癌抗原15-3酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立癌抗原15-3(CA15-3)酶促化学发光免疫分析方法.方法 利用双抗体夹心法建立CA15-3化学发光检测体系,分别对该体系的最低检测限、线性、分析特异性、准确度和精密度进行评估,并与进口全自动化学发光检测结果进行对比.结果 本方法灵敏度为0.26 U/mL,线性范围为0～ 300 U/mL,与CEA和CA125无交叉反应,添加回收率在97.0％ ～105.6％之间,分析内与分析间CV均小于10％,与进口全自动化学发光试剂同时检测160份样本的CA15-3浓度,检测结果的线性相关系数为0.987.结论 成功建立了CA15-3酶促化学发光免疫分析方法.该方法灵敏度高、重复性好,在临床应用中可替代进口化学发光检测试剂.     

孕酮化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立具有较宽检测范围的孕酮(P)化学发光免疫分析方法.方法 采用竞争一步法原理建立P化学发光免疫分析检测体系,对各种影响因素如免疫试剂的稀释度、免疫试剂的稀释体系及温育时间等进行了考察和优化,最终选定的实验条件分别对该体系的最低检出限、线性、精密度、准确性、特异性进行评估,并与进口全自动化学发光试剂检测结果进行对比.结果 本系统线性范围为0.5~90 ng/mL,最低检出限为0.05ng/mL,批内批间变异变异系数均小于10%,与高浓度孕烯醇酮、雄烯二酮、雌二醇均无交叉反应,添加回收率在96.1%~106.2%.与进口全自动化学发光试剂同时测定175份样本的P浓度,二者测定结果的相关系数r为0.981.结论 成功建立了孕酮化学发光免疫分析法,该方法线性范围宽,灵敏度高,可作为进口化学发光试剂的替代试剂在临床进行推广.     

两种免疫分析系统对甲状腺过氧化物酶抗体的一致性评价

目的 评估国产和进口两种化学发光法免疫分析系统检测血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)结果的一致性,探讨国产化学发光法免疫分析系统(MAGLUMI 4000PLUS全自动化学发光法免疫分析系统)检测TPOAb的可行性和实用性.方法 用两种方法检测130份血清样本TPOAb水平,比较两种检测方法的相关性、符合率,并对国...     

国产和进口化学发光免疫分析系统检测血清ProGRP的比对分析

目的 探讨国产自主研发AE-180全自动化学发光免疫分析系统和进口的罗氏cobas e 601电化学发光免疫分析系统同时检测血清ProGRP结果的可比性.方法 依据美国国家临床实验室标准化协会(NCCLS)指南文件EP9-A2[1]文件要求,以罗氏cobas e 601电化学发光免疫分析仪为对比仪器,苏州长光华医自主研发的AE-180全自动化学发光免疫分析仪为实验仪器,采用患者血清样本检测胃泌素释放肽前体(ProGRP)含量,通过实验数据的比对分析,对两套分析系统之间的偏倚进行评估.结果 在ProGRP测定的线性范围内,两套系统相关性好,r=0.997,直线回归方程为Y=0.9944X+0.5892,在ProGRP医学决定水平处的偏倚可接受.结论 两套系统检测ProGRP结果具有较好的一致性,国产自主研发的AE-180全自动化学发光免疫分析系统检测检测血清ProGRP能够满足临床需要,适于临床实验室推广使用.     

