咖啡因、顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 研究咖啡因，顺铂诱导骨肉瘤细胞株（OS-732）细胞凋亡的作用。探讨咖啡因在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的机制。方法 骨肉瘤细胞株（OS-732）经单纯细胞培养，与咖啡因，顺铂，咖啡因和顺铂联合作用各72h后，分别采用流式细胞仪（FCM）分析细胞凋亡比例，通过细胞内Rh123荧光强度的测定分析线粒体跨膜电位△ψm的变化，并应用电子显微镜观察细胞凋亡的形态变化。结果 骨肉瘤细胞株（OS-732）分别经单纯培养72h,与5.0mmol/L的咖啡因作用72h，与10.0μg/ml的顺铂作用72h，与咖啡因（5.0mmol/L）与顺铂（10.0μg/ml）共同作用72h后，FCM分析显示细胞凋亡比例分别为2.50%,10.62%,31.62%,57.44% ;后三者导致线粒体跨膜电位△ψm明显下降，分别为26.45% ,17.82%,38.26%。透射电镜观察显示典型的细胞凋亡特征性变化；细胞皱缩，胞膜结构保持完整，胞浆空泡化明显，胞核固缩，染色质浓缩并边缘化。表现为新月形胞核。结论 咖啡因，顺铂均可诱导骨肉瘤细胞凋亡，咖啡因和顺铂联合使用，可使诱导细胞凋亡的作用明显增强。咖啡因诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是咖啡因在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的潜在机制之一。     

咖啡因促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨咖啡因促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用。方法 :以人骨肉瘤细胞 (OS -73 2 )为受试对象 ,设咖啡因组、顺铂组、混合组、对照组 ,从三个方面观察咖啡因是否具有促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用。结果 :药物作用各组骨肉瘤细胞均可见凋亡的发生。在咖啡因与顺铂共同作用后线粒体跨膜电位下降的骨肉瘤细胞百分率明显增加 (P <0 .0 5 )。TUNEL法检测混合组骨肉瘤细胞凋亡百分率较其他各组明显增高 (P <0 .0 5 )。结论 :咖啡因有促进顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用。     

人参皂苷Rb1对UVB诱导原代角质形成细胞光损伤的影响

目的:观察人参皂苷Rb1对中波紫外线诱导的人原代角质形成细胞光损伤的影响,探讨其可能的作用机制.方法:通过细胞培养法,加入不同浓度人参皂苷Rb1(5、20、50μg/m1)预处理细胞,以中波紫外线辐射剂量30mJ/cm2诱导细胞DNA损伤,MTT法观察细胞活力的变化,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,免疫细胞化学染色观察细胞DNA损伤环丁烷嘧啶二聚体.结果:人参皂苷Rb1对未辐射中波紫外线的角质形成细胞的活力无明显影响,但可显著增强紫外线辐射后细胞的活力,减少核浓缩、核小体的形成及细胞凋亡的发生,加速环丁烷嘧啶二聚体的清除.结论:人参皂苷Rb1可能通过加速DNA损伤的清除,抑制紫外线诱导的角质形成细胞凋亡的发生.     

肿瘤坏死因子-α诱导HaCaT角质细胞凋亡的研究

烧伤后由于坏死组织刺激,引起创面局部中性粒细胞和单巨噬细胞聚集、黏附和释放炎症介质,导致机体血中和痂下水肿液中肿瘤坏死因子(TNF)-α水平明显升高,而烧伤创面愈合的关键在     

玉竹对UVB诱导HaCaT细胞损伤的保护作用

目的:探讨玉竹水提液对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:用64mJ.cm-2的UVB照射人皮肤角质形成细胞建立光老化细胞模型,以不同浓度玉竹提取物处理光老化细胞,羟胺法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,TBA法检测丙二醛(MDA)含量,酶联免疫法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌量。结果:UVB照射角质形成细胞后,SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高,TNF-α、IL-6分泌量增加(P<0.01),玉竹水提液中(100μg.ml-1)、高(200μg.ml-1)剂量组能显著提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,减少TNF-α、I L-6分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:玉竹水提液可在一定程度上减轻UVB对角质形成细胞的损伤,其机制可能与其抑制氧化损伤,增强细胞抗氧化能力,减少炎症细胞因子分泌有关。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是能够较特异性诱导肿瘤细胞凋亡的肿瘤坏死因子超家族成员 ,由于对正常组织不表现毒性[1] ,在肿瘤治疗方面得到广泛研究。我们对TRAIL诱导膀胱癌细胞EJ凋亡的作用进行了研究 ,现报告如下。材料与方法　重组人TRAIL(rhTRAIL)由KamiyaBiomedical公司制备和纯化 ,浓度设置为 10 0、5 0、2 0和 10ng/ml。Annexin V FluosStainingKit试剂盒购自罗氏公司。人膀胱癌EJ细胞用含 10 %小牛血清 ,10 0U/ml青霉素和10 0 μg/ml链霉素的RPMI 16 4 0 37℃、5 0ml/LCO2 、饱和湿度下培养。细胞按 5× …     

