回转器模拟失重对人胃黏膜HFE-145细胞形态和生物学特征的影响

目的探讨模拟失重对人胃黏膜上皮HFE-145细胞形态、增殖、周期和凋亡的影响.方法采用回转器模拟失重,用图像分析系统软件分析HE染色后人胃黏膜上皮HFE-145细胞形态的改变,用免疫组化法观察增殖细胞核抗原（PCNA）表达的变化,用流式细胞仪测定细胞周期,并用TUNEL法检测细胞凋亡.结果回转组HFE-145细胞在模拟失重12 h时的面积较对照组增大（P＜0.01）,其余时间段细胞的面积与对照组无明显差异;其长短径之比在各时间段与对照组均无明显差异.与正常对照组相比,回转组HFE-145细胞24 h、36 h、48 h及72 h的PCNA抗体阳性细胞的比率无明显差异,12 h回转组PCNA抗体阳性细胞比率明显减少（P＜0.05）.24 h、36 h、48 h和72 h回转组HFE-145细胞的细胞周期分布与对照组相比无明显差异,12 h回转组G0＋G1期细胞比例较对照组明显增多（P＜0.05）,S＋G2＋M期细胞之和较对照组显著减少（P＜0.05）.24 h、36h、48 h和72 h回转组HFE-145细胞凋亡的比例与对照组相比无明显差异,12 h回转组细胞凋亡比例较对照组明显增多（P＜0.05）.结论回转器模拟失重使胃黏膜上皮HFE-145细胞在12 h时形态发生了变化,出现细胞周期阻滞、增殖抑制和凋亡增加.     

shRNA抑制GC-C基因表达对人胃癌SGC-7901细胞生物学功能的影响

目的 研究靶向鸟苷酸环化酶C(GC-C)的短发夹RNA(shRNA)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡和细胞周期等生物学功能的影响.方法 构建针对人GC-C基因的shRNA真核表达载体,将其转染人人胃癌SGC-7901细胞,采用半定量RT-PCR和Westem blotting法检测细胞中GC-C在mRNA和蛋白水平的变化.以CCK-8法、流式细胞术和原位末端标记法检测转染GC-CshRNA真核表达载体的SGC-7901细胞增殖、凋亡及细胞周期等生物学指标的变化.结果 经DNA测序鉴定,所得到的表达载体插入片段序列与GenBank中的序列一致.shRNA-GC-C真核表达载体转染能有效抑制GC-C基因的表达,以shRNA-GC-CⅢ序列的抑制效果最佳.转染GC-C shRNA真核表达载体后SGC-7901细胞的增殖能力受到抑制(P<0.05);细胞形态发生改变,细胞体积缩小,核固缩,染色质浓缩聚集于核膜;流式细胞术检测显示G7峰前出现亚二倍体峰,转染48、72h后凋亡率分别为5.47%和5.63%(P<0.05).结论 靶向GC-C基因的shRNA可有效抑制人胃癌SGC-7901细胞生长,并促进细胞凋亡,该作用与下调靶基因GC-C的表达有关;GC-C可能是胃癌治疗的一个潜在靶点.     

端粒植入对胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响

目的研究外源端粒片段植入对胃癌细胞生物学行为的影响，初步探讨端粒影响细胞生物学活性的作用机制。方法大规模制备含有端粒片段的质粒pSXneo-1．6-T2AG3，采用LipofectAMIN^TM2000介导的转染方式，将质粒转染胃癌细胞SGC-7901，检测细胞周期、细胞形态、细胞生长曲线和细胞周期相关基因表达的改变。结果端粒片段能够成功导入SGC-7901细胞，获得稳定的细胞株。端粒片段植入后细胞生长变慢，异型性减少，S期细胞减少，G0／G1和G2M期细胞比例增加，增殖指数减小，P21mRNA表达明显高于SGC-7901细胞（P〈0．05），caspase-3 mRNA在各组细胞的表达无显著差异（P〉0．05）。结论携带了1600bp端粒TTAGGG重复序列的真核表达载体pSXneo-1．6-T2AG3能够稳定转染至人胃癌SGC-7901细胞中，使细胞增殖减慢，P21 mRNA表达上调，但对caspase-3 mRNA表达无明显影响。     

