补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖的影响

目的:观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖的影响.方法:制备补肾健脾活血方中药含药血清,取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞,用MTT检测成骨细胞增殖率.结果:补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率形成,且与含药血清浓度呈正相关.结论:补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖,并能促进成骨细胞对骨机质的功能.     

补肾健脾活血方对去卵巢大鼠BMP2/Smad信号通路的影响

目的:研究补肾健脾活血方对去卵巢大鼠骨形态发生蛋白2(BMP2)/Smad信号通路的影响。方法:72只6月龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组(24只),手术组(48只),双侧卵巢切除法造模,术后3个月两组各随机选取12只检测骨密度验证造模成功。手术组剩余的36只大鼠随机分为双侧卵巢切除模型组(OVX),补肾健脾活血方组(BSJPHX,给药剂量2.979 g·kg~(-1)),阿仑膦酸钠维D3片(Ⅱ)组(ALN,给药剂量1.02 mg·kg~(-1)),假手术组,OVX组给与等体积生理盐水灌胃。12周后处死各组大鼠,双能X射线法检测大鼠全身骨密度,生物力学试验进行胫骨三点弯曲试验,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BMP2,Smad1,Runt相关转录因子2(Runx2),骨保护素(OPG)基因的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BMP2,p-Smad1,Runx2,OPG蛋白的表达。结果:造模3个月后,与假手术组比较,OVX组大鼠骨密度明显降低,最大载荷及刚度均降低,BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平显著降低(P0.05);给药3个月后,与OVX组比较,BSJPHX组,ALN组骨密度均明显增高,最大载荷及刚度均增加,能显著提高BMP2,Smad1,Runx2,OPG基因和蛋白表达水平(P0.05)。结论:补肾健脾活血方既能通过调控BMP2/Smad通路的信号转导,又能上调OPG的表达,这可能是补肾健脾活血方防治绝经后骨质疏松症的机制之一。     

补肾活血方对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的观察中药补肾活血方对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。方法取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞：应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法（PNPP）及茜素红染色方法观察不同浓度补肾活血方对体外培养成骨细胞在24、48、72h不同时段的增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性及矿化结节形成的影响。结果不同浓度的补肾活血方均可促进成骨细胞增殖率提高,以中、高浓度组的作用较为明显（P〈0．01）;不同浓度补肾活血方可使ALP活性增强（P〈0．01）;中、高浓度组补肾活血方矿化结节数量,显著多于对照组（P〈0．01）。结论补肾活血方具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化的作用。     

补肾健脾活血方对骨质疏松骨骼肌线粒体通透转换孔调控的影响

目的:探讨补肾健脾活血方对骨质疏松骨骼肌线粒体通透转换孔(MPTP)的调控作用。方法:将6月龄的雌性SD大鼠随机分为手术模型组、雌激素组、中药组和空白对照组。以双侧卵巢摘除手术造模成功后,中药组给予中药灌胃,每天1次;雌激素组予尼尔雌醇灌胃,每周1次;手术模型组和空白对照组给予蒸馏水灌胃,每天1次。治疗3月后,收集肌肉组织进行MPTP的活性检测。结果:MPTP吸光值(OD)比值在30、60min这两个时间点上,雌激素组、空白对照组与手术模型组比较,差异均有显著性意义(P0.05);而中药组与其他各组比较,差异均无显著性意义(P0.05)。结论:补肾健脾活血中药可在一定程度上调控骨质疏松骨骼肌MPTP的开放程度,但药物浓度未达到作用的阀值,差异无显著性意义,值得进一步研究。     

补肾健脾活血方对去卵巢大鼠血清白细胞介素-6的影响

目的：观察补肾健脾活血方对实验性骨质疏松症大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)的影响。方法：将84只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药对照组、西药对照组、补肾健脾活血方大、小剂量组共7组。采用卵巢切除的方法建造绝经后骨质疏松症动物模型，灌药90天后用酶联免疫吸附法检测大鼠血清IL-6含量。结果：补肾健脾活血方能明显降低血清IL-6含量，其作用强于单纯补肾中药和西药治疗，并且与剂量至正相关。结论：补肾健脾活血方通过影响细胞因子IL-6的含量来抑制破骨细胞的骨吸收功能，从而发挥治疗骨质疏松症的作用。     

