补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞粘附分子VLA-6/CD49f水平影响的研究

目的：探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血（简称慢性再障,ChronicAplasticAnemiaCAA）患者的整合素VLA亚家族粘附分子VLA-6/CD49f表达水平的影响。方法：将45例慢性再障患者随机分为补髓生血颗粒组（试验组）和再障生血片组（对照组）,采用流式细胞术（FCM）检测试验组和对照组慢性再障患者治疗前后骨髓单个核细胞相关整合素VLA亚家族粘附分子VLA-6/CD49f的抗原表达水平并进行比较分析,并与10例正常人进行比较。结果：CAA患者骨髓单个核细胞粘附分子VLA-6/CD49f处于低表达状态,疗后表达水平升高,且补髓生血颗粒对VLA-6/CD49f表达的调整程度优于再障生血片组,且肾阳虚与肾阴虚患者疗后VLA-5/CD49f表达有显著差异。结论：慢性再障患者骨髓单个核细胞粘附分子VLA-6/CD49f表达水平异常,它可能参与了CAA的造血调控,补髓生血颗粒可以通过调节骨髓细胞粘附分子表达水平来改善CAA的骨髓造血功能,是治疗CAA的有效药物。     

补髓生血颗粒对于慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞粘附分子CD11b水平影响的研究

目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(简称慢性再障,Chronic Aplastic Anemia CAA)患者的整合素家族成员之一CD11b表达水平的影响;方法:将65例慢性再障患者随机分为补髓生血颗粒组(试验组)和再障生血片组(对照组),采用流式细胞术(FCM)检测试验组和对照组慢性再障患者治疗前后骨髓单个核细胞相关整合素家族粘附分子CD11b的抗原表达水平并进行比较分析,并与10例正常对照组进行比较;结果:CAA患者骨髓单个核细胞粘附分子CD11b处于低表达状态,治疗后表达水平升高,且补髓生血颗粒对CD11b表达的调整程度优于再障生血片组,疗后CD11b表达阳虚型与阴虚型有显著差异;结论:CAA患者粘附分子CD11b表达异常,可能与再障的发生密切相关.补髓生血颗粒能通过改善再障粘附分子的表达水平来改善CAA造血功能.     

补髓生血颗粒对慢性再障患者骨髓单个核细胞蛋白激酶B表达的影响

目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再障患者(CAA)骨髓单个核细胞中蛋白激酶B表达的影响及其作用机制。方法:采用蛋白质印迹(Western-blot)方法检测CAA患者、正常人骨髓基质细胞PKB表达水平。结果:CAA患者骨髓单个核细胞的PKB表达水平均低于正常组(均P0.05),经补髓生血颗粒治疗后,PKB表达水平有所上升,与治疗前相比具有显著性差异(P0.05)。结论:CAA患者骨髓基质细胞PKB呈低水平表达,它可能参与了CAA的发病机制过程;中药补髓生血颗粒通过调节PKB的表达水平而抑制PKB促凋亡作用,有可能调节骨髓造血信号转导调控,促进骨髓造血功能。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓NF-KB/p65表达的影响

目的 观察补髓生血颗粒对CAA患者骨髓单个核细胞中NF-kB磷酸化表达水平的影响,探讨补髓生血颗粒治疗CAA的作用机制.方法 40例CAA患者给予补髓生血颗粒治疗6个月,采用蛋白质印迹方法( Western-blot)观察CAA患者骨髓单个核细胞中NF-KB/p65的表达水平.结果 治疗前CAA患者骨髓单个核细胞NF-kB/P65表达水平低于正常对照组(P＜0.05),经补髓生血颗粒治疗后,NF-kB/P65表达有所上升,与治疗前相比具有显著性差异(P＜0.05).结论 CAA患者骨髓单个核细胞中的NF-kB/p65呈低水平表达,NF-kB/p65的异常表达可能参与CAA的发病机制过程,从而引起骨髓造血信号转导的异常.补髓生血颗粒可能通过调节NF-kB/p65的表达来改善CAA骨髓造血微环境.     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓AKT磷酸化水平的影响

