神经节双盖片法培养小室的改良

神经节的培养一般采用两种方法,即培养皿法和双盖片法。双盖片法是将培养的神经节贴附在胶原盖片上,而后将贴附有神经节的盖片又贴在云母片或玻片上,最后神经节上滴加培养液,放在凹玻片内,云母片与凹玻片周围用蜡封好,放入37℃温箱内培养。双盖片培养法是比较古典的培养方法,优点是:方法容易掌握;培养小室是密封的,所以培养过程不易污染。但它的缺点是:加入培养小室内的培养液少,培养2～3天就需更换新的培养液,在更换培养液时将云母片从凹玻上起下来,换新凹玻片和云母片,最后加入新培养液封好培养。结果操作繁琐,有可能造成污染。为了克服双盖片培养法的缺点,我们对     

西司他丁钠+亚胺培南消除细胞培养中细菌污染的研究

目的 :研究西司他丁钠 +亚胺培南 (泰能 )清除细胞培养中细菌污染的可行性。 方法 :将 1 5批细胞培养中已发生细菌污染的细胞 ,用含泰能 1 0～ 1 0 0 μg/ ml的 PBS洗涤 3次 (PBS用量逐次递增 ) ,第 3次洗涤之前将细胞悬浮于含 1 0 0 μg/ m l泰能的完全培养液 1 .5 ml中 37℃孵育 30 min;然后细胞移入含 1 0 0 μg/ m l泰能的完全培养液中培养 ,更换含 1 0 0 μg/ ml泰能的完全培养液 1次 / d,共 3d。结果 :成功消除 1 4批细菌感染 ,另 1批加用万古霉素后亦获成功。结论 :泰能可以有效消除细胞培养中的细菌污染 ,其剂型和包装等尚可改进     

乙酰胺法快速检定绿脓杆菌在医院制剂中的应用

乙酰胺法快速检定外用药品中绿脓杆菌曾有报道。但其采用将培养液离心集菌后，加乙酰胺培养基培养后进行鉴别，操作较繁，易造成污染及菌损失。     

从Hela细胞培养物中清除污染霉菌的简易方法

细胞培养在现代医学和生物科学研究中已被广泛应用,但细胞培养成败的关键之一在于能否避免污染。笔者从HeIa细胞培养物中清除了污染霉菌,小结于下: 在HeIa细胞培养过程中,培养物置于30℃一周后,在培养液表面长出了霉菌菌苔,初为一个个白色棉花团样园形集落,最后丝状集落顶部逐渐变为浅蓝绿色。经玻片培养     

氯化钾对神经母细胞瘤细胞系谷氨酸释放的影响

利用高效液相方法观察了氯化钾对培养人神经母细胞瘤细胞系（ＳＨ ＳＹ５Ｙ）细胞谷氨酸释放的影响。发现：当培养液中存在钙离子时，一定浓度的氯化钾（１０～３０ｍｍｏｌ／Ｌ）可使ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞谷氨酸释放增加，但氯化钾浓度超过４０ｍｍｏｌ／Ｌ时，谷氨酸释放增加不明显；当培养液中没有钙离子时，氯化钾不能使ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞谷氨酸释放明显增加。结果表明氯化钾对ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞释放谷氨酸的作用与钙离子相关     

小檗碱的体外降糖作用

目的研究小檗碱能否通过刺激胰岛素分泌或直接作用于肝细胞而产生降糖作用. 方法检测HepG2细胞24h培养液中葡萄糖的消耗量.另外检测βTC3细胞胰岛素的释放量. 结果小檗碱5～100μmol/L可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加32%～60%(P＜0.001),与1mmol/L二甲双胍相比无显著差异;小檗碱的降糖效能随着培养液中葡萄糖浓度的升高而降低;胰岛素对小檗碱的降糖作用没有明显的影响.小檗碱没有刺激βTC3细胞胰岛素分泌的作用. 结论小檗碱能通过肝细胞发挥非胰岛素依赖的降糖作用,但不能增加胰岛素的分泌.     

