焦亡相关基因在膀胱癌中的作用鉴定与预后分析研究

目的:通过生物信息学的方法分析并确定膀胱癌患者的关键焦亡相关基因(PRGs)表达谱,并阐明其潜在功能。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载了对应膀胱样本的mRNA表达谱和临床数据,进行功能富集分析,包括基因本体论分析(GO)和京都基因与基因组百科全书的分析(KEGG)。构建评估预后的基因模型,计算风险评分,分高、低风险组评估膀胱癌的预后。评估PRGs与肿瘤免疫浸润的相关性,并构建基于它们的共表达和预测目标的竞争性内源性RNA(ceRNA)调控轴。结果:我们选择了33个PRGs,功能富集分析显示,它们主要参与细胞因子产生、炎症小体复合物、凋亡过程和NOD样受体信号通路的正调控。我们用LASSO Cox回归分析筛选6个基因(CASP9、PRKACA、CASP6、TNF、AIM2、GSDMB)构建PRGs模型,KM曲线提示高风险评分的膀胱癌患者的总生存时间概率低于低风险评分患者,差异有统计学意义(P<0.001),列线图表明该模型对预后预测较准确。AIM2、CASP6与免疫细胞浸润显著相关(P<0.05)。通过构建ceRNA网络,确定了膀胱癌中的CASP6/hsa-le...     

树突状细胞在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨膀胱癌中树突状细胞 (DC)的表达及其生物学行为的关系。方法 :采用免疫组织化学ElivisionTM二步法检测DC。结果 :31例膀胱癌在不同病理分级、临床分期和单、多发肿瘤中 ,DC的表达具有统计学意义 (P <0 0 5 ) ,而在原、复发肿瘤中 ,DC表达无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 :DC的表达膀胱癌的病理分级、临床分期的上升而下降 ,多发肿瘤的DC数较单发肿瘤减少。DC可作为预测膀胱癌生物学行为的指标之一。     

姜黄素抑制人膀胱癌BIU87细胞的增殖并诱导其调亡

目的探讨姜黄素对人膀胱癌BIU87细胞增殖及凋亡的影响。方法以BIU87膀胱癌细胞为研究对象,分别经终浓度为10、50、100、250及500 mol/L的姜黄素作用12、24、36、48及72h后,观察细胞的形态变化,并用MTT法、TUNEL染色及流式细胞仪技术评估姜黄素对BIU87细胞增殖及细胞凋亡的影响。结果姜黄素能有效抑制BIU87细胞的增殖,作用48h后的IC50值为134.8 mol/L,且呈浓度和作用时间依赖性;同时对各浓度组药物处理后的BIU87细胞进行检测,显示100 mol/L药物组细胞的凋亡率显著的高于对照组（〈0.01）,且随着时间的延长,凋亡率逐渐增加。结论姜黄素能抑制人膀胱癌BIU87细胞的增殖并诱导其凋亡。     

细胞焦亡在膀胱癌中的作用研究进展

膀胱癌是泌尿系常见的恶性肿瘤,由于缺乏早期诊疗手段,约1/4的患者在确诊时肿瘤已侵及膀胱肌层。高转移率和高复发率使膀胱癌的治疗成为临床一大难题,而免疫检查点抑制剂研究使膀胱癌的免疫治疗进入新的阶段,但也仍存在治疗费用高、治疗时间长等问题。相关研究发现基于细胞焦亡相关基因的预测模型能很好地预测患者对免疫治疗的敏感性以及生存预后。本文就细胞焦亡在膀胱癌中的作用研究进展作一综述。     

