CD151促进人脐静脉内皮细胞管样结构生成依赖于CD151-整合素α3/α6复合体的形成

目的观察CD151转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)促细胞管样结构形成,及其与整合素的相关性。方法用脂质体转染试剂,将质粒pAAV-CD151及其突变体pAAV-CD151-AAA194-196转染HUVEC,观察转染后细胞在Matrigel胶上管样结构形成情况;免疫共沉淀法检测整合素的表达情况。结果 pAAV-CD151转染组能显著促进HU-VEC管样结构形成,免疫共沉淀能检测到整合素α3、α6的表达;而CD151突变体pAAV-CD151-AAA194-196转染组促HUVEC管样结构形成能力下降,且其免疫共沉淀未能检测到整合素α3、α6的表达。结论 CD151促进HUVEC管样结构形成依赖于CD151-整合素α3/α6复合体的形成。     

rAAV-CD151-AAA194-196表达对大鼠缺血后肢血管新生的影响

目的 观察CD151及其突变体在大鼠后肢缺血模型中的表达以及对血管新生的影响,进一步研究CD151促血管新生的分子机制.方法 将实验大鼠随机分组,分别给予生理盐水,rAAV-GFP,rAAV-CD151和rAAV-CD151-AAA194-196 (整合素α3/α6结合缺陷突变体),分点注射至大鼠左后肢肌肉组织内,基因转染1周后行股动脉切除术建立大鼠后肢缺血模型,假手术组不切除股动脉.建模5周后测定后肢皮肤温度,检测缺血肌肉组织毛细血管密度,Western blot检测各组大鼠缺血肢体局部CD151的表达.结果 术后5周,rAAV-CD151和 rAAV-CD151-AAA194-196组的CD151蛋白及AAA194-196突变体蛋白表达水平明显高于其余各组(均P＜0.05),rAAV-CD151和rAAV-CD151-AAA194-196两组间蛋白水平无明显差别,但rAAV-CD151-AAA194-196组大鼠缺血后肢平均皮肤温度和毛细血管密度明显低于rAAV-CD151组(均P＜0.05).结论 研究证实CD151促血管新生是通过生成CD151-整合素α3/α6复合体而实现的,CD151-整合素α3/α6复合体的形成是CD151促血管新生的始动机制.     

CD151激活PI3K/Akt/eNOS通路并促进小型猪缺血心肌血管生成

目的:磷脂酰肌醇-3(羟基)激酶(PI3K)信号转导途径在生长因子促血管生成过程中起重要作用.四跨膜蛋白分子CD151如何参与PI3K信号转导途径尚不清楚.文中探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导CD151转染心肌梗死小型猪模型对心肌血管生成的影响及机制. 方法:结扎左冠状动脉左前降支建立小型猪心肌梗死模型,构建并包装绿色荧光蛋白、CD151、antiCD151重组腺相关病毒,分别注射至缺血心肌组织;同时设置正常对照组.8周后用vWF相关抗原免疫组化染色并计数注射部位心肌微血管数目,Western blot检测CD151及相关信号通路分子蛋白表达. 结果:术后8周rAAV-CD151组心肌组织CD151蛋白表达明显高于正常对照组、rAAV-GFP组和rAAV-反义CD151组(P<0.05).rAAV-CD151组微血管密度[(30.20±2.35)个/视野]与正常对照组[(7.60±1.14)个/视野]、rAAV-GFP组[(14.40±1.34)个/视野]相比显著增加,rAAV-反义CD151组微血管密度[(7.20±1.30)个/视野]则明显低于其他手术组(P<0.05).CD151表达增高促进了PI3K、p-Akt、p-eNOS的激活,促进NO的生成. 结论:重组腺相关病毒携带CD151基因能有效转染心肌组织,明显增加微血管密度并激活PI3K /Akt/eNOS通路.     

