汉防己甲素联合顺铂对 NCI-H446细胞的影响及相关机制分析

目的：研究汉防己甲素(tetrandrine,TET)联合顺铂(cisplatin,DDP)对人小细胞肺癌细胞株 NCI-H446体外抗肿瘤效果,探讨 TET 增强 NCI-H446细胞对 DDP 敏感性的可能机制。方法体外培养人小细胞肺癌株 NCI-H446;药物作用48 h 后,采用 CCK-8法测定各组细胞活力;Edu 染色观察各组细胞增殖情况;Hoechst 染色检测各组细胞凋亡情况;Western blot 检测各组磷酸化Akt、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3、LC3等蛋白表达水平变化。结果低浓度的 TET 与 DDP 联合后可有效抑制 NCI-H446细胞株的增殖,诱导其凋亡;联合组半数抑制浓度较单药组显著降低;联合组磷酸化 Akt 表达显著下降,Bax、cleaved-caspase-3表达显著提高,抗凋亡蛋白 Bcl-2表达下降;自噬相关蛋白 LC3表达明显上调。结论低浓度 TET 与顺铂具有协同效应,其机制可能是通过上调促凋亡蛋白 Bax,下调抗凋亡蛋白 Bcl-2来诱导细胞凋亡;并且自噬可能在其中发挥重要作用。     

Survvin反义寡核苷酸诱导人胃癌细胞凋亡的作用

目的探讨生存素（Survivin）反义寡核苷酸（ASODN）诱导人胃癌细胞SGC7901凋亡的作用。方法设计合成特异性靶向Survivin的ASODN,将胃癌细胞株分为空白对照组（Sham组）、脂质体转染对照组（Lip组）、正义链转染对照组（Lip-SODN组）和ASODN转染组（Lip-ASODN组）。作用48h后,Westemblot法检测各组Survivin表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,免疫组化SP法检测细胞中PCNA表达情况。结果脂质体介导Survivin ASODN转染后的胃癌细胞Survivin蛋白表达明显下降;ASODN转染组细胞凋亡率明显高于各对照组（P均〈0．05）,各对照组间无统计学差异（P〉0．05）。ASODN转染后胃癌细胞中PCNA表达水平明显降低。结论 Survivin ASODN转染胃癌细胞能下调Survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,具有明显的抗癌作用。     

Survivin基因在牛蒡子苷元增强人肺癌H460细胞化疗敏感性中的作用

目的 研究Survivin基因在牛蒡子苷元促进肺癌细胞化疗敏感性中的作用.方法 应用RT-PCR技术从H460细胞中扩增全长人Survivin cDNA,并将其克隆至pcDNA3.1(+)表达载体,构建人Survivin基因真核表达质粒.将pcDNA3.1-Survivin重组质粒或空载体分别转染H460细胞,孵育24 h后,应用Western blot法检测Survivin过表达情况;转染细胞与牛蒡子苷元单独或联合顺铂处理,应用Annexin-Ⅴ/PI染色法检测细胞凋亡情况.结果 与未转染和转染空载体质粒的H460细胞相比,转染pcDNA3.1-Survivin重组质粒H460细胞Survivin水平显著增加,提高大约10倍.低剂量顺铂对H460细胞Survivin蛋白表达影响不显著,而牛蒡子苷元可显著抑制Survivin蛋白表达水平.当牛蒡子苷元与顺铂联合作用时,Survivin蛋白表达抑制程度更大.与转染空载体质粒相比,转染Survivin表达重组质粒的细胞对牛蒡子苷元单独或联合顺铂诱导的凋亡具有抗性,细胞凋亡比率显著下降.结论 牛蒡子苷元抑制人肺癌细胞中Survivin基因表达.牛蒡子苷元促人肺癌细胞顺铂敏感性与抑制Survivin通路有关.     

