保元排毒丸对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏Wnt/β-catenin 信号通路的影响

目的：观察保元排毒丸对单侧输尿管梗阻（Unilateral Ureteral Obstruction UUO）模型大鼠肾脏病理的影响及对Wnt/β-catenin信号转导通路的调控。方法：48只健康清洁级雄性SD大鼠,随机分为假手术组、UUO组、厄贝沙坦组（12.5g·kg-1/天）、保元排毒丸低、中、高剂量组（1.25g·kg-1/天、2.5g·kg-1/天、5.0g·kg-1/天）,每组8只;除假手术组只分离输尿管不结扎外其余均制备右侧输尿管梗阻肾纤维化模型,造模第二天开始予相应的药物灌胃,假手术组和UUO组给予自由进食和生理盐水灌胃,共灌14天。末次灌胃24小时后取右肾进行HE 染色观察肾脏病理改变,Masson 染色观察肾组织胶原沉积情况;Western Blot 法测肾组织E-cadherin、Collagen I、β-Catenin表达水平;Real-time PCR检测Wnt4、β-catenin mRNA表达。结果：与假手术组比较,UUO组和各给药组肾小管、肾间质病变重、肾纤维化重（P＜0.01）;与UUO组比较,保元排毒丸低、中、高剂量组和厄贝沙坦组肾小管、肾间质病变明显减轻、肾纤维化减轻（P＜0.01）;UUO组E-cadherin表达较保元排毒丸各剂量组、厄贝沙坦组和假手术组明显减少（P＜0.01）;保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组Collagen I、β-Catenin表达明显少于UUO组（P＜0.01）;UUO组Wnt4、β-catenin mRNA表达明显高于假手术组（P＜0.01）,保元排毒丸各剂量组和厄贝沙坦组Wnt4、β-catenin mRNA表达明显低于UUO组（P＜0.01）。结论：保元排毒丸有改善肾脏纤维化的作用,其机理可能与调控Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

保元排毒丸对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

观察保元排毒丸对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction UUO)模型大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响。方法:48只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、UUO组、厄贝沙坦组、保元排毒丸低、中、高剂量组各8只,假手术组只分离输尿管不结扎,其余均制备右侧UUO肾纤维化模型,造模第2天开始给予相应的药物灌胃,灌胃14 d。于末次灌胃后收集24 h尿液,眼眶采血,取右侧肾测24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮;HE和Masson染色观察肾脏病理改变,分别用免疫印迹和免疫组化测法测肾组织E-cadherin、а-SMA表达。结果:UUO组24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均高于其他各组,肾小管、间质病变及纤维化重于其他各组,а-SMA表达最强, E-cadherin表达最弱。保元排毒丸低、中、高剂量组和厄贝沙坦组24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均低于UUO组,肾小管、间质病变及纤维化程度轻于UUO组,а-SMA表达明显少于UUO组,E-cadherin表达高于UUO组。结论:保元排毒丸有改善肾脏纤维化的作用,其机理可能与调控肾小管上皮细胞转分化有关。     

排毒保肾丸对肾纤维化大鼠肾组织TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的观察排毒保肾丸对5/6肾切除大鼠肾纤维化的影响并探讨其可能作用机制。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、排毒保肾丸组、尿毒清颗粒组,每组10只。除正常组、假手术组外,其余各组大鼠均采用5/6肾切除方法建立肾纤维化模型。排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组分别予排毒保肾丸1.0 g/(kg·d)和尿毒清颗粒3.33 g/(kg·d)灌胃,正常组、假手术组、模型组予2 ml生理盐水灌胃,每日1次。各组均灌胃4周后处死大鼠,取残肾组织行HE、PAS、PASM、Masson染色病理观察,检测肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2、Smad7蛋白及其mRNA的表达水平。结果病理结果显示,模型组大鼠局灶节段性肾小球缺血性皱缩,较多炎性细胞浸润伴轻至中度纤维化;与模型组比较,排毒保肾丸组残肾组织病变程度减轻。与正常组、假手术组比较,模型组大鼠TGF-β1蛋白及其mRNA、Smad2蛋白及其mRNA表达水平均显著升高,Smad7蛋白及其mRNA表达水平均显著下降(P0.01);与模型组比较,排毒保肾丸组和尿毒清颗粒组TGF-β1蛋白及其mRNA、Smad2蛋白及其mRNA表达水平均显著降低,而Smad7蛋白及其mRNA表达水平均显著升高(P0.01)。结论排毒保肾丸有抗肾纤维化的作用,下调肾组织TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达可能是其作用机制之一。     