用一步固相放射免疫测定法检出美洲商陆有丝分裂原刺激的人淋巴细胞培养物上清液中的lgG(摘要)

B淋巴细胞被美洲商陆有丝分裂原(PMM)激活并合成分泌Ig的这一过程,在基础和临床免疫学研究中都具有重要意义。但是,过去所用的检测方法都较为复杂,不能同时处理大批标本。用一步固相放射免疫测定法(SPRIA)检测IgG是简便易行的,只需将被测物置塑料试验盘内吸附,洗后加I标记的抗IgG抗体,再经洗涤即可测定。不过,此法不能检出含血清培养液中的Ig,但在无血清培养液中淋巴细胞又不能长期培养,更不能产生Ig,为此,作者们改进了培养淋巴细胞的条件以使用一步SPRIA。经过对比研究所得到的最适培养条件是:将淋巴细胞培养于含1:100 PWM的血清     

甲基胆蒽对离体大鼠气管的致癌作用(摘要)

我们应用20-甲基胆蒽作用于离体培养的大鼠气管组织,发现在作用后的第一、二周内,即可在气管粘膜上皮发生早期癌变。实验方法:培养液为自配199培养液加10％牛血清及Hanks平衡盐类溶液。为防止细菌污染,在培养液中适当加入卡那霉素、庆大霉素及二性霉素乙。致癌物质选用20-甲基胆蒽(简称20—     

氟康唑去除细胞培养中的真菌污染

目的 探讨一种去除细胞培养中的真菌污染的好方法.方法 采用PDA平板鉴定受污染的细胞培养液,10%的氟康唑氯化钠注射液处理受污染的细胞.结果 氟康唑氯化钠注射液能有效地去除细胞培养中的真菌污染.结论 氟康唑是去除细胞培养过程中真菌污染的一种安全有效的好方法.     

大鼠α—谷氨酰转肽酶阳性肝细胞在无血清培养液中的生长

原位肝胶原酶灌流分离出经化学致癌剂诱发的大鼠癌前期肝细胞，用“淘洗“技术纯化γ－谷氨酰转肽酶（ＧＧＴ）阳性肝细胞，置无血清的ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１：１）培养液中培养。结果表明，ＧＧＴ阳性或阴性肝细胞均不能在此培养液中长期生长。而经乙基亚硝基脲（ＥＮＵ）处理４ｈ的肝细胞，只有ＧＧＴ阳性肝细胞能在此无血清培养液中长期生长并传代，其形态及排列类似正常肝细胞，电镜下可见典型的连接复合体和毛细胆管，但核较大…     

羊膜细胞培养液对胎儿卵巢组织雌二醇分泌的实验研究

目的观察胎儿卵巢在体外培养条件下及羊膜细胞培养液条件培养液对分泌雌二醇(E2)的影响,旨在为卵巢移植提供较好的供体培养方法。方法取20～28周妊娠水囊引产的胎儿卵巢,将其切成碎块进行一般培养液直接培养(A组)及加羊膜细胞培养液培养(B组)。培养后测定两种不同培养液中E2含量并进行比较。结果胎儿卵巢在一般培养液和加羊膜细胞培养液培养条件下能产生E2,随培养时间延长,E2分泌量增加。而加羊膜细胞培养液组E2分泌量高于一般培养液直接培养(P<0.05)。结论胎儿卵巢在一般培养液培养条件下能分泌E2,而加羊膜细胞培养液能促进培养的卵巢组织的E2分泌,可作为卵巢移植的供体培养的较好培养液。     

试论我国饮用水中有关细菌消毒和放射性指标

1 细菌总数 细菌总数可作为评价水质清洁程度和净化、消毒效果的指标。细菌总数增多说明水被污染，但不能说明污染来源。必须结合总大肠菌群来判断水质污染的来源和安全程度。     