雅培i2000化学发光分析仪检测HCV抗体的假阳性分析

目的分析雅培i2000化学发光分析仪在HCV抗体检测中的假阳性。方法对本院2013年1月~2014年6月所有需要进行HCV抗体检测的患者通过雅培i2000化学发光分析仪进行检测。结果22849例患者血清标本中，共检出阳性血清131例，经南京市第一医院核医学中心进行HCV-RNA确诊后，110例阳性，21例阴性。结论雅培i2000化学发光分析仪在HCV抗体检测中的假阳性(16.03%)较高，因此仍应结合临床资料及确认试验结果综合判断。     

原发性肝癌患者214例乙肝两对半及抗-HCV检测结果探析

目的探讨乙肝病毒(HBV)及丙肝病毒(HCV)感染模式与原发性肝癌(PHC)间的关系。方法选取我院于2012年1月至2015年1月间收治的PHC患者214例,抽取其早晨空腹静脉血5m L,分离获得血清,采用罗氏公司Elecsys2010型全自动化学发光免疫分析仪检测患者的乙肝两对半指标,采用酶联免疫法(ELISA)检测患者血清丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)水平。结果 214例PHC患者中,HBV的感染率高达87.85%,显著高于未感染者,其中HBs Ag阳性感染率为68.22%,显著高于HBs Ag阴性感染率19.63%,并且又以"小三阳"模式所占比例最高,达48.13%,显著高于"大三阳"模式的12.15%及其余10种感染模式所占比例,差异均有统计学意义(P<0.05)。同时HCV的感染率为16.82%,HBV与HCV双重感染率为10.75%;其中感染HCV并HBs Ag阳性感染者所占比例为0.93%,显著低于感染HCV并HBs Ag阴性感染者比例9.82%及仅感染HCV者的比例6.07%,差异有统计学意义(P<0.05)。HBs Ag阳性感染者感染HCV的几率为1.37%,显著低于HBs Ag阴性感染者感染HCV的几率47.62%及未感染HBV者感染HCV的几率53.85%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HBV感染极有可能是致使PHC发生的主要因素,而HBs Ag阳性感染在其中居主导地位,且又以"小三阳"感染模式的PHC患者占多数。同时HCV感染也不容忽视,特别是HBV与HCV的双重感染更应该引起大家的重视。     

丙型肝炎病毒实验室检测技术的研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）是一种主要经血液传播的肝炎病毒,是造成慢性肝炎、肝硬化甚至肝癌的主要病原之一。HCV属于黄病毒属,为单股正链的RNA病毒,基因组长度约9.6kb,含有单个开放阅读框架（ORF）,编码一个由约3010个氨基酸组成的多聚蛋白。到目前为止,丙型肝炎的实验室检测技术主要有抗-HCV检测、HCVRNA核酸扩增检测、HCV核心抗原的检测三种类型。现就HCV实验室检测的研究现状作一综述,为致病机理的研究及抗HCV药物的开发和疫苗的研制等提供理论依据。     

自制稀释液在化学发光定量检测HCG浓度的应用

随着科技的进步,全自动酶免化学发光仪在普通的基层医院得到普及应用,提高了免疫检验的自动化程度及检验结果的准确性。但是在使用全自动酶免化学发光仪检测血清β-HCG浓度时,经常会有样品浓度超出仪器检测范围,需要稀释后检测。大型医院釆用原装稀释液进行自动稀释检测,但在基层医院,由于检测成本的问题,实际工作中用生理盐     

应用ROC曲线评价化学发光法及酶联免疫法对HCV感染的诊断价值

目的 探讨国内五种主流丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)酶联免疫法(ELISA)试剂与进口化学发光法(CLIA)检测性能的可比性及其对HCV感染的诊断价值.方法 应用CLIA及五种ELISA(编号为A、B、C、D、E),同时检测免疫印迹法(RIBA)确认的抗-HCV阳性、阴性血清样本各68例,应用受试者工作特征曲线(ROC)评价其性能指标.结果 CLIA及A、B、C、D、E五种ELISA试剂ROC曲线下面积(AUC)分别为:0.989、0.784、0.945、0.841、0.890、0.883(P ＜0.05),差异有统计学意义;CLIA的敏感性大于五种ELISA试剂(P＜0.05),差异有统计学意义,差异主要在于CLIA 8＞S/CO值≥1标本的符合率较低;几种试剂间特异性无显著性差异(P=0.75).结论 国内五种主流HCV抗体ELISA试剂与进口CLIA对HCV感染均具有较高的诊断价值,利用CHA高敏感性及ELISA的高特异性联合检测抗-HCV,可提高HCV感染的诊断效率.     

