塞来昔布抑制Tca8113细胞释放PGE_2及抑制细胞增殖的作用

目的研究选择性环氧化酶2抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌Tca8113细胞生长抑制、诱导细胞凋亡与释放前列腺素E2（PGE2）的影响。方法采用四唑氮蓝（MTT）法检测细胞增殖,AnnexinV-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测PGE2含量,AO/EB荧光双染观察凋亡细胞的形态学变化。结果塞来昔布以剂量依赖方式抑制Tca8113细胞生长及释放PGE2,其抑制PGE2释放与抑制细胞生长及诱导细胞凋亡均呈负相关,AO/EB荧光双染观察发现经塞来昔布处理24h后,细胞出现典型的凋亡变化,凋亡细胞多见。结论塞来昔布抑制人舌鳞癌Tca8113细胞生长及诱导细胞凋亡与其抑制PGE2释放密切相关。     

塞来昔布增强博来霉素对人舌鳞状细胞癌Tca8113杀伤作用的研究

目的 研究环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)增强博来霉素(bleomycin)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法 用含不同浓度的塞来昔布和博来霉素培养液培养Tca8113细胞24、48、72 h后,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长抑制率,并采用金正钧法判断药物合用的相互作用;流式细胞术检测Tca8113细胞周期进程和诱导细胞凋亡的作用.结果 小剂量的塞来昔布(10 μmol/L)可增强博来霉素对Tca8113细胞的生长抑制作用,增强博来霉素阻滞Tca8113细胞周期进程的作用,其阻滞G1期细胞进入S期的作用最为明显,导致G0、G1细胞的数量增加[(60.93±0.32)%],S期[(30.57±0.78)%]、G2及M期[(8.50±0.50)%]细胞减少,同时,细胞凋亡率[(1.87±0.11)%]显著提高.结论 小剂量的塞来昔布可增强博来霉素对Tca8113细胞的毒性作用,阻滞细胞周期进程并诱导细胞凋亡.     

环氧化酶-2抑制剂对舌癌细胞侵袭及基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨环氧化酶-2（Cox-2）抑制剂塞来昔布对人舌鳞癌细胞系Tca8113侵袭、黏附及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）分泌的影响。方法Tca8113细胞经塞来昔布作用24 h后,免疫组织化学方法检测细胞Cox-2蛋白表达,细胞外基质黏附实验检测细胞黏附力,Boyden侵袭小室测定细胞的侵袭力,酶联免疫吸附法检测培养液中MMP-2的水平。结果Tca8113细胞经塞来昔布作用24 h后,Cox-2蛋白表达明显受到抑制,Boyden侵袭小室细胞穿膜数和细胞外基质黏附率明显降低,同时,培养液中MMP-2水平也明显降低。结论Cox-2抑制剂塞来昔布可抑制Tca8113细胞Cox-2蛋白表达,其抑制细胞侵袭力和黏附率作用可能与抑制MMP-2分泌有关。     

Survivin基因在顺铂诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡中的作用

目的体外观察顺铂（DDP）诱导Tca8113舌鳞癌细胞株凋亡的作用, 同时检测在此过程中凋亡蛋白抑制因子Survivin mRNA表达和蛋白表达的变化。方法将人Tca8113舌鳞癌细胞株进行传代培养,MTT法检测顺铂不同浓度和不同时间对Tca8113舌鳞癌细胞生长的抑制作用,通过RT- PCR检测凋亡过程中Survivin基因mRNA的表达,免疫细胞化学观察Survivin基因的蛋白表达,以及流式细胞术观察顺铂诱导各组Tca8113细胞的凋亡率。结果顺铂可明显抑制Tca8113舌鳞癌细胞的增殖, 其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率也呈同样的趋势,最高可达34.1%。1.0 μg/mL DDP处理Tca8113舌鳞癌细胞,Survivin mRNA和蛋白表达水平随时间的增加而降低,在24h达到最低,随后又升高。结论抗凋亡蛋白Survivin在Tca8113舌鳞癌细胞高表达,顺铂可有效诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡, Survivin mRNA表达在化疗早期随作用时间的延长而降低,Survivin基因的抑制在顺铂诱导的Tca8113舌鳞癌细胞的细胞凋亡中起着重要的作用。     