TRPV3在膀胱癌细胞中的表达及其对膀胱癌细胞增殖迁移能力的影响

目的探讨瞬时感受器电位香草酸受体3离子通道蛋白（TRPV3）在膀胱癌细胞中的mRNA表达水平,以及TRPV3激动剂Thymol对膀胱癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测TRPV3 mRNA在膀胱癌细胞系RT4,UM-UC-3,SW780,J82,TCC-SUP,T24和人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1中的表达;利用Thymol激活膀胱癌细胞TRPV3通道,并用WST-1和细胞划痕实验分别检测Thymol激活TRPV3后膀胱癌细胞的增殖和迁移能力变化。结果相较于正常人膀胱上皮细胞SV-HUC-1,各种膀胱癌细胞系的TRPV3 mRNA表达水平均明显下调（P〈0.0001）。与不加激动剂的DMSO对照组比较,加入Thymol激活膀胱癌细胞TRPV3通道后,膀胱癌细胞的增殖和迁移能力明显降低（P〈0.01）。结论 TRPV3基因在膀胱癌细胞中表达明显降低,激活TRPV3通道后可明显减慢膀胱癌细胞增殖和迁移速度。     

Galectin-1在膀胱癌细胞中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的检测膀胱癌细胞中半乳糖凝聚素1(Gal-1)的表达是否异常,并通过慢病毒干扰技术敲除膀胱癌细胞中Gal-1的表达后,检测肿瘤细胞的增殖能力与迁移能力有无改变。方法用荧光实时定量聚合酶链锁反应(q RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)技术分别检测膀胱癌细胞与正常膀胱上皮细胞相比,Gal-1的表达在m RNA水平以及蛋白水平有无区别。再利用RNA干扰慢病毒敲除膀胱癌细胞内Gal-1的表达后,通过WST-1试剂盒以及transwell迁移实验检测膀胱癌细胞的增殖和迁移能力有无发生改变。最后再应用Western Blot技术检测敲除Gal-1的表达后AKT、P38、JNK三条通路的激活水平有无发生改变。结果膀胱癌细胞内的Gal-1的表达水平与正常膀胱上皮细胞相比,无论在m RNA水平还是在蛋白水平均明显上调。敲除Gal-1的表达后肿瘤细胞的增殖能力未发生明显改变,但迁移能力明显下调。敲除Gal-1的表达后,AKT信号通路的磷酸化水平明显下降。结论 Gal-1在膀胱癌细胞中表达明显上调,并且与膀胱癌细胞的迁移能力密切相关。Gal-1可能通过改变AKT信号通路的激活水平从而调控了膀胱癌细胞的迁移能力。     

逆转录病毒介导的MTS1基因在人膀胱癌细胞中的表达

逆转录病毒介导的ＭＴＳ１基因在人膀胱癌细胞中的表达袁建林１，惠宏襄２，黄斌３，柴玉波２，于茂生１，王成济２（１第四军医大学西京医院泌尿外科，西安７１００３３，２第四军医大学分子生物学和生物化学教研室３西安空军电讯工程学院医院）关键词逆转录病毒载体ＭＴ...     

PTEN基因在膀胱癌组织中的表达和突变

目的 检测抑癌基因PTEN在膀胱癌组织中的表达和突变情况。方法 分别应用免疫组化和聚合酶链反应单链构象多态性分析（PCR-SSCP）技术对62例膀胱癌及18例膀胱良性病变组织（对照组）中PTEN的表达及其第1和第7个外显子的突变情况进行检测。结果 在62例膀胱癌组织中．PTEN表达的阳性率为53．2%．而对照组全部为阳性表达；62例膀胱癌组织中．第7外显子突变率为25．8％．第1外显子未发现突变．在对照组织中．末发现有指示突变的异常带型；膀胱癌PTEN的突变率可能与肿瘤的病理学分级有关。结论 PTEN基因突变所致表达障碍可能在膀胱癌的发生、发展中有着重要的作用。     

细胞凋亡相关因子与膀胱癌的关系

细胞凋亡在肿瘤演进过程中的作用及意义是众学者近年研究的热点。Fas、Survivin、转化生长因子-β(TGF-β)基因是细胞凋亡相关的基因,与膀胱癌发生、发展关系密切。现就Fas、Survivin、TGF-β的基因结构、生物学特性、在膀胱癌中的表达及作用机制做一综述。     