模拟失重对MG-63细胞形态、增殖及周期的影响

目的 探讨模拟失重对人骨肉瘤成骨样细胞(MG-63)细胞面积、增殖、周期的影响. 方法 采用回转器模拟失重,用图像处理分析软件( Image J )测量分析模拟失重后细胞面积的改变,用细胞计数法测定细胞的生长曲线,用流式细胞仪测定细胞周期. 结果 回转器模拟失重后,回转组MG-63细胞24 h、36 h和48 h时间段的细胞面积较对照组缩小(P《0.05),回转组24 h、36 h、48 h 3个时间段与12 h时间段比较细胞面积缩小(P《0.05),而对照组各时间段之间无明显差异.细胞生长曲线显示模拟失重后细胞增殖明显受抑制.12 h、36 h、48 h回转组MG-63细胞的细胞周期与对照组相比无明显差异,24 h回转后G0 G1期细胞显著减少 (P《0.05),S期细胞则显著增多 (P《0.05). 结论 回转器模拟失重使MG-63细胞在24 h、36 h和48 h细胞面积缩小,12 h、24 h、36 h和48 h增殖生长受到抑制,24 h时出现细胞周期阻滞.     

人胃腺癌SGC-7901细胞与125I-叶酸体外结合特性研究

目的　探讨人胃低分化腺癌SGC 790 1细胞与1 2 5I 叶酸体外结合特性及其细胞表面存在高密度、高亲和力叶酸受体的可能性。方法　采用放射配基受体结合分析法 ,观察SGC 790 1细胞和1 2 5I 叶酸结合与时间的关系、特异结合位点及亲和程度、不同竞争剂对SGC 790 1细胞结合1 2 5I 叶酸的影响及SGC 790 1细胞内化1 2 5I 叶酸的程度。结果　SGC 790 1细胞与1 2 5I 叶酸结合具有特异性、高亲和性、饱和性、竞争性及温度依赖性 ,其最大叶酸特异结合位点Bmax为 14 3 2 6fmol 10 6 细胞 ,平衡解离常数Kd 为 2 86× 10 - 1 0 mol L ,1 2 5I 叶酸可通过叶酸受体途径内化入SGC 790 1细胞。结论　SGC 790 1细胞表面具有高密度和高亲和力的叶酸受体及可供介导叶酸靶向诊断和治疗的靶点。     

回转器模拟失重对大鼠心肌细胞H9c2形态、骨架和增殖能力的影响

目的 探讨模拟失重对大鼠心肌细胞系-H9c2细胞的细胞形态、细胞骨架和增殖能力的影响.方法 采用双向多样本回转器(2D-RWVs)模拟失重,在30 r/min转速下分别培养2,4,6和8d,用图像处理分析软件(Image J)测量分析模拟失重后细胞面积的改变,激光共聚焦荧光显微镜观察细胞骨架的变化,采用细胞计数法测量细...     

模拟失重对胃粘膜上皮细胞增殖和周期的影响

目的 探讨模拟失重对胃粘膜上皮HFE-145细胞增殖和周期的影响.方法 采用回转器模拟失重,用免疫组化法观察HFE-145细胞PCNA表达的变化,用流式细胞仪测定细胞周期.结果 回转器模拟失重后,与正常对照组相比,回转组HFE-145细胞24、36、48及72 h的PCNA抗体阳性细胞比率无明显差异,12 h回转组阳性细胞比率明显减少（P〈0.05）.24、36、48、72 h回转组HFE-145细胞的细胞周期分布与对照组无明显差异,12 h回转组G0＋G1期细胞比例明显增多（P〈0.05）,S＋G2＋M期细胞之和显著减少（P〈0.05）.结论 回转器模拟失重使胃粘膜上皮HFE-145细胞在12 h时出现了细胞周期阻滞和增殖抑制.     

