副猪嗜血杆菌外膜蛋白pilA基因的克隆与表达（摘要）

[目的]克隆和表达副猪嗜血杆菌外膜蛋白pilA基因。[方法]对已发表的HPS的pilA序列进行序列分析,合成引物,并以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS的pilA编码基因,获得目的基因片段;构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达至大肠杆菌BI21（DE3）中,进行SDS-PAGE与Westernblot检测。[结果]表达的重组蛋白分子质量与预期的43kD一致。[结论]为制备亚单位疫苗和诊断试剂奠定了基础。     

副猪嗜血杆菌hhdA基因的鉴定和分析

副猪嗜血杆菌可引起猪的格氏病,其不同毒力菌株分子水平上的差异还不清楚.从广东省不同地区猪场送检病猪中分离到9株细菌(H1～H9),并对其16SrRNA基因进行鉴定和分析.经形态观察、生化特性鉴定和PCR鉴定,所分离的9株细菌为阳性副猪嗜血杆菌,具有卫星现象和不溶血特征.用hhdA基因引物从分离菌株中扩增到了特异性片段,...     

副猪嗜血杆菌hhdA克隆、抗原表位预测和表达

根据Gen Bank中的副猪嗜血杆菌hhd A的基因序列,设计并合成l对特异性引物,对从江西分离的HPS的hhd A基因进行扩增、克隆、测序、生物信息学分析和原核表达。测序结果表明,扩增的目的基因大小为1 797bp,共编码氨基酸599个氨基酸。与Gen Bank上公布的ZJ0906株(CP005384.1)中对应的核苷酸序列同源性为99.8%,氨基酸同源性99.6%。生物信息学分析表明,HPS hhd A蛋白是一种混合型结构蛋白,含有α-螺旋、β-折叠、β转角和无规则卷曲;综合柔性区域、亲水性位点、抗原指数和表面可能位点预测了hhd A蛋白可能的B细胞抗原表位的优势表位。将目的基因转入原核表达载体p ET-32a(+)构建重组原核表达质粒p ET-32a(+)-hhd A,将重组质粒转化到BL21(DE3)中,进行IPTG诱导表达,经过SDS-PAGE电泳结果显示表达的融合蛋白约80 k D。为进一步研究HPS hhd A生物学功能及抗体制备和开发hhd A基因工程产品奠定了基础。     

副猪嗜血杆菌oppA基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立

采用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌(Hps)的寡肽结合蛋白(Opp A)基因,序列测定结果表明,扩增片段全长1654 bp.将扩增片段插入表达载体p GEX-6P-1中,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组融合蛋白大小约为87 ku,以纯化的重组蛋白Opp A作为抗原,建立Hps抗体的间接ELISA检测方法.通过试验确定最佳的反应条件为:抗原包被浓度为1.0μg·孔-1,于37℃包被1 h,待检血清的稀释度为1∶50,阳性判断标准(D450 nm)大于0.643.特异性和重复性试验结果表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和稳定性,可用于Hps抗体的检测.     

副猪嗜血杆菌OMP5基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立

 【目的】利用表达纯化的副猪嗜血杆菌（Haemophilus Parasuis,HPS）外膜蛋白P5（outer-membrane protein P5,OMP5）,建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA 检测方法。【方法】克隆扩增HPS OMP5基因,并将OMP5基因与原核表达载体 pET-32a(+)连接,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入受体菌BL21（DE3）,经IPTG诱导表达。亲和层析法纯化蛋白,尿素梯度透析复性,Western blot鉴定表达产物。将超声破碎抗原和复性蛋白分别按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其它条件进行优化,最终建立检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。【结果】利用克隆表达的HPS OMP5蛋白做抗原,通过方阵滴定法确定蛋白最佳包被浓度为 1:400,血清的最佳稀释度为1:160。用建立的间接ELISA 方法检测317份未进行HPS免疫的健康猪血清,结果检出72份阳性,检出率为22.71%,与广东地区发病猪中的HPS分离率24%接近。同时,用该方法与用超声破碎抗原建立的ELISA方法同时检测了78份血清样品,结果,该法检出27份阳性,检出率为34.62%,后者则检出31份阳性,检出率为39.74%,二者符合率为71.79%。【结论】本研究利用重组表达的OMP5蛋白作为抗原建立的检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA 方法,特异性好、重复性好,检出率与HPS临床分离率接近,可用于副猪嗜血杆菌的临床检测、流行病学调查和免疫监控。     

副猪嗜血杆菌病的诊治

副猪嗜血杆菌病是一种由副猪嗜血杆菌引起猪的接触性传染病,又称纤维性浆膜炎和关节炎.副猪嗜血杆菌病的发病率每年呈明显的上升趋势,对猪场造成严重的经济损失.本文介绍了一例保育猪副猪嗜血杆菌病的发病情况、临床剖检、实验室诊断、治疗与防控,以期为副猪嗜血杆菌病的临床诊断与防治提供参考.     