清化固肾排毒方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制

目的:观察清化固肾排毒方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制。方法:108只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、中药高剂量组、中剂量组、低剂量组、洛丁新组,给予相应药物治疗,各组分别于建模后第7、14、21天处死,留取血清测Scr、BUN,留取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色,光镜观察各组大鼠肾组织病理变化。免疫组化检测肾组织TGF-β_1、Smad2/3、Smad7的表达。结果:随着输尿管梗阻时间延长,肾小管间质纤维化程度逐渐加重。免疫组化结果显示:与假手术组相比,各时相点UUO组TGF-β1、Smad2/3表达明显上升,Smad7表达明显下降(P均<0.05);药物干预后,与UUO组相比,中药治疗组和洛丁新组TGF-β_1、Smad2/3表达下降,Smad7表达上升(P均<0.05);中药各剂量组与洛丁新组之间比较无统计学差异。结论:清化固肾排毒方可能通过下调Smad2/3及上调Smad7来抑制TGF-β_1/Smads信号转导通路,发挥改善肾间质纤维化的作用。     

益气通阳方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的观察益气通阳方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化及TGF-β1/Smad7信号通路的影响,探讨其可能的作用机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组和西药组各10只。除假手术组外,其余各组建立UUO模型。西药组予依那普利溶液0.18mg/mL灌胃,中药组予益气通阳方浓缩液1.188g/mL灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃,每日1次。14d后心脏取血检测大鼠血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平,处死大鼠取其肾组织行HE和Masson染色,免疫组化检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的表达,Western blot和RT-PCR分别检测Smad7蛋白和m RNA的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清SCr、BUN明显升高(P0.01),病理改变明显,TGF-β1、FN蛋白表达明显升高(P0.01),Smad7蛋白和m RNA表达明显降低(P0.01);与模型组比较,中药组和西药组大鼠血清SCr、BUN明显降低(P0.05),病理改变减轻,TGF-β1、FN蛋白表达明显降低(P0.05),Smad7蛋白和m RNA表达明显升高(P0.05)。结论益气通阳方可能通过上调Smad7表达,抑制UUO大鼠肾组织TGF-β1的高表达,进而延缓肾间质纤维化进展。     

刺梨黄酮对诱导大鼠肾纤维化TGF-β1/Smads信号转导干预作用及机制分析

目的:探讨观察刺梨黄酮对UUO模型大鼠肾纤维化TGF-β1/Smads信号转导干预作用,并分析其机制。方法:将75只造模成功的肾纤维化大鼠随机分为5组,即假手术组、模型对照组、氯沙坦钾组、刺梨黄酮中剂量及大剂量组,每组各15只。氯沙坦钾组给予氯沙坦钾灌胃;刺梨黄酮中剂量及大剂量组分别给予刺梨黄酮灌胃。模型组和假手术组均同时给予同等容积的生理盐水。干预14 d后,观察24 h Upro、Scr、BUN,对比各组大鼠肾脏组织TGF-β1、Smad2/3、Smad7蛋白表达水平,分析刺梨黄酮对肾纤维化大鼠作用机制。结果:干预过程中,模型组和氯沙坦钾组各有1只大鼠死亡。模型组、氯沙坦钾组、刺梨黄酮中剂量和大剂量组24 h Upro、Scr和BUN水平较假手术组显著升高(P0.01);治疗后氯沙坦钾组、刺梨黄酮中剂量和大剂量组较模型组显著降低;与氯沙坦钾组相比,刺梨黄酮中剂量组24 h Upro、Scr和BUN表达水平无明显差异(P0.05)。免疫组化显示模型组、氯沙坦钾组和刺梨黄酮不同剂量组中,各组TGF-β1、Smad2/3表达均明显高于假手术组(P0.01),各治疗组的表达水平明显低于模型组(P0.05)。各组Smad7的表达均明显低于假手术组(P0.01),各治疗组的表达水平明显高于模型组(P0.05)。与氯沙坦钾组比较,刺梨黄酮中剂量组TGF-β1、Smad2/3、Smad7表达水平无明显差异。结论:刺梨黄酮中剂量组可显著改善肾纤维化大鼠肾功能指标,推测和抑制TGF-β1、Smad2/3蛋白表达、激活Smad7蛋白表达有关。     

