海藻酸钠-明胶协同固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的研究

以海藻酸钠和明胶为载体,对S-腺苷甲硫氨酸合成酶进行固定化。再用戊二醛对其进一步交联,增强固定化酶的稳定性。考察了海藻酸钠和明胶质量分数、CaCl2质量分数、酶和载体比例以及交联剂戊二醛体积分数等因素对固定化酶的影响。结果表明,最佳固定化条件为:海藻酸钠质量分数2.0%、明胶质量分数1.0%、CaCl2质量分数4.0%、固定化酶量为2.5 g/L凝胶、戊二醛体积分数0.6%。交联固定化酶热稳定性得到大幅度提高,在50℃下保温5 h仍保留72%的活力,而游离酶则完全失活。交联固定化酶在碱性溶液中的稳定性较高,在pH=8.0～9.0的缓冲液中4℃保温10 h酶活性仍保留87%以上。将交联固定化酶用于S-腺苷甲硫氨酸的合成,连续反应8批次后酶活性仍保留65%。     

大孔树脂D380固定化硫酸软骨素裂解酶

目的以大孔树脂D380为载体,戊二醛为交联剂,进行硫酸软骨素裂解酶(ChSase)的固定化,并考察固定化酶的酶学性质。方法分别考察加酶量、吸附温度、吸附时间、吸附pH值、戊二醛交联浓度、交联时间及交联温度对ChSase固定化效果的影响,并分析该固定化酶的最适反应温度、最适反应pH值、米氏常数(Km)及其操作稳定性。结果ChSase的最佳固定化条件为:加酶量150U/g树脂,吸附温度15℃,吸附时间6h,吸附pH值7.0,戊二醛交联浓度0.01%,交联时间3h,交联温度4℃。以此条件制备的固定化酶,其酶结合效率可达79.1%。该固定化ChSase的最适反应温度为45℃;最适反应pH值为7.0;Km达1.46×10-1g/L,较游离酶高;具有较好的操作稳定性。结论以大孔树脂D380为载体固定化ChSase是可行的,所得固定化酶有较高的使用效率和稳定性,适合于工业化生产。     

固定化黄孢原毛平革菌木素过氧化物酶的研究

用大孔吸附树脂进行黄孢原毛平革菌来源的木素过氧化物酶固定化试验,筛选出固定化效果较好的XAD7HP大孔树脂,研究了其固定化条件。结果表明,当树脂1.0g,酶液pH4.5,加酶量87.2U,吸附温度25℃,吸附4h,戊二醛质量分数0.2%,戊二醛处理时间120min,可获得最佳的固定化效果,固定化酶活力可达到16U/g(对载体)。     

磁性中性蛋白酶的固定化研究

为了克服游离酶在实际工业生产中稳定性不好、活性易丧失、不易回收、重复利用率较低的缺点,对中性蛋白酶进行了固定化研究。将具有磁性的二氧化硅包覆的Fe_3O_4(Fe_3O_4@SiO_2)材料作为载体进行中性蛋白酶固定化实验。考察了交联剂戊二醛的质量分数、交联时间、给酶量、固定化时间、温度和酸碱度对于固定化酶活力的影响,筛选出最佳固定化条件。结果表明,在交联剂质量分数为3%,交联时间为2 h,给酶量为0.20 g/g,固定化时间为3 h的条件下,固定化中性蛋白酶的活性最好。固定化酶的最适温度为50℃,固定化酶的最适pH为7.5,而且一定范围内其热稳定性和pH稳定性都比游离酶有所提高。     

乙酰胆碱酯酶固定化方法的研究

以戊二醛为交联剂,牛血清白蛋白(BSA)为保护剂,将乙酰胆碱酯酶(AchE)交联固定到商品载体上,制备固定化酶片。对影响酶固定化的重要因素进行了考察,获得了最佳固定化条件。实验结果表明,以孔径为0．45μm的硝酸纤维素滤膜作栽体,乙酰胆碱酯酶用量10U,5％(体积分数)戊二醛2μL,1％(质量分数)BSA10μL,配成70μL的酶溶液,3℃固定8h,可获得较好的固定化效果。不同批次制备的酶片,其活力值标准偏差为3.27％～5．03％,酶片在0．1mol／L pH8．5磷酸盐缓冲溶液中3℃下可保存60d。‘     

