRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能

目的检测MicroRNA-218（miR-218）在肝细胞癌中的表达情况并研究其在肝癌中的功能。方法收集46例肝细胞癌及对
应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-218 在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况;应用miR-218 mimic转染人肝癌细胞系
HepG2,MTT和流式细胞术检测转染后细胞活力和凋亡变化,qRT-PCR和Western blot检测miR-218潜在靶点的表达变化。结
果miR-218在肝癌组织中的表达显著低于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-218低表达与肿瘤大小（>5 cm）和高TNM分期（Ⅲ+
Ⅳ）具有显著相关性（P<0.05）;在HepG2细胞中,miR-218抑制细胞增殖和诱导凋亡,并下调Bmi-1和CDK6 mRNA及蛋白表达
（P<0.05）。结论miR-218低表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,miR-218可能通过下调Bmi-1和CDK6表达抑制肝癌细胞增
殖和促进凋亡。
     

MicroRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能

目的检测MicroRNA-218(miR-218)在肝细胞癌中的表达情况并研究其在肝癌中的功能。方法收集46例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-218在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况;应用miR-218 mimic转染人肝癌细胞系HepG2,MTT和流式细胞术检测转染后细胞活力和凋亡变化,qRT-PCR和Western blot检测miR-218潜在靶点的表达变化。结果 miR-218在肝癌组织中的表达显著低于对应的癌旁组织(P<0.05);miR-218低表达与肿瘤大小(>5 cm)和高TNM分期(Ⅲ+Ⅳ)具有显著相关性(P<0.05);在HepG2细胞中,miR-218抑制细胞增殖和诱导凋亡,并下调Bmi-1和CDK6 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论 miR-218低表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,miR-218可能通过下调Bmi-1和CDK6表达抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡。     

沉默干扰素诱导跨膜蛋白3可抑制肝癌细胞HepG2增殖和侵袭

目的研究干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）在原发性肝癌中的异常表达,探讨沉默IFITM3表达对肝癌细胞系HepG2生
物学特征的影响。方法通过Western blot和免疫组织化学染色法检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3的表达情况及
相关性;构建IFITM3小干扰RNA片段（IFITM3 si-RNA）,采用脂质体介导转染肝癌细胞（HepG2细胞系）,同时设置无义序列组
和空白对照组,实时荧光定量PCR检测转染后IFITM3 mRNA的表达;CCK8（cell counting kit 8）检测转染后细胞增殖能力;
Western blot检测IFITM3在蛋白水平的表达;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结果和癌旁组织相
比,IFITM3在肝癌组织中的明显高表达。与无义序列组和空白对照组比较,IFITM3 si-RNA转染组细胞IFITM3表达和细胞增
值率降低,穿膜细胞数也明显减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。划痕实验也表明迁移能力降低。结论IFITM3在原发性肝
癌中高表达;IFITM3在肝癌细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,有望成为原发性肝癌基因治疗的侯选靶点。
     

miR-196a在肝癌细胞中的表达及其促增殖作用

目的: 探讨miR-196a在肝癌组织的表达水平和对肝癌Hep3B细胞增殖的影响,阐明其促进肝癌细胞增殖的可能机制。方法: 收集20例肝癌组织及对应癌旁组织,培养人正常肝细胞株L02及肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2和Hep3B,采用qRT-PCR法检测miR-196a mRNA在肝癌组织和对应癌旁组织及肝癌细胞株中的表达水平。取处于对数生长期人肝癌Hep3B细胞随机分为对照组、miR-196a mimics转染组和miR-196a inhibitors转染组,MTT法检测各组Hep3B细胞增殖活力,qRT-PCR法检测各组Hep3B细胞miR-196a的表达,流式细胞术检测各组Hep3B细胞周期变化,qRT-PCR和Western blotting法检测各组Hep3B细胞miR-196a潜在靶点叉头转录因子(FOXO1)的表达水平。结果: 肝癌组织中miR-196a mRNA表达水平明显高于相应癌旁组织(P<0.05);miR-196a mRNA在人肝癌SMMC-7721、HepG2和Hep3B细胞中的表达水平明显高于人正常肝L02细胞(P<0.05)。与对照组比较,miR-196a mimics转染组Hep3B细胞中miR-196a mRNA表达水平明显升高(P<0.05),而miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞中miR-196a mRNA的表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,miR-196a mimics转染组Hep3B细胞增殖率明显升高(P<0.05), miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞增殖率明显降低(P<0.05),且呈时间依赖性。与对照组比较,转染24 h时,miR-196a inhibitors转染组Hep3B细胞G₀/G₁期细胞百分率明显升高(P<0.05),S期细胞百分率明显降低(P<0.05)。与对照组比较, miR-196a mimics转染组FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论: miR-196a可能通过FOXO1促进肝癌细胞的增殖,提示miR-196a可能成为肝癌诊断和治疗的新靶点。     

