室旁核内花生四烯酰乙醇胺对心衰大鼠的心脏功能和交感神经活动的影响

目的:探究慢性心衰大鼠下丘脑室旁核(PVN)内花生四烯酰乙醇胺(AEA)对心脏功能和交感神经活动的影响。方法:采用冠状动脉结扎法构建大鼠心衰模型,超声心动图检测心功能;PVN内连续4周分别灌注AEA、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)选择性抑制剂KN-93、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道特异性阻断剂辣椒平(CPZ)、Ca~(2+)螯合剂BAPTA-AM和小电导钙激活钾通道(SK通道)阻断剂apamin后,检测交感驱动及心功能指标;同时采用不同浓度AEA孵育NG108细胞,荧光测定法检测细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]_i);Western blot检测CaMKII、SK_2及磷酸化TRPV1蛋白水平。结果:与假手术组相比,心衰组左心室舒张末期压(LVEDP)明显升高,左室压力最大上升、下降速率(±dp/dt_(max))和射血分数(EF)明显下降;PVN内AEA含量、[Ca~(2+)]_i及CaMKII、SK_2和磷酸化TRPV1蛋白水平均显著降低;与溶剂组相比,心衰组PVN内灌注AEA可显著降低心衰大鼠死亡率和交感驱动指标,并改善心功能;然而,PVN内分别灌注KN-93、CPZ、BAPTA-AM和apamin均显著增强交感驱动指标并恶化心功能;AEA可剂量依赖性增加NG108细胞内[Ca~(2+)]_i及CaMKII、SK_2和磷酸化TRPV1蛋白水平。结论:室旁核内CaMKII/TRPV1/Ca~(2+)/SK_2信号通路可能参与了AEA对心衰大鼠心脏功能和交感神经活动的影响。     

下丘脑室旁核CRH神经元激活在慢性充血性心力衰竭中的交感兴奋作用

目的:观察慢性心衰时下丘脑室旁核(PVN)内促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)表达变化及其与交感神经活动之间的关系。方法:健康雄性SD大鼠,冠脉结扎制备心衰模型,侧脑室插管渗透压泵持续给药。假手术组和心衰组给予人工脑脊液0.25μL/h,心衰给药组给予CRH抑制剂αh-CRH 15 mg/h。同时,选取健康雄性体内CRH合成不足的Lewis大鼠与同源纯种Fischer 344大鼠分别制备心衰模型和假手术对照进行对比研究。4周后,测定左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、右心室/体重比(RV/BW)、肺/体重比(lung/BW)、肾交感神经放电活动(RSNA)、血浆去甲肾上腺素(NE)浓度和PVN内CRH阳性神经元数目。血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)含量。结果:与假手术组相比,SD心衰大鼠PVN内CRH阳性神经元数目明显增加,血浆ACTH浓度升高,RSNA增强,血浆NE浓度增加,LVEDP、lung/BW和RV/BW增加,±dp/dtmax降低;心衰模型后给予αh-CRH可明显逆转上述各种变化(P0.05)。Fisher 344大鼠心衰组和假手术对照相比,PVN内CRH阳性神经元数目明显增加,血浆ACTH浓度升高,RSNA增强,外周血NE浓度升高,LVEDP、RV/BW和lung/BW增加,±dp/dtmax下降(P0.05)。但Lewis大鼠心衰组和假手术对照相比,以上各指标改变均不明显。结论:慢性心衰时,下丘脑室旁核CRH神经元被激活,激活的CRH神经元可增强外周交感神经活动,加重心功能恶化。     

慢性心衰大鼠下丘脑室旁核瞬时外向钾通道蛋白Kv4.2和Kv4.3低表达促进肾交感神经兴奋性

 目的: 观察慢性心衰大鼠下丘脑室旁核内瞬时外向钾通道蛋白Kv4.2和Kv4.3的变化及其对交感神经活性的影响。方法: 采用冠状动脉左前降支结扎术建立大鼠心衰模型或假手术模型,造模4周后超声心动图测定心功能;酶联免疫吸附法测定血浆去甲肾上腺素(NE)及血清N端前脑钠肽(NT-proBNP)含量;Western blot和real-time PCR法测定室旁核内Kv4.2和Kv4.3的表达情况;室旁核部位注射钾通道阻滞剂4-氨基吡啶(4-AP),电生理记录仪记录血压、心率和肾交感神经放电的变化。结果: 与假手术组比,心衰组大鼠心功能明显降低,血浆NE及血清NT-proBNP明显升高,室旁核内Kv4.2和Kv4.3表达明显下调;注射4-AP后导致血压、心率和交感神经放电升高,但心衰组的升高幅度小于假手术组。结论: 心力衰竭时室旁核内Kv4.2和Kv4.3表达下调并伴有交感神经放电增加,促进心衰进展。     

