大鼠卵巢组织的冷冻移植

背景:玻璃化冷冻是应用高浓度的冷冻保护液结合极快的制冷速度,使细胞快速冷冻,避免细胞内外冰晶形成对细胞的破坏作用,是一种比较新的冷冻方法,具有操作简单、冷冻效率高等特点.目的:采用玻璃化冷冻技术冷冻大鼠卵巢组织,比较4种冷冻保护剂对大鼠卵巢组织学和功能的影响.方法:将大鼠随机数字表法分为6组,每组6只:二甲基亚砜+乙二醇组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、去势组、正常对照组.4冷冻组摘除卵巢后应用相应的冷冻保护液冻存,去势组仅摘除卵巢不冻存、不移植,正常对照组不作处理.冻存2周后解冻复苏行同体异位移植,将卵巢组织植入大鼠后肢大腿内侧.移植后30 d,观察阴道上皮类型及动情周期;移植后3个月,经腹主动脉采血检测血清雌二醇水平;回收卵巢组织做组织学检查.结果与结论:4冷冻组均可见卵巢组织结构受损表现,原始卵泡的形态正常率分别为67.9%,71.6%,80.5%,59.4%,初级卵泡形态正常率分别是41.6%,52.3%,55.9%,36.7%.二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组卵泡正常率较二甲基亚砜+乙二醇组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高(P<0.05);不同发育阶段卵泡构成比差异无显著性意义,均未见典型的次级卵泡.受损的卵细胞主要表现为体积变小、胞浆内出现空泡、核皱缩等.4冷冻组未出现典型动情周期的细胞类型.移植物自周围组织获得可见的血管供应,将卵巢组织块连接形成网络.移植物内毛细血管丰富,皮质中可见成群的原始卵泡,初级卵泡、次级卵泡所占比例低于原始卵泡,形态与正常者相似.4种冷冻方法冻存卵巢组织血清雌二醇水平较正常对照组明显降低(P<0.01),二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高于其他冷冻组(P<0.05).结果提示4种冷冻方法均对大鼠卵巢组织有一定程度破坏,初级卵泡的损伤大于原始卵泡.冻存复苏后,卵巢功能恢复,但并不完全,二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组效果优于另外3组,但移植后动物没有出现规律的动情周期,提示冷冻方法尚需进一步完善.     

不同冷冻方案保存人类卵巢组织的活性比较

背景：卵巢组织冷冻保存被认为是保存女性生殖内分泌功能安全、有效的方法,但目前尚无统一确定的方案。 目的：探讨3种冷冻方案对人类卵巢组织保存冷冻效果及卵泡活性的影响。方法：采用丙二醇慢速程序冷冻法、二甲基亚砜玻璃化冷冻法、液氮直投法对20例人类卵巢组织进行冷冻保存,复苏后采用细胞存活/死亡荧光分析法计数有活性的细胞,体外培养测定培养液雌二醇浓度及各级卵泡计数,判断3种不同冷冻方案对人类卵巢组织活性的影响。结果与结论：不同冷冻方案冻融后卵巢组织块的活性卵泡率均低于新鲜卵巢组（P 〈 0.05）,二甲基亚砜组最低,液氮直投法组与慢速程序冷冻法组差异无显著性意义。体外培养各冷冻组分泌的雌二醇水平比较,第4天时二甲基亚砜组低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组（P 〈 0.05）,至第8天时各冷冻组雌二醇水平与新鲜卵巢组一致。培养14 d组织学观察,各组卵巢组织内生长期卵泡比例增多,始基卵泡仍然占最主要的。新鲜卵巢组织正常卵泡的总数高于冷冻组（P 〈 0.05）,二甲基亚砜组的正常卵泡数低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组（P 〈 0.05）。提示冷冻保存对卵巢组织卵泡有一定的损伤,但仍能保存大部分始基卵泡的活性,经体外培养后可进一步发育并具有分泌功能,在3种冷冻方案中,慢速程序冷冻法和液氮直投法的冷冻效果优于二甲基亚砜玻璃化冷冻法,液氮直投法操作简便,冷冻效果稳定。     

