全沟硬蜱是我国北方地区莱姆病螺旋体的主要传播媒介

研究我国北方地区莱姆病螺旋体的生物媒介—蜱的种类、带菌状况及在传播莱姆病中的作用。用布旗法和动物诱捕法在山林地区采集蜱，分类鉴定，直接荧光抗体染色法查蜱中肠带菌率，ＢＳＫ培养基分离病原体，单克隆抗体鉴定菌株。调查蜱叮咬率与人群莱姆病感染率、患病率以及蜱的季节消长与莱姆病慢性游走性红斑（ＥＣＭ）病例发生的季节性关系。在北方１０省（市、区）共采集到１００００多只蜱，分属为２科７属１１种，以全沟硬蜱为优势种，占８０％～９５％。４种蜱的中肠携带莱姆病螺旋体，全沟硬蜱的带菌率高达２０．００％～４５．００％。从４种蜱分离到９８株莱姆病螺旋体，其中９０％以上是从全沟硬蜱分离的。全沟硬蜱叮咬率高的人群，莱姆病的感染率和患病率也高。全沟硬蜱的季节消长与ＥＣＭ发生的季节性相一致。证实我国北方地区至少有４种蜱的中肠内携带莱姆病螺旋体，莱姆病螺旋体的主要生物媒介是全沟硬蜱。     

山东省莱姆病螺旋体的首次分离与鉴定

分离与鉴定莱姆病螺旋体.方法：1996年在山东省费县塔山林场，对莱姆病螺旋体的主要媒介蜱进行调查，用布旗法共采集蜱900只，均为长角血蜱。结果：对50只进行中肠带螺旋体检查，带螺旋体率为12％（6／50）。从86组（850余只）长角血蜱中分离到2株螺旋体（TSH1、TSH3）。该螺旋体对H5332和H9724单克隆抗体呈阳性反应，对H6831单克隆抗体呈阴性反应，证实为莱姆病螺旋体。结论：山东省从长角血蜱中分离到莱姆病螺旋体尚属首次，且首次从病原学上证实山东省林区存在莱姆病疫源地。     

我国莱姆病螺旋体生物媒介的初步调查

自1987年以来,我们在全国开展了莱姆病调查,从黑龙江、吉林、辽宁、内蒙、河北、新疆、湖北、四川、福建和北京等省、市采集的全沟硬蜱、粒形硬蜱、壤塘硬蜱、嗜群血蜱、二棘血蜱和长角血蜱分离出71株莱姆病螺旋体,其中55株从全沟硬蜱分离。全沟硬蜱是东北和西北针阔叶林区的优势蜱种,其带菌率为20~45%,表明全沟硬蜱是我国北方莱姆病螺旋体的主要生物媒介。虽然从我国南方的某些硬蜱属和血蜱属种类分离到莱姆病螺旋体,但是南方的主要生物媒介还不清楚。从我国蜱体内分离的螺旋体在超微结构、单克隆抗体反应和外表蛋白等方面与美国菌株有某些区别。     

中国20个省、区、市动物莱姆病初步调查研究

目的：广泛调查我国动物莱姆病分布情况。方法：血清流行病学和病原学研究。结果：１９８７～１９９７年间，牛、羊、狗、野兔和８种野鼠有莱姆病的感染存在，其中牛、羊、狗和野鼠的感染率分别为１８．１８％～３２．６１％、１７．１２％～６１．２１％、３８．５％～６０．００％和４１．１８％～８６．０５％；从黑线姬鼠和白腹巨鼠的胎鼠分离到莱姆病螺旋体，证实莱姆病螺旋体可通过胎盘垂直传播。９种蜱的中肠携带莱姆病螺旋体，带菌率以全沟硬蜱、二棘血蜱和粒形硬蜱为高，分别为２０．００％～４５．００％、１６．００％～４０．００％和２４．００％。从华南兔、８种野鼠和８种蜱分离出１２８株莱姆病螺旋体。证实黑线姬鼠和棕背是中国莱姆病螺旋体的重要储存宿主；多种蜱的中肠内携带莱姆病螺旋体，我国北方林区莱姆病螺旋体的主要生物媒介是全沟硬蜱，南方林区二棘血蜱和粒形硬蜱是重要的生物媒介。结论：我国动物莱姆病广泛存在     