益肾化瘀方对单侧输尿管结扎大鼠转化生长因子β1、Smad7信号蛋白表达的影响

目的探讨益肾化瘀方抗肾间质纤维化的可能作用机制。方法 108只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、缬沙坦组和益肾化瘀方高、中、低剂量组,每组18只。除假手术组外其余大鼠采用单侧输尿管结扎方法建立肾间质纤维化模型,造模次日益肾化瘀方高、中、低剂量组分别予益肾化瘀方浓缩液32、16、8 g/(kg·d)灌胃,缬沙坦组予缬沙坦溶液13.3 mg/(kg·d)灌胃,假手术组、模型组予生理盐水20 ml/(kg·d)灌胃,各组均连续灌胃28天。分别于造模后第7、14、28天观察大鼠肾组织病理改变,计算肾间质纤维化面积,检测大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad7信号蛋白的表达。结果模型组大鼠出现肾间质炎细胞浸润和梭形核细胞增生,伴局灶性肾间质纤维化,各治疗组肾脏病理表现均有不同程度的减轻,其中益肾化瘀方高剂量组病理改变与缬沙坦组相当。与同时间点假手术组比较,其余各组大鼠肾间质纤维化面积、TGF-β1升高,Smad7信号蛋白减少(P0.01);与同时间点模型组比较,除益肾化瘀方低剂量组外,其余各治疗组大鼠肾间质纤维化面积、TGF-β1降低,Smad7信号蛋白增加(P0.05或P0.01),并且以益肾化瘀方高剂量组和缬沙坦组改善最明显(P0.05)。结论益肾化瘀方可能通过抑制大鼠肾组织中TGF-β1的高表达,上调Smad7的表达,从而减轻肾间质纤维化。     

肾复康对肾纤维化模型大鼠转化生长因子-β_1、Smad2、Smad7表达的影响

目的:评价肾复康对纤维化模型大鼠的疗效和对肾组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、Smad2、Smad7表达的影响。方法:选取SD大鼠70只,完全随机分为假手术组、肾复康组及模型组,其中肾复康组及模型组均接受肾间质纤维模型制备,将造模第2天肾复康组接受不同剂量肾复康灌胃,对照组及假手术组接受同等体积的生理盐水灌胃,均干预21 d。干预结束收集各组24 h尿液,检测24 h尿蛋白(24 UP)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平的变化,并断头取材,用苏木精-伊红(HE)染色评价各组肾组织的病理变化,免疫组化法检测各组肾组织TGF-β_1的变化,用Western blotting法检测Smad2、Smad7水平。结果:与假手术组比较,肾复康组及模型组24 UP、SCr及BUN水平明显升高,差异有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,肾复康组24 UP、SCr及BUN水平有所下降,差异有统计学意义(P 0. 05),且随着肾复康剂量升高趋势更明显。与假手术组比较,肾复康组及对模型组肾组织病理学评分均明显升高,其中肾复康组评分低于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05)。随着肾复康剂量的增加病理学评分逐渐下降;假手术组肾组织仅有少量TGF-β_1、Smad2表达,模型组Smad2、TGF-β1呈高表达,随着肾复康剂量的增加Smad2、TGF-β_1水平逐渐下降。造模后Smad7水平下降,肾复康干预后Smad7水平有所上调,并随着水平的增加而上调趋势更明显。结论:肾复康可明显改善肾间质纤维化模型大鼠病情,其作用机制可能与介导肾脏组织TGF-β_1、Smad2、Smad7有关,且具有剂量依赖性     

