湖南汉族群体HLA—DR2等位基因多态性与系统性红斑狼疮的相？…

以ＨＬＡ－ＤＲＢ基因类扩增为参照,通过ＨＬＡ－ＤＲ２组特异性扩增确定ＨＬＡＤＲ２携带者,ＰＣＲ／ＳＳＰ作亚型分型,并用银染ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析ＨＬＡ－ＤＲ２等位基因第二外显子单链构象,调查湖南地区汉族群体ＳＬＥ（系统性红斑狼疮）患者５８例和健康对照５９例ＨＬＡ－ＤＲ２等位基因分布。结果示,ＨＬＡ－ＤＲ２与ＳＬＥ相关,ＨＬＤ－ＤＲＢ１＊１５０１为疾病相关等位基因,该群体中检出的另外两种亚型ＤＲＢ１＊     

广东地区妇女子宫平滑肌瘤遗传易感性与HLA-DRB1、DQA1、DQB1相关性的研究

目的分析子宫平滑肌瘤与ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＡ１、ＤＱＢ１等位基因的相关性,从而探讨子宫平滑肌瘤患者的遗传易 感性。方法　用ＰＣＲ－ＳＳＰ及ＰＣＲ－ＳＳＯ技术对５１例外科手术后病理证实为子官平滑肌瘤患者和５０例正常妇女进行 ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＤＱＡ１、ＤＱＢ１等位基因的基因分型。结果　ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０２,ＤＱＡ１＊０６０１在子宫平滑肌瘤组明显高于对照 组（Ｐ＜０．０５,ＲＲ＝５．３７８,１５．４）,而ＤＲＢ１＊０１、＊０７,ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０ｌ０２却表现为对照组增高（Ｐ＜０．０５,ＲＲ＝０．２２５,０．３７５, ０．３２９）。结论ＤＲＢ１＊０２、＊０１、＊０７,ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０６０１、＊０１０２基因与子宫平滑肌瘤的遗传易感性相关联。     

原发性高血压与HLA—DRB等位基因相关的研究

目的：分析高血压患者的遗传易感性的遗传性背景。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＰ技术对病例组５６例，正常对照组１０４例进行ＨＬＡ－ＤＲＢ等位基因分型。结果：ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊１２等位基因频率显著高于正常组，并与发病年龄密切相关，即发病年龄越早，与ＤＲＢ１＊１２的关联强度越大。ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０３也出现随发病年龄的提前，而显示出明显的关联趋势。结论：ＨＬＡ－ＤＲＢ＊１２是高血压病的相关基因，与该病的遗传易感     

皖籍汉人HLA-DQA1、-DQB1基因型与银屑病的相关性研究

目的 探讨ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０１０３、－ＤＱＡ１０２０１、ＤＱＢ１＊０２０１、－ＤＱＢ１＊０３０３四种等位基因与皖籍汉族银屑病患者的相关性。方法 利用聚合酰边反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）法。对８４例名健康患者及４０名健康对照进行ＰＣＲ反应,记录以上四种等位基因在他们中的分布情况。结果 （１）ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０２０１与皖籍汉族银屑病患者具有明显的相关性（Ｐｃ＝０．００００１９１,ＯＲ＝８     

应用特异性核酸探针杂交分析法进行献血员HLA分型的初步报告

目的 探讨利用特异性核酸探针杂交分析法检测ＨＬＡ等位基因的可行性。方法 １０例西南某地献血员,提取ＤＮＡ后经ＰＣＲ扩增,采用酶联探针免疫杂交分析法检测ＨＬＡⅠ和ＨＬＡⅡ等位基因。结果 １０例标本经检测ＨＬＡ Ⅰ和ＨＬＡ Ⅱ等位基因,表现为Ａ＊０２、Ａ＊２４、Ａ＊１１、Ｂ＊３５、Ｂ＊１５、Ｂ＊５１、Ｂ＊５２、Ｂ＊４０、ＤＲＢ１＊１１０１、ＤＲＢ１＊０９０１、ＤＱＢ１＊０３０３、ＤＱＢ１＊０３０１等类     

湖南汉族群体HLA—DQA1位点等位基因多态性分析

目的：分析湖南汉族群体ＨＬＡ－ＤＱＡ位点等位基因多态性。方法;应用ＰＣＲ／ＳＳＰ和银染ＰＣＲ／ＳＳＣＰ技术对６０名无血缘关系湖南汉族健康个体作ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因分型。结果：检出１０种ＨＬＡ－ＤＱＡ１等位基因。基因频率范围为０．０１６７～０．２２５４,ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０３０２,＊０５０１,＊０１０２常见等位基因,ＨＬＡ－ＤＱＡ１＊０１０１,＊０２０１,＊０４０１为少见等位基因。检出２６种基因型,     