下丘脑室旁核小电导钙激活钾通道过表达降低慢性心衰大鼠肾交感神经兴奋性

 目的：研究下丘脑室旁核小电导钙激活钾通道亚型2（SK2）过表达对慢性心衰大鼠心率、血压和肾交感神经活性的影响,揭示心衰大鼠下丘脑室旁核对交感系统的调节机制。方法：构建SK2重组腺病毒穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP-rKCNN2。采用SD大鼠,手术组用左冠状动脉前降支结扎术制作慢性心衰模型,假手术组大鼠左冠状动脉前降支下穿线但不结扎,术后6周用超声心动图测定心功能。心衰组和假手术组分别在室旁核微量注射 SK2 腺病毒pDC316-mCMV-EGFP-rKCNN2和对照腺病毒pDC316-mCMV-EGFP,7 d后通过超声心动图检测心功能的改变;运用免疫组织化学、RT-PCR和Western blotting方法检测SK2重组腺病毒转染情况及表达。室旁核微量注射SK通道阻滞剂apamin,通过PowerLab 8/30系统采集信号记录心率、血压和肾交感神经活性的变化。结果: 心衰大鼠SK2表达较假手术组减少,下丘脑室旁核微量注射SK2腺病毒导致心衰大鼠肾交感神经兴奋性明显降低,下丘脑室旁核微量注射对照腺病毒对假手术大鼠交感神经兴奋性的改变不明显。结论：SK通道蛋白在心衰状态下表达降低并可能导致其功能减弱,进而促成由SK2通道介导的中枢负性交感调节通路的降低,增加了交感神经兴奋性,从而加重心衰的发展。SK2过表达减弱了心衰大鼠的肾交感神经活性,为治疗心衰提供了新的方向。     

限钠或补钠对充血性心衰大鼠心钠素及心功能的影响

目的观察限钠或补钠对充血性心衰大鼠心钠素及心功能的影响.方法将充血性心衰大鼠随机分为3组(心衰组、心衰限钠组、心衰补钠组),假手术大鼠为对照组,用放射免疫分析法测定各组血浆和心肌心钠素水平,同时检测心功能.结果心衰限钠组血钠、心房心钠素及左室收缩压和动脉压显著低于心衰组,血浆和心室心钠素、右房压均显著高于心衰组;心衰补钠组血钠和动脉压与对照组无显著差别,血浆和心肌心钠素、右房压与心衰组无显著差别,左室收缩压显著高于心衰组,左室舒张末压显著低于心衰组.结论心衰后适量补钠维持血钠平衡有利于心钠素发挥排钠利尿作用,改善心功能.     

中枢前列腺素E_2在慢性心力衰竭交感兴奋中的作用

目的:观察中枢前列腺素E_2(PGE_2)在慢性心力衰竭(心衰)交感神经兴奋中的作用,并探讨其机制。方法:雄性SD大鼠冠脉结扎制备心衰模型,侧脑室渗透压泵持续给药,假手术组和心衰组给予人工脑脊液(0.25μL/h),心衰给药组给予塞来考昔(CLB;20 mg/h)。4周后,检测各组大鼠脑脊液内PGE_2浓度、交感神经兴奋性和心功能指标,同时测定下丘脑室旁核(PVN)内促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)神经元激活指标和神经递质的变化。结果:与假手术组相比,心衰组大鼠脑脊液内PGE_2含量增加,肾交感神经放电活动增强,外周血去甲肾上腺素升高,左心室舒张末期压力、肺/体质量比和右心室/体质量比均增加,左室内压最大上升和下降速率均下降,PVN内CRH阳性神经元数目增多,外周血促肾上腺皮质激素浓度升高(P0.05);心衰大鼠侧脑室给予CLB后,脑脊液内PGE_2明显下降,PVN内CRH神经元激活减少,交感神经兴奋性减弱,心功能得到改善(P0.05)。与假手术组相比,心衰大鼠PVN内谷氨酸含量较高,γ-氨基丁酸含量和谷氨酸脱羧酶67阳性神经元数目较低(P0.05);侧脑室给予CLB后,以上各指标均被逆转(P0.05)。结论:慢性心衰时,中枢内升高的PGE_2可以激活下丘脑室旁核CRH神经元从而增强交感神经活动,而该作用可能是通过改变下丘脑室旁核神经递质系统来实现的。     

