免疫牛初乳与双歧杆菌复合微胶囊的研制

以双歧杆菌发酵免疫牛初乳,然后采用真空冷冻干燥技术研制成冻干粉,并以冻干粉为芯材、以肠溶材料欧巴代为壁材、以保护剂为润湿剂,采用空气悬浮微胶囊化的方法制成免疫与微生态双活性肠溶制剂。通过正交试验确定空气悬浮造粒机的最佳工艺参数为进风量200m3/h、进气温度45℃、排气温度36℃、物料温度37℃、喷浆速率6r/min。得到的微胶囊产品为浅绿色圆形颗粒状、不粘连、流动性好、粒径大小基本均匀。     

免疫初乳与双歧杆菌复合微胶囊壁材的筛选

以双歧杆菌发酵免疫初乳,采用真空冷冻干燥技术研制成冻干粉,并以冻干粉为芯材、以不同肠溶材料作为壁材,采用空气悬浮微胶囊化的方法制成免疫与微生态双活性肠溶制剂。从不同壁材的成膜性、喷雾性、溶出度、肠溶性、耐酸性、贮存稳定性等方面确定以欧巴代作为微胶囊的壁材,从喷雾性能及微胶囊的性能考虑,包衣液的质量分数为15%,芯材、壁材质量比为10∶3。     

低聚木糖复配冻干保护剂的优化及其对双歧杆菌微胶囊性能的影响

为提高双歧杆菌在微胶囊制备过程中以及人体胃肠系统中的存活率,本文通过单因素和正交试验确定了低聚木糖复配冻干保护剂的最佳比例,同时考察了保护剂的加入对微胶囊性能的影响。结果表明,保护剂最佳配比为低聚木糖4.0%、甘油2.0%、谷氨酸钠1.0%,由此制备的双歧杆菌微胶囊包埋率和冻干存活率分别为81.5%±0.7%与88.1%±0.3%,与未添加组相比,其最终活菌负载率提高了约21.6%;添加复配保护剂的微胶囊表面更加平整致密,经模拟胃液处理2 h,双歧杆菌存活率为65.9%,相对于对照组提高了约15.3%;在人工肠液中,添加入保护剂的微胶囊的活菌释放量明显高于未添加保护剂组;在4 ℃和25 ℃贮存35 d后,添加复配保护剂的微胶囊活菌量分别为8.1 lg CFU/g和7.0 lg CFU/g,显著高于未添加保护剂的微胶囊(P<0.05)。因此,添加低聚木糖复配的冻干保护剂可以有效提高双歧杆菌微胶囊对不良环境的抗性。     

植物乳杆菌CICC 20270微胶囊的制备及其特性

以植物乳杆菌CICC 20270(Lactobacillus plantarum)及椰子油/玉米油为芯材,添加到以葡萄糖值即DE值分别为25、18糖浆为壁材的乳状液中,通过喷雾干燥法制备益生菌微胶囊,考察微胶囊的菌细胞存活率、表面结构、耐热性、储藏稳定性及在模拟胃肠液中的菌细胞存活率情况。结果表明:制得的微胶囊中植物乳杆菌存活率均在90%以上。在55℃热处理条件下,各微胶囊菌活无显著性差异(p>0.05);65℃处理1、10 min后,活菌数最低的分别是DE25/椰子油和DE18/椰子油微胶囊,存活率为75.66%、49.82%;75℃热处理1、10 min后,DE18/椰子油微胶囊中活菌数均最低,存活率分别为38.40%、15.08%。在4、25、37℃储藏条件下,玉米油微胶囊储藏性质较椰子油更为稳定,活菌数更高;而在33%、52%、75%湿度条件下,糖浆的DE值不同比油脂对益生菌的存活率影响更大,且DE25糖浆给益生菌提供了更好的保护效果。在6 h体外模拟消化中,DE25糖浆/椰子油微胶囊整个过程活菌数只下降了3.88 lg CFU/g。因此,DE25糖浆更适作为益生菌壁材;添加玉米油后使得微胶囊具有更好的耐热性;而添加椰子油更有利于提高微胶囊在模拟胃肠液中的菌活数。     