人白细胞抗原—DRB1等位基因与中国西部泡状棘球蚴病易感性？…

目的 了解人白细胞抗原（ＨＬＡ）＝ＤＲＢ１等位基因与泡球蚴病相关性,阐明泡球蚴病的免疫学发病机制,探寻 球蚴病的易感基因或抗病基因提供线索。方法 应用ＰＣＲ／ＳＳＲ技术,对中国西部甘肃省漳县、岷县泡球蚴病高流行区４个 的３５例口才１０４例正常人九进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因型分析。结果 且ＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０４０Ｘ基因频率为２６％（１８／７０）,正常对照组籽１０％（２０／２０８）（ＲＲ＝４．４５,Ｘ     

上海地区妊娠高血压综合征患者人类白细胞抗原基因的多态性

研究人类白细胞抗原（ＨＬＡ）与妊娠高血压综合征（ＰＩＨ）关联的机制。采用非同位素标记的聚合酶链反应－顺序特异性寡核苷酸探针（ＰＣＲ／ＳＳＯ）杂交的方法，对３０对ＰＩＨ患者夫妇及１４对正常对照夫妇进行了ＨＬＡ－ＤＱＢ１基因型的检测。结果：ＰＩＨ患者夫妇ＨＬＡ－ＤＱＢ１＊０５０２等位基因频率增高。结论：ＨＬＡ－ＤＱＢ１＊０５０２可能是ＰＩＨ的易感基因。     

创伤多器官功能不全综合征与HLA—DRB1相关性研究

目的 研究创伤后ＭＯＤＳ与ＨＬＡ－ＤＲＢ１相关性。方法 对ＰＣＲ对３７例创伤对３７例创作后ＭＯＤＳ患者１８例对ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因引物进行扩增,用ＥＬＩＳＡ进行ＩＬ－１０测定。结果 创作后ＭＯＤＳ患者ＤＲ２（ＤＲＢ１＊１５０１－ＤＲＢ１～１５０２）基因频率显著升高。ＤＲ２＾＋较ＤＲ２＾－的ＭＯＤＳ患者血浆ＩＬ－１０水平和病死率显著升高（Ｐ〈０．０１）。结论 创伤后ＭＤＤＳ与ＨＬＡ－ＤＲ２（ＤＲＢ１     

序列特异性PCR在HLA—DRB1基因分型的应用

参照ＨＬＡⅡ型基因序列设计８条序列特异性引物，应用分别代表ＨＬＡ－ＤＲ１－１８血清学特异性的１１株ＤＮＡ标准品建立序列特异性ＰＣＲ（ＰＣＲ－ＳＳＰ）和套式ＰＣＲ方法，并对６４例ＩＤＤＭ病人和７２例健康对照者进行ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因分型。结果：（１）方法学鉴定示程序了各特异性引物均能从１１株ＤＮＡ标准口扩增出相应的等位基因，并能检出杂合子。除ＨＬＡ－ＤＲ３组特异引物对ＤＲ１发生交叉外，其余序列特异性     

HLA—DRB1基因多态性与河南汉族人群急性淋巴细胞白血病关 …

目的：探讨急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）易感性与ＨＬＡ＿ＤＲＢ１基因多态性之间的关联性,找出ＡＬＬ的易感基因。方法：采用序列特异笥引物聚合酶链反应（ＰＣＲ－ＳＳＰ）ＤＮＡ分型技术对５６例ＡＬＬ患者和１０５例健康对照组进行进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因分型。结果：ＡＬＬ组与ＨＬＡ－ＤＲ７基因关联,基因频率为２４．１％,ＲＲ＝２．５６,χ＾２＝７．３４,Ｐ〈０．０１,病因分数为０．２９．其他等位基因频率ＡＬ     

中国人胰岛素依赖型糖尿病与HLA—DQ基因的相关性研究

本研究采用聚合酶链式反应和序列特异性寡核苷酸探针杂交方法，对北京地区汉族４９例胰岛素依赖型糖尿病患者及４８名健康对照者ＨＬＡ－ＤＱＢ１基因和２７例ＩＤＤＭ患者及２９名对照者ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因的研究提示：（１）ＨＬＡ－ＤＱＡ１基因的Ａ４等位基因（ＲＲ＝１１．７，Ｐｃ＜０．０２）与ＩＤＤＭ易感性呈显著正相关，（２）ＨＬＡ－ＤＱＢ１基因的ＤＱＢ１０６０１（ＤＱＷ１．１２）等位基因与ＩＤＤＭ抵抗性相关（     