塞来昔布对Tca8113细胞侵袭性影响的体外研究

目的:探讨环氧化酶-2(cyclooxygenease-2,COX-2)抑制剂——塞来昔布(celecoxib)对Tca8113细胞侵袭性的抑制作用。方法:用划痕实验检测Tca8113细胞的迁移能力;不同浓度的塞来昔布处理人舌鳞癌Tca8113细胞后,用MTT法检测细胞-基质黏附力的变化;用Transwell小室结合Matrix胶检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果:10、20μmol/L的塞来昔布作用24 h后,细胞的侵袭能力分别下降了54%和73%(P<0.001),细胞-基质黏附力也明显降低(P<0.001)。结论:Tca8113细胞是高侵袭性细胞,塞来昔布对Tca8113细胞侵袭的抑制作用呈剂量依赖性。     

NS-398诱导舌鳞癌细胞凋亡及其对E2F-1蛋白表达的影响

目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡及其对细胞核转录因子E2F-1蛋白表达的影响。方法NS-398作用于舌癌Tca8113细胞,噻唑蓝法检测细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞周期及其凋亡率的改变,放射免疫法测定细胞上清液中前列腺素E2(PGE2)含量,Western blot法检测细胞中COX-2和E2F-1蛋白表达的变化。结果NS-398可以抑制Tca8113细胞的增殖,其抑制作用随着时间的延长和药物浓度的增加而增强。NS-398(50μmol/L)可引起Tca8113细胞G0/G1期细胞的逐渐增加,S期和G2/M期细胞比例数减少,并随着时间的延长细胞上清液中PGE2含量降低,细胞中COX-2和E2F-1蛋白表达下调。结论NS-398可以抑制Tca8113细胞的增殖,阻断细胞生长停滞于G0/G1期;该效应可能与其诱导细胞凋亡和降低细胞产生前列腺素E2有关;E2F-1蛋白可能参与了这些过程。     

脱落酸对Tca8113细胞诱导分化影响的体外实验

目的探讨植物激素中脱落酸（ABA）对人舌鳞癌Tca8113细胞的诱导分化作用。方法采用脱落酸处理Tca8113细胞,观察Tca8113细胞生长和形态变化,SABC免疫组化检测细胞表面分化标志物Involucrin、RARβ及原位杂交检测Caspase- 3 mRNA的表达变化,并比较细胞表面分化标志物的表达水平与Caspase- 3 mRNA表达两者间相关性。结果Tca8113细胞经ABA作用后,细胞生长抑制明显（P<0.05）,Tca8113细胞表现出向正常细胞转化的趋势。脱落酸作用24 h时细胞Involucrin、RARβ蛋白以及Caspase- 3 mRNA表达均增高,不同浓度实验组中其表达存在显著性差异（P<0.05）。1×10-2mmol/L ABA作用12 h和24 h时,Involucrin、RARβ和Caspase- 3 mRNA表达之间呈正相关（P<0.05）。结论脱落酸可通过提高Involucrin、RARβ表达水平,激活Caspase- 3 mRNA的表达,从而促进肿瘤细胞分化及凋亡。     