静电喷雾法制备枯草芽孢杆菌微生态制剂

为提高枯草芽孢杆菌使用效果,以海藻酸钠、明胶为壁材,采用静电喷雾法制备了枯草芽孢杆菌微胶囊。通过正交试验,得到微囊化枯草芽孢杆菌的较优制备工艺为:芯壁材比1:5,明胶浓度0.5%,海藻酸钠浓度2%,微胶囊的包埋率可达90.7%。制得的微胶囊具有一定的耐酸性和较好的肠溶性。经恒温储藏3个月加速实验,结果表明:微囊化枯草芽孢杆菌活菌数约为菌液活菌数的130倍,且存活率远高于菌液的存活率。     

内源乳化法制备青春双歧杆菌微胶囊

为提高青春双歧杆菌存活率及抵抗不利环境的能力,以青春双歧杆菌为研究对象,采用海藻酸钠与乳清蛋白为复合壁材,通过内源乳化法制备微胶囊,并对其进行模拟人工胃肠试验和贮藏稳定性试验。以包埋率为考察指标,根据单因素试验探究海藻酸钠添加量、水相油相体积比、吐温80添加量、搅拌速度和乳化时间等因素对包埋率的影响。采用响应面分析法对海藻酸钠添加量、吐温80添加量、搅拌速度进行分析和优化。结果表明: 制备青春双歧杆菌微胶囊的最佳工艺条件为海藻酸钠添加量2%（m/m）,吐温80添加量0.6 mL,搅拌速度430 r/min,包埋率为83.05%。青春双歧杆菌微胶囊于模拟人工胃、肠液中放置180 min,菌体存活率分别为59.89%、66.45%;于4 ℃环境下贮藏42 d,存活率为56.83%。研究表明：以内源乳化法制得的青春双歧杆菌微胶囊对模拟胃肠液环境具有良好的耐酸性及肠溶性,在4 ℃环境中具有良好的贮藏稳定性。     

直投式干酪乳杆菌鼠李糖亚种冻干粉的研制

为了制备含高活菌量的LCR冻干粉,研究了增菌培养基和培养条件,并优化冻干保护剂.与MRS基础培养基相比,分别添加氮源、番茄汁、胡萝卜汁和抗坏血酸,LCR 719活菌数分别提高了约2.0、1.3、1.2、1.5倍;以添加2.5倍氮源、8%番茄汁、6%胡萝卜汁、0.04%抗坏血酸的培养基,初始pH为6.8时,增菌效果最好,其活菌数达109cfu/mL,菌体最佳收获时间为16h;保护效果由大到小依次为海藻糖、脱脂奶粉、蔗糖、甘油、可溶性淀粉、硫酸锰、抗坏血酸;以10%海藻糖+10%脱脂奶粉的组合为最佳,其菌体存活率达100%,冻干菌粉活菌数达1011 cfu/g.     

双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊的研制

目的制备长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊,以期提高口服时的存活率和常温下的保存期。方法根据微胶囊在人工胃液中的耐酸性和在人工肠液中的崩解性,确定空气悬浮法制备微胶囊的最佳工艺条件。扫描电镜观察微胶囊形态与大小。根据恒温37℃、相对湿度60%~65%条件下贮存3个月后菌体存活率,考察其贮存稳定性。结果制备的微胶囊具有良好的耐酸性和肠溶性。微胶囊包囊产率56.49%,包囊效率87.45%。微胶囊表面覆盖着一层光滑平整的囊膜,粒径大小基本在400~500μm。加保护剂的微胶囊菌体存活率高于10%,且远远高于冻干菌粉和无保护剂微胶囊组。结论确定了空气悬浮法制备长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊的最佳工艺条件,微胶囊化有利于提高活菌的稳定性。     

