肿瘤坏死因子α对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的:探讨不同浓度肿瘤坏死因子α(TNF-α)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)生物学特性的影响。方法:采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测BMSCs表面标记物;分别以10、100、1000 ng/mL的TNF-α完全培养液预处理P3代BMSCs,并设置仅含培养基的空白对照组,24 h后采用ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中IL-6、IL-10的表达水平;胰酶消化细胞,用Presto Blue法检测10、100、1000 ng/mL TNF-α完全培养液预处理BMSCs后细胞增殖活性。结果:ELISA检测结果显示,与对照组相比,各浓度TNF-α干预组IL-6、IL-10均有不同程度升高,差异有统计学意义(P0.05),且1000 ng/mL TNF-α干预组IL-10表达水平最高,其浓度为170.2±11.9 pg/mL,组间比较差异有统计学意义(P0.05);100 ng/mL TNF-α干预组IL-6表达水平最高,其浓度为144.0±18.6 pg/mL,组间比较差异有统计学意义(P0.05)。Presto Blue检测结果显示,与对照组相比,10、100、1000 ng/mL TNF-α干预组荧光值均增高,差异有统计学意义(P0.05),但组间荧光值比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:10~1000 ng/mL TNF-α可促进BMSCs的增殖,且随着TNF-α浓度的升高,BMSCs分泌促炎因子IL-6的能力降低,分泌抑炎因子IL-10的能力升高。     

人肿瘤坏死因子衍生物b cDNA的构建与表达

构建了人肿瘤坏死因子缺失1～7位和102～107位共13个氨基酸编码序列的cDNA,即人肿瘤坏死因子衍生物b(rhTNFαDb),转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导后,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白量的30%～60％。其中可溶性rhTNFα Db蛋白约占超声上清总蛋白的40%。经柱层析纯化后,目的蛋白纯度达95%以上。以L929细胞株检测rhTNFα Db的细胞毒活性,测得rhTNFα Db的比活性为2×10⁸IU/mg。较rhTNFα 原型提高一个数量级。rhTNFα Db的体内外抑瘤试验也取得了初步结果     

α肿瘤坏死因子转换酶的结构及其生物学作用

α肿瘤坏死因子转换酶（tumor necrosis factor—α converting enzyme,TACE）是ADAM蛋白质家族的成员之一,又称ADAM17。TACE是锚定于细胞膜的细胞表面的蛋白质,是一种多结构域的Ⅰ型跨膜蛋白,具有显著的金属蛋白酶水解活性,对TNF—α前体有水解作用。TACE的胞内区富含脯氨酸,并包含一个潜在的磷酸化位点KKLDKQYESL,该位点具有和SH3区域相结合的潜能;很可能具有信号转导的功能,或对亚细胞定位有重要作用。     

人α－肿瘤坏死因子基因的高效表达

用人工合成的α－肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）基因构建了五个不同的表达质粒,它们不同之处是ＳＤ序列与起始密码子ＡＴＧ间距离（Ｄ）各异。计算机模拟计算出翻译起始区域（ＴＩＲ）中二级结构的最小生成自由能,以（Ｄ）为６个核苷酸时最小（绝对值）。它的表达效率也最高,产物ＴＮＦ－α可达菌体总蛋白的６０％。密码子的选用对表达效率有很大的影响,故人工合成ＴＮＦ－α基因（选用大肠杆菌偏爱的密码子）的表达效率高于ｓｃ－     

人α－肿瘤坏死因子基因的高效表达

用人工合成的α－肿瘤坏死因子(TNF—α)基因构建了五个不同的表达质粒,它们不同之处是SD序列与起始密码子ATG问距离(D)各异．计算机模拟计算出翻译起始区域(TIR)中二级结构的最小生成自由能．以(D)为6个核苷酸时最小(绝对值)。它的表达效率也最高,产物TNF—α可达菌体总蛋白的60％．密码子的选用对表达效率有很大的影响,故人工合成TNF－α基因(选用大肠杆菌偏爱的密码子)的表达效率高于sc－DNA(对部分密码子改造的半合成eDNA)．     