miR-590-5p和miR-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制

目的研究miR-590的两个臂—miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制。
方法利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证。通过脂质体将miR-590 mimic或
inhibitor 转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化。
Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证。结果miRNA芯片
结果显示3个肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调。通
过QPCR验证了10 例临床HCC肿瘤标本发现80%的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p 和miR-590-3p 均同步显著上调。
QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调。MTT
和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2 分别过表达miR-590-5p 和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加（P<0.05）;而HepG2、
Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低（P<0.05）。Targetscan预测,PDCD4
和PTEN 分别作为miR-590-5p 和miR-590-3p 的潜在靶基因。萤光素酶报告系统以及western blot 结果显示miR-590-5p 和
miR-590-3p 可以分别直接下调靶基因PDCD4 和PTEN的表达（P<0.05）。进一步我们发现miR-590-3p 通过下调PTEN激活
PI3K-AKT信号通路,促进AKT1-S473的磷酸化水平。结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结
果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进
HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路。由此可见miR-590 在HCC发生发展过程中具有重要的意
义,也可作为临床诊治潜在的新靶标。
     

miR-146a在结肠癌中的表达及意义

目的探讨miR-146a在结肠癌中的表达与功能。方法qRT-PCR分析结肠癌组织、毗邻正常细胞组织以及结肠癌细胞系
miR-146a的表达水平,MTT法测定结肠癌细胞系SW620转染miR-146a模拟物后的增值,FACS法检测细胞周期与凋亡状况。
结果43 份结肠癌组织样品中,36 份呈现miR-146a 表达量下调,并且该下调表达情况与肿瘤增殖情况（P=0.010）相一致,
miR-146a表达量还与患者肿瘤大小、临床分期密切相关,同时miR-146a表达量较高的患者较比表达量低的患者寿命要长（P=
0.011）,MTT检测表明,miR-146a能抑制细胞增殖（P<0.005）,流式细胞仪检测结果表明,转染miR-146a的SW620细胞相比对
照组细胞,凋亡比例上升（11.9%∶5.9%）,但是对细胞周期没有什么影响。结论miR-146a可能是结肠癌新的抗癌靶标,能抑制结
肠癌细胞增殖,在结肠癌中具有重要作用。
     

MUC15在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨黏蛋白MUC15 在肝细胞癌中的表达及临床意义,并分析其和患者预后之间的关系。方法应用实时定量
RT-PCR法及Western blot法检测肝细胞系L02、肝癌细胞系HepG2、MHCC-97H、SMMC-7721,以及122例肝癌组织、对应癌旁
非肿瘤组织中MUC15的表达情况;并分析MUC15的表达与相关临床参数及患者预后的关系。结果肝细胞系L02中MUC15
表达水平显著高于肝癌细胞系HepG2、MHCC-97H、SMMC-7721（P<0.05）;MUC15在肝癌组织的表达水平显著低于癌旁非肿
瘤组织（P<0.05）,且MUC15 的表达与肿瘤的TNM分期、肝内或淋巴结转移、门静脉癌栓、病理分级等明显相关（P<0.05）;
Kaplan-Meier生存曲线表明MUC15的低表达是肝细胞癌患者预后差的指标。结论MUC15的表达与肝癌患者的临床病理特
征及预后密切相关,很有可能是肝癌患者预后的一个新的预测指标。
     

miR-199a在肾细胞癌中的表达与临床病理特征及预后的关系

目的检测miR-199a在肾细胞癌及癌旁相对正常肾组织中的表达量,分析其相对表达量和肾细胞癌相关的临床病理特征
及其对肾细胞癌预后判断的意义。方法采用RT-qPCR检测67例肾细胞癌及癌旁正常组织miR-199a表达,分析表达的差异与
临床病理特征间的关系。结果在肾细胞癌和癌旁相对组织中均有不同程度的表达,在肾细胞癌的表达显著低于癌旁相对正常
组织,均值13.7倍（P=0.003）。miR-199a的表达在不同肿瘤浸润程度及复发程度之间存在差别（P<0.05,χ2=4.215）,
而与年龄、组织学类型、淋巴结转移、远处转移、Fuhrman分级等无统计学关联（P>0.05）。miR-199a下调组生存期明显低于对照组（Log-rank
test,P=0.017）。结论miR-199a表达下调与肾癌患者原发肿瘤浸润程度、复发及预后不良有关,可作为评估肾癌预后有价值的
一种指标。
     