中波紫外线对HaCaT细胞增殖活性的影响

目的：探讨中波紫外线（UVB）对HaCaT细胞损伤的影响。方法：取对数生长期的HaCaT细胞,用0、30、60、90 mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0、24、48、72h,在倒置显微镜下观察其形态学变化,用MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响。结果：在30～60mJ/cm2的UVB辐射下,随辐射剂量的增大,细胞的增值活性逐渐下降,而细胞的凋亡率逐渐增加,倒置相差显微镜从形态学上证实了细胞的凋亡改变。结论：UVB可诱导细胞凋亡,且呈剂量依赖性。     

可卡因诱导大鼠睾丸细胞凋亡的研究

目的：探讨长期使用可卡因导致睾丸损害中细胞凋亡的作用。方法：实验组每天给25d龄雄性Wistar大鼠皮下注射盐酸可卡因（15mg/kg)，共80d。对照组每天给相同剂量的普通生理盐水，共80d。在可卡因使用的第20、40、80d分别处死动物并取睾丸，用TUNEL、流式细胞技术检测睾丸细胞凋亡的情况。结果：细胞凋亡在使用可卡因20d出现，40d达高峰，且持续80天才开始下降，同对照组相比差异有显著性意义（P＜0.05)。流式细胞分析出现凋亡峰。结论：使用可卡因可以导致大鼠睾丸细胞显著凋亡，导致睾丸损害的机制可能与细胞凋亡有关。     

诱导胰腺癌细胞凋亡研究进展

目前，主要通过药物或特殊类型化合物和基因治疗两种途径来诱导胰腺癌细胞凋亡。本文就这两个方面的最新进展作一综述。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究

目的 探讨肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导膀胱癌细胞凋亡的效应。方法 10～100μg／L梯度浓度的TRAIL与培养的EJ细胞共孵育4～24h。采用Annexin V染色，DNA云梯实验和流式细胞技术检测诱导后EJ细胞凋亡发生的时期和程度。结果 TRAIL诱导4h即后可观察到早期细胞凋亡发生，8h后即可检测DNA片段化，24h后凋亡细胞最多达到66．29％。结论 TRAIL能够迅速诱导EJ细胞凋亡，可能成为膀胱癌治疗的新方法。     

绿茶多酚对表皮HaCaT细胞光损伤的干预作用研究

目的:本文旨在观察没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对中波紫外线(UVB)引起的表皮HaCaT细胞损伤,以及对细胞着色性干皮病蛋白A(XPA)和切除修复互补交叉蛋白1(ERCC1)蛋白表达的影响。方法:以30mJ/cm2 UVB照射HaCaT细胞,照光前后加入50g/mL EGCG进行干预,Western blot法检测细胞XPA和ERCC1蛋白的表达水平。结果:UVB照射后细胞内XPA和ERCC1蛋白表达水平逐渐增高,在照光后4h达到峰值,后逐渐恢复至接近正常值;加入EGCG干预可明显降低XPA和ERCC1蛋白的表达水平。结论:EGCG对紫外线光损伤的干预作用可能与调控细胞内XPA和ERCC1蛋白的表达有关。     

UVB辐射后HaCaT细胞光产物的产生和清除及EGCG的干预作用

目的:环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)是细胞受紫外线损伤后产生的特征性光产物之一。本文观察UVB辐射后HaCaT细胞光产物CPDs的产生和清除没食子儿茶素没食子酸脂(epigallocatechingallate,EGCG)的干预作用。方法:以一定剂量UVB照射HaCaT细胞并用EGCG干预处理,采用免疫组织化学法在照光后不同时间点检测CPDs的产生和清除。结果:细胞损伤程度随UVB辐射剂量加大而增大。30mJ/cm2UVB辐射后HaCaT细胞开始产生CPDs,0.5h左右达到高峰。同时细胞也开始清除CPDs,辐射后4h内清除速率较快,4h后清除速率逐渐降低,至24h基本清除CPDs。EGCG处理UVB辐射的细胞CPDs少于单纯照光组(P<0.05)。结论:细胞损伤程度随UVB辐射剂量增大而加重,UVB辐射后HaCaT细胞对CPDs的清除存在快速期和慢速期;EGCG可以降低UVB辐射所致的光产物水平。     

阿魏酸对UVB导致人角质形成细胞氧化损伤的保护作用研究

目的：探讨阿魏酸是否能对中波紫外线（UVB）诱导的人角质形成细胞（HaCaT细胞）氧化损伤和凋亡起保护作用以及其可能的作用机制。方法：将HaCaT细胞分成空白组、阿魏酸纽、UVB照射组、UVB照射＋阿魏酸纽。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,筛选最佳药物浓度;检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）和过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量变化。结果：UVB照射组的SOD、CAT、GSH-Px明显下降,MDA相应上升。阿魏酸处理的细胞UVB照射后其活性以及上清液中的SOD、GSH-Px、CAT活性相对于未加药UVB照射纽明显增加,MI）A相应下降。结论：阿魏酸可以减少UVB诱导HaCaT细胞氧化损伤,其机制可能与增强抗氧化成分活性和减少氧自由基有关。     

中波紫外线照射对HaCaT细胞p53mRNA和p53蛋白表达的影响

目的：研究中波紫外线（UVB）照射对永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p5 3mRNA和p53蛋白表达的影响.方法：以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测照射后不同时间点的p5 3mRNA和p5 3蛋白的表达水平;同时检测不同剂量UVB照射后同一特定时间点p5 3mRNA和p53蛋白的表达水平.结果：30mJ/cm^2的UVB照射后HaCaT细胞的p5 3mRNA和p5 3蛋白表达逐渐增加,4h达到峰值,后逐渐恢复至照光后24h接近正常值;不同剂量UVB照射4h后,p53mR-NA和p53蛋白表达随剂量增加而增加.结论：HaCaT细胞p5 3mRNA和p5 3蛋白表达与UVB照射存在一定的时间和剂量关系.     