肿瘤坏死因子α与中枢神经系统

肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦ）是近年来研究较深入、应用较广泛的一种细胞因子。大部分实验和临床研究都侧重于探索其免疫系统的作用。近几年不少实验证明其与中枢神经系统也有着密切的联系。ＴＮＦ可影响体温调节、自主活动、摄食、睡眠、神经内分泌、镇痛、中枢内感染等。外周ＴＮＦ可进入中枢,中枢自身也可产生ＴＮＦ。     

miR-30b 的组织特异性研究

目的:研究miR-30b的组织特异性,检测其在心,肝,脑,肾,脾和骨骼肌中的表达情况。方法:选取C57BL/6J雄性小鼠6只,用real-time PCR方法检测小鼠心,肝,脑,肾,脾和骨骼肌中miR-30b的表达量。结果:miR-30b在小鼠肝脏中表达量最低,与肝相比,在心,脑,肾,脾和骨骼肌中的相对表达量分别为13.13±0.899,9.497±0.717,4.478±1.031,6.751±0.596,2.538±0.79。且与肝相比均具有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-30b在各组织中的表达存在差异,在心脏中的表达量最高,提示miR-30b可能与心脏的发生发展密切相关,为深入探索miR-30b的功能奠定了基础。     

肿瘤坏死因子对人滋养层干扰素α分泌的影响

目的和方法：本文采用人妊娠６～８周胎盘组织块的体外培养方法,通过检测干扰素免疫活性和抗病毒活性研究肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对人滋养层干扰素（ＩＦＮ）分泌的影响。结果：ＴＮＦα可显著促进人滋养层ＩＦＮα的分泌,并呈剂量和时间依赖关系。同时各浓度的ＴＮＦα还可促进βＨＣＧ的分泌,并呈一定的剂量依赖关系。此外,我们还证明ＩＮＦα可显著抑制人滋养层细胞的生长,而ＴＮＦα则无明显作用。结论：ＴＮＦα可通过促进人滋养层干素α和βＨＣＧ的分泌,从而影响人胎盘的功能活动     

基因重组人肿瘤坏死因子-α突变体的构建

在详细分析ＴＮＦ α结构及有关ＴＮＦ α结构与功能关系研究的基础上,设计并人工合成了一对ＴＮＦ α结构基因点突变引物。应用ＰＣＲ和分子克隆技术构建了一种新型人肿瘤坏死因子（ＴＮＦ α）分子的编码基因,将该编码基因插入表达质粒,转化大肠杆菌,通过温度诱导获得了表达蛋白,对突变体克隆进行了ＤＮＡ电泳、酶切位点检测以及基因序列测定,并对突变体蛋白进行了ＳＤＳ ＰＡＧＥ电泳检测。     

重组人肿瘤坏死因子α(hTNFα)衍生物发酵条件的研究

本文对一种新型重组人肿瘤坏死因子衍生物（命名为ｈＴＮＦＤ）的发酵条件进行了初步研究。通过实验优化选择了适宜该衍生物表达的培养基、ＩＰＴＧ使用浓度、诱导时期以及诱导时间的长短等,并在５０Ｌ发酵罐进行了中试规模的放大培养,菌体的收获量湿重可达１６４３ｇ／Ｌ,ｈＴＮＦＤ表达量占总蛋白的６０％,纯化的衍生物比活为１０１×１０１０Ｕ／ｍｇ,比原型ｈＴＮＦα提高了４６５倍,具有潜在的临床应用价值。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8的生物学效应及其临床价值

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(tumor necrosis factor alpha induced protein-8,TNFAIP8)作为TNFAIP8家族的成员之一,被认为是一种具有抗凋亡和促肿瘤效应的蛋白分子,在细胞的存活和死亡中发挥重要作用。本文重点介绍TNFAIP8的发现过程、结构功能、生物学效应及其临床意义,并对其可能的作用机制进行概述。     

肿瘤坏死因子α与肥胖的研究进展

肥胖症作为一种能量代谢性疾病,已成为世界范围内的健康问题.肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor,TNF-α)是一种多效性细胞因子,在肥胖发生过程中起着非常重要的作用.TNF-α可以通过影响体内糖代谢、脂代谢及炎症反应参与肥胖的发生过程.本文就TNF-α在肥胖的发生过程中的作用做一简要综述.     

α-肿瘤坏死因子的肿瘤靶向性改造

α-肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是一种多效性的细胞因子,能高效地杀伤或抑制肿瘤细胞。但是由于其对全身有毒副作用,这使T N F-α的应用受到了限制。提高T N F-α的抗肿瘤活性,降低毒副作用以及开发具有肿瘤靶向性的融合蛋白是将其应用于临床的关键。     

人α型肿瘤坏死因子基因在昆虫细胞中的表达

将人肿瘤坏死因子α(Tumoor Necrosis Factor α,TNF-α)cDNA片段克隆到转移载体pat610上．然后与苜蓿尺蠖核型多角体病毒(Autogropha californica Nuclear PolyhedrinVirus,AcNPV)DNA共转染草地贪夜蛾细胞(Sptodoplet frugiperda)Sf21,获得含hTNF-a基因的重组病毒。以L929细胞毒方法测得重组病毒感染Sf21细胞72小时时的表达量最高,为1．0×10^-4u／lO 6细胞;同时,培养液中小牛血清浓度对hTNF－α表达量有较大影响,当浓度为6%时hTNF—α表达量最高．感染72小时表达量可达5．2×10⁴u／1O⁶细胞,ELISA实验结果证明其产物确为hTNF—α。     

