高糖对THP-1巨噬细胞CD36表达及脂质蓄积的影响

目的 观察高糖对THP-1巨噬细胞清道夫受体CD36表达和脂质蓄积的影响。方法 用不同浓度的D-葡萄糖（分别为5.6、11、20、30及35 mmol/L）、50 mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、50 mg/L ox-LDL＋20 mmol/L D-葡萄糖孵育THP-1巨噬细胞24 h,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,定量PCR与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达。结果 随着D-葡萄糖处理THP-1巨噬细胞浓度的增加,CD36 mRNA和蛋白的表达逐渐增加（P<0.05）;高糖可协同ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达上调（P<0.05）,并增加细胞内总胆固醇水平（P<0.05）。结论 高糖可诱导THP-1巨噬细胞CD36的表达上调,并促进细胞内脂质蓄积。     

血管生成素1通过LXRα途径调节THP-1源性泡沫细胞ABCA1、ABCG1表达及胆固醇流出

目的观察血管生成素1(Ang-1)通过LXRα调节THP-1源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1表达和胆固醇流出。方法 160 nmol/L佛波酯诱导人THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育,使其荷脂形成泡沫细胞,常规体外培养细胞;实验分为对照组和Ang-1处理组;液体闪烁计数仪检测细胞胆固醇流出水平,高效液相色谱检测细胞内脂质成分,实时荧光定量PCR和Western blot检测ABCA1、ABCG1表达;LXRα激动剂T0901317或抑制剂GGPP分别处理THP-1源性泡沫细胞。结果Ang-1显著抑制THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出,下调ABCA1、ABCG1表达;LXRα激活剂拮抗Ang-1对ABCA1、ABCG1表达及胆固醇流出的抑制作用。结论 Ang-1可能通过抑制LXRα表达,降低ABCA1和ABCG1表达水平,减少THP-1源性泡沫细胞内胆固醇流出。     

同型半胱氨酸对泡沫细胞中LXRα-ABCA1信号通路的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)通过影响脂代谢调控基因LXRα及其下游靶基因ABCA1和ABCG1的表达致人类急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性巨噬细胞泡沫化在脂代谢紊乱中的作用。方法:培养THP-1单核细胞,佛波酯、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同诱导,采用中性红对巨噬细胞染色,并应用流式细胞技术检测巨噬细胞表面CD14的表达,测定巨噬细胞的含量。分为5组,分别加入0、10、50、100、200μmol/L的Hcy培养24h;采用RT-PCR法检测LXRα、ABCA1、ABCG1的mRNA表达;采用Western Blot法检测LXRα、ABCA1、ABCG1的蛋白表达。结果:实验组(Hcy 10、50、100、200μmol/L)泡沫细胞计数阳性百分率均较对照组升高(均P0.05),其中以Hcy 100μmol/L组升高明显。在Hcy诱导浓度50μmol/L时巨噬细胞51.26%,CD14表达阳性率53.36%;诱导浓度100μmol/L时巨噬细胞98.5%,CD14表达阳性率73.37%。在不同浓度Hcy干预下,泡沫细胞内LXRα、ABCA1、ABCG1的mRNA及蛋白表达均低于对照组(均P0.05)。结论:Hcy可降低THP-1源性泡沫细胞内LXRα、ABCA1、ABCG1mRNA及蛋白水平的表达,LXRα可能是Hcy影响脂代谢LXRα-ABCA1信号通路中的靶基因。     

冠心病患者巨噬细胞胆固醇流出的变化

目的研究冠心病患者血液中单核细胞分化为巨噬细胞并荷脂后胆固醇流出的影响机制。方法分离冠心病患者(试验组)和正常人群(对照组)外周静脉血中单核细胞,并用佛波酯诱导为巨噬细胞,收集分离血清,检测各项血脂指标并备用。细胞用[3H]胆固醇处理24 h使其荷脂,然后分为四组:对照组+正常血清、对照组+高脂血清、试验组+正常血清及试验组+高脂血清。分别检测ABCA1、ABCG1表达及胆固醇流出率。结果与对照组比较,试验组单核/巨噬细胞胆固醇流出能力受损,油红O染色显示细胞内脂质蓄积增加,细胞内胆固醇流出减少,但ABCA1和ABCG1的表达改变不明显。与正常血清比较,试验组及对照组中高脂血清明显影响胆固醇流出能力,细胞内脂质蓄积增加,细胞内胆固醇流出减少,但不影响ABCA1和ABCG1的表达。结论冠心病患者巨噬细胞胆固醇流出能力受损,可能与动脉粥样硬化性血管疾病的发生相关。     