白藜芦醇对小鼠肾纤维化TGF-β_1/Smads信号转导通路的干预研究

目的:观察白藜芦醇对单侧输尿管梗阻(UUO)构建的小鼠肾纤维化模型TGF-β_1/Smads信号转导通路的影响,探讨其对肾纤维化的干预作用及其机制。方法:40只雄性ICR小鼠随机分为5组:假手术(Sham)组,UUO模型(UUO)组,UUO+白藜芦醇低剂量(20 mg/kg)治疗(ResL)组,UUO+白藜芦醇高剂量(40 mg/kg)治疗(ResH)组,UUO+氯沙坦(10 mg/kg)治疗(Los)组,每组8只。均于术后当天灌胃给药,每24 h 1次。14 d时处死小鼠,留取血清检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),肾组织行HE和Masson染色,观察病理结果,实时荧光定量PCR检测肾组织TGF-β_1、Smad2、Smad7 mRNA的表达。结果:白藜芦醇可以减轻肾组织纤维化的病理损害,使肾组织TGF-β_1、Smad2 mRNA表达降低,Smad7 mRNA表达升高(P0.05,部分P0.01),以高剂量组改善最显著。结论:白藜芦醇可呈剂量相关性下调TGF-β_1、Smad2及上调Smad7来抑制TGF-β_1/Smads信号转导通路,从而发挥抗肾间质纤维化的作用。     

益肾通络方对肾纤维化模型大鼠肾组织转化生长因子-β1、Smad7表达的影响

目的探讨益肾通络方治疗肾纤维化的可能作用机制。方法采用阳离子牛血清白蛋白皮下和尾静脉注射建立肾纤维化大鼠模型,将造模成功的50只大鼠随机分为模型组、对照组和益肾通络方低、中、高剂量组,每组各10只,并设10只同批正常大鼠为正常组。益肾通络方低、中、高剂量组分别予益肾通络方生药4.58、9.16、18.32 g/(kg·d)灌胃,对照组以肾炎四味片1.58 g/(kg·d)灌胃,模型组和正常组以等容量(1 ml/100 g)的蒸馏水灌胃,每天灌胃1次,连续4周。采用免疫组织化学方法结合图像分析系统测定大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad7的平均灰度值、平均光密度值、阳性细胞数、阳性率,并进行相关性分析。结果光镜下模型组肾组织TGF-β1表达明显增多,Smad7表达不明显。与模型组比较,益肾通络方各剂量组和对照组肾组织TGF-β1平均灰度值、阳性率、阳性细胞数明显减少,Smad7平均灰度值、阳性率、阳性细胞数明显提高,并且以益肾通络方中、高剂量作用更明显(P0.05或P0.01)。相关分析显示,TGF-β1与Smad7呈线性负相关(P0.01)。结论益肾通络方治疗肾纤维化可能机制是调节TGF-β1与Smad7的相互作用关系,促进Smad7表达,抑制TGF-β1表达。     

桃核承气汤对CRF大鼠TGF-β1/Smad3信号调控的miR-29表达的影响

目的通过观察桃核承气汤对慢性肾功衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠TGF-β1/Smad3信号通路介导的miR-29表达的影响,分析该方延缓CRF的可行性,为治疗CRF提供分子生物学依据。方法将100只7周龄成年雄性Wistar随机分成空白组、假手术组、模型组、治疗组。模型组与治疗组的大鼠均采用5/6肾切除手术的方式造模,假手术组的大鼠只剥除两肾的被膜;空白组不做处理。治疗组予桃核承气汤灌胃,其余三组予生理盐水灌胃,连续灌胃56天后处死,进行相关指标检测和病理组织形态观察。结果 Western Blot结果显示,治疗组相比模型组,左肾组织TGF-β1、Smad3的蛋白表达显著下降(P 0. 05); q PCR示治疗组相比模型组,TGF-β1、Smad3 mRNA表达下调(P 0. 05),miR-29a、miR-29b、miR-29c表达水平上调(P 0. 05);光镜下肾间质纤维化明显HE染色显示,空白组及假手术组左肾组织结构正常;模型组左肾组织结构紊乱,间质纤维增生严重,肾小管萎缩,可见炎性细胞浸润;治疗组与模型组相比较,肾间质中炎性浸润减少,间质纤维化程度明显改善。结论 5/6肾切除大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β1/Smad3信号被激活;桃核承气汤能通过抑制5/6肾切除大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β1/Smad3信号通路,上调miR-29的表达,发挥抑制肾间质纤维化的作用。     