CA19-9检测对长光华医全自动化学发光分析系统的性能评价

目前全自动化化学发光检测技术在灵敏度和特异性方面达到了相当高的水平,全自动免疫分析设备也在临床上得到了相当广泛的应用,由于大幅度提高了实验结果的精确度和准确性,因此受到了临床实验室的广泛欢迎[1]。长光华医全自动化学发光检测仪由苏州长光华医生物工程公司生产,拥有15个试剂位,测试速度达180个/h,目前可检测项目有100多项,达到与国外厂家相当的水平,填补了国内全自动化学发光检测系统的空白。本文以此仪器为对象,对其准确度、精密度、回收率、线性以及携带污染率等指标进行了初步测试评价,现将结果报告如下。     

丙型肝炎病毒感染与中枢神经系统损害

全世界已有超过1.7亿人受到丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染.因此,HCV感染已成为全球性公共卫生问题.HCV主要通过输血,使用血液制品,注射,接触污染的血液等途径传播.随着许多国家对血液及血液制品进行HCV筛查,经临床输血和血液制品传播的风险已大大降低,新的传染往往是通过静脉注射毒品和医疗事故.虽然HCV可通过性传播,但效率低.HCV也可通过母婴垂直传播,但传播率较低.HCV是引起慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的主要原因之一.HCV感染还能造成视神经乳头炎、脑炎、强直性脊膜炎和脑膜炎等中枢神经系统(central nervous system,CNS)疾病.与HCV感染相关的神经症状包括疲乏、记忆力减退、认知障碍、注意力不集中及生活质量下降.目前尚不清楚这些异常是精神心理因素造成的,还是一种功能性全身疾病的表现.尽管已有不少有关HCV可侵入CNS的报道[1-3],但尚缺乏HCV直接感染和损伤神经元的证据.本文主要讨论HCV感染造成CNS损伤及其机制的研究进展.     

人促黄体生成素吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立及评价

目的建立基于磁微粒-吖啶酯化学发光系统的人促黄体生成素(LH)全自动定量测定方法。方法根据双抗体夹心法原理,选择一株抗-LH单克隆抗体偶联磁微粒,吖啶酯标记另一株抗-LH单克隆抗体,建立LH化学发光免疫分析方法,并优化了反应体系、反应时间等影响因素,使整个系统达到最佳检测性能。结果本检测方法线性范围为0.25~250IU/L,空白检测限0.01IU/L,不同浓度样本的分析内精密度1.1%~4.4%、分析间精密性1.5%~4.2%,与hCG、FSH、TSH均无明显交叉反应,与贝克曼Access全自动化学发光免疫测定系统回归方程为Y=0.989X+0.214,相关系数r=0.988。结论成功建立了人促黄体生成素的吖啶酯全自动化学发光免疫分析方法,各项指标均满足临床检测的要求,具有一定的临床应用价值。     