联合应用PCR/SSCP和PCR/SSO提高HLA基因分型的精确性

ＰＣＲ／ＳＳＯ分析７０例无血缘关系湖南汉族正常人ＨＬＡＤＰＡ１位点等位基因多态性，并对全部样本ＨＬＡＤＰＡ１基因第二外显子作银染ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析。发现ＰＣＲ／ＳＳＯ误将一例ＤＰＡ１＊０１／０２杂合子定为单一的ＤＰＡ１＊０１基因；经ＰＣＲ／ＳＳＣＰ完善获得湖南汉族正常人ＤＰＡ１＊０１，０２基因频率值分别为０．２６３２和０．７３２７；ＰＣＲ／ＳＳＣＰ法显示湖南汉族人ＤＰＡ１＊０２基因由单一亚型构成。结果表明，ＰＣＲ／ＳＳＣＰ可用于进一步分析ＰＣＲ／ＳＳＯ分型中杂交信号不典型或难以准确定型的样本，用于分析ＳＳＯ序列以外的ＨＬＡＤＮＡ多态性，完善分型精确性     

中国人胰岛素依赖型糖尿病与HLA－DQ基因的相关性研究

本研究采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）和序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＳＳＯＰＨ）方法（ＤＱＡｌ，共用９个探针，ＤＯＢ１，共１０个探针），对北京地区汉族４９例胰岛素依赖型糖尿病（ＩＤＤＭ）患者及４８名健康对照者ＨＬＡ－ＤＯＢｌ基因和２７例ＩＤＤＭ患者及２９名对照者ＨＬＡ－ＤＱＡｌ基因的研究提示：（１）ＨＬＡ－ＤＱＡｌ基因的Ａ４等位基因（ＲＲ＝１１．７，Ｐｃ＜０．０２）与ＩＤＤＭ易感性呈显著正相关。（２）ＨＬＡ－ＤＱＢ１基因的ＤＯＢ１＊０６０１（ＤＱＷ１．１２）等位基因与ＩＤＤＭ抵抗性相关（ＲＲ＝０．０３，Ｐｃ＜０．００２）。（３）ＨＬＡ－ＤＱ６５７天门冬氨酸［ＨＬＡ－ＤＱβ５７Ａｓｐ（＋）纯合子基因型与ＩＤＤＭ易感性降低有关，而ＨＬＡ－ＤＱβ５７非天门冬氨酸［ＨＬＡ－ＤＱＢ５７Ａｓｐ（－）］纯合子基因型与ＩＤＤＭ易感性增强有关，说明ＨＬＡ－ＤＱβ链第５７位氨基酸在决定ＩＤＤＭ易感性方面的重要作用。同其它人种相比，ＨＬＡ－ＤＱβ５７Ａｓｐ（－）纯合子基因型频率在中国人群中的减少及ＨＬＡ－ＤＱβ５７Ａｓｐ（＋）纯合子基因型频率在中国人群中的增多可能同中国人群ＩＤＤＭ发病率低有关。     

人4-1BB-hIgG1Fc融合蛋白真核表达载体的构建

目的：构建人４１ＢＢ胞膜外区ｈＩｇＧ１Ｆｃ融合蛋白真核表达载体。方法：ＰＣＲ扩增人４１ＢＢ胞膜外区和ｈＩｇＧ１Ｆｃ基因片段，用ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔＩ酶切４１ＢＢ胞膜外区，ＰｓｔＩ　、ＥｃｏＲ　Ｉ　酶切ｈＩｇＧ１Ｆｃ　，ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＩ　酶切ｐＣＤＮＡ３，纯化后的酶切产物经Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转化大肠杆菌ＤＨ５α，氨苄青霉素筛选阳性克隆，ＰＣＲ及测序鉴定。结果：连接反应产物转化大肠杆菌ＤＨ５α，氨苄青霉素筛选出多个阳性克隆；分别以针对４１ＢＢ胞膜外区和ｈＩｇＧ１Ｆｃ的引物进行ＰＣＲ扩增，电泳后观察到一５５８ｂｐ、７０８ｂｐ的特异性条带，与４１ＢＢ胞膜外区和ｈＩｇＧ１Ｆｃ相符，提示构建成功。进一步测序分析证明克隆在ｐＣＤＮＡ３　质粒中的４１ＢＢ和ｈＩｇＧ１Ｆｃ序列和读码框架正确，无基因突变。结论：成功构建人４１ＢＢ胞膜外区ｈＩｇＧ１Ｆｃ融合蛋白真核表达载体，为表达４１ＢＢ融合蛋白奠定基础。     