以壳聚糖为载体固定化青霉素酰化酶的研究

介绍了以壳聚糖为载体固定化青霉素酰化酶需首先制备壳聚糖颗粒 ,使用戊二醛、甲醛、乙二醛 3种活化剂处理所得的壳聚糖颗粒 ,确定了以戊二醛为活化剂交联其上的氨基共价结合青霉素酰化酶的固定化方法。从戊二醛的浓度、pH值、固定化时间、固定化pH值、酶用量等条件摸索了最佳固定化条件 ,获得了酶活力为4 0 0 0 0U/ (g·h)、回收率为 5 0 %左右的固定化青霉素酰化酶。     

明胶膜固定化脲酶的制备及性质

以明胶为载体,戊二醛为交联剂,采用包埋-交联联用法制备了明胶膜固定化脲酶,其酶活力为6 07U/g载体,酶活力收率为66 1%。最优固定化条件是包酶量为10mg酶/g明胶,ρ(明胶)=100g/L,φ(戊二醛)=0 5%。研究了固定化酶的性质,并与游离酶作了比较,游离酶的最适pH=7 0,固定化酶的最适pH=6 5;游离酶的最适温度为60℃,固定化酶的最适温度升至70℃;固定化酶与游离酶的米氏常数Km分别为11 7mM和12 4mM;固定化酶在80℃下180min仍保留初始活力的10%,而游离酶几乎完全失活。固定化酶重复使用20次其活力仅下降15%,4℃下贮存35d后仍保持初始活力的55%。     

利用固定化脲酶处理尿素废水

研究了各种材料固定化脲酶用于处理化肥厂的尿素废水,选择了明胶－戊二醛包埋法。对其固定化条件和固定化脲酶的性质进行了探讨,结果表明：在５０℃下,尿素废水通过固定化酶柱只需停留３ｍｉｎ,就有９２．５％的尿素分解。固定化脲酶的半衰期为３个月。     

纳米Fe3O4协同海藻酸钠固定化桑叶多酚氧化酶

探索磁性纳米Fe3O4协同海藻酸钠固定化桑叶多酚氧化酶.通过单因素和正交试验优化固定化条件,并采用电镜技术对固定化桑叶多酚氧化酶进行形态观察.试验结果表明最佳固定化条件为:按质量比3∶5加入磁粉纳米Fe3O4到4％海藻酸钠溶液里,在质量分数为1％氯化钙中包埋1.0h,再用质量分数为1.5％戊二醛交联1.5h,此条件下的酶活回收率为93.44％.通过与非磁性的海藻酸钠固定化酶的对比,磁性纳米Fe3O4复合海藻酸钠固定化酶包覆良好,酶活回收率提高了7.84％.     

以壳聚糖为载体固定化海藻糖合成酶

以壳聚糖为栽体,采用戊二醛为交联剂的方法来固定海藻糖合成酶。研究结果表明：在戊二醛质量分数为0．5％、液态酶与壳聚糖凝胶的配比为1：1、交联pH值为8．0、交联温度为15℃、交联时间为12h条件下,固定化海藻糖合成酶的活性最高,生成的海藻糖量最多,海藻糖的最高含量能达到40％左右。另外,固定化酶转化麦芽糖为海藻糖的最佳反应时间为18h,这时可以获得最高含量的海藻糖。     

Urease immobilized on chitosan membrane: Preparation and properties

Urease was covalently immobilized on glutaraldehyde-pretreated chitosan membranes. The optimum immobilization conditions were determined with respect to glutaraldehyde pretreatment of membranes and to reaction of glutaraldehyde-pretreated membranes with urease. The immobilized enzyme retained 94% of its original activity. The properties of free and immobilized urease were compared. The Michaelis constant was about five times higher for immobilized urease than for the free enzyme, while the maximum reaction rate was lower for the immobilized enzyme. The stability of urease at low pH values was improved by immobilization; temperature stability was also improved. The optimum temperature was determined to be 65°C for the free urease and 75°C for the immobilized form. The immobilized enzyme had good storage and operational stability and good reusability, properties that offer potential for practical application.     