从粤东丰溪自然保护区台湾角血蜱体内分离出莱姆病螺旋体

目的：检测台湾角血蜱携带莱姆病螺旋体情况。方法：直接荧光抗体法（ＤＦＡ）和病原分离培养。结果：该蜱是粤东丰溪自然保护区优势蜱种，用采集的该蜱５０只取中肠涂片，ＤＦＡ检测８只为阳性，阳性率１６％；从１１５只（２３组）该蜱中分离出１株莱姆病螺旋体，命名为ＭＤ６。经单克隆抗体鉴定，结果与国内Ｍ７菌种反应相同。结论：从媒介蜱类分离出莱姆病螺旋体，在广东尚属首次，证实该地为莱姆病流行区     

中国莱姆病螺旋体主要生物媒介的调查研究

为研究中国莱姆病螺旋体的生物媒介———蜱的种类、带菌状况及在传播莱姆病中的作用 ,采用布旗法和动物诱捕法在山林地区采集蜱 ,进行分类鉴定 ,应用直接荧光抗体染色法查蜱中肠带菌率 ,BSK培养基分离病原体 ,单克隆抗体鉴定菌株。调查蜱叮咬率与人群莱姆病感染率、患病率以及蜱的季节消长与莱姆病慢性游走性红斑 (ECM )病例发生的季节性关系。在全国 2 0个省 (市、区 )共采集到170 0 0多只蜱 ,分属为 2科 8属 2 3种 ,蜱类分布的地区差异较大 ,北方林区以全沟硬蜱为优势种 ,南方则以二棘血蜱和粒形硬蜱为优势种。 9种蜱的中肠携带莱姆病螺旋体 ,其带菌率以全沟硬蜱、二棘血蜱和粒形硬蜱为高 ,分别为 2 0 .0 0 %～ 4 5.0 0 %、16.0 0 %～ 4 0 .0 0 %和 2 4 .0 0 %。从 8种蜱分离出 10 8株莱姆病螺旋体 ,其单克隆抗体反应与美国B31菌株有明显的差异 ,绝大多数中国菌株对H6831呈阴性反应。蜱叮咬率高的人群 ,莱姆病的感染率和患病率也高。全沟硬蜱的季节消长与ECM发生的季节性相一致。证实多种蜱的中肠内携带莱姆病螺旋体 ;我国北方林区莱姆病螺旋体的主要生物媒介是全沟硬蜱 ,南方林区二棘血蜱和粒形硬蜱是重要的生物媒介。     

全沟硬蜱在黑龙江小兴安岭莱姆病螺旋体传播中的作用

目的：探讨全沟硬蜱在莱姆病螺旋体传播中的作用。方法：用布旗法在林区草地采蜱，并分类鉴定；用直接荧光抗体法检查蜱类中肠带菌情况，并分离菌株。结果：全沟硬蜱为当地优势蜱种，人群发病与该蜱叮咬率密切相关；该蜱中肠带菌率为４０％，并从１４组（７０只）蜱中分离出２株莱姆病螺旋体；新分离株的单克隆抗体反应与国内分离株Ｍ７相同，而与美国菌株Ｂ３１有区别。结论：当地全沟硬蜱是莱姆病螺旋体的主要生物媒介。     

浙江省首次在蜱中检测到莱姆病螺旋体DNA片段

目的：了解蜱、鼠中自然感染莱姆病螺旋体的状况。方法：用PCR法检测鼠类脾脏和蜱类中莱姆病DNA片段。结果：在浙江省金华市金东区及丽水市青田县捕到蜱215只。分别在微小牛蜱和长角血蜱中各检到阳性1份，阳性率为0．93％。结论：初步认为浙江省存在莱姆病病原，尚需进一步调查和病原分离加以证实。     