死亡相关蛋白激酶与肿瘤的诊断及治疗

死亡相关蛋白激酶(DAPK)是一种凋亡的正性调节因子,可促进肿瘤细胞的分化并抑制肿瘤的转移,被认为是肿瘤的抑制剂。DAPK基因启动子超甲基化或蛋白表达异常在多种肿瘤中均可观察到,并与分级分期及预后呈一定相关,表明其在肿瘤的发生及进展中发挥一定作用,在肿瘤的早期诊断、评价预后及基因靶向治疗等方面有重要意义。现就DAPK与肿瘤的诊断与治疗的研究进展予以一综述。     

Skp2在前列腺癌中的研究进展

Skp2是F-box蛋白家族成员之一,参与多种细胞周期调节蛋白的泛素依赖性蛋白水解过程,从而调控细胞周期,并在多种肿瘤细胞中过表达。Skp2在前列腺癌的发生与发展、分级、分期、术后复发中起着重要的作用。探讨前列腺癌患者中Skp2的不同表达与疾病发生、进展及预后的关系,可进一步明确恶性肿瘤的发生机制,并可以作为抗肿瘤治疗的新靶点。     

死亡相关蛋白激酶启动子区甲基化状态与膀胱癌的关系

目的探讨死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAPK)在膀胱癌中CpG岛的甲基化状态及其意义。方法收集40对新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织;采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)检测DAPK基因启动子区CpG岛的甲基化状态;并对MSP产物进行TA克隆。结果40对癌组织及其癌周正常组织中,7例癌组织检测到DAPK异常甲基化,1例癌周正常组织检测到异常甲基化(7/40vs.1/40,P>0.05);原发性与复发性膀胱癌中的甲基化阳性率分别为2/15、5/25,二者差异无显著性(P>0.05);在不同分级、分期膀胱癌中的差异均无显著性(P>0.05)。结论DAPK启动子在膀胱癌中的甲基化阳性率较低,并且与膀胱癌的分级、分期无相关性,因而在选择分子学指标辅助膀胱癌早期诊断时,DAPK的甲基化检测需慎用。     

膀胱癌细胞在尿液中适应性生存的研究

目的观察膀胱癌细胞是否能在尿液中存活及其存活时间．方法过滤除菌正常人中段晨尿,并行尿RT及生化检测．倒置显微镜观察在除菌尿液中培养的膀胱癌细胞．MTT法对比人膀胱癌细胞EJ、人肝癌细胞HepG2和人血管内皮细胞Ecv304分别在尿液、生理盐水和无血清1640中的存活情况．通过逐渐递加培养基中除菌晨尿,筛选高尿液适应性的膀胱癌细胞．结果除菌前后尿RT及生化无改变．EJ细胞在尿中12h贴壁,24h仍可见到存活细胞．经多元方差分析,在尿液中培养相同时间时,EJ较HepG2（P〈0．001）和Ecv304（P=0．014）的存活数日多;HepG2与Ecv304的差异无统计学意义（P=0．062）．高尿液适应性的膀胱癌细胞在尿液中,24h时有大量细胞存活,48h仍有细胞存活．结论膀胱癌细胞可以在尿液中存活,并且在尿液培养相同时间时较HepG2和Ecv304存活数目多．经尿液诱导后筛选出的膀胱癌细胞能在尿液中存活更长时间．     

胃癌DAPK1基因启动子甲基化状况及表达的研究

目的对DAPK1基因甲基化状态、表达进行研究,探讨基因甲基化在胃癌发病中的作用。方法用半定量RT-PCR方法研究胃癌及癌旁组织中DAPK1基因的表达,用甲基化特异性PCR（MSP）对胃癌及癌旁组织中DAPK1基因启动子区甲基化情况进行研究。结果 DAPK1有16例表达下调,6例表达上调,基因在癌旁组织的mRNA表达明显高于癌组织,具有统计学意义（P=0.465）。DAPK1在胃癌组织及癌旁组织中甲基化率均为100%,无统计学意义（P〉0.05）。结论胃癌组织中DAPK1基因表达下降与该基因甲基化无明确相关性。     