目的：观察补髓生血颗粒对CAA患者骨髓单个核细胞中AKT磷酸化水平变化,探讨补髓生血颗粒治疗CAA的作用机制。方法：将30例CAA患者予以补髓生血颗粒治疗6个月,另取28例健康志愿者作为正常对照组。采用蛋白质印迹方法（Western-blot）观察CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞中pAKT-Ty308的表达水平。结果：CAA患者治疗前骨髓单个核细胞pAKT-Ty308的表达低于正常对照组（P〈0.05）,经补髓生血颗粒治疗后,pAKT-Ty308的表达有所上升,与治疗前比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：CAA患者骨髓单个核细胞PAKT-Ty308的水平均呈低水平表达,提示pAKT与CAA发病密切相关,补髓生血颗粒可能通过调节PAKT-Ty308的表达来改善CAA骨髓造血微环境。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓NF-κΒ/p65表达的影响

目的：观察补髓生血颗粒对CAA患者骨髓单个核细胞中NF-κΒ磷酸化表达水平的影响,探讨补髓生血颗粒治疗CAA的作用机制。方法：40例CAA患者给予补髓生血颗粒治疗6个月,采用蛋白质印迹方法（Western-blot）观察CAA患者骨髓单个核细胞中NF-κΒ/p65的表达水平。结果：治疗前CAA患者骨髓单个核细胞NF-κΒ/P65表达水平低于正常对照组（P〈0.05）,经补髓生血颗粒治疗后,NF-κΒ/P65表达有所上升,与治疗前相比具有显著性差异（P〈0.05）。结论：CAA患者骨髓单个核细胞中的NF-κΒ/p65呈低水平表达,NF-κΒ/p65的异常表达可能参与CAA的发病机制过程,从而引起骨髓造血信号转导的异常。补髓生血颗粒可能通过调节NF-κΒ/p65的表达来改善CAA骨髓造血微环境。     

补髓生血颗粒对慢性再障患者骨髓单个核细胞MEK表达的影响

目的：探讨补髓生血颗粒对慢性再障患者（CAA）骨髓单个核细胞中丝裂原活化蛋白激酶（MEK）表达的影响及其作用机制。方法：采用蛋白质印迹（Western-blot）方法检测CAA患者、正常人骨髓基质细胞MEK表达水平。结果：CAA患者骨髓单个核细胞的MEK表达水平均低于正常组（P〈0.05）,经补髓生血颗粒治疗后,MEK表达水平有所上升,与治疗前相比具有显著性差异（P〈0.05）。结论：CAA患者骨髓基质细胞MEK呈低水平表达,它有可能参与了CAA的发病机制过程;中药补髓生血颗粒可能是通过调节MEK的表达水平而促进MEK抗凋亡作用,从而影响骨髓造血信号转导调控,促进骨髓造血功能。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓FAK表达及FAK磷酸化水平的影响

目的:观察补髓生血颗粒对CAA患者骨髓单个核细胞中FAK表达及FAK磷酸化水平变化,探讨补髓生血颗粒治疗CAA的作用机制。方法:将60例CAA患者予以补髓生血颗粒治疗6个月,另取20例健康志愿者作为正常对照组。采用蛋白质印迹方法(Western-blot)观察CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞中FAK及FAK pY397的表达水平。结果:CAA患者治疗前骨髓单个核细胞FAK及FAKpY397的表达均低于正常对照组(P均0.05),经补髓生血颗粒治疗后,FAK及FAK pY397的表达均所上升,与治疗前比较均具有显著性差异(P均0.05)。结论:CAA患者骨髓单个核细胞FAK及FAKpY397的水平均呈低水平表达,提示FAK与CAA发病密切相关,补髓生血颗粒可能通过调节FAK及FAK pY397的表达来改善CAA骨髓造血微环境。     

补肾生血法治疗慢性再生障碍性贫血的疗效及对CD11a细胞粘附分子的影响

目的观察以补肾生血药物为主的补髓生血颗粒对慢性再障(CAA)患者的临床疗效,并探讨对外周血单个核细胞中整合素β2亚群中CD11a粘附分子的影响,研究以补肾生血药物为主的补髓生血颗粒对CD11a粘附分子的干预作用和机制。方法运用流式细胞术FCM法测定CAA患者外周血单个核细胞粘附分子CD11a表达水平并与正常组进行分析比较。结果慢性再障患者经补髓生血颗粒治疗两个疗程(6个月)后,其临床有效率达79.25%,治疗后中医症候积分相较于治疗前明显降低,差异具有统计学意义(P0.05);治疗前CAA患者骨髓单个核细胞粘附分子CD11a表达水平均低于正常组(P0.05),治疗后CD11a表达水平相较于治疗前有所提高,与治疗前相比均具有显著性差异(P0.05),但与正常组相比较仍呈低表达水平。结论补髓生血颗粒治疗CAA可以提高患者的临床疗效。CAA患者外周血单个核细胞上的整合素β2亚群中CD11a粘附分子表达低于常人,提示CAA发病机制可能与CD11a细胞粘附分子表达异常相关,补髓生血颗粒通过干预CD11a细胞粘附分子的表达水平,来调节慢髓劳病患者骨髓造血微环境损伤的发病机制,增强骨髓的造血能力。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞c-kit mRNA及CD117影响的研究