小檗碱调节肝X受体α去乙酰化促进THP-1

目的 观察小檗碱对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达及其细胞内胆固醇流出的影响,并探讨肝x受体α(LXR-α)去乙酰化在此过程中的作用.方法 用不同浓度的小檗碱(0、5、10、20 μmol/L)处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24 h,或以20 μmol/L小檗碱处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞不同的时间(0、6、12、24 h).采用Western Blot检测ABCA1、LXR-α和乙酰化LXR-α的蛋白表达,液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出,高效液相色谱法测定细胞内胆固醇浓度.结果 与对照组比较,小檗碱呈浓度(0～20 μmol/L)和时间依赖性(0～24 h)上调巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达和下调乙酰化LXR-α的表达,增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇的流出,减少细胞内胆固醇的含量.上述效应在20 μmol/L小檗碱处理THP-1巨噬细胞24 h后达到最大值.结论 小檗碱能上调THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,并促进细胞内胆固醇流出,这种效应与调节LXR-α乙酰化有关.     

白细胞介素4对THP-1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达和胆固醇流出的影响

目的探讨白细胞介素4(IL-4)对人类单核细胞株THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达及细胞内胆固醇流出的影响及机制。方法 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞加入不同浓度的IL-4,处理不同时间,以及加入肝X受体α(LXRα)激动剂T0901317处理后,采用半定量RT-PCR和Western blot分别检测细胞ABCA1及LXRαmRNA和蛋白质的表达,采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,使用液体闪烁计法检测细胞内胆固醇流出,采用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的量。结果 IL-4能呈浓度和时间依赖性地降低THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达(P0.05),并减少细胞内胆固醇流出。加入T0901317后能使IL-4对ABCA1的抑制作用减弱(P0.05)。结论 IL-4能抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达及胆固醇的流出。LXRα激活能逆转IL-4对ABCA1的抑制作用。     

NO/PKG对THP-1巨噬细胞ABCA1基因mRNA表达和胆固醇含量的影响

目的:探讨THP-1巨噬细胞泡沫化过程中NO/PKG的变化,以及NO/PKG对THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)基因mRNA表达和胆固醇含量的影响。方法:THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞,用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理,油红O染色观察巨噬细胞脂滴,酶标仪测定一氧化氮(NO)的释放;用一氧化氮供体L-精氨酸和硝普钠(SNP)、乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA)、PKG激动剂处理巨噬细胞,RT-PCR法测定细胞ABCA1基因mRNA的表达,高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内胆固醇的含量变化。结果:ox-LDL可导致THP-1巨噬细胞脂质的蓄积和NO释放的增加,实验组NO释放量较对照组显著升高(P<0.05),实验组中50mg/L组、100mg/L组、200mg/L组与25mg/L组相比显著升高(P<0.05)。用PKG激动剂处理巨噬细胞后促进ABCA1基因mRNA表达上调(P<0.05);用PKG激动剂、L-精氨酸、SNP处理后的巨噬细胞内胆固醇较对照组显著减少(P<0.05)。EGTA能显著增加细胞内胆固醇含量(P<0.05)。结论:NO/PKG能降低细胞内胆固醇,其机制可能是PK...     

高糖依赖过氧化体增殖物激活型受体γ介导THP-1巨噬细胞CD36表达及脂质蓄积

目的　观察高糖诱导THP-1巨噬细胞CD36表达及脂质蓄积是否由过氧化体增殖物激活型受体γ（PPARγ）所介导。方法　分别用20　mmol/L　D-葡萄糖（高糖）、高糖＋10　mmol/L　GW9662（PPARγ拮抗剂）、50　mg/L氧化型低密度脂蛋白＋高糖、50　mg/L氧化型低密度脂蛋白＋高糖＋10　mmol/L　GW9662共同孵育THP-1巨噬细胞24　h;采用逆转录聚合酶链反应检测CD36、PPARγ　mRNA的表达;用Western　blot分别检测CD36、PPARγ蛋白质的表达;用油红O染色观测细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平。结果　GW9662明显抑制高糖所诱导的THP-1巨噬细胞CD36的表达及脂质蓄积,CD36　mRNA和蛋白质表达明显下降（P<0.05）;细胞内脂滴明显减少,总胆固醇含量明显下降（P<0.05）。结论　高糖所诱导的CD36表达及脂质蓄积可能是由PPARγ所介导的。本研究将为糖尿病性动脉粥样硬化病变的防治积累有价值的实验资料。     

