血红蛋白类红细胞代用品理化性质的色谱分析

目的 建立血红蛋白类红细胞代用品的色谱分析方法。方法 通过高效液相系统与二极管矩阵检测器、多角度激光散射检测器和蒸发光散射检测器进行组合,检测聚乙二醇(PEG)化牛血红蛋白(PEG-bHb)的色谱纯度、相对分子质量分布和磷脂含量。结果 PEG-bHb为多位点不均一修饰的混合物,数均相对分子质量为1.211×10~5,重均相对分子质量为1.347×10~5,残余磷脂含量低于1μg/ml。结论 色谱分析方法是进行血红蛋白类红细胞代用品理化性质分析的适宜方法。     

PEG化猪血红蛋白偶联物的设计与产物分析

目的 采用结构分析和分子模拟方法修饰猪血红蛋白,制备人血代用品的可行性。方法 通过蛋白质结构分析方法比较猪血红蛋白αβ二聚体晶体表面氨基的数量及其反应活性,以分子模拟方法确定修饰产物的可能结构,以mPEG修饰猪血红蛋白,并分析修饰产物理化性质。结果 修饰产物的相对分子质量增大,平均偶联程度达到27％。结论 计算机模拟技术可以用于异源血红蛋白的修饰。     

红细胞代用品的研究进展

近年来国内外多家研究机构在红细胞代用品的研究上取得了可喜的进展,其中血红蛋白氧载体、全氟碳化合物和血红蛋白微囊三大类有着良好的发展前景,为缓解日益紧张的血源供应和解决输血引起的副作用问题提供了可能。本文对红细胞代用品的结构、性质及临床应用的研究进展作一综述。     

氮氧自由基定点修饰牛血红蛋白的制备和抗自氧化研究

摘要:以4-（N-马来酰亚胺基）-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氮氧自由基( Mal-Tempol) 与牛血红蛋白（Hb）为原料,制备了氮氧自由基定点修饰在巯基上的血红蛋白( Mal-Tempol-Hb)。利用分光光度法测定了氮氧自由基的修饰度,通过紫外光谱研究了有无叠氮化钠（NaN3）介导下,Hb和Mal-Tempol-Hb中高铁血红蛋白(MetHb)含量随时间变化的过程。结果表明,无介导下,3h时Mal-Tempol-Hb中MetHb的摩尔百分含量由修饰前的44%下降为修饰后的28%;在NaN3介导下,3h时Mal-Tempol-Hb中MetHb的摩尔百分含量从修饰前的50%下降为修饰后的32%。氮氧自由基的修饰有效地降低了血红蛋白的自氧化速率。     

单甲氧基聚乙二醇修饰蚓激酶的制备及性质研究

采用以三聚氯氰活化的单甲氧基聚乙二醇(mPEG-5000),对从赤子爱胜蚓体内提取的抗血栓酶——蚓激酶进行了化学修饰,以期降低其抗原性及增加它的稳定性。实验表明,在37℃下,15.0mL,pH9.2,0.1mol?L?1的硼酸缓冲液中,按每1.0mg的蚓激酶加入25.5mg活化的mPEG,水浴保温1h,经透析、超滤浓缩、冻干得mPEG修饰酶,测得蚓激酶的修饰率为63.2%,酶活回收率为56.6%。在此基础上,对修饰蚓激酶的性质进行了研究。结果显示,修饰后的蚓激酶对底物的亲和力有所增加(天然酶表观米氏常数Km值为0.267mg.mL?1,修饰酶Km'值为0.115mg.mL?1);修饰蚓激酶的抗胰蛋白酶水解能力、热稳定性均优于天然酶;同时修饰酶的抗原性有了较大程度的降低,与抗血清的结合能力大约是天然酶的25.0%左右。     

黄连素与牛血清白蛋白及牛血红蛋白的相互作用研究

文章运用紫外-可见吸收光谱(UV-Vis)和傅立叶红外光谱(FT-IR)研究了生理pH条件下黄连素与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,简称BSA)及牛血红蛋白(Bovine hemoglobin,简称BHb)的相互作用,求算了黄连素与BSA及BHb结合的结合常数,研究了药物黄连素对BSA和BHb二级结构的影响。     