抗纤灵对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏纤维化基因与蛋白表达的影响

目的：利用基因芯片研究抗纤灵治疗肾小管间质纤维化的机理。方法：将18只SPF级SD大鼠中12只行unilateral ureteral occlusion（UUO）模型,随机分为模型组（UUOG）和抗纤灵组（KXLG）,另外6只为假手术组。UUO和假手术组给予生理盐水灌胃;抗纤灵组给予抗纤灵灌胃。所有大鼠均在14天处死留取左肾组织。运用定制芯片检测基因变化结果。结果：与假手术组比较。UUO组TGF-β1、smad2、smad3基因显著上调,和假手术组比较上调超过1.5倍,P〈0.01,Smad7基因显著下调,和假手术组比较下调超过1.5倍,P〈0.01。而抗纤灵组TGF-β1、smad2、smad3基因显著下调,和UUO组比较下调超过1.5倍,P〈0.01,Smad7基因显著上调,和UUO组比较上调超过1.5倍,P〈0.01。结论：发现抗纤灵能显著降低组织内TGF-β1、Smad2、Smad3基因水平,免疫组化结果也表明抗纤灵能明显降低TGF-β1/Smads介导的基因转录活性。结果提示抗纤灵能抑制性调节TGF-β1/Smads信号通路,抑制肾纤维化的发生。     

TGF-β1/Smad信号通路在腺嘌呤导致的肾纤维化大鼠肾脏组织中的作用与意义

目的:探讨肾组织中TGF-β1/Smad信号通路在腺嘌呤导致的肾纤维化模型损伤过程中的变化与意义。方法:将23只SD大鼠随机分为正常组10只和模型组13只,采用腺嘌呤制备肾纤维化大鼠模型;采用RT-PCR检测两组大鼠TGF-β1mRNA的表达,ELISA法检测Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达,免疫组化法检测a-SMA蛋白表达。结果:模型组较正常组TGF-β1mRNA表达增强,Smad2、Smad3水平升高,Smad7水平下降,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论:腺嘌呤导致的大鼠肾纤维化与TGF-β1/Smad信号通路密切相关,通过调节TGF-β1/Smad信号通路,对抑制肾纤维化的发生发展有重大意义。     

红芪多糖联合厄贝沙坦对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的:探讨红芪多糖单用或联合厄贝沙坦对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响。方法:采用高脂高糖饲料加单次腹腔注射链脲佐菌素[30 mg/kg(体质量)]制备2型糖尿病大鼠模型。将Wistar大鼠50只随机分为正常对照组(NC组)10只和造模组40只,将造模成功的36只大鼠随机分为糖尿病组(DM组)、红芪多糖组(HPS组)、厄贝沙坦组(IRB组)及红芪多糖联合厄贝沙坦组(HPS+IRB组)各9只。HPS组每日予红芪多糖150 mg/kg灌胃,IRB组每日予厄贝沙坦30 mg/kg灌胃,HPS+IRB组每日予红芪多糖150 mg/kg加厄贝沙坦30 mg/kg灌胃,NC组和DM组予等量生理盐水灌胃,干预8周。检测各组大鼠空腹血糖,计算心重指数(H/B),实时荧光定量PCR法测定心肌局部转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3及Smad7 m RNA水平,免疫组化法测定TGF-β1、Smad3及Smad7蛋白水平,透射电镜下观察大鼠心肌超微结构,Masson染色法测定心肌胶原含量。结果:1)与NC组比较,其余4组大鼠心肌胶原含量增多,间质纤维化明显,H/B、TGF-β1、Smad3表达均升高,Smad7表达降低(P0.01);与DM组相比,HPS组、IRB组及HPS+IRB组大鼠心肌纤维化减轻,H/B、TGF-β1、Smad3表达下降,Smad7表达升高(P0.05),HPS+IRB组上述变化更显著。2)心肌病理改变:与NC组相比,DM组大鼠心肌胶原纤维增多,排列紊乱,线粒体肿胀;而HPS组、IRB组及HPS+IRB组上述改变减轻,HPS+IRB组上述改变减轻较HPS组和IRB组更明显。结论:红芪多糖及厄贝沙坦能通过抑制TGF-β1/Smads信号通路延缓2型糖尿病大鼠心肌纤维化的发生和发展,两药联合效果优于两药单用。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏病理及肾脏TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的分析化瘀通络中药对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏病理及肾脏TGF-β_1/Smad信号通路相关因子表达的影响。方法糖尿病大鼠模型采用高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立,大鼠分为正常对照组、模型组、中药组和厄贝沙坦组,各组相应药物剂量灌胃。灌胃16周检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量(24hUTP),肾组织行光镜、电镜观察,Real-time PCR检测肾脏TGF-β_1、Smad2、Smad7mRNA的表达。结果与正常对照组比较,模型组各项指标均有差异(P0.05);与模型组比较,两治疗组Scr、BUN、24hUTP及TGF-β_1、Smad2 mRNA表达水平明显下降(P0.05),Smad7 mRNA表达水平明显上升(P0.05),病理损伤明显减轻;与厄贝沙坦组比较,中药组24hUTP明显降低(P0.05)。结论化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与调节TGF-β1/Smad信号通路有关。     