三氧化二砷对舌鳞癌细胞凋亡及端粒酶逆转录酶基因的作用

目的　研究三氧化二砷(As2O3)对舌鳞癌细胞株(Tca8113)增殖的影响及对端粒酶逆转录酶基因(hTERT mRNA)的作用,并初步探讨三氧化二砷的作用机制。方法　以舌鳞癌细胞株(Tca8113)为研究对象,采用噻唑蓝 (MTT)、Annexin V/碘化丙锭(PI)染色法检测细胞生长抑制率和细胞凋亡率;采用Western blot检测细胞hTERT蛋白 的表达;采用RT-PCR法检测细胞hTERTmRNA的表达情况。结果　As2O3能够明显抑制Tca8113细胞增殖,诱导 细胞凋亡,并有浓度、时间依赖性。5μmol/L As2O3组72 h细胞生长抑制率为83·40%±7·31%,细胞凋亡率为 26·40%±3·42%。As2O3能抑制hTERTmRNA的表达和翻译,随As2O3作用时间、浓度增加,细胞hTERTmRNA和蛋 白表达减弱,各实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0·05)。结论　As2O3可以明显抑制Tca8113细胞增殖, 诱导舌癌细胞凋亡,并抑制端粒酶催化亚基基因的表达,诱导细胞凋亡和抑制hTERT转录和翻译可能是其作用机 制之一。     

塞来昔布增强 KB/VCR 细胞对长春新碱敏感性与诱导凋亡的相关性研究

目的：探讨环氧化酶－2（COX －2）抑制剂塞来昔布增强口腔癌耐长春新碱细胞株 KB ／VCR 细胞对长春新碱敏感性与诱导凋亡的相关性。方法将 KB ／VCR 细胞分别采用长春新碱、塞来昔布及长春新碱联合塞来昔布处理后,用 MTT 法检测 KB ／VCR 细胞的生长抑制率,Annexin V －FITC ／PI 双标法检测细胞早期凋亡率,Western blot 检测抗凋亡蛋白 Bcl －xl 和Bcl －2的表达。结果塞来昔布以时间和剂量依赖方式抑制 KB ／VCR 细胞的生长,当塞来昔布浓度≤10μmol ／L 时,其对KB ／VCR 细胞的生长无明显影响。但小剂量的塞来昔布（10μmol ／L）与长春新碱（1．5μmol ／L）作用 KB ／VCR 细胞24、48及72 h 后,其生长抑制率分别为（33．16±4．66）％、（39．20±5．77）％、（44．01±4．27）％,显著高于长春新碱组（1．5μmol ／L）（P均＜0．01）。流式细胞术检测结果示联合用药组处理24 h 后早期凋亡率显著高于长春新碱单独用药组（P 均＜0．01）。West-ern Blot 结果显示联合用药组较其他给药组明显下调 Bcl －2、Bcl －xl 的表达（P 均＜0．01）。结论 COX －2抑制剂塞来昔布促进长春新碱对 KB ／VCR 细胞增殖抑制和诱导凋亡作用,可能与下调 Bcl －2、Bcl －xl 蛋白表达有关。     

高迁移率族蛋白N2抑制口腔鳞状细胞癌增殖作用的体外研究

目的 以人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113为实验模型,初步探讨高迁移率族蛋白N2（HMGN2）抗口腔鳞状细胞癌的作用。方法 大量培养重组人HMGN2表达载体大肠杆菌BL21,用异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷（IPTG） 诱导HMGN2的表达,产物用B-PER GST Fusion Protein Purification Kit进行纯化。在细胞培养基中加入不同质量浓度的HMGN2,通过MTT、Hoechst 33342荧光染色、流式细胞术和Western-blot法检测其凋亡效果及抗凋亡的分子机制。结果 经MTT检测证明HMGN2能显著抑制Tca8113细胞的生长,通过Hoechst 33342荧光染色、流式细胞术和 Western-blot检测证明HMGN2能使Tca8113的细胞形态发生改变,并且能使Tca8113细胞阻滞于细胞周期的S期,促进Tca8113细胞凋亡。结论 HMGN2可以促进人口腔鳞状细胞癌细胞的凋亡。     

短发卡RNA介导的表皮生长因子受体基因沉默对舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)介导的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因沉默对舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响,为治疗舌鳞状细胞癌提供依据.方法 构建靶向人EGFR的shRNA真核表达载体并瞬时转染人舌鳞状细胞癌细胞株Tca8113细胞,用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法检测转染前后EGFR的mRNA和蛋白的变化,用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖活性,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 转染后Tca8113细胞的EGFR mRNA和蛋白的表达(0.217±0.047)和(0.324±0.059)均明显下调(P＜0.05),细胞增殖活性(0.340±0.009)明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率(39.4±7.7)%显著增高(P＜0.05).结论 shRNA介导的EGFR基因沉默可抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖并诱导其凋亡.     

