干细胞治疗骨质疏松症的可行性研究

目的研究干细胞治疗骨质疏松症的可行性。方法从体外输入同种异体骨髓间充质干细胞(BMSCs)治疗大鼠骨质疏松症,测定大鼠的骨密度变化。结果骨质疏松大鼠通过BMSCs治疗后,骨密度明显增加。结论 BMSCs能有效治疗骨质疏松症,增加骨密度。     

雌性大鼠去势方法的改进

目的 探讨减少大鼠卵巢切除术的损伤，提高手术的安全性和成功率。方法 在大鼠背部皮肤正中单一切口，进行卵巢摘除手术。结果 20例大鼠双侧卵巢完全摘除，术后无伤口感染、裂开现象。结论 该卵巢摘除方法具有切口小，操着简便，安全性高的特点。     

补肾养血方对去势雌性大鼠动情周期及性激素水平影响的研究

目的：探讨补肾养血方对去势雌性大鼠动情周期及性激素E2、FSH、LH水平的影响。方法：选用50只SD雌性大鼠,采用去势大鼠模型,随机分为模型对照组、六味地黄汤组、补肾养血方高剂量组、低剂量组,并与假手术组对照,每日做阴道脱落细胞涂片,观察大鼠动情周期,各组用药连续20日后采血样用放免法测定性激素E2、FSH、LH值。结果：研究表明补肾养血方能使去势大鼠阴道上皮细胞出现角化现象,缩短动情间期,恢复动情期;明显升高去势大鼠血清E2水平（P〈0.01）,降低FSH和LH水平（P〈0.01）。结论：研究表明补肾养血方能改变去势大鼠动情周期,缩短动情间期,恢复动情期;并能提高去势大鼠血清E2水平,降低血清FSH和LH含量。     

雌性大鼠去势方法的改进

目的　探讨减少大鼠卵巢切除术的损伤 ,提高手术的安全性和成功率。方法　在大鼠背部皮肤正中单一切口 ,进行卵巢摘除手术。结果　 2 0例大鼠双侧卵巢完全摘除 ,术后无伤口感染、裂开现象。结论　该卵巢摘除方法具有切口小 ,操着简便 ,安全性高的特点。     

去势雌性大鼠骨质疏松症模型的复制及相关指标测定

切除１４月龄雌性大鼠双侧卵巢,复有质疏松症动物模型,观察去势对大鼠长骨骨密度、血清钙、磷、碱性磷酸酶的影响。结果发现,去势１３周后的大鼠,鼠骨密度明显低于正常对照组（Ｐ〈０．０５）,血清碱性磷酸酶明显高于正常组（Ｐ〈０．０１）,色经后骨质疏松症特征符,说明模型复制成功。     

虾青素抗去势雌性大鼠骨质疏松症实验研究

目的:探讨虾青素对去卵巢骨质疏松模型大鼠股骨的密度、骨矿含量的影响及机制.方法:将72只15周龄SD大鼠随机分为6组,空白组做假手术,其余5组做卵巢切除术,术后用药12周后处死,测定右侧股骨骨密度、骨矿含量、血清雌二醇、碱性磷酸酶含量及子宫湿重.结果:虾青素高、中、低剂量(20、15、10 mg/kg)组、尼尔雌醇(1.05 mg/kg)组能对抗骨密度、骨矿含量、血清雌二醇的下降、血清碱性磷酸酶的升高(与模型组相比P＜0.05);各剂量组、尼尔雌醇组能对抗子宫指数的减轻(与模型组相比P＜0.05).结论:虾青素可以改善骨质量,抑制大鼠去卵巢骨质疏松的发生,具有类似雌激素的效应.     