CD151与肿瘤侵袭转移的关系研究进展

CD151蛋白是第一个被发现的四跨膜蛋白。α3、α6整合素可与CD151紧密结合形成CD151-α3β1/α6β1两种复合体,该两种复合体能够促进内皮细胞迁移和微血管增生,促进肿瘤细胞侵袭转移。CD151可直接与基质金属蛋白酶（MMPs）相互作用,调节其在细胞表面的定位、转运,溶酶体降解和蛋白水解活性。CD151蛋白作为细胞表面分子,有望成为肿瘤治疗的靶标。     

CD151促进Rac/cdc42信号通路激活并维持体外血管生成的稳定性

目的 探讨CD151及其QRD突变体对Rac/cdc42信号通路和体外血管生成的稳定性影响及机制.方法 脂质体介导质粒(pAAV-CD151、pAAV-CD151-QRD、pAAV-anti-CD151)转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),将HUVECs细胞分为对照组、CD151组、CD151-QRD组,anti-CD151 4组,分别取各个不同时间点评价Matrigel上的各组管腔血管形成能力及新生血管的稳定性.Western blot法检测各组CD151蛋白表达,以及Rac和cdc 42信号通路蛋白表达.结果 CD151组内皮细胞CD151表达(1.86士0.15)明显高于对照组(0.90士0.06),差异有统计学意义(P＜0.01);CD151-QRD组(1.75士0.16)与CD151组相比CD151蛋白表达差异无统计学意叉(P＞0.05),但anti-CD151组蛋白表达(0.51土0.06)明显下降.在12 h Matrigel上CD151及其他各组之间血管生成比较差异无统计学意义(P＞0.05).36 h时,各组血管生成有区别.72 h,CD151组Matrigel上血管生成明显高于其他各组,其他各组生成的血管不能维持.CD151高表达促进cdc 42,Rac蛋白表达增加,CD15 1-QRD组、anti-CD151组蛋白表达则较CD151组下降.结论 CD151促进Rac和cdc 42信号通路激活,促进体外血管生成并可维持生成血管的稳定性.     

CD151及整合素α3β1在胃癌中的表达及意义

目的　通过对CD151及整合素α3β1 在胃癌组织中的表达的研究,将有助于加深对胃癌发生、发展及转移机制的了解,以及为防治和评估找到新方法。方法　 采用免疫组化S-P 方法检测了23 例正常胃组织、46 例胃癌原发灶及21 例淋巴结转移灶中CD151及整合素α3β1的表达, 并分析比较它们分化程度、特别是原发灶与转移灶分组中表达差异。结果　胃癌中CD151及整合素α3β1表达阳性率分别为66.0%和48.5%,在淋巴道转移中的阳性率为81%和72%,二者差别都有统计学意义(P<0.05);CD151及整合素α3β1在胃癌原发灶及淋巴结转移灶中表达强度呈正相关关系。结论　CD151和整合素α3β1 在胃癌组织中存在异常高表达,检测CD151及整合素α3β1的表达可望成为与胃癌发生、发展、转移有关并提示预后不良的指标。     

核定位CBFβ基因重组腺相关病毒载体的构建与鉴定

目的 构建携带核定位信号的核结合因子(nuclear location signal core binding factor beta, NLS-CBFβ)的重组腺相关病毒载体,从而实现体外诱导关节液间充质干细胞成软骨分化。方法 使用分子生物学方法将腺相关病毒载体与NLS-CBFβ基因相结合,构建pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒;采用PEI转染法将pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒和pAAV-RC、pAAV-Helper质粒共转染至AAV-293细胞中,包装并生产携带CBFβ的重组腺相关病毒rAAV-NLS-CBFβ-RFP,进一步将病毒感染人关节液来源间充质干细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测CBFβ基因在细胞内的表达水平。结果 双酶切及DNA测序证明NLS-CBFβ已成功构建到pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒中,AAV-293细胞表达红色荧光蛋白提示共转染成功,包装的重组腺相关病毒rAAV-CBFβ-RFP感染人关...     