上调miR-125b对肝癌Huh-7细胞系增殖及顺铂诱导凋亡的作用研究

目的 研究miR-125b在肝癌发生发展中的作用机制,及其表达对于肝细胞癌化疗耐受性的影响.方法 采用qPCR检测肝癌患者癌组织、癌旁组织、Huh-7细胞系(对照组)及转染miR-125b mimic的Huh-7细胞系(转染组)中miR-125b表达情况.采用流式细胞仪及MTT法检测对照组及转染组细胞周期及增殖情况.Western blot检测Huh-7细胞系转染后Mcl-1蛋白表达.设3组:对照组为正常培养细胞,miRNAcontrol组转染miRNA control,miR-125b mimic组转染miR-125b mimic.Western blot检测Mcl-1特异性siRNA阻断Mcl-1蛋白表达后,细胞凋亡相关蛋白caspase3的表达情况.设3组:对照组细胞正常培养;顺铂组加入顺铂,终浓度50 μg/mL培养;转染+顺铂组转染Mcl-1-siRNA,48 h后加入顺铂,终浓度50 μg/mL.结果 肝癌组织miR-125b表达较癌旁组织明显减低,为癌旁组织的(46.24±8.53)％,P＜0.05.miR-125b mimic转染Huh-7细胞后,转染组细胞G1/S比例较对照组明显增高(P ＜0.05);Mcl-1蛋白表达较对照及miRNAcontrol组下调(P＜0.05);转染+顺铂组中的Caspase3蛋白表达较对照组及顺铂组明显增高(P＜0.05).结论 上调miR-125b的表达可以抑制肝癌细胞增殖,抑制靶蛋白Mcl-1表达,促进顺铂诱导凋亡,具有抑癌基因的作用.     

HMGB1对人鼻咽癌细胞株C666-1体外增殖的影响

目的观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人鼻咽癌细胞株C666-1增殖的影响并探讨其可能的机制。方法用siRNA干扰
鼻咽癌细胞株C666-1 HMGB1基因,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测cyclin D1,CDK6及相
关通路蛋白表达。用带GFP的HMGB1质粒转染鼻咽癌细胞株C666-1,EDU和CCK-8检测细胞增殖。结果干扰HMGB1的表
达后,细胞增殖明显减慢（P<0.001）;细胞周期分析显示处于G1期细胞比例增多（P<0.001）,S期细胞比例明显下降（P<0.001）;
Western blot结果显示cyclin D1、CDK6的表达下调,STAT3,P-STAT3的表达也下调。过表达HMGB1后,EDU显示处于S期细
胞比例增多（P<0.05）;CCK-8显示细胞增殖明显增快（P<0.001）。结论HMGB1促进人鼻咽癌细胞株C666-1的增殖,可能通过
STAT3信号通路上调cyclin D1、CDK6促进鼻咽癌细胞株C666-1由G1期进入S期从而调控其增殖。
     

沉默信息调节因子3对肝癌细胞增殖的影响

目的探讨沉默信息调节因子3（SIRT3）对肝癌细胞增殖的影响。方法Western blotting检测SIRT3在正常肝组织、永生化
肝细胞及肝癌细胞系中的蛋白表达水平;在肝癌细胞中过表达SIRT3,台盼蓝排斥实验检测过表达SIRT3对肝癌细胞增殖的影
响,EdU标记实验检测SIRT3对肝癌细胞DNA合成的影响;在肝癌细胞中过表达SIRT3,平板集落实验检测SIRT3对肝癌细胞
集落形成能力的影响;qRT-PCR验证SIRT3的沉默效率,台盼蓝排斥实验检测SIRT3沉默对肝癌细胞增殖的影响,EdU标记实
验检测SIRT3沉默对肝癌细胞DNA合成的影响。结果SIRT3在肝癌细胞系中的蛋白水平较永生化肝细胞、正常肝组织降低;
SIRT3在肝癌细胞中成功过表达,过表达SIRT3使肝癌细胞增殖数目减少了约为51%~61%（P<0.001）,使肝癌细胞DNA合成下
降了约57%（P<0.05）;过表达SIRT3抑制肝癌细胞的集落形成能力;SIRT3沉默有效,SIRT3沉默使肝癌细胞的增殖增加了约
51%~61%（P<0.01）,使肝癌细胞的DNA合成能力增强了137%~149%（P<0.01）。结论SIRT3可抑制肝癌细胞的增殖。
     