川芎嗪、顺铂对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响及机制探讨

目的观察川芎嗪、顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的NCI-H446细胞分为A、B、C、D组。A组常规培养,B组加入川芎嗪培养液100μg/ml,C组加入顺铂培养液2μg/ml,D组加入上述浓度的川芎嗪及顺铂培养液,均继续培养72 h。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,Westernblot法检测各组细胞中的Bcl-2、p53。结果 A组NCI-H446细胞凋亡率为5.23%±1.01%、Bcl-2蛋白为0.87±0.003 5、p53蛋白为0.19±0.002 3,B组分别为16.37%±1.23%、0.58±0.004 8、0.31±0.001 4,C组分别为19.2%±1.51%、0.32±0.003 9、0.46±0.002 5,D组分别为21.2%±1.79%、0.23±0.001 9、0.62±0.002 7。B、C、D组与A组相比,P均〈0.05;D组与B、C组相比,P均〈0.05。结论川芎嗪、顺铂联合应用可诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡,可能与其降低Bcl-2表达水平、升高p53表达水平有关。     

Celecoxib诱导SKOV3细胞株凋亡的机制探讨

目的探讨塞米昔布（Celecoxib）是否通过抑制Survivin表达来诱导人卵巢浆液性乳头状囊腺癌（SKOV3）细胞株的凋亡。方法选择SKOV3细胞株分成4组：对照组、Celecoxib组、转染空质粒组和Survivin转染组。各组细胞应用流式细胞仪检测细胞的凋亡率，应用Western印迹方法检测Survivin蛋白的表达。结果应用Celecoxib处理后，SKOV3细胞株的凋亡率上升，而Survivin蛋白表达明显下降，与对照组相比，差异具有显著性（P〈O．05）。转染了Survivin基因后，Survivin蛋白表达上调，而凋亡率明显下降，与Celecoxib组及转染空质粒组相比，差异具有显著性（P〈0．05）。结论Celecoxib可以诱导SKOV3细胞株的凋亡，这种凋亡是通过抑制Survivin蛋白的表达来实现的。     

川芎嗪、顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞株体外增殖的影响

目的观察川芎嗪、顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞株体外增殖的影响。方法将在体外培养的NCI-H446细胞分为川芎嗪组、顺铂组及川芎嗪联合顺铂组,分别加入相应药物,同时设空白对照组。MTT法检测各组细胞光密度值,进行集落形成实验,Western blot检测各组细胞的Cyclin D1、p16蛋白。结果加入川芎嗪、顺铂及川芎嗪＋顺铂培养后细胞变圆、坏死,存活的细胞减少。MTT实验显示在体外培养72 h及96 h时,川芎嗪组的光密度值分别为1.031±0.034、1.129±0.049,顺铂组分别为0.986±0.028、1.018±0.038,川芎嗪联合顺铂组分别为0.854±0.036、0.923±0.041,与空白对照组的1.336±0.067、1.437±0.045相比,P均〈0.05;川芎嗪联合顺铂组与单药组相比,P均〈0.05。细胞集落形成率川芎嗪组为17.9%±3.7%、顺铂组为15.8%±3.5%、川芎嗪联合顺铂组为11.2%±2.9%,与空白对照组的23.8%±4.2%相比,P均〈0.05;川芎嗪联合顺铂组与单药组相比,P均〈0.05。用药72 h后与对照组相比,川芎嗪组、顺铂组以及川芎嗪联合顺铂组p16蛋白表达水平升高（P均〈0.05）,川芎嗪联合顺铂组又高于单药组（P均〈0.05）;三组Cyclin D1蛋白表达水平下降（P均〈0.05）,川芎嗪联合顺铂组又高于单药组（P均〈0.05）。结论川芎嗪、顺铂均可抑制NCI-H446的增殖,二者联合应用抑制作用更明显,同时可降低细胞Cyclin D1的表达水平、升高p16的表达水平。     

Survivin在非小细胞肺癌中的表达及其与p53、细胞凋亡的关系

目的探讨Survivin基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与p53、细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化方法检测60例NSCLC和16例肺良性组织中Survivin和p53的表达，用TUNEL技术检测NSCLC的凋亡情况。结果肺癌组织中Survivin蛋白表达的阳性率为63.3％（38／60），而在良性肺疾病肺组织均无表达；Survivin蛋白的表达与肺癌TNM分期、淋巴结转移和细胞分化程度有密切关系，但与肿瘤组织学类型、患者年龄及性别无关。p53蛋白表达阳性的NSCLC中，Survivin蛋白表达阳性率（80．5%）明显高于p53蛋白表达阴性者（26．3％）．P〈0．01。Survivin蛋白在NSCLC中的表达水平与癌细胞的凋亡指数（AI）星负相关（r=-0．231，P〈0．05）。结论Survivin基因异常表达引起的细胞凋亡抑制在NSCLC的发生中起一定作用，抑癌基因p53失活和Survivin基因过度表达可能在NSCLC癌变中起协同作用。     

