Taqman技术定性检测主要性病病原体的临床评价

目前对性传播疾病主要病原体淋病奈瑟菌 (ＮＧ)、沙眼衣原体 (ＣＴ)和解脲脲原体 (ＵＵ)的病原检测 ,主要采用培养法和常规聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术。本试验采用Ｔａｑｍａｎ技术对临床标本中ＮＧ、ＣＴ及ＵＵ进行定性检测 ,并与培养法和常规ＰＣＲ方法比较 ,评价Ｔａｑｍａｎ技术在性病病原体定性检测中的临床应用价值。一、材料与方法1 .仪器试剂 :ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ热循环仪系罗氏公司产品 ;ＮＧ、ＣＴ、ＵＵ所用引物及Ｔａｑｍａｎ探针由上海生工生物工程有限公司合成。2 .标本来源与分类 :2 0 0 1年 1～ 6月四川大学华西医院泌…     

结核分枝杆菌快速检测仪检测非结核分枝杆菌

我们用结核分枝杆菌快速检测仪 (ＢＡＣＴＥＣ) ,对 2 0 1株抗酸杆菌做 ρ 硝基 α 乙酰氨基 β 羟基苯丙酮 (ＮＡＰ)试验 ,初选非结核分枝杆菌 (ＮＴＭ ) ,并以常规法对照。另用ＢＡＣＴＥＣ做 11株ＮＴＭ药敏试验 ,现报告如下。一、材料和方法1 标本来源 :2 0 1株抗酸杆菌获自我院 1996年 3月～2 0 0 1年 2月结核科、内科病人。2 试验材料 :(1)ＢＡＣＴＥＣ检测仪、12Ｂ培养瓶、ＮＡＰ培养瓶和药物纯品 [利福平 (ＲＦＰ)、链霉素 (ＳＭ )、乙胺丁醇(ＥＭＢ)、异烟肼 (ＩＮＨ) ]均购自美国Ｂ Ｄ公司。 (2 )改良罗氏培养基、对硝基苯甲酸…     

一种分离提取非实体瘤凋亡细胞的方法

分离提取凋亡细胞对许多研究有重要意义 ,我们参考Ｍａｒｔｉｎ等[1] 的方法 ,建立了一种简便易行的非实体瘤凋亡细胞分离提取方法。1　材料和方法1 1　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞株 (本院血液病研究室提供 ) ,常规ＲＰＭＩ 16 40培养基 (Ｇｂｉｃｏ产品 )培养 ,隔天换液 ,所有用于实验的细胞均处于对数生长期。1 2　凋亡细胞诱导　调整细胞浓度至 10 6/ｍｌ,加入以二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)溶解的抗癌药物ＶＰ 16 (Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ,Ｓｉｇｍａ产品 )至所需浓度 (0、5、10、2 0、40 μｇ/ｍｌ)作用 3 5ｈ ,ＰＢＳ(ｐＨ 7 2 ,不含Ｃａ+ 、Ｍｇ2…     

双表位酶联免疫吸附试验一步法检测沙眼衣原体方法的建立

沙眼衣原体 (ＣＴ)引起的泌尿生殖道感染已成为许多国家和地区常见的性传播性疾病 ,目前病原学检测因方法的局限性难以作为临床常规检测。因此我们建立了双表位酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)方法检测ＣＴ抗原 ,报告如下。一、材料与方法1 标本来源 :来自健康体检者宫颈拭子 38份、尿道拭子2 2份 ,1997～ 1999年中山医科大学附属一院临床科室疑为ＣＴ感染的患者标本 15 0份 (宫颈拭子 82份、尿道拭子 6 8份 ) ,将拭子置传送培养基中 ,挤压后在振荡器上猛烈振荡10ｓ ,吸出液体 ,- 70℃冻存。2 试剂材料 :抗ＣＴ主要外膜蛋白 (ＭＯＭＰ)不同…     