去势雌性大鼠HRT后血脂及冠状血管病理形态学变化研究

目的：探讨激素替代疗法（HRT）对心血管的影响,为性激素补充疗法提供心脏和血管病理形态学变化依据。方法：以去势雌性大鼠作为雌激素缺乏模型,在喂食高脂饲料情况下,行HRT后检测大鼠血脂及光镜下观察冠状动脉血管病理形态学变化。雌性大鼠分为6组,分别为A假手术组、B模型对照组、C尼尔雌醇组、D利维爱组、E倍美力组、F尼尔雌醇＋孕酮组。结果：C、F组TG增高,与A、B、D、E组比较P〈0.05;B组及C、E、F用药组TC增高,与实验前各组均值对照比较P〈0.01,与A组比较P〈0.05,C、E、F用药组与B组比较P〈0.05;各组间HDL-C比较P〈0.05;B组及C、E、F用药组LDL-C不同程度增高,与A组比较P〈0.05;D组TC、LDL-C增高不明显,与A组比较P〉0.05。实验各组大鼠心脏各级冠状动脉血管均见不同程度早期动脉粥样硬化症病变,F组病变程度最轻,A组、D组病变程度较轻,B组、C组、E组病变程度较重。结论：大鼠去势后HRT对血脂影响及冠状动脉粥样硬化病变的影响与雌激素类型、激素配伍使用及动物种属有关。     

去势对不同月龄雌性大鼠骨丢失的影响

为了探讨去势对不同月龄雌性大鼠体质量、骨密度、组织病理学的影响,以便选用恰当月龄的大鼠复制绝经后骨质疏松的动物模型。本研究选用3、6、12月龄的SD雌性大鼠共48只,每月龄组16只,均分成A、B两组,A组为对照组,B组为去势组。分别于术后6、12周测量体质量、腰椎和股骨的骨密度及组织病理学观察。结果发现3月龄的去势级大鼠的体质量增加尤为明显,3、6月龄大鼠的去势组较对照组在去势后6、12周骨密度均有显著性差异（P＜0．001）,组织病理学观察去势组骨小梁稀疏,皮质骨变薄,骨髓腔扩大;而12月龄的大鼠骨密度改变不显著。结论：绝经后骨质疏松模型复制大鼠的年龄是6月龄为佳,3～6月龄亦可选用,12月龄以后不适宜选择。     

雌激素对雌性去势大鼠脑组织抗氧化能力的影响

目的 给予雌性去势大鼠雌激素替代治疗后观察血清雌二醇水平和脑组织抗氧化能力之间的关系,从而探讨雌激素对中枢神经系统的作用及可能机制。方法 清洁级9月龄雌性SD大鼠30只随机平均分为①用药组(去势后每日给予共轭雌激素0.2 mg/kg/d灌胃);②对照组;③假手术组。12周后测定血清E_2水平、大脑额叶皮质及海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、活性氧(ROS)水平等生化指标。采用非配对t检验对以上指标进行统计学分析。结果 1.用药组血清E_2水平显著高于对照组及假手术组(均P<0.001);假手术组E_2水平高于对照组但差别无显著性(P>0.05)。2.用药组及假手术组大脑额叶皮质SOD活力均高于对照组(均P<0.05),用药组与假手术组之间差异无显著性(P>0.05);用药组海马组织中SOD活力高于对照组(P<0.05),用药组与假手术组及对照组与假手术组之间差异无显著性(P>0.05)。3用药组大脑额叶皮质MDA水平显著低于对照组及假手术组(P<0.05),对照组及假手术组之间差异无显著性(P>0.05);用药组海马组织中MDA水平也显著低于对照组(P<0.005)而与假手术组之间及对照组与假手术组之间差异均无显著性(P>0.05)。4.用药组及假手术组大脑额叶皮质及海马组织中总抗氧化能力均显著高于对照组(P<0.05),用药组及     