周期型马来丝虫感染期幼虫体外培养的继续观察

周期型马来丝虫感染期幼虫(L_3)在含人羊膜细胞系的TC199+RPMI1640(1∶1)混合培养液中于培养后10～12d开始蜕皮,少数(9.6％)可完成蜕皮进入L_4,幼虫最长可存活25d;在含人羊膜细胞系的TC199培养液及不含细胞系的TC199+RPMI1640(1∶1)混合培养液中,幼虫可分别存活19和15d,但均未出现蜕皮现象。本实验证实了培养基的组成及哺乳动物细胞系的应用对于马来丝虫体外存活、生长和发育的重要性。     

大鼠α-谷氨酰转肽酶阳性肝细胞在无血清培养液中的生长

原位肝胶原酶灌流分离出经化学致癌剂诱发的大鼠癌前期肝细胞,用“淘洗”技术纯化γ-谷氨酰转肽酶(GGT)阳性肝细胞,置无血清的DMEM:F12(1:1)培养液中培养。结果表明,GGT阳性或阴性肝细胞均不能在此培养液中长期生长。而经乙基亚硝基脲(ENU)处理4h的肝细胞,只有GGT阳性肝细胞能在此无血清培养液中长期生长并传代,其形态及排列类似正常肝细胞,电镜下可见典型的连接复合体和毛细胆管,但核较大;组织化学及免疫组织化学方法证实这些细胞仍维持GGT阳性,且能产生白蛋白,故此种细胞可能是介于正常肝细胞与肝癌细胞的癌前期细胞。     

应用人黄素化颗粒细胞条件培养液行人类胚胎体外培养

目的 研究卵泡壁颗粒细胞条件培养液在人类胚胎体外发育中的作用。方法 将卵泡液中回收的卵泡壁颗粒细胞,分别置于添加0．1％聚乙烯醇(PVA)和添加10％胎牛血清(FCS)的TCM-199培养系统中进行体外培养。结果 在无蛋白培养系统中,颗粒细胞能够缓慢生长,第三～五天达到生长高峰,群体倍增时间发生在培养的第二～三天,培养第一～五天可分泌雌二醇到培养液中(3．22～4．65pmol／ml)。在有蛋白培养系统中,颗粒细胞生长速度明显高于无蛋白的培养系统。使用颗粒细胞条件培养液,获得的囊胚在囊胚腔的大小和细胞数量上,均优于商品化囊胚培养液。结论颗粒细胞条件培养液有利于人类4-细胞以后胚胎的发育。     

番茄汁对DNA损伤的保护作用研究

目的 探讨番茄汁对人正常细胞和肿瘤细胞增殖的影响及DNA损伤的保护作用.方法 采用MTT法检测不同剂量的番茄汁对细胞增殖的影响,彗星实验检测不同剂量番茄汁对细胞DNA的影响及对DNA损伤的保护作用.结果 当番茄汁体积在培养液中所占比例低于15%时,对正常细胞和肿瘤细胞的增殖没有任何影响;当番茄汁在培养液中所占比例达到或超过20%时,此时的培养液不是细胞生长的最适条件,表现为细胞生长抑制.番茄汁在培养液中体积分数为50～500 μL/mL时没有引起细胞DNA损伤,而低浓度(20～100 μL/mL)番茄汁对重铬酸钾诱导的DNA损伤具有明显的保护作用,该作用随着番茄汁剂量的增加而增强,表现为拖尾细胞减少,尾长减短,番茄汁剂量与拖尾细胞尾长具有明显的剂量-反应关系,呈负相关(r=-0.917,P=0.00369).肿瘤细胞和正常细胞实验结果一致.结论 番茄汁不但不会引起细胞DNA损伤,而且对重铬酸钾诱导的DNA损伤具有明显的保护作用;此外,在研究番茄汁对细胞增殖影响时应该注意番茄汁在培养液中所占的体积,本实验显示番茄汁不能超过20%,否则会得到错误的结论.     