高含量AFP用胶体金免疫层析法呈假阴性1例报告

胶体金免疫层析测定 (简称ＧＩＣＡ)ＡＦＰ作为初筛试验 ,具有快速、简便、特异性高、试剂稳定的优点。但如果标本的ＡＦＰ含量过高 ,有时会发生假阴性。本文用 3种不同品牌批号的ＧＩＣＡ试条测试 1份ＡＦＰ含量为 5 9× 10 4μｇ/Ｌ的标本 ,测定结果均为阴性。现报告如下。1　材料和方法1 1　ＡＦＰ含量为 5 9× 10 4μｇ/Ｌ的标本来源于本院肝癌患者 ,测定方法为ＥＬＩＳＡ。1 2　检测ＡＦＰ的ＧＩＣＡ试条　分别为试条 1(Ａｐｐｒｙｍｃ ＳａｎＤｉｅｇｏ ,ＣＡ93 65 4 ＵＳＡ) ;试条 2 (大卫公司 0 0 0 60 7) ;试条 3 (博赛研究所 0 0…     

运用荧光定量PCR反应检测性病病原体

淋球菌 (ＮＧ)、沙眼衣原体 (ＣＴ)、解脲支原体 (ＵＵ)所致的泌尿生殖系感染 ,已成为我国各地区常见的性传播疾病。而快速、准确的性病病原体定量检测 ,是临床诊断治疗的迫切需求。为了解本地区这三种性病病原体感染现状 ,我们运用荧光定量ＰＣＲ技术 (ＦＱ -ＰＣＲ)对我院 3 14份标本进行ＮＧ、ＣＴ、ＵＵ联检 ,现报告如下。1　材料1 1　标本来源 :3 14例标本选自我院 2 0 0 1年 1月～ 2 0 0 2年2月间皮肤性病科、泌尿外科、妇产科门诊患者。男性取尿道口2～ 4ｃｍ分泌物 ,女性取宫颈内 2ｃｍ分泌物。放入含有 1ｍｌ无菌生理盐水的试管内…     

葡萄糖代谢显像对恶性淋巴瘤临床分期和疗效评价

近年来 ,应用单光子发射计算机断层显像 正电子放射计算机断层显像 (ＳＰＥＣＴ ＰＥＴ)进行1 8氟 氟代脱氧葡萄糖 (1 8Ｆ ＦＤＧ)代谢显像从分子水平上反映肿瘤组织中的生化变化和代谢状态 ,对淋巴瘤的临床分期、疗效评价、放化疗后复发或残留肿瘤的诊断具有重要作用。我们将在我院进行1 8Ｆ ＦＤＧ代谢显像的 8例非霍奇金淋巴瘤 (ＮＨＬ)患者进行总结 ,报告如下。资料和方法1　临床资料　 1999年 5月～ 2 0 0 1年 8月在我院进行1 8Ｆ ＦＤＧ代谢显像的 8例ＮＨＬ患者中 ,男 5例 ,女 3例 ,年龄 2 4～ 73岁。所有患者均经手术或活检证实。…     

前列腺素E治疗重型肝炎甲皱微循环的动态观察

注射用前列腺Ｅ1(ＰＧＥ1)用于我院 1999年～ 2 0 0 0年收治的重型肝炎 34例 (符合 1995年北京第一次病毒性肝炎防治方案 ) ,观察了甲皱微循环的变化 ,结果如下。1　治疗方法用ＰＧＥ110 0～ 2 0 0 μｇ溶于 5 %葡萄糖注射液 2 5 0～ 5 0 0ｍｌ中作缓缓静脉点滴 ,1次 /ｄ ,连续     