模拟失重对人牙周膜成纤维细胞生物学性能的影响

目的 观察三维回转模拟失重对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hP-DLFs)形态和功能的影响.方法 回转组hPDLF细胞运用三维回转器(TDC)分别培养48 h,72 h和96 h,对照组常规培养.利用HE染色、细胞计数法、MTT活性检测、流式细胞术、H...     

回转模拟失重对人脐静脉内皮细胞LC3、p62、p53和磷酸化p70S6K表达的影响

目的探讨人脐静脉内皮细胞(HUVECs)在回转模拟失重条件下微管相关蛋白轻链3(LC3)、p62、自噬相关分子p53和反映mTOR活性的磷酸化p70S6K(Thr389)的表达变化。方法体外培养HUVECs,随机分为回转72 h组和静止对照组,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞p53的mRNA水平的变化,Western blotting检测各组细胞LC3、p62、p53和磷酸化p70S6K的蛋白表达变化。结果与静止对照组相比,回转72 h可使HUVECs LC3-II/LC3-I蛋白表达显著升高(P0.05),p62蛋白表达显著降低(P0.05),p53的mRNA表达和蛋白表达则显著降低(P0.05),反映mTOR蛋白活性的磷酸化p70S6K表达显著低于对照组(P0.05)。结论回转模拟失重72 h可促进静脉内皮细胞中LC3-I向LC3-II转换,p62蛋白降解增多,自噬水平增高,p53表达降低和mTOR活性降低,可能在模拟失重后静脉内皮细胞自噬增强调节中起一定作用。     

模拟失重对NIH3T3细胞纺锤体结构和细胞周期的影响

目的探讨模拟失重对成纤维细胞纺锤体结构和细胞周期的影响。方法采用双向多样本回转器(2D-RWVs)在30r/min转速下分别培养24、28和72h,模拟失重效应,以NIH3T3作为成纤维细胞模型,激光共聚焦显微镜研究细胞骨架系统的变化,并计算纺锤体结构异常比率。利用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果模拟失重对NIH3T3细胞微丝在3个时间点的影响不明显,微管系统在48h和72h产生解聚,纺锤体异常率在48h、72h均有显著性增高(P0.01)。回转24、48和72h时S期细胞显著增加,而G2/M期细胞却明显减少。结论 NIH3T3细胞在模拟失重环境中造成微管系统损伤,处于分裂相的细胞纺锤体异常率显著增高,细胞周期阻滞在S期。     

胃癌的X线形态学与增殖细胞核抗原表达相关性研究

目的 :研究增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)与胃癌临床病理因素及X线钡剂造影表现的关系和意义。方法 :经低张气钡上消化道钡剂造影检查 ,确诊胃癌患者 35例 ,术后新鲜标本沿大弯 (或小弯 )剖开 ,摄取大体标本照片 ,再摄取标本涂钡照片 ;用免疫组化SP染色对 35例胃癌手术标本进行定量检测 ,观察PCNA与胃癌临床病理因素及X线钡剂造影表现的关系和意义。结果 :PCNA在胃癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁及正常胃组织 (P <0 0 1) ,PCNA指数在高、中分化胃癌中的表达低于低分化胃癌 (P <0 .0 1) ,在淋巴结转移及浸润深度方面无统计学意义。观察胃癌标本涂钡照片 2 9例 ,分析癌肿周围粘膜破坏情况 ,在高、中分化胃癌中 ,癌肿组织与周围正常组织交界处粘膜皱襞中断截然的为 4 2 .86 % ,而在低分化胃癌中 ,80 %的癌肿与周围正常组织交界处粘膜皱襞中断截然 ,但经统计学处理P=0 .0 6 ,无统计学意义 ;在胃癌的大体分型、淋巴结转移及浸润深度方面 ,与粘膜分界也无统计学意义。结论 :检测胃癌组织中PCNA的表达有助于进一步了解肿瘤的生物学特性 ,PCNA可作为评价胃癌预后的指标 ;胃癌X线形态学与PCNA表达无明显的相关性     