补肾益骨方对去势大鼠成骨细胞增殖及BMP-2表达的影响

目的:观察补肾益骨方对去势大鼠成骨细胞增殖及骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响。方法:取12周龄Wistar雌性大鼠40只,随机分为A(模型组)、B(治疗组)、C(阳性对照组)、D(正常对照组)四组,每组10只,前3组行完整双侧卵巢摘除术,D组行假手术,术后常规饲养12周,再分别予以生理盐水、补肾益骨方水提液、α-D3水溶液及生理盐水灌胃治疗12周,处死大鼠,取右胫骨上端做病理切片,通过HE染色观察成骨细胞增殖、免疫组化染色观察BMP-2表达。结果:治疗组成骨细胞数量明显增加,而且通过免疫组化染色发现BMP-2棕色深染的阳性细胞比例明显高于模型组。结论:补肾益骨方能促进成骨细胞分化、增殖,加速骨形成,具有治疗骨质疏松的作用。推测骨中BMP-2含量增加是其重要的治疗机理之一。     

补肾活血方对成骨细胞增殖等生物学特性影响的实验研究

目的:观察中药补肾活血方对体外培养SD大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化的的影响.方法:取新生的SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞.应用MTT法,对硝基苯磷酸盐法(PNPP)及茜素红染色方法观察补肾活血方对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化结节形成的影响.结果:补肾活血方具有刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性及矿化结节形成的数量的作用(P＜0.01或P＜0.05).结论:补肾活血方具有促进成骨细胞的增殖、分化及矿化作用.     

补肾健脾活血方对卵巢大鼠血清IGF-1的影响

目的：观察补肾健脾活血方对实验性骨质疏松症大鼠血清胰岛素生长因子1（IGF-1）的影响。方法：将84只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、中药对照组、西药对照组、补肾健脾活血方大、小剂量组共7组,采用卵巢切除的方法建造绝经骨质疏松症动物模型,灌药90天后用放射免疫法检则大鼠血清IGF-1含量。结果：补肾健脾活血方能明显增加血清IGF-1含量,其作用强于单纯补肾中药和西药,且与剂量呈正相关。结论：补肾健脾活血方通过影响细胞因子IGF-1的含量来促进成骨细胞增殖分化和骨形成的功能,从而发挥治疗骨质疏松症的作用。     

复方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响

目的：观察补肾健脾活血方中药含药血清对大鼠成骨细胞增殖及矿化功能的影响。方法：制备补肾健脾活血方复方中药含药血清，取不同浓度剂量干预体外培养的成骨细胞，用MTT法检测成骨细胞增殖率，用茜素红染色法显示矿化结节的形成。结果：补肾健脾活血方含药血清能明显增加成骨细胞增殖率和矿化结节形成数，且与含药血清浓度呈正相关。结论：补肾健脾活血方能明显促进成骨细胞的增殖，并能促进成骨细胞对骨机质的矿化功能。     

补肾健脾药物血清对大鼠成骨细胞Smad2 mRNA表达影响的研究

目的:研究补肾健脾中药吸收后不同浓度血清对离体大鼠成骨细胞转化生长因子(TGF)-β1细胞内信号转导分子Smad2表达的调节作用,探讨补肾健脾中药治疗绝经后骨质疏松症(OP)的作用机制.材料方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞(rOB),用改良钙钻法测定碱性磷酸酶(ALP)活性以鉴定rOB;以补肾健脾药物吸收后药物血清,加入体外培养的rOB中进行培养,分别以RT-PCR法及免疫细胞化学方法检测rOB的Srnad2 mRNA和蛋白的表达.结果:补肾健脾吸收后药物血清可上调rOB的Smad2的mRNA和蛋白的表达,并呈一定的浓度依赖性(P＜0.01).结论:补肾健脾中药通过诱导rOB TGF-β1的信号转导分子Smad2的mRNA和蛋白的表达而促进rOB的增长与分化.     