肿瘤坏死因子α在中枢神经系统中的作用

概述了肿瘤坏死因子α（TNFα）及其受体在中枢神经系统（CNS）中的作用。TNFα在神经元和胶质细胞中的表达量与神经系统疾病的发病密切相关;TNFα与神经胶质增生、Alzheimer’s病、Parkinson病和多发性硬化症都有关系。然而;当CNS受损伤以后,TNFα能够促进神经营养因子的分泌,增强神经元的粘附和促进轴突的生长;这是它有利的一面。这种双重模式的效应与其受体亚型和激活不同的信号转导途径有关。所以,在CNS的发育中,TNFα可能是一个重要的调节因子。     

肿瘤坏死因子-α与心脏疾病

肿瘤坏死因子-α是一种具有多种生物学效应的细胞因子。新近研究表明,TNF-α参与冠心病、心肌炎、心力衰竭等多种心脏疾病的发生和发展过程,并可能介导了心脏手术后的炎症反应。如何抑制病理条件下高浓度血清TNF-α对机体造成的损害成为当前人们关注的课题。     

新型基因工程人肿瘤坏死因子研制成功

新型基因工程人肿瘤坏死因子研制成功据中国科学报１９９４年１２月１４日报道,中国科学院上海生物工程中心陈常庆教授主持的课题组研制成功了新型基因工程人肿瘤坏死因子。实验室研究和临床试验资料表明,这种人肿瘤坏死因子对多数肿瘤具有细胞毒和抑制生长的作用,它能...     

新型基因工程人肿瘤坏死因子研制成功

新型基因工程人肿瘤坏死因子研制成功我国科学家在基因工程研究领域又获重大进展。中国科学院上海生物工程研究中心陈常庆教授主持的课题组，经过几年努力，终于研制成功了新型基因工程人肿瘤坏死因子。这是一种国内外尚未见报道的人肿瘤坏死因子突变体，具有毒性低、抗肿...     

信号转导和转录激活因子3调节肿瘤坏死因子α表达的结合位点研究

脓毒症早期内毒素(脂多糖,LPS)可激活丝裂原活化蛋白激酶通路,诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)等多种炎性细胞因子大量生成.TNF-α作为一种重要的早期炎症介质,间接激活Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路.STATs活化后直接进入核内参与LPS诱导的基因表达.本研究拟探讨STAT3在TNF-α启动子上的作用位点,为深入认识JAK/STAT信号通路在脓毒症发生中的分子基础及其干预途径提供理论依据.a.将Flag-STAT3与全长TNF-α启动子报告基因共同转染COS-7细胞,观察STAT3作用的剂量-效应.结果证实,STAT3对TNF-α基因的表达不受LPS调节,无论是否有LPS刺激,随着STAT3剂量的增加,TNF-α基因的表达亦随之增加.在将200μg/L浓度的Flag-STAT3质粒分别与不同长度的TNF-α启动子报告基因质粒共同转染COS-7细胞并用LPS刺激,观察不同片段的TNF-α启动子活性.结果发现,95 bp片段的TNF-α缺失突变体作用最为明显,增加了6.9倍.b.分别构建了70 bp、75 bp、80 bp和85 bp片段的TNF-α缺失突变体———pTNF-α(70 bp)、pTNF-α(75 bp)、pTNF-α(80 bp)和pTNF-α(85 bp),将它们与Flag-STAT3共同转染COS-7细胞并用LPS刺激,观察到85 bp片段的活性与95 bp片段相似,当片段到达80 bp时,活性降低到对照水平.为了进一步了解其精确结合位点,将85 bp片段突变体的81和82位碱基突变,检测其对TNF-α活性影响,发现启动子活性下降.c.为了证明STAT3的潜在结合位点在80 bp到85 bp之间,且81和82位这2个位点的突变确实改变了STAT3对TNF-α启动子活性,进行凝胶迁移阻滞实验,观察到TNF-α启动子62～85 bp的野生型γ-32P标记的探针可以与核蛋白STAT3结合,而突变的62～85 bp标记的探针不能与核蛋白STAT3结合.上述结果表明,STAT3对TNF-α基因表达的调节不依赖LPS的刺激,STAT3在TNF-α启动子的潜在结合位点是在80到85碱基片段之间.