HCV跨膜蛋白(P7)重组表达及化学发光法检测HCV感染者血清中抗P7抗体的建立与评价北大核心CSCD

目的:建立化学发光法检测丙型肝炎病毒(HCV)感染者血清抗跨膜蛋白P7(anti-P7)抗体的方法,并进行应用评价。方法:以含有HCV 1b基因型P7核酸序列(Accession No:AJ238800)的质粒PUC-P7为模板,PCR扩增P7基因,构建重组质粒pGEX-KG-P7,P7融合蛋白经原核诱导表达、提取纯化后,间接法包被微孔板、制备化学发光法检测抗P7抗体试剂盒,并对其方法学指标进行评价。结果:质粒pGEX-KG-P7构建正确,经原核诱导表达获得相对分子质量约34 kD的P7融合蛋白,制备的化学发光法检测抗P7抗体试剂盒方法学指标为:精密度试验(批内变异系数2.97%~4.09%,批间变异系数3.75%~5.52%),空白限和检出限分别为1.56、5.99 RLIR,相关系数r=0.9989,分析测量范围(AMR)为1.252~18.774 RLIR,平均回收率为97.8%,类风湿因子等阳性血清标本对本试验无交叉反应,试剂盒15个月内稳定,45例HCV感染者血清抗P7抗体阳性率为20%(9/45)。结论:化学发光法检测HCV感染者血清中抗P7抗体试剂盒符合方法学要求,可用于HCV感染者筛查诊断、病情监测、预后评估、疾病机制和流行病学研究,P7蛋白在HCV感染者体内存在免疫应答现象。     

人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法的初步建立及应用

目的:建立人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法并在临床检测中的应用。方法:使用CY-FRA21-1定量测定试剂盒（化学发光法）检测308例临床血清标本,并与CYFRA21-1电化学发光全自动免疫分析方法进行对比。结果:灵敏度0.04μg/L,线性范围（1.5～100）μg/L,与NSE及CEA无交叉反应,样本中抗凝剂量的柠檬酸钠、肝素、EDTA-Na₂对测定结果没有影响。添加回收率和稀释回收率为90%～110%,分析内和分析间变异系数均<10.0%。该方法正常参考值为（0～3.4）μg/L（95%可信限）。ECLA测定结果与本法相比,临床总符合率为96.65%。结论:该方法灵敏度高、特异性好、稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性,完全可替代进口化学发光试剂用于临床样本的检测。     

糖类抗原50化学发光免疫分析方法的建立及评价

目的 建立以异硫氰酸荧光素(FITC)单抗包被磁微粒、吖啶酯为发光标记物的检测糖类抗原50(CA50)的磁微粒全自动化学发光免疫分析方法.方法 根据双抗体夹心法原理,选择抗-FITC单克隆抗体偶联磁微粒,FITC标记一株抗-CA50单克隆抗体,吖啶酯标记另一株抗CA50单克隆抗体,建立CA50化学发光免疫分析方法,同时对该方法的空白限、检出限、线性范围、准确度、重复性、干扰进行了验证,并与迈瑞全自动化学发光试剂检测结果进行了比对.结果 本方法最终采用两步法的反应模式,空白限为0.03U/mL,检出限为2U/mL,线性范围为4.0～500.0U/mL,样本的回收率为99.39％,高、低两份样本变异系数分别为4.05％和2.16％,与迈瑞全自动化学发光免疫测定系统同时测定131份样本,回归方程为Y=1.0177 X-3.0827,r=0.993.同时发现样本中的荧光素钠(FITC-Na)高于2μg/mL时会对本方法造成干扰.结论 成功建立了糖类抗原50的吖啶酯全自动化学发光免疫分析方法,各项指标均满足临床检测的要求,具有一定的临床应用价值.     

基于光电倍增管的化学发光免疫检测系统的研制

基于光电倍增管(PMT)设计了全自动化学发光免疫检测总体方案,以泌乳素(PRL)作为检测对象,标记酶采用辣根过氧化物酶(HRP),发光体为Pierce的鲁米诺(激发底物),对化学发光免疫检测系统PMT数据进行处理。通过检测5种不同浓度的HRP稀释液的发光数进行标定,后对数据进行线性化处理,得到PRL浓度与发光数的关系。两检测样本PRL分别取阳性范围浓度值(样本A)和阴性范围浓度值(样本B),同时将检测结果与LUMO与Liaison两种化学发光仪的检测结果进行比较。对于样本A,本系统、LUMO和Liaison的检测结果分别为51.724、46.198、43.792 ng/mL;对于样本B,本系统、LUMO和Liaison的检测结果分别为11.702、15.133、8.069 ng/mL。实验结果表明,所设计的全自动化学发光免疫检测系统可以确定被测样本的阴阳性,能够满足免疫分析应用需求。     