双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊的研制

目的 制备长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊,以期提高口服时的存活率和常温下的保存期.方法 根据微胶囊在人工胃液中的耐酸性和在人工肠液中的崩解性,确定空气悬浮法制备微胶囊的最佳工艺条件.扫描电镜观察微胶囊形态与大小.根据恒温37℃、相对湿度60%～65%条件下贮存3个月后菌体存活率,考察其贮存稳定性.结果 制备的微胶囊具有良好的耐酸性和肠溶性.微胶囊包囊产率56.49%,包囊效率87.45%.微胶囊表面覆盖着一层光滑平整的囊膜,粒径大小基本在400～500μm.加保护剂的微胶囊菌体存活率高于10%,且远远高于冻干菌粉和无保护剂微胶囊组.结论 确定了空气悬浮法制备长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌二联活菌微胶囊的最佳工艺条件,微胶囊化有利于提高活菌的稳定性.     

微胶囊法提高益生菌抗逆性的研究

以嗜酸乳杆菌为研究对象,以明胶和阿拉伯胶为璧材,采用复凝聚法进行微胶囊化,并对其进行耐酸性、肠溶性和贮藏稳定性试验;以包埋率为考察指标,采用响应面分析法对菌胶质量比、搅拌速度和乳化时间进行分析和优化。结果表明:制备嗜酸乳杆菌微胶囊的最佳工艺条件为菌胶质量比1∶7,乳化搅拌速度611 r/min,反应时间15 min,p H 4.0;制得的微胶囊包埋率为93.5%,与模型预测值相对误差仅为0.46%;嗜酸乳杆菌微胶囊在人工胃液中仍有75%的存活率,在人工肠液中30 min内即可崩解完成。在-4℃和30℃下贮藏30 d后,存活率分别为82%和80%。     

冻干乳酸双歧杆菌微胶囊的制备及存活性能研究

为了提高双歧杆菌在贮存和消费过程中的菌体存活率,利用冷冻干燥与微囊化结合的方法,将双歧杆菌和高效活菌保护剂一起作为核心物质,采用乳化法制备双歧杆菌微胶囊。通过正交试验,对双歧杆菌冻干过程中加入的保护剂种类及其最佳配比进行了研究。并探讨了双歧杆菌在模拟胃肠道环境以及高渗透压等极端环境条件下的存活能力。结果表明：加入10%菊糖、6%大豆蛋白、12%海藻糖、10%甘露醇可显著提高微囊化双歧杆菌冻干活菌数,使其存活率达到69.2%。较之冻干菌粉,双歧杆菌微囊在模拟胃液、肠液、高胆汁盐以及高渗透压溶液中均具有较好的耐受性。     

富硒酸奶发酵剂的制备及其发酵性能研究

以青春双歧杆菌ys01和干酪乳杆菌ys05为原料制备富硒酸奶发酵剂。在单因素试验基础上,采用Box-Behnken试验设计对青春双歧杆菌ys01和干酪乳杆菌ys05混合富硒条件进行优化,得到最佳富硒条件为低聚果糖1%、Se4+质量浓度6.83μg/mL、初始pH6.0、青春双歧杆菌ys01和干酪乳杆菌ys05接种比例2:1、接种量3.8%、培养温度42℃、培养24h加硒、培养时间60h。在上述条件下,青春双歧杆菌ys01和干酪乳杆菌ys05混合菌体含硒量为(551±4.6)μg/g,硒转化率为(42.2±3.6)%。利用青春双歧杆菌ys01和干酪乳杆菌ys05制备的富硒酸奶发酵剂具有良好的发酵性能,用其发酵制备富硒酸奶,其有机硒含量为(17±4.5)μg/kg。     

Preparation of the bifidus milk powder

Malt extract and skim milk were used as the culture medium for bifidobacteria. Bifidobacterium longum E194b (ATCC 15707) selected from among four strains grew well in a nitrogen atmosphere regardless of the initial dissolved oxygen level of the culture medium. The optimum temperature range for growth was 34 to 37 degrees C. The viable cell numbers of Bifidobacterium in freeze-dried powder from neutralized bifidus milk were 20 times those found in powder from nonneutralized milk after storage for 30 d at 35 degrees C. The optimum residual water content in the powder for bacterial stability was about 3.5% or less. Bifidus milk powder prepared under these optimum conditions contained at least one billion viable cells even after storage for 30 d at 35 degrees C. The powder must be sealed with material made of aluminium for storage.     