Akt参与室旁核内注射微量催产素减轻大鼠胃缺血-再灌注损伤

目的 研究PVN内注射微量催产素（OT）对大鼠胃缺血再灌注(GI-R)损伤的影响及其局部的分子机制。方法 用夹闭大鼠腹腔动脉30 min，再灌注1 h的GI-R损伤模型，于单侧PVN内注射微量OT。计数胃黏膜损伤指数后，用免疫组化及免疫印迹观察胃黏膜细胞p-Akt和caspase-3蛋白表达。结果 PVN内注射微量OT(24、120、600和3000 ng)呈剂量依赖性减轻GI-R损伤，并明显增加胃黏膜细胞的Akt表达和减少caspase-3的表达。侧脑室给予OT特异性拮抗剂atosiban后取消OT对大鼠GI-R损伤的影响。结论 PVN微量注射OT后通过增加胃黏膜细胞Akt表达，抑制caspase-3的表达，减轻GI-R损伤。     

运动训练改善心力衰竭大鼠动脉压力反射功能

目的:探讨运动训练(EX)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠动脉压力反射功能的影响及机制。方法:实验分4组:心衰-运动组(EX-CHF),心衰-非运动组(CHF),假手术-运动组(EX-sham),假手术-非运动组(sham)。采用结扎左冠状动脉诱发心衰,然后进行4周跑步运动,检测压力反射(BR)、血浆血管紧张素II(AngII)和中枢AngIIⅠ型受体(AT1R)表达。结果:(1)CHF大鼠BR曲线平均斜率和最大增益明显小于sham大鼠(P0.01),EX增强CHF大鼠BR曲线平均斜率和最大增益(P0.05),但对sham组BR曲线无明显影响。(2)EX降低CHF大鼠血浆AngII浓度[(137±27)ng/Lvs(263±55)ng/L,P0.01],但不影响sham大鼠血浆AngII[(75±17)ng/Lvs(92±21)ng/L]。(3)CHF大鼠PVN内AT1R蛋白表达明显高于sham组(1.20±0.21vs0.70±0.14,P0.01),EX显著降低CHF大鼠室旁核内AT1R蛋白表达(0.90±0.13,P0.05),对sham大鼠AT1R表达(0.60±0.16)无明显影响。结论:运动训练改善心衰时减弱的动脉压力反射功能,其机制涉及降低血浆AngII和下调室旁核内AT1R蛋白表达。     

miR-30a在心肌梗死大鼠心肌纤维化中的作用机制及对心功能的影响

目的探讨miR-30a在大鼠心肌梗死后对心肌纤维化的作用机制及对心功能的影响。方法构建携带大鼠miR-30a基因的载体,在HEK293细胞中包装病毒载体r AAV9-miR-30a及阴性对照r AAV9-miR-30a-NC,提取纯化后通过冠脉注射方法分别传导PBS缓冲液、r AAV9-miR-30-NC和r AAV9-miR-30a至大鼠心脏,再建立大鼠心肌梗死模型,分别设为PBS组、miR-30-NC组和miR-30a组,同时设立假手术组(sham组)。用心脏彩色多普勒超声检测心功能指标,包括短轴缩短率(FS)及左室射血分数(LVEF);Masson染色观察心肌胶原容积分数(CVF);免疫组化法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测心肌miR-30a及TGF-β1和CTGF mRNA表达;蛋白印迹法(Western blot)检测TGF-β1及CTGF蛋白的表达。结果 miR-30a组心功能较PBS组及miR-30-NC组显著改善(P0.05)。miR-30a组的心肌CVF及Ⅰ、Ⅲ胶原表达水平、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值较PBS组及miR-30-NC组显著降低(P0.01);miR-30a组心肌TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平与PBS组及miR-30-NC组比较显著下降(P0.001);CTGF mRNA及蛋白表达水平较PBS组及miR-30-NC组显著降低(P0.001)。结论 miR-30a过表达能下调心肌梗死后心肌TGF-β1、CTGF mRNA及蛋白水平,从而减少心肌胶原产生,抑制心肌纤维化,进而改善心功能。     