支原体鉴定药敏一体化试剂盒假阳性结果分析

目的对造成支原体液体培养法假阳性的原因进行分析。方法采用解脲支原体（Uu）-人型支原体（Mh）鉴定与药敏一体化试剂对322例妇科门诊患者分泌物进行检验,并对支原体阳性培养液进行细菌培养及鉴定,用已知可分解或不分解尿素和精氨酸的标准菌株配制成不同浓度的菌液进行干扰试验。结果 213例支原体阳性培养液中共分离出细菌14例,其中192例清的变红培养液细菌分离率为0%;21例混浊或微浊培养液培养出细菌真菌14例,分离率为66.7%。在干扰试验中,当菌液浓度〈10^4/ml时,培养液对细菌抑制明显;当菌液浓度≥10^4/ml时,培养液对细菌抑制效果不理想,培养液呈不同程度混浊,如果尿素和精氨酸分解试验至少有一项阳性的细菌,可导致假阳性。结论标本中如含有大量分解尿素或精氨酸的细菌,且支原体培养液不能抑制细菌的生长时,可造成支原体培养假阳性。所以培养液颜色变红和混浊时不能直接报告支原体阳性,应结合其他检测方法与临床症状做出判断。     

条件培养基抑制L-抗坏血酸钠介导的小鼠黑色素瘤细胞凋亡

目的探讨肿瘤细胞B16F10通过自分泌对抗由L-抗坏血酸钠(VitCNa)介导的凋亡作用。方法常规在75 cm~2培养瓶中培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,待细胞长至90%～95%融合时吸取原DMEM/高糖培养液,用PBS反复清洗后加入无血清的DMEM/高糖10ml在培养箱中培养6～8 h,收集培养液用2500 r/min离心5min后上清用0.22μm滤器过滤,-20℃保存备用,在6孔板中每孔接种1×10~6 B16F10,常规培养24h后,实验组每孔加入2ml条件培养液(含有10%胎牛血清),对照组用普通培养液,两组均用10 mmol/L VitC Na促凋亡,分别在3、6、24 h观察细胞凋亡情况,hoechst染核,收集细胞免疫荧光检测caspase3和TUNEL、RT-PCR检测Bcl2表达。进而分离出条件培养液中相对分子质量大于5 000和小于5 000成分,分别煮沸,用蛋白酶K灭活后对B16F10促凋亡。结果发现条件培养基能够抑制VitC Na介导的小鼠黑色素瘤细胞B16F10凋亡,抗凋亡成分小于5 000,且不能被煮沸和蛋白酶K灭活,提示其是小分子抗凋亡物质。结论 B16F10可以分泌出拮抗细胞凋亡的小分子物质。     

人类胚胎体外培养细菌污染12例分析

目的分析胚胎体外培养细菌污染的发生原因及预防措施。方法对中山大学附属第一医院生殖中心10年来胚胎体外培养中发生的12例细菌污染资料进行回顾分析。结果胚胎体外培养污染中,所有培养液滴有污染5例,部分液滴有污染3例,接触配子及胚胎的液滴污染有4例,培养液滴最常见的细菌为大肠埃希菌,污染的来源可能为患者生殖道、手术操作、培养环境及培养操作等。结论严格操作规程,改善培养环境,可能有效减少人类胚胎体外培养中的细菌污染。     

牛嗜铬细胞体外培养及其分泌多巴胺的测定

为给肾上腺髓质细胞移植治疗帕金森病提供理论依据 ,观察正常体外培养和冷冻复苏后牛肾上腺嗜铬细胞的形态变化 ,并检测培养液中的多巴胺含量。结果 :悬浮培养嗜铬细胞在培养液中集聚成团 ,始终保持圆形 ,并分泌多巴胺 ,在冷冻复苏后仍存活 ;单层贴壁培养嗜铬细胞于贴壁后开始变形 ,伸出短的突起 ,但于 1周后开始退化 ;体外培养嗜铬细胞分泌多巴胺在 5～ 6d达高峰。结果提示 :肾上腺嗜铬细胞可作为脑内移植治疗帕金森病的细胞来源