骨密冲剂对去势大鼠实验性骨质疏松症的影响

为探讨骨密冲剂治疗骨质疏松症（OP）的疗效与机理。36只SD大鼠分为4组，正常组（C），模型组（D），中药组（E），西药组（F），除C组外，其余大鼠行去势手术，造成OP模型。术后4个月开始，E、F组分别以骨密冲剂。尼尔雌醇灌胃，连续3个月，观察治疗前后大鼠右股骨抗弯强度（δf)，全身骨密度（BMD）及左股骨髁部骨皮质，骨小梁形态。结果：两用药组δf,BMD及骨组织形态明显好于D组。接近C组；两用药组间差别无显性意义。提示骨密冲剂可以替代雌激素治疗OP。     

杜仲对去势大鼠腰椎骨和rBMSCs TGFβ与FGF2表达调控

目的:观察杜仲干预去势大鼠腰椎骨及对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone mesenchymal stem cells,rBMSCs)转化生长因子β(transforming growth factor β,TGFβ)和成纤维生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)表达的调控.方法:(1)80只4月龄雌性SD大鼠随机分成4组,假手术组、阴性对照组、阳性对照组和实验组.除假手术组打开腹腔、暴露卵巢后即缝合外,其他3组均摘除双侧卵巢.大鼠手术10天后,阳性对照组和实验组分别用阿尔法骨化醇(ALF)和盐杜仲灌胃,每天一次,另外2组正常饲养.灌胃3个月后,解剖取各组第一腰椎骨,4%多聚甲醛固定,3天后浸入4%EDTA溶液中脱钙,4周后冰冻切片,免疫组化检测各组中TGFβ与FGF2表达;(2)取盐杜仲粉末2 g,分别加水或甲醇至15 ml,室温震荡1 h,静置过夜后,离心弃沉淀.水浸上清不经进一步处理即得水提取物;甲醇浸上清经真空浓缩,再加水至15 ml溶解剩余物后,得醇提取物.水/醇提取物均经0.22 μm膜过滤,-20℃保存;(3)取2月龄SD大鼠骨髓细胞,置含20%小牛血清的DMEM/F12培养基中,37℃,5%CO2培养,传代3次后进行杜仲水/醇提取物诱导,诱导物分为10-2、10-3、10-4和10-54个稀释度并设4个重复组,同时设一不加诱导物的对照细胞培养组.诱导6天后,免疫细胞化学法测定BMP-2表达.结果:与假手术组比较,阴性对照组腰椎骨中TGFβ、FGF2表达均下降;与阴性对照组相比,ALF阳性对照组和杜仲实验组TGFβ和FGF2表达上升;与对照细胞培养组比较,杜仲水/醇提取物诱导rBMSCs FGF2的表达显著升高,但TGFβ的表达变化不显著.结论:杜仲改善去势大鼠骨质疏松状态与调节TGFβ、FGF2表达相关,杜仲具有直接刺激细胞FGF2的表达的作用.     

雌性甲亢大鼠模型的建立

目的:建立雌性甲亢大鼠模型.方法:为低、中、高三个剂量组灌胃给药甲状腺素片混悬液造成大鼠甲亢,对照组灌胃生理盐水,观察行为变化及体重变化,经放免法检测FT3、FT4及TSH值.结果:成功建立雌性甲亢大鼠模型,甲亢各组大鼠的血清FT3、FT4水平较对照组明显升高,TSH值下降.结论:使用甲状腺素片制备雌性大鼠甲亢模型推荐采用每日10～20 mg/100 g剂量组,时间约30 d.     

去势雌性大鼠骨质疏松模型的研究

骨质疏松(Osteoporosis)主要表现为骨量减少和骨组织微结构退行性改变等特征,以致骨脆性、骨折危险性增加的代谢性全身骨骼疾病.合适的骨质疏松动物模型是研究骨质疏松症的重要基础.本文就绝经后骨质疏松雌性大鼠模型复制的基本方法、月龄和造模的选择及常用的评价指标特点简要综述,为研究去势骨质疏松疾病动物的正确选择提供参考.     