重组分泌型内皮抑素腺相关病毒的包装及在膀胱癌EJ细胞系中的表达

目的:包装重组分泌型内皮抑素腺相关病毒(rAAV-Endostatin)制备内皮抑素原位基因治疗膀胱癌的基因载体药物。方法:采用分子生物学方法构建腺相关病毒质粒载体(pAAV-IgG-Endostatin),酶切、测序鉴定;经质粒共转染方法包装rAAV-Endostatin,测定病毒颗粒滴度并电镜下鉴定;转染膀胱癌EJ细胞后,ELISA法测定重组内皮抑素的浓度。结果:pAAV-IgG-Endostatin的构建和rAAV-Endostatin的包装均获成功,病毒滴度达1.0×1012v.p/ml。感染EJ细胞后内皮抑素成功表达并分泌,上清液中浓度达54.09ng/ml。结论:rAAV-Endostatin载体的构建、包装与表达的成功为rAAV-Endostatin原位基因治疗膀胱癌的实验研究奠定了基础。     

四跨膜蛋白CD151与整合素α6β1在宫颈癌中的表达及其与淋巴结转移的相关性研究

目的 研究四跨膜蛋白CD151与整合素α6β1在宫颈癌(CC)中的表达及其与淋巴结转移的相关性.方法选取2010年1月—2014年5月我院CC根治术(广泛子宫切除+盆腔淋巴结清扫术)切除标本,经病理证实为CC组织50例.采用免疫组化方法检测癌旁正常组织、CC原发灶和淋巴结转移灶中CD151及α6β1蛋白表达情况,分析其与淋巴结转移的相关性.结果CD151、α6β1在CC原发灶和淋巴结转移灶中的阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.05),而在淋巴结转移灶的阳性表达率更高,尤其是α6β1与CC原发灶比较差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,CD151、α6β1表达与CC淋巴结转移呈正相关(P<0.05).结论CD151与整合素α6β1在CC原发灶和淋巴转移灶中高表达,可能参与了CC形成、侵袭和转移.     

糖尿病病人突变CD59蛋白在真核细胞中的表达

目的 构建两种含有人CD59蛋白突变体的真核表达载体,获得中国仓鼠卵巢(CHO)细胞真核表达系统,为在基因水平阐明糖尿病血管增殖性病变的发病机制奠定基础.方法 将两种含有不同突变体的人CD59全长cDNA序列重组pALTER质粒,应用阳离子脂质体导入法与pcDNA共转染CHO细胞,用G418筛选阳性克隆,应用细胞免疫组化及流式细胞仪检测CD59在CHO细胞表面的表达. 结果 含有人CD59两种突变体的重组pLATER质粒经酶切和琼脂糖凝胶电泳鉴定,得到长496 bp的电泳条带,与所插入片段完全相符.运用阳离子脂质体导入法将重组pALTER质粒共转染CHO细胞成功,筛选出的阳性克隆经细胞免疫组化检测,证明突变的CD59可在CHO细胞表面表达,流式细胞仪测定表达率分别为68.6%、71.7%.结论 成功建立了两种高效表达人CD59突变体的真核表达系统,能够进一步研究人CD59的突变体糖基化及抗补体活性,为阐明糖尿病血管增殖性病变的发病机制奠定了基础.     

CD151 Promotes Proliferation and Migration of PC3 Cells via the Formation of CD151-integrin α3/α6 Complex

Over-expression of CD151 was found to be associated with metastasis and poor prognosis of prostatic carcinoma. This study was designed to examine the mechanism by which CD151 promotes the proliferation and migration of prostatic cancer cells. The pAAV-CD151, pAAV-GFP and pAAV-CD151-AAA mutant plasmids were constructed and used to transiently transfect PC3 cells (a prostatic carcinoma 3 cell line) by the mediation of Fugene HD. Then, the cells were assigned to control group, pAAV-GFP group, pAAV-CD151 group, and pAAV-CD151-AAA group respectively. Cell proliferation was evaluated by using the 3-[4,5-dimet-hylthiazol-2-yl]-2,5, diphenyltetrazolium bromide (MTT) method. Cell migration assay was performed by using Boyden chambers. The formation of CD151-integrin a3/a6 complex was determined by the method of co-immunoprecipitation. The protein expression levels of CD151 and extracellular signal-regulated kinase (ERK) were measured by Western blotting. The results showed that transfection of pAAV-CD151 or pAAV-CD151-AAA mutant increased the expression of CD151 protein in PC3 cells. Co-immunoprecipitation showed that more CD151-integrin a3/a6 complex was formed in the pAAV-CD151 group than in the control group, the pAAV-GFP group and the pAAV-CD151-AAA mutant group. Furthermore, the proliferative and migrating capacity of PC3 cells was substantially increased in the pAAV-CD151 group but inhibited in the pAAV-CD151-AAA mutant group. CD151 transfection increased the expression of phospho-ERK. Taken together, it was concluded that CD151 promotes the proliferation and migration of PC3 cells through the formation of CD151-integrin complex and the activation of phosphorylated ERK.     