目的:探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者骨髓单个核细胞c-kitm RNA及CD117表达的影响。方法:分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及流式细胞技术检测CAA病人治疗前后骨髓单个核细胞c-kitm RNA及CD117水平的变化。结果:CAA患者骨髓c-kitm RNA及其CD117表达水平高于正常对照组,治疗后二者表达水平均有不同程度下降,并且补髓生血颗粒对二者表达水平的下调程度优于再障生血片对照组(P<0.05)。结论:CAA患者骨髓c-kitm RNA及CD117的表达存在异常;补髓生血颗粒剂可能通过调节骨髓c-kitm RNA及CD117的表达来改善CAA的骨髓造血功能,促进骨髓造血功能恢复。     

补肾活血方药对CAA患者骨髓单个核细胞C-met SF基因表达的影响

目的:探讨补肾活血方药对慢性再生障碍性贫血(CAA)患者骨髓造血细胞C-met SF基因表达的影响。方法:60例CAA病人随机分为治疗组和对照组,治疗组给予补肾活血中药汤剂,每日1剂,分2次口服;对照组给予再障生血片,5片,每日3次,口服,疗程为3个月,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞C-met SFmRNA基因含量的变化。结果:CAA患者骨髓单个核细胞C-met SF mRNA表达水平高于正常对照组,治疗后C-met SF mRNA表达水平有不同程度下降,并且补肾活血方药对C-met SF表达水平的下调程度优于再障生血片组(P<0.05)。结论:CAA患者骨髓C-met SF的基因表达存在异常;补肾活血方药可能通过调节骨髓C-met SF基因的表达而改善CAA的骨髓造血功能,促进骨髓造血功能恢复。     

补肾生血法对慢性再生障碍性贫血患者骨髓ERK信号通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨补肾生血法对CAA患者骨髓细胞外调节信号通路相关蛋白的表达变化及其意义。方法:将60例CAA患者按照中医辨证分为肾阴虚型33例,肾阳虚型27例,均予以补肾生血之中药补髓生血颗粒治疗,另取20例健康志愿者作为正常对照组。采用蛋白质印迹方法(Western-blot)观察CAA患者治疗前后骨髓单个核细胞ERK1、ERK2的蛋白水平表达。结果:CAA患者治疗前骨髓单个核细胞ERK1、ERK2均低于正常对照组(P均0.05),经补肾中药治疗后,ERK1、ERK2表达均有所上升(P均0.05);治疗后肾阳虚型的ERK1、ERK2上升程度均较肾阴虚型明显(P均0.05)。结论:CAA患者骨髓单个核细胞ERK1、ERK2均表达异常,提示ERK信号通路异常与CAA发病相关,补肾中药可能通过调节ERK信号通路相关蛋白ERK1、ERK2的表达来改善CAA骨髓造血功能,且存在中医证型的疗效差异。     

Busuishengxue ranules mediate their effects upon non-severe aplastic anemia via mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase pathway

Objective

To observe the clinical efficacy of Busuishengxue granules on non-severe aplastic anemia (NSAA) and investigate its effect on the mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase (MAPK/ERK) pathway.

Methods

Sixty NSAA patients were divided equally into two groups. Subjects in the experimental group were treated with Busuishengxue granules, and the control group with Zaizaoshengxue tablets. The treatment course was 6 months and curative efficacy was compared between the two groups as well as with 10 healthy individuals. Flow cytometry (FCM) was used to detect the intracellular concentration of Ca^{2 +} ([Ca^{2 +}]_i). Western blotting was employed to detect the expression of enzymes in the MAPK/ERK pathway.

Results

The efficacy of Busuishengxue granules was significantly better than that of Zaizaoshengxue tablets (P<0.05). Before treatment, expression of JNK, phospho-ERK 1/2 and p-JNK was higher, and [Ca^{2 +}]_i higher, than that of the control group (P< 0.05). After treatment with Busuishengxue granules, expression of all enzymes related to signal transduction pathways in the blood cells of NSSA patients were altered to different degrees.