前列腺素E1治疗脑梗死疗效观察

我们对 130例脑梗死病人采用前列腺素Ｅ1(ＰＧＥ1) (哈尔滨制药三厂生产 )进行治疗 ,与同期住院 131例脑梗死病人采用脉栓通治疗对照 ,观察肢体功能障碍恢复情况 ,现报告如下。1　资料与方法1 1　一般资料　前列腺素Ｅ1治疗组 130例 ,其中男 82例 ,女 48例 ,年龄 46 - 75岁 ,平均 6 2 5岁 ;脉栓通对照组 131例 ,其中男 80例 ,女 5 1例 ,年龄 45～ 76岁 ,平均 6 3 4岁。起病至治疗时间 3～ 72小时。1 2　给药方法　将国产ＰＧＥ1粉剂 2 0 0 μｇ加入 5～ 10 %葡萄糖 30 0ｍｌ中 ,以 2 0～ 2 5滴 /分 (约 0 0 2 0～ 0 0 2 5 μｇ·ｋｇ 1/…     

平底微孔板-酶标仪法筛查Rh阴性血型的探讨

采用试管法检测Ｒｈ血型 ,操作繁锁 ,肉眼判读结果缺乏客观性。针对上述不足 ,笔者经反复摸索 ,将平底微板法与酶标仪扫描 ,电脑自动判读打印技术相结合 ,用ＴＣＥＡＮ全自动加样分析系统完成。经常规 130 32份标本的检测 ,符合率达 10 0 %。1　材料与方法1 1　标本来源　经ＥＤＴＡ Ｋ 2抗凝的无偿献血者的全血标本。1.2　试剂　抗Ｄ Ｉ型血清 (ＢＡＳＯ公司 ,批号Ｂ10 2Ａ、Ｂ10 3Ａ)。1.3　器材　平底微孔反应板 (国产 ) ;ＧＥＮＥＳＩＳＲＳＰ 2 0 0全自动加样分析系统 (瑞士帝肯公司 ) ;ＩＤ2ｓ 2型平板离心机(北京医用离心机厂 ) ;Ｔ…     

大容量采集外周血干细胞

采用新型细胞分离机ＣＯＢＥＳｐｅｃｔｒａ采集健康供者和恶性淋巴瘤患者外周血干细胞 (ＰＢＳＣ)。资料和方法1　 4名健康供者 (异基因外周血干细胞移植供者 )分别是 4例急性白血病患者 (例 1～例 4)的同胞 ,经ＨＬＡ配型符合供者要求。供者 1的动员方案为 :ｒｈＧ ＣＳＦ 30 0 μｇ/ｄ× 5ｄ ,供者2 ,3,4的动员方案采用ｒｈＧ ＣＳＦ 30 0 μｇ/ｄ加ｒｈＧＭ ＣＳＦ 15 0 μｇ/ｄ ,连续 5ｄ。根据ＣＤ3 4 细胞含量均在第 6天采集ＰＢＳＣ。2　例 5～例 8进行自体ＰＢＳＣ移植　例 5、例 8为霍奇金病(ＨＤ)患者 ,动员采用环磷酰胺 (ＣＴ…     

新型吡唑类杀虫剂一锐劲特急性中毒2例报告

我科 2 0 0 0年 1～ 10月使用凯时 (前列腺素Ｅ1)治疗 35例急性脑梗死病人 ,现将结果报告如下。1　资料与方法1 1　病例选择　所有病例均按全国第四届脑血管病学术会议制定的诊断标准 ,并经头ＣＴ或ＭＲＩ证实为颈内动脉系统血栓性脑梗死 ,均有不同程度的肢体瘫痪、意识改变的症状和体征。治疗组平均年龄 6 2± 8岁 ,男 19例 ,女 16例 ;对照组平均年龄 6 3± 9岁 ,男 16例 ,女 14例。1 2　方法　 6 5例病人随机分 2组 :①治疗组 :35例病人给凯时 (ＰＧＥ1) 2 0 μｇ加入生理盐水 10ｍＬ静脉推注 ,每日 1次 ,共14ｄ。②对照组 :血塞通 0 4ｇ…     