锌酞菁与牛血红蛋白相互作用的光谱研究

运用荧光光谱和紫外-可见吸收光谱法研究了锌酞菁与牛血红蛋白的相互作用.结果表明,锌酞菁与牛血红蛋白之间主要存在疏水作用,而且锌酞菁对牛血红蛋白还表现出较强的荧光猝灭作用.测定了不同温度下锌酞菁与牛血红蛋白相互作用的表观结合常数KA和热力学参数△G☉、△H☉、△S☉,基于能量转移机制计算了锌酞菁和牛血红蛋白结合时的作用距离r,并用同步荧光技术研究了锌酞菁对牛血红蛋白构象的影响.     

硅胶表面接枝引发转移终止剂制备牛血红蛋白分子印迹聚合物及性能评价

以牛血红蛋白为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,N - N甲基双丙烯酰胺为交联剂,通过固定在硅胶表面的引发转移终止剂二乙基二硫代氨基甲酸钠引发聚合反应,应用表面印迹法制备了牛血红蛋白(BHb)印迹聚合物.通过平衡吸附和选择性实验进行评价,结果表明印迹聚合物具有高吸附效率和选择性.     

氮氧自由基定点修饰牛血红蛋白的制备和抗自氧化性能

以4-(N-马来酰亚胺基)-2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氮氧自由基(Mal-Tempol)和牛血红蛋白(Hb)为原料,制备了氮氧自由基定点修饰在巯基上的血红蛋白(Mal-Tempol-Hb)。利用分光光度法测定了氮氧自由基的修饰度,通过紫外光谱考察了有无叠氮化钠(NaN_3)介导下,Hb和Mal-Tempol-Hb中高铁血红蛋白(Met Hb)含量随时间变化的过程。结果表明,无NaN_3介导下,180 min时,Mal-Tempol-Hb中Met Hb的摩尔分数由修饰前的44%下降为修饰后的28%;在NaN_3介导下,180 min时,Mal-Tempol-Hb中Met Hb的摩尔分数从修饰前的50%下降为修饰后的32%。氮氧自由基的修饰有效地降低了血红蛋白的自氧化速率。     

膨胀床吸附高效纯化牛血红蛋白

探索了将膨胀床吸附层析应用于动物血液蛋白质的提取,尝试了直接从牛血红细胞破碎液中纯化血红蛋白.对该过程采用的吸附介质及pH值、离子强度、温度、洗脱条件等因素对高铁血红蛋白生成、产品纯度以及回收率等的影响进行探索.选择了最佳吸附介质Streamline SP,确定了优化的吸附条件为：吸附过程选用离子强度为10mmol•L^-1的磷酸盐缓冲系统,进料线流速3.3cm•min^-1,进料pH值6.6,改变缓冲液pH值为7.2进行洗脱,操作温度4℃.该技术省去了离心去除碎片步骤,有效地控制了纯化过程中无载氧能力的高铁血红蛋白的生成,动态吸附容量达到70～75mg•ml^-1,只经一步操作产品纯度达电泳纯,高铁血红蛋白含量仅为5.4％.与现有的膜过滤-层析纯化方法相比,膨胀床吸附法操作时间短,提取收率高,产品活性损失小,是一种简捷、高效、适合工业放大的天然血红蛋白制备方法.     

Protective Effect of Dinitrosyl Iron Complexes Bound with Hemoglobin on Oxidative Modification by Peroxynitrite

Dinitrosyl iron complexes (DNICs) are a physiological form of nitric oxide (^•NO) in an organism. They are able not only to deposit and transport ^•NO, but are also to act as antioxidant and antiradical agents. However, the mechanics of hemoglobin-bound DNICs (Hb-DNICs) protecting Hb against peroxynitrite-caused, mediated oxidative modification have not yet been scrutinized. Through EPR spectroscopy we show that Hb-DNICs are destroyed under the peroxynitrite action in a dose-dependent manner. At the same time, DNICs inhibit the oxidation of tryptophan and tyrosine residues and formation of carbonyl derivatives. They also prevent the formation of covalent crosslinks between Hb subunits and degradation of a heme group. These effects can arise from the oxoferryl heme form being reduced, and they can be connected with the ability of DNICs to directly intercept peroxynitrite and free radicals, which emerge due to its homolysis. These data show that DNICs may ensure protection from myocardial ischemia.     