CD151基因RNAi慢病毒载体构建与稳转细胞株建立

目的构建人的CD151基因RNAi慢病毒载体,并建立A549-CD151i稳定细胞株。方法根据人的CD151基因序列,设计三对RNAi序列,筛选出有效序列,利用此有效序列,合成相对应的Oligo DNA,退火后形成黏性末端的DNA双链,与双酶切后的pshRNA—Lentivector载体连接得到LV—CD151i慢病毒载体,转化TOP10感受态细胞,PCR筛选阳性克隆,并进行测序鉴定。用LV—CD151i和包装质粒共转染慢病毒包装用293T细胞,生产慢病毒并检测获得的病毒滴度。利用所获得的慢病毒感染A549细胞,筛选稳定转染细胞株。结果测序证实,成功构建CD151RNAi的慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为5×10^8ifu,并利用此病毒悬液,成功感染A549细胞,筛选到稳定表达细胞株。结论成功构建人CD151基因RNAi慢病毒载体,并建立稳定的A549-CD151i细胞株。     

CD151基因对前列腺癌细胞增殖、转移的促进作用及其机制

目的研究人前列腺癌细胞株PC3细胞转染CD151基因后其增殖和迁移能力的变化及机制。方法用FuGENE HD分别将质粒pAAV-CD151(CD151组)、pAAV-GFP(GFP组)转染入PC3细胞,并设加入等体积PBS的对照组。48 h后采用Western blot检测CD151蛋白、磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)和总ERK的表达。采用MTT法检测CD151基因对PC3细胞增殖的影响,采用Boyden趋化小室研究CD151基因对PC3细胞迁移的影响。结果与对照组和GFP组相比,CD151组的CD151蛋白表达水平明显增加(均P<0.05);磷酸化ERK的表达量亦明显高于其它两组;细胞增殖能力比对照组和GFP组明显增高[相对吸光度值分别为:(0.245 7±0.006 4)vs(0.175 2±0.007 4)、(0.179 0±0.008 4)];细胞迁移数(107.8±9.6)亦显著高于对照组和GFP组[(53.0±7.6)和(57.0±5.2),P<0.05]。结论 CD151在前列腺癌细胞的增殖、转移中起着重要作用,是肿瘤转移的重要分子基础,其分子机制可能是CD151对ERK信号通路的激活。     

Effects of rAAV-CD151 and rAAV-antiCD151 on the migration of human tongue squamous carcinoma cell line Tca8113

TheproteinCD151(PETA3/SFA1)isamemberofthetransmembrane4superfamily(TM4SF)andcontainstwoextracellularloops,fourhydrophobictransmembranedomains,andtwoshortcytoplasmictails.Themajorextracellularloopscombiningwiththeintegrinsisanimportantstructureforthesignal…     

Adeno-associated viral vector mediated and cardiac-specific delivery of CD151 gene in ischemic rat hearts

Our previous studies demonstrated that CD151 gene promoted neovascularization in ischemic heart model.To improve the delivery efficacy and target specificity of CD151 gene to ischemic heart,we generated an adeno-associated virus(AAV) vector in which CD151 expression was controlled by the myosin light chain(MLC-2v) promoter to achieve the cardiac-specific expression of CD151 gene in ischemic myocardium and to limit unwanted CD151 expression in extracardiac organs.The function of this vector was examined in rat ischemic myocardium model.The protein expression of CD151 in the ischemic myocardium areas,liver and kidney was confirmed by using Western blot,while the microvessels within ischemic myocardium areas were detected by using immunohistochemistry.The results showed that MLC-2v significantly enhanced the expression of CD151 in ischemic myocardium,but attenuated its expression in other organs.The forced CD151 expression could increase the number of microvessels in the ischemic myocardium.This study demonstrates the AAV-mediated and MLC-2v regulated CD151 gene is highly expressed in the ischemic myocardium and cardiac-specific delivery that is more efficiently targets CD151 to the ischemia myocardium after myocardial infarction.     