UVB照射对PIG1细胞增殖活性的影响

目的：探讨UVB照射对正常人黑素细胞PIG1细胞形态及增殖活性的影响。方法：取对数生长期的PIG1细胞,分别以50、100、200、300、400、500、600和700mJ/cm2剂量的UVB照射后继续培养0h、24h和48h,在倒置显微镜下观察其形态学变化,用MTT法检测UVB照射对细胞增殖活性的影响。结果：在50～200 mJ/cm2的UVB辐射下,随辐射剂量的增大,PIG1细胞的增殖活性逐渐增加,倒置相差显微镜从形态学上证实了一定剂量的UVB照射可以促进细胞增殖。结论：一定剂量的UVB照射有刺激PIG1细胞增殖及树突生长的作用。     

Germ cell apoptosis induced by progesterone in rats

Objectives:To document the effect of progesterone exposure with large dose and long term on spermatogenesis,especially on the germ cell apoptosis in rats.This study was also to evaluate the toxicity of progesterone in the reproductive system when administered with large doses and long term in men.Methods:Groups of adult male SD rats were administered with 37.5,75 and 150 mg/kg depot-medroxyprogesterone acetate(DMPA)per two-weeks for 12 or 18 weeks.At the end of treatment,each male rat was paired with one adult female SD rat to estimate the reproductive function.Serum testosterone concentration was analyzed in duplicate by radioimmunoassay(RIA).The pathological changes of testes,epididymis,and prostate were checked under light microscopic,epididymis was also used for sperm count,and fresh testis tissue was used for apoptosis assessment by flow cytometry.Results:After treatment with DMPA,weights of gonad,the ratio of testes/body,the ratio of epididymides/body,and the ratio of prostate/body decreased significantly(P<0.01).The level of serum testosterone,sperm count,sperm activity decreased significantly(P<0.01)while abnormality of sperm increased significantly(P<0.01).The embryonic number in uterus of pairing female rat decreased significantly after DMPA treatment.Compared with control,the number and the ratio of apoptotic germ cell increased dramatically(P<0.01)along with dose increase or treating prolongation of DMPA,which analyzed by flow cytometry.Conclusion:In summary,in addition to inhibition of pituitary gonadotrophin and subsequently deprivation of androgen,progesterone(DMPA)inhibits spermatogenesis by the induced germ cell apoptosis.The reproductive toxicity of DMPA administrated with large doses and long term is confirmed.     

Study on the effect of glucocorticoid on apoptosis of rat spermatogenic cells

The effect of glucocoiticoid on the apoptosis of rat spermato-genic cells labeled with TUNEL was observed in vivo by laser con-focal microscopy and electron microscopy. The results showed thatlarge doses of glucocorticoid increased the apoptosis of rat spermto-genic cell. (Chin J Androl 2001; 2: 98-101)     

MTT法和水溶性四氮唑(WST-1)法检测中波紫外线照射HaCaT细胞后活力的比较

目的:观察中波紫外线照射后HaCaT细胞活力的变化并探讨水溶性四氮唑(WST-1)法检测的适用性.方法:将HaCaT细胞分为对照组(假照射组)、300J/m2、600J/m2、900J/m2紫外线照射后24h组(每组6个样本).600J/m2紫外线照射后4h组、8h组、1 2h组、24h组、48h组、72h组(每组6个样本).血球计数板计算HaCaT细胞数量.四甲基偶氮唑盐(MTT)法和水溶性四氮唑(WST-1)法活性测定HaCaT细胞活性.结果:MTT法显示300J/m2、600J/m2、900J/m2紫外线照射HaCaT细胞24h后光密度(OD)值明显较0J/m2组低;WST-1法各组OD值明显比0J/m2组低.MTT法显示600J/m2紫外线照射HaCaT细胞8h、12h、24h、48h、72h后OD值明显比0J/m2组低.WST-1法显示600J/m2紫外线照射HaCaT细胞4h后OD值较0J/m2组低;600J/m2紫外线照射HaCaT细胞8h、12h、24h、48h、72h后OD值明显比0J/m2组低.WST-1法的OD值与细胞计数、MT法OD值呈正相关.结论:随着紫外线剂量的加大和照射后时间延长,HaCaT细胞数量减少,细胞的活力下降,WST-1代谢活性亦降低,呈时间和剂量依赖性.HaCaT细胞可对WST-1进行代谢,适用于该细胞增殖研究.