乙二醇二缩水甘油醚交联血红蛋白的反应优化

将乙二醇二缩水甘油醚(EGDE)作为血红蛋白(Hb)的交联剂制备红细胞代用品.采用SDS-PAGE电泳、高效液相色谱和多角度激光散射检测器联用鉴定交联产物.实验表明,在pH 8.7,血红蛋白浓度为20 mg·mL-1,修饰剂EGDE与血红蛋白的摩尔比达100:1时反应4 h,交联产物中90%为分子内交联的血红蛋白.在pH 7.5、血红蛋白浓度为200mg·mL-1,修饰剂EGDE与血红蛋白的摩尔比为25:1时反应12 h,交联产物主要为寡聚血红蛋白,分子量范围在145-375 kD之间;其中二聚体血红蛋白占总蛋白量的74.7%,三聚体血红蛋白18.9%,四到六聚血红蛋白6.4%,几乎无高聚物生成.采用血氧分析仪对交联产物进行活性鉴定,制备的分子内交联和寡聚血红蛋白均具有携氧能力,小鼠的生物学实验表明产品无异常毒性,具备了作为红细胞代用品的可能性.     

牛神经生长因子的研制

目的 寻找新的制备神经生长因子的材料和方法。方法 利用牛精液为原料，进行两次阳离子交换层析。结果 获得了纯的牛神经生长因子，相对分子质量为30000，比活性为400000BU/mg，FPLC检测结果为一个峰，电泳检测纯度大于95％。结论 可以从牛精液中制备神经生长因子。     

脱色猪血红蛋白酶解产物制备及其抗氧化性

通过复合蛋白酶(Pancreatin and Protamex)酶解制备了猪血红蛋白酶解产物,将其产物采用活性炭吸附脱色.酶解产物的分子量范围在＞15 kDa～＜1 kDa(游离氨基酸)之间,脱色酶解产物的分子量范围大部分＜5 kDa.脱色祛除94.36%的高铁血红素从而改善终产物的色泽.酶解产物及脱色产物具有还原力和DPPH自由基清除能力.猪血红蛋白酶解产物的抗氧化活性依赖于其分子量和氨基酸组成.     

用数字三维图像剖析患者服FK506后白蛋白-血红蛋白-红细胞分布特征

采用数字三维图像剖析研究老、中、青年肾移植患者服用普乐可复剂量(FK506)后体内白蛋白、血红蛋白、红细胞个体差异较大的特征,使患者临床用药形象化显现,为个体用药提供信息。将老年患者(>60a)、中年患者(40-59a)与青年患者(<40a)分组,采用MATLAB7.0做三维图像,分析图像特征并且比较白蛋白、血红蛋白、红细胞的各组图像。三维图像显示出三项指标间存在内在关系与个体差异很大。三项体内指标与年龄相关,三项指标对临床个体用药指导具有重要意义。     

纳米氢氧化铝的制备及亲油改性

采用均匀沉淀一共沸蒸馏法制备纳米氢氧化铝,考察了反应温度对粒径的影响;经硅烷偶联荆KH570改性后,纳米氢氧化铝的亲油性增强,能稳定分散在有机单体中.     

牛乳铁蛋白十肽的基因改造、克隆及表达

目的克隆并表达牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因。方法参照大肠杆菌偏爱密码子,分别针对牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,设计并合成两个具有相同黏性末端的DNA片段,同时在其基因前后分别加上天冬酰胺和甘氨酸的密码子,构成羟胺裂解位点,通过连接获得其二拷贝基因同向串联体。分别将该串联体克隆至载体pUC18上,经双酶切、PCR及测序鉴定后,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物纯化后,用凝血酶切割及羟胺裂解。结果获得了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2二拷贝基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出相对分子质量约29000的目的蛋白条带,纯化后的蛋白经凝血酶切割后,相对分子质量约29000的目的蛋白条带消失。结论已成功克隆并表达了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,为基因工程抗真菌肽的制备奠定了基础。