白杨黄素影响两种胃癌细胞系增殖与凋亡的研究

 目的 研究白杨黄素对两种胃癌细胞系SGC-7901和MKN-45是否具有抑制作用的分子生物学机制.方法 通过MTT法检测白杨黄素对SGC-7901和MKN-45细胞的增殖抑制作用,流式细胞术测定经白杨黄素处理后两种细胞的细胞周期,Westen-blot测定凋亡相关因子Caspase-3、Survivin和Bcl-2的表达水平.结果 白杨黄素对SGC-7901和MKN-45细胞具有增殖抑制作用,呈时间浓度依赖性;能够将细胞周期阻滞于Sub G1期;能上调Caspase-3,下调Survivin和Bcl-2的基因表达.结论 白杨黄素能够诱导SGC-7901和MKN-45细胞的凋亡并有效地抑制其增殖.其机制可能与干扰细胞周期及激活Caspase-3,抑制Survivin和Bcl-2有关.     

脑胶质瘤SHG-44细胞株照射后子代辐射敏感性

目的 探讨脑胶质瘤SHG-44细胞株照射子代生长特性及辐射敏感性变化。方法 培养人脑胶质瘤SHG-44细胞株照射后的存活子代细胞,测定其群体倍增时间,并进行集落形成实验和流式细胞仪检测,分析其辐射敏感性和细胞周期变化。结果 SHG-44细胞群体倍增时间为(22.78±2.61) h,SHG-44细胞经6 MV X射线10 Gy照射后存活子代SHG-44.10细胞群体倍增时间为(30.46±2.73) h (F=7.878,P<0.05)。SHG-44细胞和SHG-44.10细胞再次2 Gy照射后的存活分数分别为70.8%、80.6%。与SHG-44细胞相比,SHG-44-10细胞在G2/M期比例减少,S期比例增多。结论 SHG-44细胞照射后存活子代细胞增殖延缓,辐射敏感性下降。     

模拟失重对大鼠承重骨骨髓基质细胞数及体外成骨能力的影响

目的 研究模拟失重条件对大鼠后肢承重骨成骨细胞数及体外成骨能力的影响。方法 选用20只SD大鼠，随机配对分为鼠尾悬吊组和对照组，每组10只，鼠尾悬吊28d。将股骨骨髓基质细胞进行原代和传代细胞培养，细胞计数法和噻唑蓝法绘制生长曲线，进行碱性磷酸酶(ALP)活性及体外矿化小结形成量的检测。结果 悬吊组培养系的股骨基质细胞数明显减少，约是对照组细胞数的50％。悬吊组和对照组细胞生长曲线和倍增时间相似。原代培养中悬吊组ALP活性和小结形成量同对照组相比较显著下降；传代培养中细胞接种密度相同，悬吊组ALP活性和小结形成数较对照组明显降低。结论 去负荷对骨髓基质细胞数有抑制作用。骨髓成骨祖细胞减少，导致分化的成骨细胞数减少，成骨能力减弱。     

肿瘤坏死因子对胃癌细胞的作用及机理研究

 为探讨肿瘤坏死因子(TNF)对胃癌细胞的作用及其机理,运用细胞克隆抑制实验、细胞毒性实验、<'3>H-TdR掺入实验、流式细胞术及电镜技术,观察了TNF对胃癌细胞的作用及特点,同时观察TNF与化疗药物联合运用的抗肿瘤作用特点.结果显示:TNF在低浓度下即能抑制胃癌细胞克隆形成,浓度大于3×10<'4>U/ml时,细胞毒性作用明显,且对胃癌细胞DNA合成有抑制作用,均呈浓度依赖性.透射电镜超微结构观察发现TNF促使胃癌细胞坏死、溶解.流式细胞术显示TNF能抑制胃癌细胞增殖,阻止其由G<,2>M期进入G<,0>/G<,1>期.TNF与化疗药物合用,细胞毒作用成倍提高.提示:TNF能抑制胃癌细胞克隆形成;能抑制胃癌细胞DNA合成;具有细胞毒作用;能阻止其由G<,2>M期进入G<,0>/G<,1>期;促使胃癌细胞坏死而实现其抗肿瘤作用.与化疗药合用有协同作用.     