青霉素酰化酶在新型复合载体上的固定化研究

在反应温度为45℃、反应时间为6 h、丙烯酰胺(AM)质量浓度为40 g/L、引发剂用量为单体质量1%的条件下制得PAM-SiO2复合载体,利用红外光谱表征了其化学结构,热失重法测定其接枝量为21%。在所制PAM-SiO2复合载体上固载青霉素酰化酶,其固载最适条件为:戊二醛用量0.1 mmol/L,pH值7.64,给酶量1%,温度42℃,时间11 h~12 h。此条件下所得固定化酶的活力为34000 U/mL;测得所制固定化酶的最适pH值为7.82,最适温度为45℃。     

海藻酸钠明胶协同固定化黑曲霉脂肪酶

以海藻酸钠明胶为复合载体,采用包埋法制备固定化黑曲霉脂肪酶,考察了海藻酸钠、明胶浓度等因子对固定化效果的影响,比较固定化酶和游离酶对温度、pH等条件的稳定性。结果表明,制备固定化黑曲霉脂肪酶的最优条件为:海藻酸钠、明胶浓度分别为1.25%和0.5%,CaC l2浓度为10%,给酶量为450 IU/g;固定化酶最适温度为35℃,最适pH为9.0,常见有机溶剂和金属离子对固定化酶的活力影响较小。     

猪骨基多孔碳固定化酶的研究

本文以猪骨基多孔碳为载体,采用明胶包埋与戊二醛交联结合的方法,制备固定化过氧化氢酶,并对固定化酶制备条件的优化,酶作用最适条件及其稳定性进行研究。结果表明:以猪骨基多孔碳为载体吸附2h、1%明胶包埋、1%戊二醛交联过氧化氢酶制备的固定化酶,在最适的缓冲液浓度、溶液pH和体系温度下,虽然催化效率有所下降,但其贮存稳定性和操作稳定性都有所增加,重复使用8次后,活力仍保持在初始活力的90%以上。这对于过氧化氢酶进一步在食品工业和纺织工业的推广可能有潜在的应用价值。     

固定化β-葡萄糖苷酶双相体系中水解大豆异黄酮

采用共价交联的方法将β-葡萄糖苷酶固定到球形壳聚糖上,并对固定化酶的性质进行表征,得出固定化酶的最佳反应条件：pH=5,温度40℃。据此用乙酸乙酯和pH=5缓冲溶液的双相体系,在40℃条件下水解大豆异黄酮。与游离酶相比,固定化酶在此双相体系中起到了稳定酶的作用;与单相体系相比,双相体系中产物的产率显著提高,反应速率也更快,且能有效去除粗品大豆异黄酮的异味。对于30%左右级别的大豆异黄酮,水解的两个主要水解产物（大豆苷元和染料木素）的产率都能达到70%。     

海藻酸钠固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的制备及其性质研究

研究了以海藻酸钠包埋法制备固定化S-腺苷甲硫氨酸（sAM）合成酶的条件,并考察了固定化酶的酶学性质。结果表明,最适固定化条件为：海藻酸钠质量分数3％、CaCl2质量分数4％、SAM合成酶加量（以每克海藻酸钠计）75mg、固定化时问30min,在此条件下,固定化酶活力回收率达到42％。固定化酶热稳定性较好,在50℃下保温5h仍保留69％的酶活力,而游离酶则完全失活;固定化酶在碱性条件下的稳定性较好,在pH值7．5～9．0的缓冲溶液中4℃下保温10h仍保留84％以上的酶活力;将固定化酶用于SAM的合成,连续反应5批次后,仍保留82％的酶活力。     

银/二氧化硅复合载体固定木瓜蛋白酶的研究

以沉积了银纳米粒子的二氧化硅微球为载体,戊二醛为交联剂共价固定了木瓜蛋白酶。研究了戊二醛用量以及载体中银纳米粒子质量分数对酶负载率、相对活力和酶活回收率的影响,考察了温度和pH值对固定酶的影响。结果表明,戊二醛的适宜质量分数为5%;当载体的银负载量(质量分数)为0.68%时,固定木瓜蛋白酶活回收率最高,比使用未负载银载体提高了131%;固定酶的最适反应温度为75℃,与游离酶基本相同;最适pH值为7.5,与游离酶相比向碱性方向移动了1个单位。