副猪嗜血杆菌病的防治

副猪嗜血杆菌病,也作猪副嗜血杆菌病。副猪嗜血杆菌病曾一度被认为是由应激所引起的。     

副猪嗜血杆菌D15蛋白的原核表达及免疫原性分析

为了对副猪嗜血杆菌D15蛋白进行原核表达,本试验通过PCR方法扩增D15基因,之后将其克隆入pET-28a(+)载体构建重组质粒,再将重组质粒转化BL21 (DE3)感受态中,使用0.5mM 部PTG经20℃诱导表达了52Ku的D15重组蛋白.经Western blot试验证明D15重组蛋白具有较高的免疫原性,免疫4周龄昆明小鼠制备免疫血清,ELISA试验表明制备的血清效价在1∶20000以上,表明D15蛋白具有良好的免疫原性.     

猪副猪嗜血杆菌病的诊治

副猪嗜血杆菌是引起猪多发性浆膜炎和关节炎的病原体,近几年来,该病已成为影响养猪生产的一种重要疫病。介绍了猪副猪嗜血杆菌病的临床症状、剖检病变、诊断与防治方法,并对如何防控猪副猪嗜血杆菌病提出了建议。     

副猪嗜血杆菌的诊断与防治

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌引起的一种传染病,多危害断奶仔猪,该病以多发性浆膜炎、关节炎及高死亡率为特征,给养猪业带来了巨大经济损失。文章综述了副猪嗜血杆菌的诊断与防治。     

副猪嗜血杆菌lpxM基因缺失株构建及生物学特性分析

【目的】研究副猪嗜血杆菌脂寡糖合成相关基因lpxM对其生长、生物被膜形成能力、抗50%猪血清杀菌能力、对巨噬细胞毒力和抗生素敏感性部分生物特性的影响,为揭示HPS致病机制,lpxM基因缺失疫苗的构建奠定理论基础,为猪场防治HPS进行药物选择时提供依据。【方法】以高致病性血清5型HPS地方分离株H45为研究对象,自杀性质粒PK18mobsacB为载体,通过自然转化法将构建好的重组质粒转进H45,使其在抗生素的压力下发生同源重组,最终经过抗生素筛选并通过PCR和测序验证得到lpxM基因缺失株H45-△lpxM,比较两者之间部分生物学特性的差异。测定两者的OD₆₀₀-t关系曲线比较生长情况;用结晶紫染色法比较两者在培养24h后生物被膜形成的能力;测定两者在50%猪血清中存活率,比较两者的抗血清补体杀菌能力;将两者同时刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞,作用时间为6、12和24h,检测细胞培养上清液中LDH的释放量,比较两者对巨噬细胞毒力影响;利用K-B纸片扩散法研究两者对氨苄西林等临床上常用13种抗生素和多粘菌素B抗生素敏感性,通过测定抑菌圈直径来并参照耐药标准判...     

副猪嗜血杆菌病研究进展

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, HPS）感染引起的猪多发性纤维素性浆膜炎、肺炎、关节炎、脑膜炎等全身性炎症。HPS 属于非运动、多形态、有荚膜的革兰氏阴性小杆菌,是猪上呼吸道的条件致病菌。该菌血清型众多,各菌株间毒力差距较大,毒力菌株能感染任何日龄的猪,引起副猪嗜血杆菌病。近年来该病在我国广泛流行,且与多种病毒与细菌混合感染严重,导致猪群发病率和死亡率上升,给我国造成巨大的经济损失,严重影响我国生猪产业的健康发展。介绍了HPS 的病原学特性、流行病学、致病机制与毒力因子,综述了副猪嗜血杆菌病的实验室诊断方法、灭活疫苗、亚单位疫苗和菌影疫苗的研究进展,以期为该病的防控提供参考。     

复合PCR鉴定巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的方法

在已经建立的多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件和引物的筛选,成功地建立了PM、HIS复合PCR诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增多杀性巴氏杆菌的457 bp和副猪嗜血杆菌的1 090 bp的特异性片段.检测灵敏度分别达7.2 Pg DNA/1 040 CFU和16.0 Pg DNA/2 300CFU,用所建方法检测临床分离的23株可疑菌株和本实验室人工感染猪分离菌,结果显示,23株可疑株有2株检出多杀性巴氏杆菌特异性条带,没有检出副猪嗜血杆菌特异性条带;人工感染分离菌株均扩增出副猪嗜血杆菌特异性条带.表明该方法能够对临床上这2种疾病进行鉴别诊断.     

一例副猪嗜血杆菌病的诊治

针对一例以呼吸道症状和多发性关节炎为主要特征的慢性传染病,依据病史、临床症状、病理解剖和细菌学检查,诊断为副猪嗜血杆菌所致,并提出相应的防治方案,疫情得到控制。     

湖北省部分地区猪场副猪嗜血杆菌病的血清学调查

为了明确湖北省部分地区猪场的副猪嗜血杆菌感染率,采用副猪嗜血杆菌间接血凝对湖北3个不同地区猪场的450份血清样品进行了血清学调查,结果平均阳性率为21.7%,其范围为0～58.0%.表明该地区猪场有副猪嗜血杆菌不同程度的感染.