快速冷冻与慢速冷冻条件下复合组织血管内皮的生物活性

背景:恢复良好血供对于复合组织保存及再植至关重要,但不同冷冻方法对血管活性影响不同。目的:比较快速冷冻与慢速冷冻方法对复合组织血管内皮活性的影响。方法:新西兰大白兔后肢分别进行快速冷冻与慢速冷冻,快速冷冻的兔后肢直接放入液氮中,慢速冷冻组经4℃,-20℃,-80℃冷冻后再投入到液氮中,各组依次保存12h,3d,7d后快速复温,并设对照组。所有新西兰大白兔后肢均经甲醛溶液固定后行苏木精-伊红染色及免疫组织化学染色检测各组血管内皮的病理变化。结果与结论:快速冷冻组和慢速冷冻组冷冻12h,3d,7d时兔血管组织形态评分均低于对照组(P<0.05)。快速冷冻组冷冻12h,3,7d时血管内皮组织血管内皮生长因子评分低于慢速冷冻组(P<0.05)。证实,慢速冷冻法能更好的维持复合组织中的血管内皮细胞的生物学活性。     

海藻糖保护同种带瓣大动脉的最适浓度

背景:目前液氮低温保护组织和器官技术已经非常成熟,但其保护剂一直以来争论不一。目的:观察不同冷冻保护剂对液氮深低温冻存同种带瓣大动脉组织细胞凋亡和代谢的影响,寻求最佳的冷冻保护剂及冷冻保护剂的最适浓度。方法:取新西兰大白兔带瓣主动脉、肺动脉标本,将其在液氮中冻存12,15,18个月,冻存液分别使用0.1mol/L二甲基亚砜,0.1mol/L海藻糖,0.1mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜,0.2mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜,0.3mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜。标本复温后,免疫组织化学方法检测标本的细胞凋亡情况,葡萄糖消耗量测定法检测组织细胞的代谢水平。结果与结论:免疫组织化学和葡萄糖消耗量测定结果均显示经0.1mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜,0.2mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜冻存液处理的标本冻存效果最好,其次是经0.3mol/L海藻糖+0.1mol/L二甲基亚砜处理和经0.1mol/L海藻糖单独处理的标本,单独使用0.1mol/L二甲基亚砜处理的标本冻存效果最差。说明海藻糖对液氮深低温保存同种带瓣大动脉活性有很好的保护作用,单独使用海藻糖优于单独使用二甲基亚砜,联合应用海藻糖和二甲基亚砜效果更好,且联合应用的海藻糖最佳浓度范围是0.10~0.20mol/L。     

新型玻璃化冷冻法对人卵巢组织超微结构保存的研究

目的探讨新型玻璃化冷冻法对人卵巢组织超微结构的保存效果,尤其是对卵巢间质细胞的保存效果。方法收集2007年6月-2009年1月在我院行妇科手术的患者卵巢组织共8例,使用新型玻璃化冷冻法和慢速冷冻法保存,比较两种冷冻方法对于始基卯泡卵母细胞、颗粒细胞、卵泡周围间质细胞超微结构保存效果。结果对于始基卵泡卵母细胞和颗粒细胞,发现两种冷冻方法之间无显著差异（P〉0．05）;在间质细胞保存中,新型玻璃化冷冻法号慢速冷冻法相比较,正常间质细胞百分率增加（P〈0．05）。结论新型玻璃化冷冻法与慢速冷冻法相比能更好地保存卵泡周围间质细胞,在深低温保存人卵巢组织中具有较广阔的应用前景。     

血管内皮生长因子与组织工程血管生成

1 不同冷冻方法对人卵巢组织血管内皮生长因子表达及血管生成的影响 2 血管内皮生长因子在鼠尾胶原凝胶诱导三维血管新生中的作用研究 3 血管内皮生长因子治疗性血管生成作用与缺血性脑血管病     