89Sr对乳腺癌MCF-7细胞周期及基因表达的影响

目的探讨不同放射性浓度的^89Sr对MCF-7细胞周期的影响及其可能机制。方法用不同放射性浓度的^89Sr在体外不同时间培养人高转移性乳腺癌MCF-7细胞，通过普通光学显微镜观察其形态变化；四甲基偶氮唑蓝（MTr）微量酶反应比色法测定经不同放射性浓度（148、296、592、1184和2368Bq／m1）^89Sr诱导不同时间（24、48和72h）后的细胞增殖抑制率；用流式细胞仪分析培养后经不同放射性浓度（370、740、1480、2960、3330、6660和13320kBq／m1）^89Sr诱导24h后细胞周期的变化情况；用免疫组织化学分析p53基因表达情况。结果经不同放射性浓度的^89Sr诱导后，细胞数量减少，形态改变，MCF-7细胞增殖抑制明显，与药物浓度和诱导时间呈正相关，细胞周期出现不同程度和不同时相的阻滞，各时相阻滞情况及百分比与药物浓度相关。在1480～6660kBq／ml范围内p53基因表达增强。结论在148Bq／ml～6660kBq／ml范围内，MCF-7细胞增殖抑制率和细胞周期阻滞与^89Sr的放射性浓度相关，且受p53基因调控。     

新辅助化疗的不同方案对进展期大肠癌组织中细胞凋亡和增殖细胞核抗原表达的影响

 目的研究不同新辅助化疗方案能否引起进展期大肠癌肿瘤细胞的凋亡以及对大肠癌肿瘤细胞增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响.方法应用原位末端标记(Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick endlabeling,TUNEL)和直接免疫荧光法检测细胞凋亡,采用链菌亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(Avidin or streptavidin-biotinperoxidase complex,ABC)标记的免疫组化法检测大肠癌组织的PCNA表达,对96例大肠癌患者组织中的正常大肠黏膜和肿瘤细胞的凋亡指数(Apoptotis index,AI)和增殖指数(Proliferative index,PI)分别进行检测.结果两个新辅助化疗组患者肿瘤细胞AI分别为7.47%和6.14%,与手术对照组肿瘤细胞AI 4.83%相比明显增高(P＜0.01),与单纯对照组大肠黏膜细胞AI2.74%相比明显增高(P＜0.01);两个新辅助化疗组中患者肿瘤细胞PI为分别33.71%和39.68%,与手术对照组肿瘤细胞PI51.51%相比明显降低(P＜0.01),与单纯对照组大肠黏膜细胞PI 19.82%相比明显增高(P＜0.01).两个新辅助化疗组间AI与PI相比具有显著差异(P＜0.01).结论新辅助化疗能诱导肿瘤细胞发生凋亡,并能抑制其增殖,细胞增殖与凋亡平衡失调程度与大肠癌新辅助化疗的不同方案密切相关.     

肿瘤坏死因子对胃癌细胞增殖周期的作用研究

 为探讨肿瘤坏死因子对胃癌细胞的作用机理,运用流式细胞术测定其对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的作用.结果显示经肿瘤坏死因子作用后,胃癌细胞SGC-7901增殖指数明显下降(P<0.01),72 h内G<,2>M期细胞由6.5%上升到49.8%(P<0.01).而G<,0>.G<,1>期和S期细胞则显著下降(P<0.01);72 h后其作用减弱.表明肿瘤坏死因子能抑制SGC-7901细胞增殖,将SGC-7901细胞阻抑在细胞增殖周期中的G<,2>M期,且在72 h内达高峰.为临床合理运用肿瘤坏死因子治疗胃癌提供实验依据.