补肾健脾活血法对SD大鼠骨折愈合过程中骨痂显微结构变化的影响

目的:探讨补肾健脾活血法(骨康方)对SD大鼠骨折愈合过程中骨痂显微结构变化的影响。方法:清洁级SD雄性大鼠40只随机分为骨折组(A组)及骨折+中药组(B组),建立骨折模型,造模后第3、7、14、21天,每组随机选取5只大鼠,切取骨痂标本,在显微镜下观察骨痂显微结构并拍片观察。结果:B组毛细血管侵入时间、成纤维细胞、成软骨细胞、成骨细胞出现时间均早于A组,且功能较A组活跃。结论:补肾健脾活血中药(骨康方)能够促进骨折愈合过程中软骨骨痂向骨性骨痂转化的步骤,从而促进骨折愈合。     

补肾健脾活血方对老年性骨质疏松症患者炎性因子、骨代谢标志物及骨密度的影响

目的 观察补肾健脾活血方对老年性骨质疏松症患者炎性因子、骨代谢标志物及骨密度的影响。方法 将我院90例老年骨质疏松患者随机分为对照组与观察组各45例。对照组根据常规剂量服用阿仑膦酸钠维D₃片、阿法骨化醇软胶囊;观察组在对照组治疗方案的基础上服用补肾健脾活血方。两组治疗3个月后比较临床疗效,以及治疗前后的中医证候积分、血清炎症因子、骨代谢标志物含量与骨密度值。结果 治疗后,观察组治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05);观察组各项中医证候积分、证候总分均明显低于对照组(P<0.05);观察组血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、生长分化因子15(GDF15)、骨钙素N段中分子片段(N-MID)、Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊系列(β-CTX)、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(PINP)水平均显著低于对照组(P<0.05),白介素-10(IL-10)、血清25羟维生素D₃[25-(OH)D₃]显著高于对照组(P<0.05);观察组L1～4、股骨粗隆、Ward三角区的骨密度值均显著高于对照组(P<0.05)。结论...     

补肾健脾药物血清对体外培养的成骨细胞增殖与分化的影响

目的观察补肾健脾药物血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响.方法用多次酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,加入含不同药物浓度的补肾健脾药物血清条件培养液共同培养;改良Gomori钙钴法染色鉴定,MTT法测定细胞增殖率,对硝基苯酚法检测碱性磷酸酶(ALP)活性.骨疏康和尼尔雌醇作为阳性对照药物.结果补肾健脾中药组成骨细胞的增殖、ALP活性均显著高于空白对照组(P＜0.05),与骨疏康和尼尔雌醇组比较有显著性差异.结论补肾健脾中药可通过增加成骨细胞的增殖与分化而促进骨形成.     

骨康含药血清对大鼠成骨细胞BMP-2表达的影响

目的:通过观察骨康含药血清对成骨细胞BMP-2表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的作用机制。方法:将6只大白兔随机分为3组:正常血清组、骨康含药血清组和雌二醇含药血清组,分别将血清添加入体外分离、培养的成骨细胞,每组8个样本,采用酶联免疫吸附法,检测成骨细胞BMP-2的表达。结果:骨康含药血清组BMP-2含量显著低于空白对照组(P<0.05),骨康含药血清组与雌二醇含药血清组BMP-2的含量无明显差异。结论:在去势状态下,骨康可能通过促进BMP-2的分泌,达到治疗骨质疏松症的目的。     

补肾健脾活血方对大鼠绝经后骨质疏松症的防治作用

目的研究补肾健脾活血方对大鼠绝经后骨质疏松症的防治作用。方法 72只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾健脾活血方组(2.979 g/kg)、阿仑膦酸钠维D_3片(Ⅱ)组(1.02 mg/kg),双侧卵巢切除法进行造模。药物干预12周后,双能X射线法检测大鼠腰椎骨密度,骨生物力学检测腰椎最大载荷和刚度,实时荧光定量PCR法检测wnt2、wnt3a、lrp5、lrp6、β-catenin、OPN、Runx2、osterix mRNA表达,Western blot法检测wnt3a、β-catenin蛋白表达。结果与模型组比较,补肾健脾活血方组腰椎骨密度、最大载荷及刚度均明显增高(P<0.05),能显著降低OPN mRNA表达(P<0.05),显著增高wnt3a、lrp5、β-catenin、Runx2、osterix mRNA表达及wnt3a、β-catenin蛋白表达(P<0.05)。结论补肾健脾活血方对大鼠绝经后骨质疏松症有一定的防治作用,其机制可能与调控wnt/β-catenin信号通路和OPN的表达有关。     