环氧合酶-2抑制剂对口腔鳞癌血管生成的影响

目的:探讨环氧合酶-2抑制剂对口腔鳞癌发生过程中血管生成的影响。方法:选取人舌鳞癌细胞株Tca8113作为实验样本。应用反转录聚合酶链反应(PT-PCR)及Western印迹方法检测在COX-2抑制剂NS-398对Tca8113细胞系表达VEGF、Survivin的mRNA及蛋白水平的影响。采用SPSS11.5软件包对数据进行统计学分析。结果:NS-398可下调Tca8113细胞系VEGF及Survivin的表达,且表现出一定的时间依赖性。结论:COX-2抑制剂NS-398可降低口腔鳞状癌细胞Tca8113 VEGF及Survivin的mRNA及蛋白质含量的水平,在口腔鳞癌血管形成及基因凋亡过程中起着重要作用。     

过表达外源性Notch1对舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体表达的影响

目的研究过表达外源性Notch1对人舌鳞癌细胞体外生长及表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法用脂质体将编码Notch1胞内域的表达质粒体外转染人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞,用甲基噻唑基四唑法（MTT）和流式细胞仪分别检测细胞增殖活性和凋亡情况,用逆转录聚合酶链式反应和Western blot检测Notch1和EGFR的mRNA和蛋白的变化,用免疫细胞化学检测EGFR蛋白的表达。结果转染后Tca8113细胞的增殖活性降低（Р<0.05）,细胞凋亡率增高（Р<0.05）,Notch1表达上调（Р<0.05）,而EGFR表达下调（Р<0.05）。结论体外过表达外源性Notch1抑制人舌鳞癌细胞增殖,诱导其凋亡,并下调其表皮生长因子受体的表达。     

生存素基因沉默增强人舌鳞状细胞癌Tca8113对顺铂敏感性的实验

目的探讨靶向生存素短发夹状RNA（short hairpin RNA，shRNA）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株生存素基因表达、凋亡及其对顺铂、5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的影响。方法脂质体介导的生存素shRNA表达载体转染Tea8113细胞，未转染、转染脂质体及错配shRNA载体的细胞作为对照。采用RT-PCR和Western blot分别检测生存素mRNA和蛋白的表达，流式细胞仪分析细胞的凋亡率，MTT法测定抗癌药物的敏感性。结果生存素shRNA表达质粒转染后，与3个对照组相比较，生存素mRNA和蛋白表达水平明显下降，细胞凋亡率的上升呈时间依赖性，48h可达37．9％。生存素shRNA能显著增加顺铂的敏感性，与未转染组比较其IC50值下降约4／5（P〈0．01），但对5-Fu的作用不明显。结论靶向生存素的shRNA可有效抑制Tea8113细胞生存素mRNA和蛋白的表达，同时增加了顺铂的化疗敏感性。     

维生素E琥珀酸酯诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的研究

目的探讨维生素E琥珀酸酯（VES）对人舌鳞癌Tca8113细胞的凋亡诱导作用及其可能的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测VES对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用;应用流式细胞仪分析不同质量浓度VES处理后舌鳞癌细胞的凋亡率;Fas中和抗体进行阻断实验;以细胞免疫化学法和流式细胞仪检测VES处理后肿瘤细胞Fas蛋白水平和细胞表面Fas表达的变化。结果不同质量浓度的VES处理后,舌鳞癌细胞的生长受到明显的抑制,肿瘤细胞的凋亡率显著上升,呈现时间依赖性和剂量依赖性;Fas中和抗体进行阻断后,细胞凋亡率显著下降;VES处理后细胞Fas蛋白表达增强;流式细胞仪检测细胞表面Fas平均荧光强度也显著升高。结论VES对舌鳞癌细胞具有凋亡诱导作用,其作用机制与肿瘤细胞表面Fas蛋白表达的上调有关。