双歧杆菌对仔猪小肠黏液糖蛋白的粘附研究

通过扫描电镜观察细菌在仔猪肠黏膜的粘附状况，发现肠道茵群与黏膜表面的黏液层有密切联系。采用放射性代谢标记方法研究所拥有的双歧杆菌与仔猪肠黏膜黏液糖蛋白的粘附，发现青春双歧杆菌的粘附能力最强，为44．61%；其次是短双歧杆菌，为33．20％；婴儿双歧杆菌和长双歧杆菌分别是18．40％和11．78％。结果表明，所实验的糖、初乳粉以及婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、大肠杆菌和沙门氏茵上清均能导致青春双歧杆菌粘附下降，而青春双歧杆菌和短双歧杆菌上清却有促进其粘附的作用。     

Relationship between oxygen sensitivity and oxygen metabolism of Bifidobacterium species.

Bifidobacteria, which are obligate anaerobes, were studied to determine the relationship between their sensitivity to oxygen and oxygen metabolism. Among the four species tested, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium breve, and Bifidobacterium longum differed from Bifidobacterium adolescentis in sensitivity to oxygen. The former three species showed marked growth under conditions of partial aeration, whereas the growth of B. adolescentis was suppressed by low concentrations of oxygen. Bifidobacteria express reduced NAD-oxidase and -peroxidase activities, which function in a pathway for two-electron reduction of molecular oxygen, producing hydrogen peroxide and, subsequently, water. Activities of reduced NAD-oxidase and -peroxidase were inversely correlated with their sensitivities to oxygen. Bifidobacterium adolescentis exhibited lowered activities of these two enzymes; the activities were 10 to 20% of those observed with B. infantis, B. breve, and B. longum. These observations are compatible with the hypothesis that reduced NAD-oxidase and reduced NAD-peroxidase in Bifidobacterium species play a role in prevention of oxygen toxicity. Superoxide dismutase activity was also detected in Bifidobacterium species. Superoxide dismutase is probably not involved in detoxification of oxygen, because the activity of this enzyme was extremely low, and the sensitivity to oxygen varied independently of superoxide dismutase activity.     

不同醇沉竹荪多糖组分对青春双歧杆菌体外增殖作用的影响

本文以竹荪为原料提取多糖成分并以乙醇分级制备竹荪多糖(DPs)不同组分,通过青春双歧杆菌体外增殖试验初步评价竹荪多糖及其分级醇沉组分的益生元功效。结果显示在α-淀粉酶溶液中水解4 h后,20%、40%、50%、60%竹荪多糖醇沉组分水解度分别为9.10%、8.02%、8.88%、11.67%,与对照组菊粉(水解度13.15%)相比差异显著(P<0.05);80%竹荪多糖醇沉组分、未分级醇沉组分与菊粉对照组相比差异不显著(P>0.05)。在模拟胃液中水解6 h后,20%、40%、50%竹荪多糖醇沉组分水解度分别为17.30%、14.52%、9.61%,与对照组菊粉(水解度5.72%)相比差异显著(P<0.05);60%竹荪多糖醇沉组分、80%竹荪多糖醇沉组分、未分级醇沉组分水解度与对照组相比无显著差异(P>0.05)。随着竹荪多糖添加量的增加,青春双歧杆菌的菌体浓度呈现先增大而后不断减小的趋势。分级醇沉浓度达到80%的竹荪多糖组分和未分级的多糖组分,青春双歧杆菌体外增殖作用与pH下降显著且效果优于菊粉(P<0.05),并在20 h的发酵时间内两者表现出相似的效果。不同竹荪多糖醇沉组分对青春双歧杆菌均有增殖效果,且不同竹荪多糖醇沉组分的增殖效果和抗水解能力随乙醇浓度的增加而增强,未分级的多糖组分同样可以加强青春双歧杆菌增殖能力,具有益生元潜力。     