山东省莱姆病地理流行病学研究

目的调查山东省莱姆病地理分布、媒介生物、动物宿主及病原分离情况,为今后防治提供依据。方法采用间接免疫荧光抗体试验(IFA)对6个调查点的人群进行莱姆病抗体检测;用直接免疫荧光抗体试验(DFA)检查优势蜱种及其携带莱姆病螺旋体情况,并用BSKⅡ培养基分离培养莱姆病螺旋体。宿主调查采用DFA检查鼠肾。用单克隆抗体和IFA进行菌株的鉴定。结果共检测血清1934份,阳性121份,感染率6.26%;鲁东、鲁南、鲁中、鲁西北感染率分别为5.76%、7.03%、0、9.81%;各年龄组差异无统计学意义(P>0.05);男性感染率为5.56%,女性为6.98%,两者间差异无统计学意义(χ2=1.67,P>0.05);山东省蜱类的优势种为长角血蜱,该蜱中肠带螺旋体率为12.00%;宿主动物调查显示,鼠类带莱姆病螺旋体率为13.26%,黑线姬鼠为优势种(占45.65%),带菌率高为14.24%。从86组培养物中分离到2株莱姆病螺旋体(TSH1、TSH2)。结论不同地区生态环境和传播媒介分布不同,各地区间莱姆病感染程度差别很大。长角血蜱可能为山东省莱姆病的重要生物媒介。     

宁波口岸蜱类及莱姆病病原体携带情况的调查研究

目的掌握宁波口岸蜱的种群特征和莱姆病病原携带情况。方法采用人工小时布旗法采蜱,用PCR法检测蜱类中携带的莱姆病DNA片段。结果采集蜱872只,隶属于1科3属3种,分别为中华硬蜱、长角血蜱、镰形扇头蜱,其中长角血蜱占97.36%,为优势种;3-9月均可捕获蜱,3-6月为高峰期,7月下旬种群数量开始急剧减少;莱姆病螺旋体DNA片段检测均呈阴性。结论查清宁波口岸蜱的种群结构,宁波口岸尚无莱姆病自然疫源地的证据。     

密云地区莱姆病螺旋体宿主动物和传播媒介感染状况调查

目的了解密云地区莱姆病宿主动物和传播媒介的感染情况,以及宿主动物的分布情况和传播媒介蜱的季节消长规律,为密云地区莱姆病的防制提供科学依据。方法采用布旗法捕蜱,用倒置显微镜观察蜱的形态,对蜱进行鉴定。采用夹夜法捕鼠;用BSKII培养基对蜱和鼠标本进行病原分离。采用巢式聚合酶链反应（PCR）对蜱和鼠进行病原学检测。羊血清莱姆病抗体检测采用间接免疫荧光抗体法。结果密云地区捕获的蜱均为长角血蜱,其消长曲线具有明显的季节性,巢式PCR检测蜱带菌率为10．16％;黑线姬鼠和北社鼠是该地区优势鼠种,巢式PCR检测鼠带菌率为4．26％;当地放养山羊血清学检测阳性率为12．00％。结论在蜱和鼠中均检测到莱姆病螺旋体的特异片段,表明密云地区可能为莱姆病自然疫源地。     

长角血蜱实验室繁殖规律研究与种群的建立

目的研究长角血蜱的繁殖规律和饲养条件,建立长角血蜱的实验种群。方法从自然界抓捕蜱,放在光照培养箱或干燥器中饲养,以小鼠和兔为饲血动物,对长角血蜱进行繁殖传代,记录饲血动物特异性、各虫态时间以及饲养条件。结果长角血蜱适宜养殖温度和相对湿度分别为（22±2）℃、（85±10）%,小鼠和兔可以作为长角血蜱的饲血动物,长脚血蜱一个生活周期约4～5个月。结论本研究基本摸清了长角血蜱的繁殖规律和饲养条件,并建立了实验种群。     

黑龙江东部七口岸蜱种群特征及携带莱姆病病原体的研究

目的掌握黑龙江省东部七口岸蜱的种群特征及其感染的莱姆病病原体。方法采用人工小时布旗法采集蜱．接种于BSKⅡ培养基,分离莱姆病螺旋体。结果在七口岸共施蜱180人工小时,采集成蜱6554只,隶属于1科3属5种,其中长角血蜱为口岸蜱类新记录。主要种群为：森林革蜱(37．2％),全沟硬蜱(31．6％)．嗜群血蜱(27．6％)；不同口岸和生境蜱种群构成有所不同。从东宁、同江口岸分离到莱姆病螺旋体3株。结论基本查清黑龙江省东部七口岸蜱的种群构成,东宁、同江口岸存在莱姆病疫源地。     