去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力研究

目的　探讨去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化的特点。方法　选用3月龄健康SD雌性大鼠行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松症的动物模型。实验分为正常大鼠髓间充质干细胞组(MSCs controlgroup )、骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞组(MSCs ovx group)、正常骨髓间充质干细胞成骨诱导组(OSI controlgroup)、骨质疏松骨髓间充质干细胞成骨诱导组(OSI ovx group)。使用密度梯度离心法分别获取正常大鼠和骨质疏松大鼠MSCs,体外培养传至3、4代后,流式细胞技术检测MSCs control group和MSCs ovx group细胞周期及增殖指数(PI) ;加入含有地塞米松(10 - 8m ol/L) ,β-甘油磷酸钠(10 - 2 mol/L) ,抗坏血酸(5 0 μg/m l)的成骨诱导液进行成骨诱导,采用磷酸对硝基苯测定方法检测碱性磷酸酶(AL P)表达量,同位素标记方法检测骨钙素(BGP)分泌量。结果　1PI:MSCs control group高于MSCs ovx group(P<0 .0 5 )。2 AL P的表达量:成骨诱导第7d和14 d时,OSI各组均明显高于相应的MSCs组(P<0 .0 5 ) ;OSI control组明显高于OSI ovx组(P<0 .0 5 )。随着时间延长,OSI各组AL P表达量呈升高趋势。3BGP的分泌量:成骨诱导14 d、2 1d、2 8d时,OSI各组均明显高于相应的MSCs组(P<0 .0 5 ) ;OSI control组明显高于OSI ovx组(P<0     

普伐他汀对去势大鼠骨质疏松症的治疗作用

目的 探讨普伐他汀片对去势大鼠骨质疏松症的治疗作用,为临床用药提供依据.方法 取12周龄的雌性Wistar大鼠加只,氯氨酮(5 mg/100 g)麻醉条件下,其中30只打开腹腔去除双侧卵巢,逐层缝合,另10只予以单纯打开腹腔不切除卵巢.将大鼠分模型组、普伐他汀组、阳性对照组、正常对照假手术组4组,饲养12周后,分别予以生理盐水(10 ml/kg)、普伐他汀水溶液(2 ms/ks)、α-D3水溶液(0.05μg/kg)及生理盐水(10 ml/kg)灌胃.灌胃12周后,活杀各组动物,以双能X线密度测定仪测定骨密度.取血清用放免法测定血清中骨钙素(BGP)、降钙素(CT).通过三点弯曲试验,记录载荷-变形曲线,测定骨生物力学指标.结果 经过12周的普伐他汀水溶液灌胃治疗,明显提高了去势大鼠的骨密度、血清激素水平,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01或<0.05),并能改善治疗组大鼠的骨力学性能.结论 普伐他汀可提高去势大鼠的骨密度值及血清激素水平,改善骨的生物力学性能,具有治疗骨质疏松症的作用.     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及表型和功能特点

目的 建立体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)的方法，探讨其表型和功能特点。方法 用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs，传代扩增，测定生长曲线，通过形态学观察，细胞化学及免疫细胞化学法分析大鼠骨髓MSCs的表型和功能特点。结果 MSCs属骨髓中单个核细胞，密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs，在含10％小牛血清的L-DMEM中，1、3、5代细胞生长曲线基本相同，增殖快，每传代一次细胞约增加2．2倍。细胞呈均一的成纤维细胞样，表达CD44、CD54、纤维粘连蛋白(fibronectin，FN)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)。加入地塞米松(Dex 10^-8mol／L)、β-甘油磷酸钠(β-GP 10mmol／L)、抗坏血酸(AA50μg／ml)可诱导MSCs分化为成骨细胞，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性增高，形成矿化结节。结论 所分离、培养的细胞具有间充质干细胞的表型和功能特点，建立了体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓MSCs的方法。     

去势雌性大鼠激素替代治疗后垂体、子宫及乳腺形态变化研究

目的：研究去势雌性大鼠应用HRT后垂体、子宫及乳腺形态变化。方法：对正常及卵巢切除,卵果切除并行激素后三组雌性大鼠的垂体、子宫及乳腺作形态学研究,并对子宫进行形态定量分析。结果：治疗大鼠子宫内膜及乳腺腺体萎缩明显减轻,但3．10例治疗组大鼠宫内膜上皮及腺体发生鳞状化生,间质增生明显,毛细血管及胶原纤维增生活跃;部分大鼠乳腺腺体增生明显活性,腺体弥浸性分布,并有增生过度的表现。脑垂体中腺垂体细胞较模型组明显增多,与正常组相似,但仍有较多细胞似去势细胞,胞浆内有小空泡,内含粉红色分泌物。结论：去势应届生 大鼠应用HRT后,可使大鼠子宫内膜及乳腺腺体萎缩明显减轻,但有可能致宫内膜上皮及腺体发生鳞状化生,乳腺腺体过度增生。脑垂体中腺垂体细胞分泌亢进,可能与绝经期妇女补充E2后出现全身性内分泌功能紊乱有关。     

大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养

目的 观察体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的生物学特性。方法 通过贴壁法培养、鉴定大鼠骨髓MSCs，观察其生长规律及光镜结构特点。结果 大鼠MSCs 7代以前增殖速度较快，细胞接种后1～2d为滞留期，3d后达对数生长期，第6天进入平台期。免疫组织化学染色显示MSCs表达CI）44，不表达CD45；光镜下可见MSCs呈梭形、纺锤形和多角形，核居中，有1～2个核仁。结论 培养的细胞为骨髓MSCs；在体外培养条件下细胞生长性状稳定，可作为组织工程的种子细胞。     

甲状旁腺激素和骨硬化蛋白抗体联合治疗雌性SD大鼠骨质疏松症的疗效观察

目的探索甲状旁腺激素（PTH）和骨硬化蛋白抗体（Scl-Ab）联合治疗雌性SD大鼠骨质疏松症的疗效,为临床应用提供实验基础。方法从70只健康雌性SD大鼠随机选取65只行双侧卵巢切除术,其余5只行假手术;术后在正常环境下饲养12周,从双侧卵巢切除大鼠中随机选取5只检测胫骨骨密度,较假手术大鼠下降37.64%,证实骨质疏松大鼠模型建立成功。遂将余下60只双侧卵巢切除大鼠随机分成4组：未用药组15只（其中2只大鼠因伤口感染而死亡）、Scl-Ab组15只（Scl-Ab25mg/kg皮下注射,2次/周）、PTH组15只（PTH60滋g/kg皮下注射,3次/周）、PTH+Scl-Ab组15只（Scl-Ab25mg/kg皮下注射,2次/周;同时PTH60滋g/kg皮下注射,3次/周）。治疗12周后处死大鼠取胫骨行Micro-CT、HE组织切片和骨生物力学检测与比较。结果Micro-CT三维重建分析,药物治疗12周后Scl-Ab组、PTH组和PTH+Scl-Ab组骨小梁数量较未用药组明显增多,且骨小梁更粗、联系更为紧密;胫骨干骺端微观参数改善较未用药组更为明显,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,其中PTH+Scl-Ab组最为明显（P＜0.05）。HE组织切片可见Scl-Ab组、PTH组和PTH+Scl-Ab组骨小梁之间联系紧密,排列规律,且胫骨干骺端骨量增加,胫骨局部骨组织矿化明显,其中PTH+Scl-Ab组最为明显。骨生物力学检测结果显示Scl-Ab组、PTH组和PTH+Scl-Ab组最大载荷、刚度值均高于未用药组（均P＜0.05）,其中PTH+Scl-Ab组亦分别高于Scl-Ab组和PTH组（均P＜0.05）。结论PTH、Scl-Ab治疗雌性SD大鼠骨质疏松症的疗效明显,其中两药联用疗效更佳。