miR-424通过调控ATG14的表达抑制肝癌细胞的自噬和增殖

目的 研究miR-424通过调控ATG14表达影响自噬和肝癌细胞增殖。方法 收集肝癌患者因手术切除的肝癌组织及其癌旁组织,采用 qRT-PCR 法检测肝癌组织中 miR-424-5p,ATG14 的表达。培养人肝癌细胞系 HepG2、SMMC-7721、Huh-7、MHCC97H、HCCLM3和人正常肝细胞LO2,qRT-PCR法检测上述各细胞系的miR-424-5p表达,选取表达量较高的Huh-7和表达量较低的HCCLM3肝癌细胞为研究对象,Huh-7细胞实验分组（n=3）：干扰miR-424-5p表达阴性对照组（in-NC组）,干扰miR-424-5p表达组（in-miR-424-5p组）;HCCLM3细胞实验分组（n=3）：过表达miR-424-5p组（mi-miR-424-5p组）,另设过表达miR-424-5p阴性对照组（mi-NC组）;过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14阴性对照组（mi-NC+NC组）;过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14组（mi-NC+ ATG14组）;过表达miR-424-5p +过表达ATG14阴性对照组（mi-miR-424-5p+NC组）;过表达miR-424-5p +过表达ATG14组（mi-miR-424-5p +ATG14组）。qRT-PCR法及Western blot法验证各组miR-424-5p和ATG14的转染情况。采用MTT法检测各组细胞的细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞的ATG14和自噬相关蛋白LC3、Beclin1和P62的表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424-5p和ATG14之间的相互作用。结果 在肝癌组织和细胞中ATG14高表达,miR-424-5p低表达。与相应对照组相比,过表达miR-424-5p抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡（P<0.05）;干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡（P<0.05）;miR-424可能通过靶向ATG14发挥抑癌的作用。干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14均能提高肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P<0.05）,降低自噬受体蛋白P62的表达水平（P<0.05）;过表达miR-424-5p则降低肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P<0.05）,提高自噬受体蛋白P62的表达水平（P<0.05）。结论 miR-424调控ATG14表达影响自噬,从而抑制肝癌细胞增殖。     

Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞生物学的作用

目的探讨DNA分化抑制因子（inhibitor of DNA differentiation, Id）Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞
增殖、侵袭、迁移及粘附等生物学行为的作用。方法Western blot方法检测4例子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的Id1/Id3
的表达;将子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B两株细胞各分为未处理细胞组、空白病毒组、启动子病毒组和Id1/Id3双敲低组。通
过qRT-PCR检测不同腺病毒载体感染细胞后MMP2、CXCR4和P21 mRNA表达量,Western blot检测MMP2、CXCR4、P21蛋白
表达情况;通过MTT增殖试验、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和细胞粘附实验检测Id1/Id3表达改变后,对子宫内膜癌细胞
增殖、侵袭、移行和粘附能力的影响。结果Id1/Id3在子宫内膜癌组织中较癌旁组织表达增高（P<0.05）;双敲低Id1/Id3,子宫内
膜癌细胞中MMP2、CXCR4的mRNA水平和蛋白水平明显降低（P<0.05）,P21的mRNA水平和蛋白水平则明显升高（P<0.05）,
RNAi组与其他3组细胞相比均有显著性差异;Id1/Id3双敲低组子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B株细胞增殖能力、侵袭能力、迁
移能力和粘附能力均抑制（P<0.05）。结论Id1/Id3在子宫内膜癌患者组织中高表达,并可通过升调MMP2、CXCR4和降调P21
的表达促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附作用,靶向Id1/Id3治疗可能成为预防和治疗子宫内膜癌的新方案。
     