胃腺癌组织CD151、Cav-1与MT1-MMP的表达及其临床意义

目的：探讨胃腺癌组织分化抗原151(CD151)、小凹蛋白-1(Cav-1)与膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)的表达变化及其临床意义。方法选取2014年5月至2015年5月我院消化外科胃腺癌手术患者65例,术中采集胃腺癌组织标本65例作为研究组,癌旁正常胃黏膜组织标本65例作为对照组,采用SP免疫组化方法检测CD151、Cav-1与MT1-MMP蛋白表达水平。结果研究组CD151与MT1-MMP蛋白阳性表达率分别为78.46%和80.00%,明显高于对照组的6.15%和12.31%,Cav-1蛋白阳性表达率为52.31%,明显低于对照组的80.00%,两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);CD151、Cav-1与MT1-MMP蛋白表达与组织学分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征具有明显的相关性,其中低分化及其未分化胃腺癌、中晚期胃腺癌及其有淋巴结转移胃腺癌CD151与MT1-MMP蛋白阳性表达率显著增高,Cav-1蛋白阳性表达率显著降低,不同临床病理特征胃腺癌组织CD151、Cav-1与MT1-MMP蛋白阳性表达率比较差异均具有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析显示,CD151、MT1-MMP与Cav-1表达之间具有明显的负相关(r=-0.521,-0.501,P<0.05),CD151与MT1-MMP表达之间具有明显的正相关(r=0.547,P<0.05)。结论胃腺癌组织CD151与MT1-MMP表达明显上调,Cav-1表达明显下调,三者均与临床病理特征具有紧密的关系。     

PETA-3/CD151在乳腺癌组织芯片中的表达及意义

目的 研究穿膜蛋白CD151在乳腺癌中的蛋白表达及与乳腺癌发生发展、转移和预后的关系.方法 构建乳腺癌组织芯片,采用免疫组化SP法检测CD151的蛋白表达,探讨与临床病理资料之间的关系.定性资料间的比较,采用χ2检验.P<0.05为差异有统计学意义.结果 CD151在正常乳腺组织中的阳性表达率为0.0%(0/39);在原位癌组织和浸润性乳腺癌组织中阳性表达率分别为33.3%(10/30)和59.0%(59/100),三组间比较差异有统计学意义(χ2=41.276,P=0.000).CD151蛋白表达与乳腺癌患者的年龄和组织学类型无关(P>0.05);但与肿瘤大小、ER/PR表达、淋巴结转移、肿瘤分化程度、TNM分期有密切关系(P<0.05).结论 CD151在乳腺癌组织中存在异常高表达并与乳腺癌发生发展、浸润转移有密切关系.检测可作为判断乳腺癌生物学行为和预后的重要指标,尤其对ER(-)/PR(-)乳癌的判断更具有价值.     

携带c-Met短发夹结构重组腺相关病毒的包装及滴度测定

目的：包装带有人U6启动子及c-Met短发夹环的重组腺相关病毒，为抑制c-Met的表达及进行肿瘤基因治疗研究奠定基础。方法：通过PCR方法将带有c-Met短发夹结构的片段构建至人U6启动子下游，将U6shMet构建至腺相关病毒载体质粒pSNAV中，将pSNAVUshMet转染BHK细胞，经G418筛选后加辅毒rHSV1-repcap包装成携带U6shMet的重组腺相关病毒。SDS-PAGE电泳分析病毒纯度，斑点杂交测定病毒滴度。结果：获得了2段带有c-Met短发夹结构的片段U6shMet1和U6shMet2,成功包装了2个带有U6shMet序列的重组腺相关病毒rAAVUshMet1和rAAVUshMet2，纯化后的病毒电泳分析条带清晰、杂带少，病毒滴度均为4×10¹²mg•L^-1。结论：成功构建了带有U6shMet的重组腺相关病毒rAAVUshMet，病毒纯度好、滴度高，为抑制c-Met的表达及进行肿瘤基因治疗提供了运载工具。