蛋白酶体抑制剂单用或联合顺铂对人胃癌细胞的抑制效应

背景：蛋白酶体抑制剂通过阻断泛素．蛋白酶体通路中的蛋白降解，致使错误折叠蛋白或受破坏蛋白堆积．启动热休克反应并进一步导致细胞死亡，对多种恶性肿瘤细胞具有抑制作用。目的：探讨蛋白酶体抑制剂Z-Leu—Leu—Phe-CHO（ZLLFC）单用或联合顺铂对人胃癌细胞株SGC-7901体外增殖和凋亡的影响及其对肿瘤多药耐药相关切除修复交叉互补基因1（ERCC1）mRNA表达的影响。方法：将ZLLFC和顺铂单独或联合作用于SGC-7901细胞。以甲基噻唑基四唑（MITT）法检测细胞存活率，透射电子显微镜观察凋亡细胞形态，流式细胞仪检测细胞凋亡率．逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测ERCC1 mRNA表达。结果：ZLLFC或顺铂单独作用后，SGC-7901细胞存活率较对照组显著降低（P〈0．01），呈现轻度凋亡形态；ZLLFC联合顺铂组细胞存活率较单用顺铂组显著降低（P〈O．01），细胞凋亡率显著升高（P〈O．01），呈现明显凋亡形态。联合组ERCC1 mRNA表达显著低于单用顺铂组（P〈0．01）。结论：蛋白酶体抑制剂ZLLFC能轻度抑制人胃癌细胞株SGC．7901生长，诱导细胞凋亡，与顺铂联用具有协同抑制效应。ZLLFC可能通过下调ERCC1转录水平逆转顺铂耐药，从而增强顺铂的抗肿瘤作用。     

生存素反义寡脱氧核苷酸对人胃癌细胞株凋亡的影响

背景：生存素（survivin）是凋亡抑制蛋白（IAP）基因家族成员之一，在多数肿瘤组织中高表达。目的：观察生存素反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞株凋亡的影响。方法：将体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901分为不同浓度生存素ASODN组、无关寡脱氧核苷酸（N-ODN）组和对照组。以四甲基偶氮唑蓝（MTT）试验检测生存素ASODN对SGC-7901细胞生长的影响；通过形态学观察、DNA电泳和流式细胞仪分析反映细胞凋亡情况；以端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定（TRAP-ELISA）方法检测端粒酶活性。结果：生存素ASODN能抑制SGC-7901细胞生长，诱导细胞凋亡，抑制端粒酶活性。凋亡细胞形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；DNA电泳呈现凋亡特征性阶梯状条带；流式细胞仪分析显示G1期前出现亚二倍体凋亡峰。结论：生存素ASODN能诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡，抑制细胞生长及其端粒酶活性。     

热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响及机制探讨

目的观察热疗联合顺铂对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的NCI-H446细胞随机分为A、B、C、D组,A组常规培养不进行特殊处理,B组将细胞消化后放置离心管中在42℃水浴中加热2 h,C组加入含2μg/mL顺铂的培养液4μg/孔,D组先经过水浴处理后加入顺铂。继续培养72 h后,采用流式细胞仪测算各组细胞凋亡率,采用Western blot法检测各组细胞中的Bcl-2、Bax。结果 NCI-H446细胞凋亡率A组为4.25%±0.56%、B组为8.12%±0.64%、C组为10.02%±0.82%、D组为12.12%±0.49%,B、C、D组细胞凋亡率与A组比较,P均<0.05;D组与B、C组比较,P均<0.05。NCI-H446细胞中Bcl-2、Bax相对表达量A组分别为0.89±0.002 8、0.18±0.001 8,B组分别为0.61±0.004 2、0.32±0.002 0,C组分别为0.30±0.003 6、0.48±0.001 4,D组分别为0.21±0.001 7、0.64±0.002 5。B、C、D组与A组比较,P均<0.05;D组与B、C组比较,P均<0.05。结论热疗联合顺铂可诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡,其机制与降低细胞中Bcl-2表达、升高Bax表达有关。     

Survivin与骨肉瘤关系的研究进展

Survivin是一个新发现的凋亡抑制蛋白（IAP）家族成员.IAP家族是继Bcl-2家族后发现的又一类凋亡调控蛋白.其广泛表达于人的胚胎组织和各种肿瘤组织,但仅在少数正常成人组织表达[1～3].Survivin具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能,是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子.研究发现骨肉瘤组织中Survivin升高,不仅为骨肉瘤的发病原因提供了更为确切的研究的方向,也为其靶向治疗提供了良好的前景.     