心衰患儿血浆中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白的表达及临床意义

目的中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)在临床上被广泛应用于肾脏疾病的诊断,而与小儿心衰的关系很少被研究。本文旨在探讨心衰患儿血浆NGAL表达水平及临床意义。方法选取40例心衰患儿作为实验组,按照纽约心脏学会(NYHA)分类法进行心功能分级。另选取年龄、性别相匹配的40例健康体检者作为对照组。记录两组患者血浆NGAL与N-末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)水平以及左心功能指标左心室射血分数(LVEF),比较实验组不同心衰等级患儿血浆NGAL水平。结果实验组心衰患儿血浆NGAL及NT-proBNP水平均明显高于对照组,而LVEF显著低于对照组;血浆NGAL与NT-proBNP呈正相关(r=0.76,P0.05),与LVEF呈负相关(r=-0.37,P0.05);不同等级心衰患儿血清肌酐和血红蛋白水平比较,差异无统计学意义。结论心衰患儿血浆NGAL水平显著升高,且与心衰严重程度呈正相关,检测血浆NGAL水平对小儿心衰的诊断和预后评估具有重要的临床应用价值。     

Enhanced sympathetic activity and cardiac sympathetic afferent reflex in rats with heart failure induced by adriamycin

Our previous studies have shown that the cardiac sympathetic afferent reflex is enhanced in rats with chronic heart failure(CHF) induced by coronary artery ligation and contributes to the over-excitation of sympathetic activity.We sought to determine whether sympathetic activity and cardiac sympathetic afferent reflex were enhanced in adriamycin-induced CHF and whether angiotensin II(Ang II) in the paraventricular nucleus(PVN) was involved in enhancing sympathetic activity and cardiac sympathetic afferent reflex.Heart failure was induced by intraperitoneal injection of adriamycin for six times during 2 weeks(15 mg/kg).Six weeks after the first injection,the rats underwent anesthesia with urethane and α-chloralose.After vagotomy and baroreceptor denervation,cardiac sympathetic afferent reflex was evaluated by renal sympathetic nerve activity and mean arterial pressure(MAP) response to epicardial application of capsaicin(1.0 nmol).The response of MAP to ganglionic blockade with hexamethonium in conscious rats was performed to evaluate sympathetic activity.The renal sympathetic nerve activity and cardiac sympathetic afferent reflex were enhanced in adriamycin rats and the maximum depressor response of MAP induced by hexamethonium was significantly greater in adriamycin rats than that in control rats.Bilateral PVN microinjection of angiotensin II(Ang II) caused larger responses of the cardiac sympathetic afferent reflex,baseline renal sympathetic nerve activity and MAP in adriamycin rats than control rats.These results indicated that both sympathetic activity and cardiac sympathetic afferent reflex were enhanced and Ang II in the PVN was involved in the enhanced sympathetic activity and cardiac sympathetic afferent reflex in rats with adriamycin-induced heart failure.     

肌肉注射CTLA4-FasL重组腺相关病毒抑制大鼠关节炎的实验研究

目的观察CTLA4-FasL融合基因能否有效抑制大鼠关节炎。方法在动物造模免疫第2天,以肌肉注射方式导入CTLA4-FasL和EGFP(对照)重组腺相关病毒(rAAV),持续观察和测量2组动物的临床指标包括关节指数、踝关节厚度和体质量等,并对踝关节的组织学表现如滑膜增生和炎性细胞浸润等进行了检测。结果应用大鼠佐剂诱导关节炎动物模型,明确了重组AAV病毒可介导目的基因CTLA4-FasL于体内表达;与rAAV.EGFP对照组相比,rAAV.CTLA4-FasL处理组在临床学和组织学表现上均有效抑制了大鼠关节炎。结论 CTLA4-FasL融合分子很可能是具有潜在研究价值的类风湿性关节炎治疗分子。     