靶向VEGF的miRNA对恶性黑色素细胞增殖和凋亡的影响

目的研究靶向血管内皮生长因子（VEGF）基因的外源性miRNA对恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法根据
VEGF基因序列设计合成4对miRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,测
序分析鉴定插入序列的完整性;脂质体法将该4 个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株SKmel-28,RT-PCR 检测转染细胞中
VEGF基因的mRNA表达变化,Western blotting 检测miRNA对VEGF蛋白表达水平的调控效应,明确抑制效果最为显著的
miRNA干扰序列。MTS法和流式细胞仪分别检测人工合成的靶向VEGF的miRNA对SKmel-28生长的抑制作用,以及对肿瘤
细胞凋亡的影响。结果测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确,成功转染SKmel-28细胞后,均能显著抑制
肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,与对照组相比有显著性差异（P<0.01）。抑制效应最强的重组载体是X-26-2n-1,MTS法
和流式细胞仪检测显示,SKmel-28细胞转染X-26-2n-1后,细胞增殖受到明显抑制,增殖抑制效应具有时间依赖性,与阴性对照
组比较差异具有显著性（P<0.05）,与空白组比较细胞增殖抑制更加明显（P<0.01）;肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率
也显著高于对照组（P<0.01）。结论外源性靶向VEGF的miRNA能够显著降低黑色素瘤细胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的
表达水平,抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。
     

microRNA-616在肝细胞癌侵袭转移中的作用机制研究

目的探讨microRNA-616（miR-616）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其在HCC侵袭转移中的作用机制。方法通过qRT-PCR检测miR-616在60例HCC及癌旁组织中的表达,同时检测miR-616在不同肝癌细胞系中的表达情况;免疫组织化学染色检测miR-616在HCC及癌旁组织中波形蛋白（vimentin）、上皮型钙黏素（E-cadherin）及同源性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）的表达情况;qRT-PCR检测miR-616在人正常永生化肝细胞（LO2）及5种不同肝癌细胞系（HepG2、SMMC-7721、Hep3B、Hu7）中的表达水平;使用miR-616抑制物作用Hep3B细胞,TranswellTM实验检测miR-616抑制后Hep3B细胞侵袭能力变化;应用miR-616抑制物及PTENsiRNA转染Hep3B细胞,qRT-PCR检测Hep3B中miR-616、vimentin、PTEN、E-cadherin的mRNA水平,Westernblot法检测癌细胞中vimentin、PTEN、E-cadherin的蛋白水平。结果miR-616在HCC组织中表达水平高于对应癌旁组织;miR-616在不同肝癌细胞系中表达均高于LO2细胞;miR-616高表达与低表达在血管侵犯、Edmonson-Steiner分级、TNM分期比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);miR-616高表达肝癌组PTEN及E-cadherin水平低于miR-616低表达肝癌组,而vimentin水平高于miR-616低表达肝癌组,相关性分析结果显示HCC组织中miR-616与E-cadherin、PTEN水平呈负相关,与vimentin水平呈正相关;在肝癌细胞中抑制miR-616后PTEN及E-cadherin表达水平上调,而vimentin表达降低,Hep3B细胞的侵袭能力明显降低。结论miR-616在HCC组织中表达上调,其表达与HCC恶性临床病理特征有关,miR-616促进肝癌细胞侵袭转移的作用可能与其抑制PTEN表达及诱导上皮间质转化有关。     

三七总皂苷对K562细胞增殖、凋亡及周期的影响及机制

目的研究三七总皂苷（PNS）对K562 细胞增殖、凋亡、周期的影响及其相关分子机制。方法采用MTT法检测PNS对
K562细胞增殖的影响;AO/EB双荧光染色法及Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞凋亡及死亡状况;流式细胞术检测K562
细胞的周期变化;RT-PCR检测mTOR信号通路主要分子mRNA的表达变化;Western blot 检测cleaved caspase-3 蛋白、cyclin
D1蛋白及mTOR信号通路主要蛋白及磷酸化蛋白的表达量变化。结果100~800 μg/mL的PNS 作用于K562细胞后能够抑制
细胞增殖。PNS能够上调cleaved caspase-3蛋白表达,促使K562细胞发生凋亡。并且下调cyclin D1蛋白表达,促使K562细胞
阻滞在G0/G1期。同时,PNS 能够抑制K562 细胞mTOR mRNA 表达,降低mTOR 蛋白和磷酸化蛋白p-mTOR（Ser2448）、
p-p70S6K（Thr229/389）及p-4E-BP1（Thr37/46）的表达,从而抑制mTOR信号通路活性。结论PNS 对体外培养K562细胞有抑
制增殖,促进凋亡,使其发生周期阻滞的作用。其机制可能与PNS抑制mTOR信号通路活性、上调cleaved caspase-3蛋白表达
及抑制cyclin D1蛋白表达有关。