小剂量顺铂诱导的胃癌AGS细胞凋亡及对Survivin表达的影响

目的探讨小剂量顺铂(DDP)诱导胃癌细胞株AGS(ATCC CRL-1739)凋亡及对凋亡抑制蛋白Survivin表达的影响,为晚期胃癌DDP治疗策略提供理论依据。方法 AGS细胞经小剂量DDP处理后用MTS法检测癌细胞增生的抑制,流式细胞仪测定细胞凋亡率,RT-PCR检测Survivin mRNA及Western blot法检测Survivin蛋白的表达。结果小剂量DDP可抑制AGS细胞的增生并诱导其凋亡,肿瘤细胞的凋亡与DDP浓度及作用时间有依赖关系,但至一定浓度后,凋亡达最高,再增加浓度后仅增加坏死率,5 mg/L以上DDP在作用24 h后凋亡率不再增加。10 mg/L的DDP对癌细胞有较强时效关系的细胞毒性。胃癌AGS细胞Survivin mRNA的表达随DDP浓度升高而增加,至DDP达2 mg/L时表达最高,再增高浓度时反而下降;Survivin蛋白表达与其mRNA表达一致。结论小剂量DDP对胃癌细胞株AGS有凋亡诱导作用;对Survivin mRNA及蛋白表达均有诱导作用。     

健脾散结方对Lewis肺癌小鼠细胞相关凋亡蛋白及端粒酶活性的影响

目的观察健脾散结方对Lewis肺癌小鼠细胞相关凋亡蛋白及端粒酶活性的影响。方法选用C57BL/6小鼠接种Lewis肺癌细胞建立动物模型,按实验分组分别干预21 d,观察肿瘤生长情况,采用SABC免疫组化法检测Survivin、c-myc表达,PCR-ELISA法检测端粒酶活性。结果健脾散结方组、顺铂组、联合组的抑瘤率分别为42.36%、57.38%、69.71%;与模型组比较,各药组均可降低Survivin与c-myc表达(P0.05或P0.01),且联合组最明显,健脾散结方与顺铂有协同作用;各药组端粒酶活性均低于模型组(P0.05),且健脾散结方组、顺铂组与联合组比较均有显著差异(P0.05)。结论健脾散结方抑制肿瘤作用可能与下调Survivin、c-myc表达,诱导细胞凋亡,抑制端粒酶活性有关。     

顺铂联合热疗对人胃癌耐药细胞增殖及耐药相关基因Survivin表达的影响

目的通过体外实验观察顺铂联合热疗对人胃癌耐药细胞增殖及多药耐药基因Survivin表达的影响。方法选取人胃癌SGC7901/DDP细胞系进行体外培养。应用流式细胞术(FCM)检测对照组、化疗组、热疗组及热化疗组SGC7901/DDP细胞增殖的情况,并用FCM法半定量检测各组细胞中Survivin蛋白表达的变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测4组SGC7901/DDP细胞中Survivin mRNA表达的变化。结果热疗及顺铂联合热疗都可以降低人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP的增殖水平,并且顺铂联合热疗作用效果最明显。单纯热疗及顺铂联合热疗作用后,SGC7901/DDP细胞中Survivin蛋白及mRNA的表达明显下降,并且并顺铂联合热疗作用后下降最明显。结论热疗、顺铂联合热疗能够抑制人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的增殖,并可诱导该细胞凋亡,抑制细胞周期诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制之一;下调Survivin蛋白及mR-NA的表达可能是热疗逆转人胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP多药耐药性的机制之一。     

Aurora A激酶抑制剂VX-680对人宫颈癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨Aurora A激酶抑制剂VX-680对人宫颈癌细胞化疗敏感性的影响。方法以Aurora A激酶抑制剂VX-680抑制宫颈癌细胞株Caski中Aurora A的表达,再将宫颈癌细胞用不同浓度顺铂处理,Western Blot检测Aurora A蛋白受抑制情况,用流式细胞仪分析Aurora A表达下调后宫颈癌细胞生长抑制率和细胞凋亡率的变化。结果 Aurora A表达下调使顺铂对宫颈癌细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均升高（P均〈0.01）。结论 Aurora A激酶抑制剂VX-680可使人宫颈癌细胞对顺铂的敏感性增强,抑制Aurora A可望提高顺铂对宫颈癌的治疗效果。     