心衰大鼠室旁核微量注射AT1和AT2受体阻滞剂对肾交感神经活性的影响

目的: 研究慢性心衰大鼠室旁核微量注射血管紧张素II-1型和2型(AT₁和AT₂)受体阻滞剂对心率、血压和肾交感神经系统的影响,揭示心衰大鼠下丘脑室旁核对交感系统的调节机制。方法: 采用SD大鼠,手术组用左冠状动脉前降支结扎术制作心衰模型,假手术组大鼠左冠状动脉前降支下穿线但不结扎。术后4周,测定血流动力学评判心功能状态,测定心脏/体重比与肺/体重比,并进行心脏病理组织学观察。对符合标准的大鼠进行麻醉,经腹膜后途径暴露左肾,在手术显微镜下剥离肾交感神经,脑立体定位仪对大鼠室旁核定位,微量注射AT₁和AT₂受体阻滞剂(100 nL),POWERLAB 8/30系统采集信号,记录心率、血压和肾交感神经放电活动的改变,人工脑脊液组作为对照。结果: 肾交感神经放电:下丘脑室旁核微量注射AT₁受体阻滞剂导致肾交感神经兴奋性减弱,对心衰大鼠交感神经的兴奋性减弱较假手术组明显。下丘脑室旁核微量注射AT₂受体阻滞剂及人工脑脊液对心衰大鼠及假手术大鼠交感神经的兴奋性改变不明显。结论: 心衰时室旁核内注射AT₁、AT₂受体阻滞剂对交感神经的输出反应有差异。在中枢肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS),血管紧张素II主要通过AT₁受体起作用,而AT₂受体无相关介导作用。     

Angiotensin AT1 receptors in paraventricular nucleus contribute to sympathetic activation and enhanced cardiac sympathetic afferent reflex in renovascular hypertensive rats

Sympathetic activity is enhanced in hypertension, which contributes to the pathogenesis of hypertension and progression of organ damage. The cardiac sympathetic afferent reflex (CSAR) is enhanced in renovascular hypertension and involved in the sympathetic activation. The present study was designed to investigate whether angiotensin II (Ang II) and Ang II type 1 (AT(1)) receptors in paraventricular nucleus (PVN) contribute to the enhanced CSAR and sympathetic outflow in experimental renovascular hypertensive rats. Hypertension was induced by the two-kidney one-clip (2K1C) method. The normotensive rats underwent sham operation (Sham). Acute experimentation was carried out at the end of the 4th week. Under urethane and α-chloralose anaesthesia, the renal sympathetic nerve activity (RSNA) and mean arterial pressure (MAP) were recorded in rats with sino-aortic denervation and cervical vagotomy. The AT(1) receptor expression was determined with Western blot. The CSAR was evaluated by the response of RSNA and MAP to epicardial application of 1.0 nmol of capsaicin. The AT(1) receptor expression in the PVN was increased, and Ang II in the PVN augmented the enhanced CSAR and RSNA in 2K1C rats. The effects of Ang II were abolished by pretreatment with the AT(1) receptor antagonist, losartan, in 2K1C rats. Losartan in the PVN normalized the enhanced CSAR and decreased the RSNA and MAP in 2K1C rats. These results indicate that the increased activity of AT(1) receptors in the PVN contributes to the enhanced CSAR and excessive sympathetic activation in renovascular hypertensive rats.     

shRNA干扰蓝斑核去甲肾上腺素转运体(NET)表达对大鼠抑郁样行为的改善作用

目的:探讨利用慢病毒在蓝斑核(locus coeruleus,LC)敲除去甲肾上腺素转运体(norepinephrine transporter,NET)对大鼠抑郁样行为的影响。方法:构建NET-shRNA慢病毒载体及阴性对照序列,感染PC12细胞后通过Q-PCR和Western Blot方法测定NET mRNA和蛋白水平;建立慢性不可预见性温和应激大鼠抑郁症模型,双侧蓝斑核注射NET-shRNA;3周后采用强迫游泳实验、糖水偏好实验、旷场实验检测大鼠抑郁样行为;Western Blot检测大鼠NET水平;高效液相色谱法(HPLC)检测大鼠去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)水平。结果:Q-PCR和Western Blot检测结果显示:shRNA-1146沉默效率最高(P0.01);与抑郁症模型组相比,蓝斑核注射NET-shRNA组大鼠强迫游泳不动时间减少、糖水偏好率增加、旷场实验得分增加(P0.01),蓝斑核NET表达下降(P0.01)、NE水平升高(P0.05)。结论:NET-shRNA慢病毒注射蓝斑核能下调NET的表达,改善大鼠抑郁样行为,为抑郁症的基因治疗提供了实验依据。