载脂蛋白A1对胆固醇逆转运及三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

目的 观察载脂蛋白A1(apoAl)对人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性泡沫细胞内胆固醇、胆固醇酯含量和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCAl)表达的影响和机制.方法 以50 ng/ml的佛波酯诱导人THP-1,使其分化为巨噬细胞,再经50μg/ml氧化型低密度脂蛋白充分诱导使其转变为负脂的泡沫细胞;然后用不同浓度apoAl(5μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20 μg/ml)孵育泡沫细胞24 h,以apoAl(10μg/ml)孵育泡沫细胞6 h、12 h、24 h.采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,用氧化酶法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量;用反转录聚合酶链反应检测不同浓度apoAl干预泡沫细胞后ABCA1 mRNA的表达;用免疫荧光法检测经不同浓度和不同时间apoAl和ABCAl多克隆抗体干预泡沫细胞后ABCA1蛋白的表达.结果 (1)THP-1经佛波酯(50 ng/ml)和氧化型低密度脂蛋白(50μg/ml)分别干预48 h后可成功诱导为富含脂质的泡沫细胞;(2)apoA1可促进THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇逆向转运,减少细胞内胆固醇含量,呈浓度依赖性和时间依赖性;(3)随着apoA1干预浓度增加,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内ABCA1 mRNA的表达变化不显著,但蛋白表达增加,0 μg/ml与5 μg/ml、10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml apoAl干预浓度下油红O染色阳性细胞率分别为(55±4)%与(43±9)%、(33±4)%、(28±1)%、(26±2)%,差异有统计学意义(均P<0.05);(4)ABCAl抗体干预可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白的表达.结论 apoA1-ABCA1通路参与泡沫细胞胆固醇逆向转运,apoA1起关键作用,apoA1增加ABCA1蛋白的表达可能与降低ABCA1蛋白的降解有关.     

松龄血脉康对THP-1源性泡沫细胞ABCA1蛋白表达及细胞内胆固醇含量的影响

目的 观察松龄血脉康对THP-1源性泡沫细胞腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达及细胞内胆固醇含量的影响及其防治动脉粥样硬化(AS)的可能机制.方法 培养THP-1细胞,160 nmol/L佛波脂(PAM)使之巨噬化,用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白使巨噬细胞形成泡沫细胞.0.81 mg/L松龄血脉康、10 μmol/L罗格列酮分别和泡沫细胞孵育6、12、24 h;0.40、0.81、1.6 mg/L的松龄血脉康、1、10、20 μmol/L的罗格列酮与泡沫细胞孵育24 h.用流式细胞技术检测ABCA1蛋白表达的水平,并测定各组细胞内胆固醇含量.结果 松龄血脉康组、罗格列酮组均增加ABCA1蛋白的表达,而细胞内胆固醇含量减少,与对照组相比,均有显著性差异(P＜0.05),且有浓度、时间依赖性.松龄血脉康组与罗格列酮组无显著性差异(P>0.05).结论 松龄血脉康具有与罗格列酮增加ABCA1蛋白及降低胆固醇含量相似的作用.增加ABCA1蛋白表达,降低细胞内胆固醇含量可能是中药松龄血脉康抗AS的机制之一.     