Survivin与肺癌

肿瘤的发生不仅和细胞增殖或分化异常有关，细胞凋亡的下降亦为重要机制之一。Survivin基因是新近发现的一种新的凋亡抑制蛋白，选择性表达于常见的恶性肿瘤，而在癌旁正常组织和成人分化组织并不表达。近年来的研究发现，survivin在肺癌组织中也有高表达，本文着重对survivin与肺癌作一综述。     

槲皮素对小细胞肺癌细胞株H446的凋亡调控作用

目的初步探讨槲皮素对人小细胞肺癌细胞株凋亡的影响。方法以不同浓度槲皮素培养H446细胞24 h后,运用免疫荧光染色法检测细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果以0、15、30、60μmol/L浓度的槲皮素作用于细胞株24 h后,细胞凋亡率分别为(1.30±0.32)%(12.95±0.08)%,(16.8±0.19)%,(25.81±1.01)%,各组间均值具有显著性差异(P0.01),并且随着槲皮素浓度的增加,H446细胞凋亡率逐渐增加,两者呈正性相关。采用免疫荧光染色法检测发现,随着槲皮素作用浓度的增加,抗凋亡蛋白BCL-2的表达信号亦逐渐降低。结论槲皮素对人小细胞肺癌细胞株有促进凋亡的作用,其机制可能与抑制抗凋亡蛋白BCL-2的表达有关。     

存活素的研究进展及其与脑缺血的关系

凋亡蛋白抑制因子（inhibitor of apoptosis protein，IAP）是一类分布广泛的抗凋亡因子。而存活素（Survivin）是最近新发现的一种IAP家族成员，能在多器官中表达。与细胞的增殖有密切的关系。本文综述了Survivin的结构和功能。组织分布，抗凋亡机制以覆与脑缺血的关系，为临床研究Survivin治疗缺血性脑血管病提供理论依据。     

凋亡调节蛋白Survivin与类风湿关节炎

凋亡调节蛋白（Survivin）是最近新发现的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins，IAP）家族的新成员，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡的重要因子。类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以关节滑膜浸润性增生为主要病理改变的自身免疫疾病。研究表明，滑膜细胞周期失调及凋亡异常可导致关节滑膜组织过度增生、肥厚，从而促进RA发生。这些异常的凋亡与凋亡相关基因Fas、Bcl-2、p53、survivin等表达异常有关。本文就Survivin与RA之间的关系综述如下。[第一段]     

β-榄香烯联合热化疗对肺腺癌患者A549细胞系中蛋白表达的影响

目的 探讨β-榄香烯联合顺铂和热疗对非小细胞肺癌A549细胞系杀伤的可能生物学机制.方法 不同浓度榄香烯联合热疗和顺铂处理细胞后,用Western blot检测Star3、p21 Wafl/Cip1、Survivin蛋白表达.结果 37℃下随着榄香烯浓度的升高,A549细胞中Stat3、磷酸化Stat3(pStat3)和p21 Waf1/Cip1蛋白的表达均升高,且高、低浓度组间差异有统计学意义,Survivin蛋白未见明显变化；联合4 μg/ml顺铂后,高浓度榄香烯下p21Waf1/Cip1蛋白、Survivin蛋白以及Star3和pStat3蛋白的表达全部降低；42℃下,榄香烯60 μg/ml组的Stat3蛋白无明显变化,但是pStat3蛋白、p21 Waf1/Cip1蛋白和Survivin蛋白均显著下降；榄香烯15 μg/ml联合4 μg/ml顺铂组Stat3和pStat3蛋白表达均上升,而Survivin表达降低.结论 37℃下高浓度榄香烯通过p21Waf1/Cip1蛋白高表达抑制A549细胞的生长；高浓度榄香烯联合顺铂主要通过抑制Stat3和pStat3蛋白的表达及使Survivin蛋白降低,抑制细胞生长；42℃下,高浓度榄香烯可能通过抑制Stat3磷酸化为pStat3的过程降低Survivin蛋白表达,促进细胞凋亡；低浓度榄香烯联合顺铂通过降低Survivin蛋白表达导致协同杀伤效应.