PCR扩增IgH和TCR_β基因重排在检测淋巴细胞白血病微小残留病中的应用

利用ＩｇＨ和ＴＣＲ＿β克隆性基因重排原理，用多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ．ＰＣＲ）技术检测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓和外周血共１３例。结果：ＡＬＬ初治的２例患儿ＰＣＲ检测全部呈现阳性特异性单带。ＡＬＬ完全缓解（ＣＲ）的１１例患儿中阳性７例，阴性４例，其中２例骨髓移植（ＢＭＴ）患儿移植前ＰＣＲ阳性，移植后转为阴性。１例自体骨髓移植（ａｕｔｏ－ＢＭＴ）患儿于移植后２个月时ＰＣＲ检测又重新出现阳性，但临床无复发现象。４例对照者ＰＣＲ均为阴性。结果表明ＰＣＲ技术具有简便、快速、敏感、特异性强等优点，在检测微小残留（ＭＲＤ）中具有广阔前景。     

PCR证明肝癌细胞有HBV－DNA复制

用恰跨过ＨＢＶ－ＤＮＡ的ＤＲ１、ＤＲ２两个缺刻的特制引物对２１例肝癌及其癌旁组织作巢式ＰＣＲ。其目的基因为ＨＢＶ的复制模板ｃｃｃＤＮＡ。同时作ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ免疫组化。结果４例癌组织、６例癌旁组织呈ｃｃｃＤＮＡ阳性，其ＰＣＲ产物在３３５ｂｐ处，条带清晰；阴性对照呈阴性，首次发现肝癌细胞内有ｃｃｃＤＮＡ，证明了肝癌细胞有ＨＢＶ复制模板，有复制。该４例ｃｃｃＤＮＡ阳性中其癌细胞的ＨＢｓＡｇ、ＨｋＡｇ阳性率亦显著高于ｃｃｃＤＮＡ阴性者。此外，ＨＢＶ复制可发生于各种不同分化的肝癌细胞。     

应用40条引物进行不同品系小鼠RAPD遗传检测的初步研究

目的：探讨运用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ对小鼠进行遗传检测的可能性,筛选在各品系小鼠间具有多态性的引物。方法：运用４０条引物对ＴＡ１、ＢＡＬＢ／ｃ、ＮＩＨ、ＳＣＩＤ、Ｔ７３９、ＤＢＡ／２、６１５、ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ等９个品系小鼠的ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,以琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果：４０条引物中只筛选出２条多态性引物,其它３８条引物扩增结果无品系间多态性。结论：ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法可以区分９     

丁基胆碱酯酶基因、载脂蛋白E基因与阿尔茨海默病的相关性

目的：探讨中国汉族人载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因、丁基胆碱酶基因（ＢＣＨＥ）基因多态性与阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ,ＡＤ）的相关情况。方法：应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法,在３８例患者和４０例正常人中观察ＡｐｏＥ和ＢＣＨＥ基因多态性的分布,进行关联分析。结果：ＡＤ患者与ＡｐｏＥ基因的等位基因ε４正关联,ＢＣＨＥ基因多态性与ＡＤ无关联。结论：在中国人群中,ＡｐｏＥε４是ＡＤ发病的风     

用mRNA差异显示法分离大鼠吗啡依赖相关基因

目的：分离并克隆大鼠吗啡依赖相关基因。方法：ＳＤ大鼠用递增剂量的吗啡作皮下注射,形成吗啡依赖的动物模型。分离鼠脑的中脑导水管周围灰质、伏核、纹状体等核团,提取总ＲＮＡ,用ｍＲＮＡ差异显示（ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙＰＣＲ,ＤＤＰＣＲ）的方法,筛选吗啡依赖大鼠特异表达产物的ｃＤＮＡ片段。用３组锚定引物（Ｔ１２ＭＮ,Ｍ＝Ａ,Ｇ,Ｔ或Ｃ,Ｎ＝Ａ,Ｃ或Ｇ）和６组随机引物（ＡＰ１～ＡＰ６）作不同组合进行ＰＣＲ扩增。结果：获得了８０余个差异表达产物的ｃＤＮＡ片段,经斑点杂交初步筛选,克隆了１０个阳性片段,选取４个克隆进行序列分析,获得了４个ｃＤＮＡ片段。结论：通过ＢＬＡＳＴ数据库序列比较,现已确认获得了４个吗啡依赖表达的新基因片段。