miRNA-638对巨噬细胞内胆固醇外流的影响及其发生机制研究

背景流行病学研究表明生活方式、饮食结构等外部因素的改变与遗传因素相互作用导致人体脂代谢紊乱,而胆固醇逆转运过程能够维持体内胆固醇稳态。目的探讨miRNA-638对巨噬细胞内胆固醇外流的影响及其发生机制。方法实验于2016年9月-2017年9月完成。采用100 ng/ml佛波酯诱导人髓系白血病单核细胞(THP-1)贴壁并分化为巨噬细胞,根据预实验结果选取浓度为20 nmol/L的miRNA-638模拟物及其阴性对照物进行转染。采用NBD-胆固醇分别检测转染miRNA-638模拟物及其阴性对照物巨噬细胞经载脂蛋白AI(ApoAI)、高密度脂蛋白(HDL)及标准血清外流液介导的胆固醇外流率;采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测转染miRNA-638模拟物及其阴性对照物巨噬细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)和极低密度脂蛋白受体(VLDLR)mRNA及其相对表达量。结果转染miRNA-638模拟物巨噬细胞经ApoAI外流液介导的NBD-胆固醇外流率低于转染阴性对照物巨噬细胞(P<0.05);转染miRNA-638模拟物巨噬细胞与转染阴性对照物巨噬细胞经HDL、标准血清外流液介导的NBD-胆固醇外流率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。转染miRNA-638模拟物巨噬细胞的ABCA1、ABCG1、VLDLR mRNA相对表达量低于转染阴性对照物巨噬细胞(P<0.05)。转染miRNA-638模拟物巨噬细胞中ABCA1、ABCG1相对表达量低于转染阴性对照物巨噬细胞(P<0.05);转染miRNA-638模拟物巨噬细胞与转染阴性对照物巨噬细胞中VLDLR相对表达量比较,差异无统计意义(P>0.05)。结论miRNA-638可减少由ApoAI介导的巨噬细胞内胆固醇外流,该作用可能是通过调控ABCA1/ABCG1的表达实现的。     

ATP-binding cassette transporters G1 and G4 mediate cellular cholesterol efflux to high-density lipoproteins

The mechanisms responsible for the inverse relationship between plasma high-density lipoprotein (HDL) levels and atherosclerotic cardiovascular disease are poorly understood. The ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) mediates efflux of cellular cholesterol to lipid-poor apolipoproteins but not to HDL particles that constitute the bulk of plasma HDL. We show that two ABC transporters of unknown function, ABCG1 and ABCG4, mediate isotopic and net mass efflux of cellular cholesterol to HDL. In transfected 293 cells, ABCG1 and ABCG4 stimulate cholesterol efflux to both smaller (HDL-3) and larger (HDL-2) subclasses but not to lipid-poor apoA-I. Treatment of macrophages with an liver X receptor activator results in up-regulation of ABCG1 and increases cholesterol efflux to HDL. RNA interference reduced the expression of ABCG1 in liver X receptor-activated macrophages and caused a parallel decrease in cholesterol efflux to HDL. These studies indicate that ABCG1 and ABCG4 promote cholesterol efflux from cells to HDL. ABCG1 is highly expressed in macrophages and probably mediates cholesterol efflux from macrophage foam cells to the major HDL fractions, providing a mechanism to explain the relationship between HDL levels and atherosclerosis risk.     

Cholesterol efflux pathways and other potential mechanisms involved in the athero-protective effect of high density lipoproteins

Plasma high density lipoprotein (HDL) levels bear a strong independent inverse relationship with atherosclerotic cardiovascular disease. Although HDL has anti-oxidant, anti-inflammatory, vasodilating and anti-thrombotic properties, the central anti-atherogenic activity of HDL is likely to be its ability to remove cholesterol and oxysterols from macrophage foam cells, smooth muscle cells and endothelial cells in the arterial wall. To some extent, the pleotropic athero-protective properties of HDL may be related to its ability to promote sterol and oxysterol efflux from arterial wall cells, as well as to detoxify oxidized phospholipids. In cholesterol-loaded macrophages, activation of liver X receptors (LXRs) leads to increased expression of adenosine triphosphate (ATP) binding cassetter transporter (ABCA1), ATP binding cassetter transporter gene (ABCG1) and apoE and promotes cholesterol efflux. ABCA1 stimulates cholesterol efflux to lipid-poor apolipoproteins, whilst ABCG1 promotes efflux of cholesterol and oxysterols to HDL. Despite some recent setbacks in the clinical arena, there is still intense interest in therapeutically targeting HDL and macrophage cholesterol efflux pathways, via treatments with niacin, cholesterol ester transfer protein inhibitors, LXR activators and infusions of apoA-1, phospholipids and peptides.     