Conclusion

Busuishengxue granules had a better effect with regard to improving symptom scores, increasing the number of blood leukocytes, and increasing hemoglobin levels than Zaizaoshengxue tablets, and they differed slightly in terms of increasing the number of platelets.     

补肾活髓颗粒对慢性再生障碍性贫血患者mTOR信号通路的影响

目的 :观察补肾活髓颗粒治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)的临床疗效,并从调控m TOR信号通路角度探讨其作用机制。方法:70例患者按随机数字表法分成两组,试验组在常规西药治疗的基础上加用口服补肾活髓颗粒治疗,对照组采用西药常规治疗,并设30例健康人为正常组。观察治疗前后临床症状、临床疗效及不良反应,并用RT-PCR方法检测CAA患者骨髓单个核细胞m TOR信号通路中的m TOR m RNA表达。结果:试验组总有效率83.33%,优于对照组的64.51%(P0.05)。两组治疗后血红蛋白(HGB)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)均有明显上升(P0.01)。CAA患者骨髓中m TOR表达水平低于正常水平(P0.01),治疗后两组m TOR m RNA表达水平均有所提高,但试验组高于对照组(P0.01)。结论:补肾活髓颗粒可显著改善CAA患者临床症状,提高临床疗效,且安全、无不良反应。补肾活髓颗粒可显著提高HGB、WBC、PLT的数量。补肾活髓颗粒通过激活CAA患者m TOR信号通路活性增加骨髓造血细胞的增殖,提高骨髓造血细胞的数量,并改善恢复骨髓造血功能。     

补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓基质细胞碱性成纤维细胞生长因子及其受体的影响

目的观察补髓生血颗粒对治疗慢性再生障碍性贫血(chronic aplastic anemia,CAA)患者的临床疗效及骨髓基质细胞相关细胞因子的影响。方法将124例CAA患者按随机数字表法分为两组,试验组(61例)使用补髓生血颗粒治疗,对照组(63例)使用再造生血片治疗,疗程均为6个月,并设立10名健康人作为正常对照组。观察患者治疗前后症状积分、疗效判定与外周血象的变化,采用RT-PCR法检测CAA患者治疗前后骨髓基质细胞中碱性成纤维细胞生长因子(b-fibroblast growth factors,bFGF)及碱性成纤维细胞生长因子受体(b-fibroblast growth factors receptor,bFGFR)信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达变化。结果试验组总有效率(75.0%,45/61)明显优于对照组(58.7%,37/63),其症状积分及外周血象明显改善,也明显优于对照组(P<0.05)。CAA患者骨髓基质细胞bFGF及bFGFRmRNA表达水平较正常对照组明显降低(P<0.05),治疗后两组bFGF与bFGFRmRNA表达水平均有所提高(P<0.05,P<0.01),且试验组优于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论补髓生血颗粒具有较好的临床疗效,能改善CAA患者症状积分以及外周血象,提高临床疗效,且对细胞因子bFGF与bFGFRmRNA表达水平有调节作用,通过调控CAA骨髓基质细胞的增殖和定向分化以及促进骨髓新生血管的形成改善了造血微环境,促进骨髓造血功能的恢复。     

补髓生血颗粒对慢性再障患者骨髓单个核细胞内Ca~(2+)水平及不同血液疾病间差别的影响

目的:通过观察慢性再障患者骨髓单个核细胞内钙离子浓度的变化,探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血(CAA)的可能治疗机制。观察不同血液疾病骨BMMC内Ca2+浓度的变化,以期为血液疾病的诊断和治疗提供思路。方法:提取CAA患者BMMC,使用fluo3 AM进行荧光染色,采用流式细胞仪检测细胞内Ca2+浓度。同时提取慢性再障、骨髓增生异常综合征、特发性血小板减少性紫癜、缺铁性贫血患者及正常志愿者BMMC,进行细胞内Ca2+浓度的检测与对比。结果:CAA患者BMMC内Ca2+浓度明显高于正常组。经补髓生血颗粒治疗后,各组患者细胞内Ca2+浓度均出现下降,治疗组优于对照组,但仍高于正常组。MDS、CAA患者Ca2+浓度高于其他组;ITP、IDA组与正常组无明显差异。结论:CAA患者BMMC细胞内Ca2+浓度上升,是CAA患者疾病情况的重要标志。补髓生血颗粒能调节BMMC内Ca2+的释放,可能是其治疗CAA的作用机制之一。MDS、CAA、CITP、IDA不同血液疾病之间钙离子浓度存在明显差异,可能与疾病恶性程度及发病机理相关。