温阳活血方对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织Caspase-3和BMP-7表达的影响

目的:观察温阳活血方对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾组织Caspase-3和BMP-7表达的影响,探讨温阳活血方对慢性马兜铃酸肾病的肾保护机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为5组:(1)正常对照组(n=8):予生理盐水灌胃;(2)模型组(n=10):按关木通水煎液10mL.kg-1.d-1(相当于关木通40g.kg-1.d-1,马兜铃酸A 2.6mg.kg-1.d-1)给大鼠灌胃;(3)中药组(n=10):在模型组基础上,再予温阳活血方30g.kg-1.d-1灌胃;(4)西药组(n=10):在模型组基础上,再予科素亚33.3mg.kg-1.d-1灌胃;(5)中西药结合组(n=10):在模型组基础上,再予(温阳活血方30g.kg-1.d-1+科素亚33.3mg.kg-1.d-1)灌胃。20周末,检测大鼠尿蛋白、肾功能,光镜和电镜观察肾脏病理,采用免疫组化检测肾组织Caspase-3和BMP-7的表达。结果:与正常组和治疗组比较,模型组大鼠24h尿蛋白、Scr、BUN均明显升高(P<0.01);肾脏病理显示治疗组较模型组肾损害明显减轻;与正常对照组和治疗组比较,模型组大鼠肾组织Caspase-3表达明显升高(P<0.05),BMP-7的表达减少(P<0.01)。结论:温阳活血方能有效防治慢性马兜铃酸肾病,其机制可能与降低Caspase-3升高BMP-7有关。     

益肾活血方对早期糖尿病肾病大鼠肾组织Smad_2的影响

目的:探讨具有益气养阴、活血利湿作用的益肾活血方对早期糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管上皮细胞丝/苏氨酸激酶受体(Smad2)的影响。方法:用煎煮中药药液灌服DN模型大鼠,生化检测实验大鼠24h尿蛋白、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血浆白蛋白(ALB);Leica Qwin Plus图像分析系统测量肾小球直径;PAS染色观察大鼠肾脏病理;免疫组化(IHC)检测肾组织Smad2表达。结果:益肾活血方能够降低实验大鼠肾小管上皮细胞Smad2的表达,减少24h尿蛋白、Scr、BUN,升高ALB,缩小肾小球直径,改善肾脏病理,中药组与模型组相比差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论:益肾活血方可能通过影响DN大鼠肾小管上皮细胞Smad2的表达,而改善上述生化指标,减轻肾脏病理损害。     

补肾健脾活血方对骨质疏松症信号转导基因表达的调控作用

目的:观察补肾健脾活血方对骨质疏松症信号转导基因的影响,探讨补肾健睥活血方抗骨质疏松的作用机制.方法:应用基因芯片技术检测补肾健脾活血方治疗骨质疏松症前后外周静脉血信号传导基因的表达,通过美国国立医学生物技术信息中心对差异表达基因进行基因信息学分析,运用Pathway Studio软件进行信号转导信息学分析.结果:补肾健脾活血方调控18个表达差异显著的基因介导的20条信号转导通路,其中11个基因上调,7个基因下调,有8个基因共表达调控大于、等于4套信号转导通路.结论:补肾健脾活血方抗骨质疏松的作用效应是多信号转导基因共同调控的结果.补肾健脾活血方能上调成骨细胞抗凋亡和增殖基因,上调成骨基因和胶原基因,抑制蛋白酶基因,抑制破骨因子,抑制破骨细胞增殖基因,抑制炎性因子,重塑骨重建基因表达良性平衡,并能保护NEI网络功能,增强机体免疫功能,延缓衰老.     

补肾健脾养血活血方对老年小鼠肾线粒体DNA缺失突变的影响

目的:研究补肾健脾养血活血方对老年Balb/c小鼠肾线粒体DNA缺失突变的影响。方法:老年Balb/c小鼠随机分为老年空白组和老年给药组,分别给予生理盐水和补肾健脾养血活血方4个月。采用聚合酶链反应(PCR)技术和光密度扫描检测两组线粒体DNA的缺失突变情况。结果;与老年空白组比较,补肾健脾养血活血方能显著减少老年Balb/c小鼠肾mtDNA的缺失(P<0.001)。结论:补肾健脾养血活血方可以抑制老年小鼠mtDNA的缺失突变,提示补肾健脾养血活血法组方能减少mtDNA的氧化损伤,对mtDNA有保护作用,从而从分子水平提供了本方延缓衰老的可能机制。