脂联素对泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达及细胞内胆固醇含量的影响

目的通过研究脂联素对细胞内胆固醇外流的影响以及三磷酸腺苷结合盒转运子A1的功能变化,探讨其抗动脉粥样硬化作用的可能机制。方法以THP-1来源的泡沫细胞模型为研究对象,用脂联素进行体外干预;采用逆转录聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验和高效液相色谱等方法测定干预前后三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达和细胞内胆固醇含量的变化。结果脂联素在体外上调泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1mRNA和蛋白的表达,与载脂蛋白A1联合作用还能进一步增加细胞内胆固醇的流出。脂联素单独作用促进细胞内胆固醇酯转化为游离胆固醇。结论脂联素上调泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达,并促进其介导的细胞内游离胆固醇的外流;脂联素还能促进细胞内胆固醇酯的水解。     

MicroRNA-27a/b regulates cellular cholesterol efflux,influx and esterification/hydrolysis in THP-1 macrophages

Rationale

Macrophage cholesterol homeostasis maintenance is the result of a balance between influx, endogenous synthesis, esterification/hydrolysis and efflux. Excessive accumulation of cholesterol leads to foam cell formation, which is the major pathology of atherosclerosis. Previous studies have shown that miR-27 (miR-27a and miR-27b) may play a key role in the progression of atherosclerosis.

Objective

We set out to investigate the molecular mechanisms of miR-27a/b in intracellular cholesterol homeostasis.

Methods and results

In the present study, our results have shown that the miR-27 family is highly conserved during evolution, present in mammals and directly targets the 3′ UTR of ABCA1, LPL, and ACAT1. apoA1, ABCG1 and SR-B1 lacking miR-27 bind sites should not be influenced by miR-27 directly. miR-27a and miR-27b directly regulated the expression of endogenous ABCA1 in different cells. Treatment with miR-27a and miR-27b mimics reduced apoA1-mediated cholesterol efflux by 33.08% and 44.61% in THP-1 cells, respectively. miR-27a/b also regulated HDL-mediated cholesterol efflux in THP-1 macrophages and affected the expression of apoA1 in HepG2 cells. However, miR-27a/b had no effect on total cellular cholesterol accumulation, but regulated the levels of cellular free cholesterol and cholesterol ester. We further found that miR-27a/b regulated the expression of LPL and CD36, and then affected the ability of THP-1 macrophages to uptake Dil-oxLDL. Finally, we identified that miR-27a/b regulated cholesterol ester formation by targeting ACAT1 in THP-1 macrophages.

Conclusion

These findings indicate that miR-27a/b affects the efflux, influx, esterification and hydrolysis of cellular cholesterol by regulating the expression of ABCA1, apoA1, LPL, CD36 and ACAT1.     

ATP结合盒转运蛋白A1研究进展

动脉粥样硬化是心脑血管疾病的重要基础病理改变,而胆固醇在巨噬细胞内聚集和泡沫细胞形成是动脉粥样硬化的始动环节。ATP结合盒转运蛋白Al（ABCAl）是一种重要的胆固醇流出调节蛋白,能介导细胞内胆固醇逆向转运到细胞外,使之与载脂蛋白A-Ⅰ结合并包装形成高密度脂蛋白（HDL）的膜转运蛋白。因此,ABCAl是调节血浆HDL及细胞内胆固醇水平的重要膜蛋白,ABCAl的表达水平与动脉粥样硬化的发生关系密切。同时,细胞内脂质、核受体PPAR、LXR、RXR和细胞因子等对ABCAl蛋白表达具有凋控作用。本文将ABCAl研究进展作一综述。     

C反应蛋白和高密度脂蛋白对血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的观察C反应蛋白和高密度脂蛋白对单核细胞株THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达的影响,以及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的变化与细胞内胆固醇含量变化的关系。方法THP-1单核细胞株经佛波酯诱导分化为巨噬细胞。用不同浓度C反应蛋白或高密度脂蛋白在体外干预巨噬细胞,测定干预前后巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达的变化,并采用高效液相色谱测定巨噬细胞内胆固醇含量的变化。结果与对照组相比,C反应蛋白或高密度脂蛋白均可以诱导THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),C反应蛋白使巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量显著增加(P<0.01),而高密度脂蛋白使细胞内总胆固醇和胆固醇酯显著降低(P<0.01)。结论C反应蛋白和高密度脂蛋白都能引起THP-1来源的巨噬细胞表面血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达上调,提示血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1并不是介导巨噬细胞参与炎症反应病理生理变化的关键性受体。