OKT3与骁悉联合治疗Ⅳ度移植物抗宿主病成功一例

患者 ,女 ,46岁 ,原发病为急性髓系白血病 (ＡＭＬ)Ｍ4 型 ,ＣＲ1持续 1年进行异基因外周血干细胞移植 (ａｌｌｏ ＰＢＳＣＴ)。ＨＬＡ位点完全相合 ,刺激指数 (ＳＩ)为 0 .90 ,混合淋巴细胞培养 (ＭＬＣ) :Ｒ12 (患者刺激细胞与供者反应细胞 ) =0 .0 0 % ,Ｒ2 1(供者刺激细胞与患者反应细胞 ) =0 .78%。预防移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)用环孢菌素Ａ(ＣｓＡ) 10 0ｍｇ/ｄ 短程甲氨蝶呤(ＭＴＸ) ( 1天 15ｍｇ/ｍ2 , 3天、 6天均给予 10ｍｇ/ｍ2 )。移植后白细胞 >1.0× 10 9/Ｌ ,血小板 >5 0× 10 9/Ｌ的时间分别为 2 0天和 2 9天。 2 4天…     

前列腺素E_1抗肝纤维化临床初步观察

肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段,也是可以逆转的最后阶段[1]。筛选有效的抗纤维化药物是广大学者一直关注的问题[2]。我们应用前列腺素Ｅ1(ＰＧＥ1)治疗慢性病毒性肝炎120例,发现其有明显的抗肝纤维化作用,现将结果报告如下。1　临床资料与方法240例患者均为慢性病毒性肝炎,诊断标准按1995年5月第5次全国传染病寄生虫病学术会议修订的标准[3],随机分为两组,ＰＧＥ1治疗组及对照组各120例,两组病情及病程基本相似,具有可比性。治疗方法:治疗组应用ＰＧＥ1100～200μｇ/ｄ静滴,4周为1疗程。对照组应用门冬氨酸钾镁40ｍｌ/ｄ静…     

前列腺素E1治疗慢性肾功能不全的临床观察

前列腺素Ｅ1(ＰＧＥ1)是花生四烯酸代谢产物 ,对机体各系统生理功能及物质代谢有明显调节作用 ,能直接扩张血管平滑肌、降低血压、改善肾脏血流量 ,并能抑制血小板聚集和血栓素Ａ2 的合成。动物实验证实 :ＰＧＥ1能显著降低尿蛋白 ,减轻肾脏的病理变化[1] 。本研究旨在探讨外源性ＰＧＥ1治疗慢性肾功能不全(ＧＲＦ)的临床意义。1　临床资料1.1　一般资料　 1999年 1月至 2 0 0 0年 7月在湘雅二医院住院的ＣＲＦ(氮质血症期 )患者 5 6例 ,男 34例 ,女2 2例 ,平均年龄 5 2 (2 2～ 6 0 )岁 ,原发病为慢性肾小球肾炎 38例 ,慢性肾盂肾炎 8例 ,高…     

聚合酶链反应反向点杂交法鉴定人乳头瘤病毒型别

为了探讨人乳头瘤病毒 (ＨＰＶ)的分型方法 ,我们将聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术和Ｓａｉｋｉ等[1] 提出的反向点杂交 (ＲＤＢ)技术结合起来 ,对ＨＰＶ进行型别鉴定 ,现报告如下。一、材料及方法1.标本来源 :30份宫颈癌组织标本 ,选自贵阳医学院附属医院病理科 ,为 1995年 1月～ 1997年 12月部分存档活检及手术切除的蜡块标本。2 .菌种及试剂 :内含ＨＰＶ全基因组的 4种ＰＵＣ19质粒 :ＨＰＶ6Ｂ、11、16和 18及特异性寡核苷酸探针 (ＳＳＯ) ,通用引物序列为 :ＧＰ5 5′ ＴＴＴＧＴＴＡＣＴＧＧＴＡＧＡＴＡＣ 3′ ,ＧＰ6 5′ ＧＡＡＡＡＡＴＡ…     