存活素基因表达与膀胱癌细胞增殖活性的关系

目的:探讨存活素基因在膀胱移行细胞癌中的表达,以及存活素基因表达与癌线胞的凋亡和增值活性的关系。方法:应用Western blot定量分析检测存活素蛋白在128例膀胱移行细胞瘤组织中的表达水平,原位DNA片段末端标记法检测肿瘤细胞的凋亡指数(Al),Ki-67单克隆抗体检测肿瘤细胞的增殖活性(Ki-67LI)。结果:Wstern blot分析结果表明在肿瘤组织中可检测到存活素的高表达,而正常膀胱组织中无存活素蛋白的表达。存活素蛋白的表达水平在肿瘤的临床分期和病理分级间差异具有显著性(P<0.05)。Spearman秩和相关检验提示存活素蛋白的表达水平与肿瘤的增值活性呈正相关(P<0.001),而与肿瘤细胞的AI无明显的相关性(P>0.005).结论:存活素蛋白表达在膀胱移行细胞癌的恶性进展中起重要作用,可作为评估膀胱移行细胞癌的恶性程度和预后的指标。     

Apoptin基因诱导膀胱癌耐药细胞凋亡的研究

目的观察Apoptin基因对膀胱癌耐药细胞株EJ／MDR细胞的杀伤效果，探讨其可能的机制。方法用脂质体将Apoptin基因导人EJ／MDR细胞，通过RT-PCR法检测ApoptinmRNA的表达，同时用SABC免疫组化法分析Apoptin和p53的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率，TUNEL法标记凋亡细胞，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果转入Apoptin基因后，EJ／MDR细胞的生长明显受抑制（P％0．05）。细胞周期分析可见凋亡峰，凋亡率35％。细胞中可见Apoptin阳性表达（P〈0．05），p53表达无显著性差异（P〉0．05）。凋亡细胞在荧光显微镜下形成凋亡小体。结论转入Apoptin基因可显著促进EJ／MDR细胞的凋亡，Apoptin诱导的凋亡不依赖功能性p53的生成。     

整合素连接激酶修饰的骨髓间充质干细胞改善大鼠梗死后心脏心功能

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)对心肌梗死后心脏心功能的影响。方法:取大鼠骨髓体外分离扩增培养MSCs,分别用ILK、ILK-siRNA及对照GFP腺病毒转染MSCs。结扎大鼠心脏左前降支1h后,分别将GFP-MSCs、ILK-MSCs、ILK-siRNA-MSCs多点注射到大鼠心肌梗死区周边,对照组注射等量PBS。结果:细胞移植4d后与GFP-MSCs移植组相比,ILK-MSCs组存活细胞数目明显增多,而ILKsiRNA-MSCs移植组存活细胞明显减少(P<0.05)。细胞移植3周后与GFP-MSCs移植组相比,ILK-MSCs组新生血管数目明显增多,且胶原蛋白沉积减少,梗死面积明显缩小,心功能各项指标明显改善(P<0.05);而ILK-siRNA-MSCs移植组新生血管数目明显减少,胶原蛋白沉积增多,梗死面积明显增加,心功能各项指标明显恶化(P<0.05)。结论:ILK增加MSCs存活率、促进梗死后心脏血管新生,从而抑制心室重构,改善心功能。     

膀胱癌相关因子研究进展

膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤,目前对于膀胱癌的诊断仍依赖膀胱镜病理学检查及尿脱落细胞学检查,治疗仍是手术及膀胱灌注化疗,但效果未令人满意。近年来随着分子水平的研究深入,发现了大量膀胱癌相关因子,从而进一步指导临床对于膀胱癌的诊断、治疗。