海藻糖保护同种带瓣大动脉的最适浓度

背景：目前液氮低温保护组织和器官技术已经非常成熟,但其保护剂一直以来争论不一。目的：观察不同冷冻保护剂对液氮深低温冻存同种带瓣大动脉组织细胞凋亡和代谢的影响,寻求最佳的冷冻保护剂及冷冻保护剂的最适浓度。方法：取新西兰大白兔带瓣主动脉、肺动脉标本,将其在液氮中冻存12,15,18个月,冻存液分别使用0.1mol/L二甲基亚砜,0.1mol/L海藻糖,0.1mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜,0.2mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜,0.3mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜。标本复温后,免疫组织化学方法检测标本的细胞凋亡情况,葡萄糖消耗量测定法检测组织细胞的代谢水平。结果与结论：免疫组织化学和葡萄糖消耗量测定结果均显示经0.1mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜,0.2mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜冻存液处理的标本冻存效果最好,其次是经0.3mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜处理和经0.1mol/L海藻糖单独处理的标本,单独使用0.1mol/L二甲基亚砜处理的标本冻存效果最差。说明海藻糖对液氮深低温保存同种带瓣大动脉活性有很好的保护作用,单独使用海藻糖优于单独使用二甲基亚砜,联合应用海藻糖和二甲基亚砜效果更好,且联合应用的海藻糖最佳浓度范围是0.10~0.20mol/L。     

血管内皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子联合应用对自体游离脂肪颗粒移植成活的影响

背景:微血管的生成是脂肪细胞成活的关键。研究显示血管内皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子分别对血管生长有促进作用。目的:观察联合应用血管内皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子对脂肪颗粒移植成活的影响。方法:50只SD大鼠随机分为5组,将自体大网膜脂肪颗粒移植于背部,然后分别加入生理盐水,50μg/L血管内皮生长因子,50μg/L碱性成纤维细胞生长因子,50μg/L血管内皮生长因子+50μg/L碱性成纤维细胞生长因子,100μg/L血管内皮生长因子+100μg/L碱性成纤维细胞生长因子。于移植15,30d处死大鼠取出移植物。结果与结论:100μg/L血管内皮生长因子+100μg/L碱性成纤维细胞生长因子实验组移植物的残余质量和微血管密度明显高于其他组,差异有显著性意义(P<0.05),其他各组间差异无显著性意义(P>0.05)。结果可见血管内皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子联合应用可促进移植的脂肪颗粒成活。     

玻璃化法和低温冷冻法保存兔股动脉活性的差异

背景：异体血管保存常用的低温冷冻法会不可避免地形成大量冰晶,因此所保存的血管活性有限。玻璃化法可避免冰晶所造成的挤压损伤和冻融效应,尤其适合于活性组织的保存。目的：比较玻璃化法和低温冷冻法保存兔股动脉组织结构和收缩舒张能力的差异。设计、时间及地点：组织形态学及力学水平的随机对照实验,于2002-09/2006-08在解放军总医院骨科研究所完成。材料：纳入新西兰兔18只,按随机数字法分为3组,玻璃化法保存组、低温冷冻法保存组及新鲜血管组各6只,每组取12条股动脉。方法：切取股动脉标本,置于平衡液中备用。玻璃化法保存组血管在4℃条件下经25%,50%和100%梯度玻璃化溶液浸泡后,直接投入液氮中。低温冷冻法保存组血管由常温状态下,经过0,-20,-70℃梯度降温,平衡60min,直接投入液氮中。将新鲜动脉作为对照,样本在液氮中保存14d以上。主要观察指标：对动脉组织进行细胞培养和鉴定,测定动脉环张力随去甲肾上腺素和硝普钠剂量的变化。结果：3组动脉培养均为平滑肌细胞,玻璃化法保存组生长速度与新鲜血管组相近,而优于低温冷冻法保存组。玻璃化法保存组与新鲜血管组动脉环最大收缩力差异无显著性意义（P〉0.05）,玻璃化法保存组、新鲜血管组动脉环最大收缩力显著大于低温冷冻法保存组（P〈0.01）。当去甲肾上腺素剂量为10-6mol/L时,动脉开始明显收缩;当去甲肾上腺素剂量为10-4mol/L时,动脉收缩力达到最大。玻璃化法保存组、低温冷冻法保存组及新鲜血管组动脉环最大舒张程度差异无显著性意义（P〉0.05）。当硝普钠剂量为10-7mol/L时,动脉开始产生明显的舒张反应;当硝普钠剂量为10-4mol/L时,动脉基本达到最大舒张程度。结论：玻璃化法保存的动脉较低温冷冻法具有更多的活性平滑肌细胞,尽管玻璃化法保存的动脉在对去甲肾上腺素的收缩能力方面优于低温冷冻法保存的动脉,但是对硝普钠的舒张能力上二者之间没有差别。     