面包酵母冻干粉保护剂筛选及其生物活性分析

目的:优化真空冷冻干燥过程中保护剂配方,得到发酵性能较好的面包酵母3G-28冻干粉。方法:在对脱脂奶粉、蔗糖、吐温?80、阿拉伯胶、β-环状糊精、甘油单因素实验基础上,采用响应面实验对复合冻干保护剂的配方进行了优化,并对酵母冻干粉的发酵力、海藻糖含量、蔗糖酶活力以及发酵液中的风味物质进行了研究。结果:各因素对面包酵母冻干粉活菌数量影响顺序为:甘油浓度 > 蔗糖浓度 > 脱脂奶粉浓度 > β-环状糊精浓度;最佳复合冻干保护剂的配方为:甘油4.7%,脱脂奶粉20%,β-环状糊精15%,蔗糖5%;面包酵母冻干粉活菌数量为36.89×109 个/mL。面包酵母3G-28冻干粉的发酵能力为214 mg/h/g干酵母,海藻糖含量为44.22 mg/g干酵母,蔗糖酶活力20.27 U/g干酵母,与市售酵母菌冻干粉和初始菌株酵母冻干粉相比表现出较高的生物活性。在风味物质方面,面包酵母3G-28冻干粉与其它两者相比醇类的含量最高,表现出了良好的实用性。结论:本文探讨了面包酵母3G-28冻干粉的最佳冻干保护剂配方,得到了生物活性较优的面包酵母冻干粉,在改善面包产品品质及微生物工业化应用中具有很好的前景。     

青春双歧杆菌的耐氧驯化及不同低聚糖对其增殖效果的影响

为改善青春双歧杆菌在发酵产品中活菌数低、菌种功效弱的情况,对厌氧青春双歧杆菌进行耐氧驯化,采用无氧有氧交替驯化法,在驯化过程中逐渐增加青春双歧杆菌培养液的氧分压,测定青春双歧杆菌驯化前后生理特性,并对比大豆低聚糖、低聚木糖、低聚麦芽糖对青春双歧杆菌增殖的影响。结果表明,青春双歧杆菌在耐氧驯化后对氧气的敏感程度下降,有氧条件下生长能力达标,产酸能力得到提升,菌体驯化前后形态基本一致,耐氧青春双歧杆菌代谢产生的乙酸与乳酸比值较厌氧青春双歧杆菌更适宜发酵,在3种低聚糖中,低聚木糖对青春双歧杆菌增殖作用明显,可作为青春双歧杆菌良好的双歧因子。耐氧驯化后的青春双歧杆菌有着优良的生理特性,能够作为潜在的益生菌菌种深入研究其功能并可应用于发酵食品中。     

婴儿源益生性双歧杆菌的筛选及肠道定殖性研究

本研究旨在从婴儿粪便中筛选出具有潜在益生特性的双歧杆菌,并探究其肠道定殖情况,为双歧杆菌的产品开发提供优良的菌株。采用MRS培养基对样品进行分离纯化,菌株经F6PPK检测及16S r DNA测序鉴定,之后进行模拟胃肠液、胆盐耐受性、对食源性致病菌(大肠杆菌、沙门氏菌、单增李斯特菌等)的抑制及对HT-29细胞的粘附能力测定,将筛选出的菌株进行动物实验,测定其肠道定殖能力。分离到的27株双歧杆菌,经分子生物学鉴定为7个不同的种:Bifidobacterium longum、Bifidobacterium breve、Bifidobacterium bifidum、Bifidobacterium pseudocatenulatum、Bifidobacterium infantis、Bifidobacterium animalis和Bifidobacterium adolescentis。体外实验表明,B.longum A9、B.breve A4、B.bifidum B6、B.longum C6、B.adolescentis F8和B.infantis H6等具有较强的潜在益生特性;动物实验表明,B.infantis H6和B.longum C6具有较强的肠道定殖能力。B.longum C6和B.infantis H6有望作为优良的益生性菌株,应用于双歧杆菌的产品开发。