HL-60及COC1细胞亲代及耐药细胞系中细胞外调节蛋白激酶与端粒酶活性变化

我们研究了急性早幼粒细胞白血病细胞系ＨＬ 6 0及其耐药细胞系ＨＬ 6 0 Ｅ6、卵巢癌细胞系ＣＯＣ1及其耐药细胞ＣＯＣ1 ＤＤＰ中细胞外调节蛋白激酶 (ＥＲＫ)及端粒酶活性的改变 ,以了解ＥＲＫ信号传导途径和端粒酶在白血病和卵巢癌耐药形成中的意义。材料和方法1　细胞培养　ＨＬ 6 0、ＣＯＣ1和ＣＯＣ1 ＤＤＰ细胞引自武汉大学中国典型培养物保藏中心。ＨＬ 6 0 Ｅ6细胞系是采用周期间歇小剂量表阿霉素作用于ＨＬ 6 0细胞建立的多药耐药细胞系[1 ] 。上述细胞培养采用含 10 %胎牛血清、10 0Ｕ ｍｌ青霉素、10 0 μｇ ｍｌ链霉素的ＲＰ…     

脉冲振荡法测定慢性阻塞性肺疾病0级患者呼吸阻抗变化

依据慢性阻塞性肺疾病 (ＣＯＰＤ)全球倡议 (ＧＯＬＤ)的分级标准[1 ] ,将有慢性咳嗽、咳痰、肺功能ＦＥＶ1 /ＦＶＣ≥ 70 %的患者归为ＣＯＰＤ 0级。尽管对于ＣＯＰＤ 0级患者常规肺功能检查不能显示气流受限 ,但依据ＣＯＰＤ的发病机制 ,我们认为通过某些肺功能测定有可能发现ＣＯＰＤ 0级患者的气流受限现象。为此我们对 94例慢性支气管炎患者进行时间肺活量、流速 容量曲线和呼吸阻抗测定。慢性支气管炎患者 94例 ,年龄 :54～ 91岁 ,平均 72 .6岁。其中男 59例 ,女 35例。按ＧＯＬＤ标准 :ＦＥＶ1 /ＦＶＣ≥ 70 % 1 7例(ＣＯＰＤ 0…     

PEG沉淀提取法在提取HBV DNA中的应用

血浆ＨＢＶ核酸模板提取质量对ＨＢＶＤＮＡ定量检测起重要作用。本文参照文献[1] 建立了ＰＥＧ沉淀提取制备ＨＢＶ核酸模板方法 ,并用于ＨＢＶＤＮＡ荧光定量ＰＣＲ检测。1　材料与方法1.1　标本　本院门诊及住院乙型肝炎患者 ,用ＰＣＲ专用管收集血液 ,ＥＤＴＡ抗凝 ,分离血浆 ,置 - 2 0℃保存或当日检测。1.2　试剂　沉淀剂由ＰＥＧ 6 0 0 0和氯化钠及水配制而成 ;裂解液由ＮＰ40配制而成 ;ＨＢＶＤＮＡ荧光定量试剂由本科研制 ;磁颗粒核酸提取试剂盒购自Ｒｏｃｈｅ公司。1.3　ＰＥＧ沉淀提取法　取血浆样本 10 0 μｌ加入等量沉淀剂 ,混…     

核酸杂交及聚合酶链反应检测人微小病毒B19感染

检测人微小病毒Ｂ19(ＨＰＶＢ19)采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)、核酸杂交等基因诊断技术仍是目前最常用的方法 ,本研究对两种方法进行了比较。一、材料与方法1 标本来源 :于青岛大学医学院附属医院及第二附属医院采集 2 6例不明原因自然流产患者的血、宫颈分泌物及流产胎块组织 ;同期采集 2 0名健康人工流产者的上述标本。2 试剂 :ＰＣＲ引物参考ＨＰＶ19全基因序列设计[1] ,中国科学院微生物所合成 ,(Ｋ1:ＡＴＡＡＡＴＣＣＡＴＡＴＡＣＴＣＡＴＴ 2 936 2 95 4,Ｋ2 :ＣＴＡＡＡＧＴＡＴＣＣＴＧＡＣＣＴＴＧ 36 17 36 35 6 99ｂｐ ;Ｋ3:ＴＴ…