雅培全自动化学发光免疫分析仪i2000SR故障维修一例

0 引言 全自动化学发光免疫分析仪是医院检验科常用设备之一,大连大学附属中山医院使用的是美国雅培公司i2000SR全自动化学发光免疫分析仪,可同时检测25个项目,每小时能完成200个测试,具有较高的工作效率及准确性和灵敏度. 化学发光免疫分析(chemilumineseent immunoassay,CLIA)是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物直接标志抗体或抗原的数量,进而对抗体或抗原进行特定量检测的一类免疫分析法.检测技术中检测小分子抗原使用竞争法,检测大分子抗原用夹心法.i2000SR全自动免疫发光分析仪中肝炎检测项目优势明显,在肝炎定量检测方面属于全球金标准测试,其中的HbsAg和HbsAb为全定量检测,HbeAg、HbeAb、HBcAb为半定量检测.i2000SR全自动免疫发光分析仪对甲状腺的检测项目中促甲状腺素(thyroid Stimulating Hormone,TSH)具有最优灵敏度.     

HCV抗体诊断试剂及HCV疫苗的研究现状和展望

丙型肝炎病毒(HCV)感染有潜在的致肝癌和肝硬化的危险。到目前为止,尚未发现令人满意的治疗药物。因此,HCV感染的防治工作更应以预防为主,应用高灵敏性、特异性好的抗体诊断试剂盒筛选献血员和血液制品及HCV疫苗的研制正是预防HCV传播的主要手段。 HCV抗体检测包括对IgG和IgM特异性抗体的检测。HCV-IgG抗体检测试剂盒的研制可分为三个阶段。 1.第一代抗HCV-IgG的抗体检测试剂盒的研制及应用 随着含363个病毒AA残基的融合蛋白-C100-3在酵母细胞内表达成功,Chiron公司首先研     

人血清CA15-3化学发光免疫分析方法的建立及应用

目的：建立人血清CA15-3化学发光免疫分析方法并在临床检测中的应用。方法：使用CA15-3定量测定试剂盒（化学发光法）检测1232例,其中754例正常人及478例病人血清标本,并与CA15-3电化学发光全自动免疫分析方法进行对比。结果：灵敏度0．032KU／L,线性范围1．2～160KU／L,与CA125及CEA无交叉反应,样本中抗凝剂量的柠檬酸钠、肝素、EDTA-Na2对测定结果没有影响。添加回收率和稀释回收率为90％～110％,分析内和分析间变异均〈10．0％。该方法正常参考值为（0～23．08）KU／L（95％可信限）。ECLA测定结果与本法相比,临床总符合率为96．65％。结论：该方法灵敏度高、特异性好、稳定性强、检测范围宽,有良好的准确性和重复性,完全可以替代进口化学发光试剂用于临床样本的检测。     

游离甲状腺素化学发光免疫分析方法的建立

目的 采用二抗-甲状腺素抗体固相两步包被法,使用鲁米诺-双氧水-辣根过氧化物酶化学发光体系作为检测体系,建立测定血清中游离甲状腺素的化学发光免疫分析方法.方法 利用竞争法建立游离甲状腺素的检测体系,分别对该体系进行分析性能评估、2016年度内分泌室间质评,并与进口全自动发光试剂盒检测结果进行一致性检验.结果在4~64pmol/L的校准曲线范围内相关系数0.9995,最低检出限为0.54pmol/L,批内和批间精密度均小于7.0%,稳定性结果良好,不影响检测结果.2016年全国室间质评测定结果均在允许范围内,与进口西门子发光试剂盒有很好的临床符合性,两种试剂盒的样本测值差异不具有统计学意义.结论 本方法利用二抗-甲状腺素抗体固相两步包被法,在节约包被原料的同时改善了精密度且提高了灵敏度,最后通过临床血样的一致性评价,与参比试剂盒具有同等的临床使用价值.