吉林延边地区蜱复合感染新塔拉塞维奇立克次体及SFTSV调查研究

  目的  为了解吉林省延边地区蜱类新塔拉塞维奇立克次体(candidatus rickettsia tarasevichiae，CRT)和复合感染新布尼亚病毒(sever fever thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV)的感染情况。  方法  采集吉林省延边朝鲜族自治州(延边州)延吉、汪清、珲春、敦化、安图、和龙6个县游离蜱，进行形态学分类，通过巢式多聚核苷酸链式反应(nested polymerase chain reaction，nested PCR)和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)方法检测蜱体内CRT和SFTSV。对其CRT进行目标DNA测序，分析同源性和系统进化关系。  结果  此研究共采集各种蜱类1 032只，分别为全沟硬蜱(ixodes persulcatus)(35.56%)、森林革蜱(dermacentor silvarum)(20.64%)、日本血蜱(haemaphysalis japonica)(20.45%)、长角血蜱(haemaphysalis longicornis)(10.47%)、嗜群血蜱(haemaphysalis concinna)(8.33%)以及其他种类(4.55%)。全沟硬蜱、长角血蜱、日本血蜱、森林革蜱检测出CRT，最低感染率(minimum infection rate per 100 ticks，MIR)为10.47%。嗜群血蜱、日本血蜱、全沟硬蜱、长角硬蜱、森林革蜱检测出SFTSV，最低感染率为2.52%。全沟硬蜱、日本血蜱、森林革蜱3种蜱存在CRT和SFTSV复合感染现象，复合感染MIR为1.26%。本研究CRT ompA和17kDa基因序列与中国河南信阳株(KX365196.1)序列同源性达100%。系统进化分析，延边地区蜱CRT ompA基因序列和该河南信阳株基因序列成为一簇，而17kDa基因则形成独立分支。  结论  本研究首次从吉林省延边地区游离蜱中检测出CRT，全沟硬蜱为主要媒介宿主。因此，可以明确该地区为新塔拉塞维奇立克次体病自然疫源地。同时发现，延边地区蜱类存在CRT与SFTSV复合感染的现象。因此，在该地区必须加强新塔拉塞维奇立克次体病和发热伴血小板减少综合征(sever fever thrombocytopenia syndrome，SFTS)疫情监测。     

天津市主要蜱类及其病原携带调查

目的了解天津市蜱类及其病原携带情况。方法采用人工小时布旗法和犬类体表检视法对全市16个区县199块社区绿地和204只犬类开展蜱类调查;同时7个区县送检社区绿地、家畜和犬类及病人等处采集的蜱。用PCR法分别检测布尼亚病毒、嗜粒细胞无形体、伯氏疏螺旋体和巴尔通体。结果蜱的收集和构成：2011年3-8月在全市8个区县共采集蜱197只,全沟硬蜱58只,占29.4%;长角血蜱139只,占70.6%。蜱密度：人工小时布旗法对全市16个区县199块社区绿地进行调查,蜱密度1.01%。染蜱率：采用犬类体表检视法调查全市16个区县的204只犬类,染蜱率1.47%,总蜱指数0.02。蜱病原携带检测：布尼亚病毒核酸Realtime RT-PCR检测阴性;嗜粒细胞无形体核酸巢氏PCR检测阴性;伯氏疏螺旋体核酸巢式PCR检测阴性;巴尔通体核酸PCR检测阴性。结论全沟硬蜱和长角血蜱是天津市的优势蜱种。今后蜱类防治重点要加强环境治理,清除杂草;同时城市中宠物狗携带蜱尤其需引起重视。有必要对蜱等生物媒介宿主动物及其病原体进行更深入的生态与分子流行病学研究。     