川芎嗪对肾间质纤维化模型大鼠Smad7和SnoN蛋白表达的影响

目的:探讨川芎嗪(tetramothylpyrazine,TMP)对单侧输尿管梗阻(unilatcral ureteral obstruction,UUO)所致大鼠肾间质纤维化的作用及机制.方法:雄性SD大鼠18只,随机分为3组:假手术组、模型组以及TMP组,每组6只.采用单侧输尿管结扎建立大鼠肾间质纤维化模型.川芎嗪(40mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗3周后取梗阻侧肾组织,分别进行HE和Masson染色,观察肾组织病理改变和胶原沉积的变化;采用放射免疫分析法检测Ⅲ型前胶原含量;应用酶联免疫吸附(ELIsA)法检测肾组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平;采用Western blotting检测肾组织中Smad7和Smad转录共抑制因子SnoN蛋白表达水平的变化.结果:与假手术组比较,镜下可见模型组大鼠肾小管萎缩,管腔扩张,肾间质中大量胶原纤维沉积,肾间质明显增宽;Ⅲ型前胶原、TGF-β1含量显著增加;Smad7,SnoN蛋白表达水平显著下调.TMP组与模型组比较,肾组织病理改变明显改善,Ⅲ型前胶原、TGF-β1含量明显降低,Smad7,SnoN蛋白表达水平明显上调.结论:川芎嗪具有显著抗肾间质纤维化的作用,其机制与降低肾组织中促纤维化细胞因子TGF-β1含量,同时恢复Smad逆向调控因子Smad7和SnoN蛋白表达水平有关.     

抗纤灵方对肾纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路表达的影响

目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除所致肾纤维化大鼠的治疗效果,并探讨其分子作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组(n=10),假手术组(n=10),5/6肾切除肾纤维化造模组(n=30)。将造模成功的大鼠随机分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦钾组。氯沙坦钾组、抗纤灵方组每日分别给予氯沙坦钾(33. 3 g·kg-1)及抗纤灵方(21 g·kg-1)灌胃治疗,其余组都用等体积的生理盐水。持续8周灌胃后处死,检测各组大鼠血肌酐(SCr),尿素氮(BUN),24 h尿蛋白(24 h-Pro);苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学改变;马松(Masson)染色观察肾脏纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测肾脏转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad2,Smad3,Smad7蛋白和mRNA在肾脏组织中的表达。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠的SCr,BUN,24 h-Pro上升,纤维化面积和肾脏损伤评分增加,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白表达升高,Smad7 mRNA与蛋白表达显著下降(P 0. 01)。与模型组相比,氯沙坦钾组、抗纤灵方组可减少纤维化面积,降低肾脏损伤评分,SCr,BUN,24 h-Pro,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白的表达水平,Smad7mRNA与蛋白表达显著上调(P 0. 01),但低于正常组与假手术组的水平。结论:中药抗纤灵方可通过抑制TGF-β_1/Smad通路来延缓肾纤维化。     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β_1、smad7蛋白表达的影响