缺氧诱导人视网膜色素上皮细胞19中血管内皮生长因子mRNA表达及金雀异黄素的抑制作用

目的:观察缺氧对人视网膜色素上皮细胞19中血管内皮生长因子mR-NA表达的诱导作用,以及金雀异黄素对其血管内皮生长因子mRNA和蛋白表达的抑制作用。方法:实验于2004-02/12在南京医科大学生理学实验室完成。视网膜色素上皮细胞缺氧(体积分数为0.05的CO2/体积分数为0.95的N2)2,12,24,36h后,用反转录聚合酶链反应检测该区域血管内皮生长因子mRNA表达;细胞用50,100,200μmol/L金雀异黄素和50μmol/LPD98059预处理后缺氧2和24h,用反转录聚合酶链反应检测人视网膜色素上皮细胞19细胞中血管内皮生长因子mRNA表达,用酶联免疫吸附分析检测细胞培养液上清中血管内皮生长因子蛋白表达。结果:①缺氧2,12,24,36h人视网膜色素上皮细胞19细胞血管内皮生长因子mRNA表达是正常组的2.6,3.1,8.4,2.9倍(P<0.05,n=8)。②缺氧2h:50,100,200μmol/L金雀异黄素和50μmol/LPD98059可以抑制缺氧组血管内皮生长因子mRNA表达的51.1%,71.6%,79.7%和55%(P=0.01,n=10),蛋白表达分别为(97.00±12.79),(58.85±20.21),(37.93±14.41),(57.83±9.66)ng/L。③缺氧24h:50,100,200μmol/L金雀异黄素和50μmol/LPD98059可以抑制缺氧组血管内皮生长因子mRNA表达的55.0%,78.7%,90.7%和67.2%(P=0.000,n=10),蛋白表达分别为(189.60±20.20),(117.70±21.97),(49.7±13.17),(86.33±12.47)ng/L。结论:缺氧对血管内皮生长因子mRNA表达的诱导呈时间依赖性;金雀异黄素可以在转录及转录后水平抑制缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞19细胞中血管内皮生长因子表达的上调。金雀异黄素对血管内皮生长因子mRNA和蛋白表达的抑制作用也呈浓度依赖性。     

卵巢组织玻璃化冷冻保存和移植的研究进展

背景:卵巢组织玻璃化冷冻技术作为一种快速、简便、经济的冷冻方式被逐渐应用于卵巢组织的保存。目的:综述国内外关于卵巢组织玻璃化冷冻保存及移植的研究进展。方法:由第一作者检索1995/2011PubMed数据库及清华同方数据库有关卵巢组织玻璃化冷冻保存以及卵巢组织移植技术等方面的文献。结果与结论:玻璃化冷冻是一个超高速的冷冻过程,形成高黏度的"玻璃样凝固状态",可以避免由于冰晶形成所造成的细胞损伤。但至今玻璃化冷冻仍缺乏统一的标准化程序。影响卵巢组织玻璃化冷冻保存效果的主要因素有卵巢组织块的大小、冷冻保护剂的种类、渗透平衡的时间和温度、冷冻载体等。随着低温生物学的发展和卵巢组织冷冻保存效果的提高,卵巢组织的移植已经具备了一定的临床应用可行性。到目前为止,全世界已有一系列关于冻存卵巢组织移植后成功妊娠及分娩的报道,移植成功的关键在于减少缺血再灌注损伤和促进新生血管的形成。     

人卵巢组织冷冻保存及其评价方式的研究与进展

背景：如何保存有生育需求的患者的卵巢功能使其能获得一定的生育能力,具有重要的意义及广阔的应用前景。目的：综合近年来卵巢组织冷冻的相关研究,对保存及评价方法作以综述,以探讨如何建立最佳的卵巢组织冷冻方案。方法：由第一作者检索1994年1月至2014年1月PubMed数据及万方数据库相关文献。英文检索词为ovariantissue,ovariantissuecryopreservation,freezingfactors;中文检索词为卵巢组织,卵巢组织冷冻,冷冻影响因素。纳入与卵巢组织冷冻技术、影响冷冻化效果的因素、冷冻组织复苏及人卵巢组织移植相关的文献59篇进行分析。结果与结论：目前,卵巢组织冷冻主要分为慢速冷冻、快速冷冻及玻璃化冷冻技术,而不同的患者、组织切片的大小、冷冻保护剂种类、渗透时间及冷冻载体的不同,都会影响到冷冻效果。卵巢组织复苏后,主要通过组织学显微镜下观察卵泡及颗粒细胞的形态并进行计数,观察亚细胞结构的改变评价冻融效果;凋亡信号的检测;免疫组织化学分析检测复苏后增殖及凋亡相关的信息;体外培养检测内分泌水平的变化;基因水平的检测等。近年来,卵巢组织冷冻后的临床应用是将冷冻复苏后的组织进行移植,使患者恢复生殖内分泌功能,或获取成熟的生殖细胞,从而保存女性生育能力。然而,卵巢组织冷冻仍存在一些问题尚需进一步研究。     