豫南地区蜱类分布及蜱媒病原体调查与分析

摘要:目的　探讨豫南地区蜱虫分布特点,蜱媒病原体类型及流行性特征。方法　采用布旗法、体表检蜱法采集不同环境中蜱虫,采用PCR方法对蜱媒病原体的感染情况进行流行病学调查研究。结果　3-10月份采集蜱虫730只,分2属3种,其中长角血蜱占80.71%,为当地优势蜱种;蜱虫分布呈季节性消长;经PCR扩增出2种蜱媒病原体的特异性DNA片段,比对显示与发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）、嗜吞噬细胞无形体有高度同源性;SFTSV阳性率为4.90%;嗜吞噬细胞无形体阳性率为2.49%。结论　豫南地区蜱虫分布有生态及季节性规律,蜱中携带SFTSV、人粒细胞无形体病的病原体,是造成人发热伴血小板减少综合征、无形体病的主要原因,应加强疫区防控措施。     

图们江流域中朝俄边境地区长角血蜱中SFTS病毒监测分析

  目的  掌握图们江流域中朝俄边境地区长角血蜱分布特征,了解该地区长角血蜱携带发热伴血小板减少综合征（severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS）病毒情况,分离病毒,分析其基因特征。  方法  2017年4月~9月,在吉林省图们江流域中朝俄边境地区珲春市、图们市、和龙市、龙井市采集蜱虫进行形态学分类,选择新鲜长角血蜱对其进行分组,采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应方法检测SFTS病毒。对阳性样品,利用绿猴肾细胞进行病毒分离,并扩增S、M、L基因片段,比对同源性,建立系统进化树,分析其基因特征。  结果  长角血蜱主要分布在图们江下游珲春市和图们市,为该两县优势种,分别达到71.85%和87.62%。在珲春市长角血蜱中分离到一株病毒,命名为YBHC-TICK2-2017/CHINA。该病毒S片段（1 746 bp）、M片段（3 336 bp）、L片段（6 376 bp）基因序列与美国国家生物技术信息中心（National Center for Biotechnology Information,NCBI）DNA序列数据库中记录的中国和韩国SFTS病毒分离株基因序列同源性为98.00%~99.00%。系统进化树分析,该病毒株S片段基因序列与中国吉林株（KT890282）分为一簇,M片段和L片段基因序列与中国江苏株（KR230781）分为一簇。  结论  长角血蜱在图们江下游中朝俄边境地区具有广泛的分布。该研究首次在该地区长角血蜱中分离到SFTS病毒,提示该地区为SFTS防控重点区域。     

蜱类携带粒细胞无形体的核酸检测及核酸序列分析

目的了解蜱类自然感染粒细胞无形体(anaplasma phagocytophilum)的状况,为人粒细胞无形体病的预防、控制提供技术支持。方法利用分子生物学技术,通过对野外采集的蜱类样品的核酸(DNA)提取、聚合酶链反应(套式PCR)、凝胶电泳分析以及核酸序列分析等,对蜱类携带的粒细胞无形体进行确认。结果在大连地区采集的长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)中检测到粒细胞无形体。序列分析结果表明,与GenBank数据库中已注册的粒细胞无形体核酸序列有高度的相似性(97%～99%)。结论我国大连地区存在蜱粒细胞无形体感染。应加强对该地区蜱类的监测和控制,防止因蜱类叮咬导致人粒细胞无形体病的暴发流行。     

北京西山地区长角血蜱及其体内伯氏疏螺旋体实验观察

目的 :实验观察长角血蜱及其体内伯氏疏螺旋体形态结构。方法 :1994～ 1996年在北京西山地区采集长角血蜱 180只。标本应用蜱整体封片法、冰冻切片和石蜡切片结合HE染色和硝酸银染色法分别检测和光镜观察。结果 :蜱整体封片法直接镜检即可观察到蜱外部基本形态结构。HE染色观察蜱内部器官细微形态结构。冰冻切片和石蜡切片结合硝酸银染色 ,检出北京西山地区长角血蜱 (包括幼蜱、若蜱、成蜱和饱血蜱 )伯氏疏螺旋体感染率为 2 3 % ,显微镜下可清晰观察到蜱体伯氏疏螺旋体多种不同的形态。结论 :上述方法对莱姆病媒介蜱及伯氏疏螺旋体的流行病学研究有一定价值