目的:观察温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1、smad7蛋白表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:将雄性SD大鼠(120只)随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组30只。采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型(假手术组只分离但不结扎输尿管),于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦(10 mg·kg-1·d-1),温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方(9.8 g·kg-1·d-1)。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、smad7蛋白的表达。结果:造模后第14天温肾活血化湿方较模型组明显降低尿蛋白定量(P0.05),第21天温肾活血化湿方与模型组比较有极显著降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较smad7蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:温肾活血化湿方通过抑制TGF-β1,上调smad7蛋白表达,从而延缓肾间质纤维化的进程。     

芪蛭真武汤改善单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及其机制

目的:探讨芪蛭真武汤对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响,及对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/Smads和氧化应激反应的作用。方法:将30只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、芪蛭真武汤高剂量组、芪蛭真武汤低剂量组、厄贝沙坦组(n=6)。模型组及各治疗组行左侧输尿管结扎,假手术组不结扎输尿管,仅分离输尿管后关闭腹腔。术后1 d开始灌胃给药,假手术组、模型组予无菌蒸馏水10 mL·kg~(-1),芪蛭真武汤高剂量组予芪蛭真武汤22.2 g·kg~(-1),低剂量组予芪蛭真武汤11.1 g·kg~(-1),厄贝沙坦组予厄贝沙坦片0.02 g·kg~(-1)。各组大鼠分别于术后14 d取材,取材前收集24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量(24 h-Upr);收集血清用以检测肌酐(SCr),尿素氮(BUN);取结扎侧肾组织行苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色,光镜下观察其病理改变;免疫组化法(IHC)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和纤维连接蛋白(FN)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TGF-β_1,Smad3,p-Smad3,非吞噬细胞氧化酶Ⅳ(NOX4)的表达。结果:与假手术组比较,模型组SCr,BUN,胶原容积分数(CVF),24 h-Upr均增高(P0.05,P0.01),模型组α-SMA,Col-Ⅰ,FN,TGF-β_1,p-Smad3,NOX4蛋白的表达均较高(P0.05);与模型组比较,芪蛭真武汤高剂量组和厄贝沙坦组的SCr,BUN,CVF,芪蛭真武汤高剂量组的24 h-Upr均较低(P0.05);各中药治疗组α-SMA,Col-Ⅰ,FN,TGF-β_1,Smad3,p-Smad3,NOX4的表达均较少(P0.05)。结论:芪蛭真武汤能够减少UUO大鼠的尿蛋白,保护肾脏功能,抑制肾间质纤维化的发生、发展;其机制可能与抑制TGF-β_1/Smads信号通路和氧化应激反应有关。     

“清化固肾排毒颗粒”对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织Wnt4和TGF-β1表达的影响

目的:观察清化固肾排毒颗粒对肾间质纤维化大鼠肾组织Wnt4和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,从而探讨其对肾间质纤维化的作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新组及清化固肾排毒方高、中、低剂量组,除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管结扎手术方法(UUO)建立大鼠肾间质纤维化模型,术后各组分别予相应药物或生理盐水灌胃,每日1次。给药第7、14、21日后,各组大鼠禁食不禁水1d,处死,取手术侧肾组织做病理检测,Masson染色观察其病理变化,免疫组织化学染色检测Wnt4及TGF-β1在肾间质的阳性染色表达。结果:经Masson染色后,模型组与各给药组大鼠肾组织胶原纤维蓝染部分较假手术组明显增多,肾纤维化程度显著加重;与模型组比较,清化固肾排毒方各剂量组和洛丁新组大鼠肾组织胶原纤维蓝染部分明显减少,肾纤维化程度相对减轻。免疫组化结果显示,清化固肾排毒方各剂量组和洛丁新组大鼠肾组织Wnt4及TGF-β1阳性表达显著低于模型组(P0.05)。结论:清化固肾排毒颗粒能有效改善肾间质纤维化模型大鼠肾纤维化程度,其可能通过下调Wnt4、TGF-β1改善肾功能,从而达到改善肾纤维化的作用。