促卵泡刺激素干预改善绵羊卵巢组织玻璃化冻存后异种移植的效果研究

背景:卵巢皮质片移植是无血管吻合移植,因此,提高卵巢组织对冻存-解冻和移植后缺血的耐受力是提高冻存后移植物卵泡存活和延长功能寿命的关键环节.目的:观察促卵泡刺激素在玻璃化冻存过程中对绵羊卵巢组织形态和功能的保存效果,为成人卵巢组织的冻存提供技术方法.方法:BALB/c品系雌性裸鼠随机分为3组.均行羊卵巢皮质片裸鼠异位移植:①新鲜移植对照组,取材后即移植.②玻璃化冻存移植组,采用玻璃化冻存解冻后移植,所用液体均未添加促卵泡刺激素.③添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组,采用冷冻液、解冻液和培养液均添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存后移植.移植后检测受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡数和发育状况,于移植后4周取移植卵巢进行组织学观察、并行血清雌二醇水平分析.结果与结论:含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组与新鲜移植组相比动情周期恢复率、每高倍视野卵泡计数差异均无显著性意义(P>0.05),卵泡计数高于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05).移植后4周,含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组组织学观察见卵泡发育,未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组仅偶见原始卵泡.含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组与新鲜移植组相比血清雌二醇水平差异无显著性意义(P>0.05),显著高于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P< 0.05).结果提示,在玻璃化液中加入促卵泡刺激素可提高冻存绵羊卵巢组织移植后卵泡存活率.     

A new possibility in fertility preservation: The artificial ovary

Conventional fertility preservation methods such as oocyte or embryo cryopreservation are currently insufficient to treat including those patients with prepubertal cancer and premature ovarian failure. Ovarian tissue cryopreservation presents as an alternative but has limitations with a potential risk of reintroducing malignant cells in patients who recover from cancer, those of chemotherapy prior to tissue cryopreservation. The so called “artificial ovary” aims to resolve this issue by transplanting isolated follicles with or without a biological scaffold. The artificial ovary may also offer an effective alternative option for those who cannot benefit from traditional assisted reproductive techniques such as in vitro fertilisation. To date, in animal studies and human trial, the artificial ovary restored endocrine function, achieved in vivo follicular development, and resulted in successful pregnancies. However, development of a technique for higher follicular recovery rate and a more optimised design of delivery scaffold, better transplantation techniques to prevent postsurgical ischemia, and consideration for genetic safety are required for safer and consistent human clinical applications. Ideas from different transplantation surgeries (e.g., entire ovary, ovarian cortex, and transplantation with tissue‐engineered products) can be applied to enhance the efficacy of artificial ovarian transplantation. For the better application of artificial ovary, a deeper understanding of mechanical and biochemical properties of the ovary and folliculogenesis after cryopreservation, transplantation with or without scaffold, and development of sophisticated in vivo imaging techniques of transplanted artificial ovary need to precede its efficient clinical application.     

Children born after autotransplantation of cryopreserved ovarian tissue. a review of 13 live births

INTRODUCTION. Premature ovarian failure (POF) can occur naturally at an early age or be due to iatrogenic agents. Indeed, ovaries are very sensitive to cytotoxic treatment, especially to radiation and alkylating agents. METHODS. Several options are currently available to preserve fertility in cancer patients and allow them to conceive when they have overcome their disease: embryo cryopreservation, oocyte cryopreservation, and ovarian tissue cryopreservation. Cryopreservation of ovarian tissue is the only option available for pre-pubertal girls and women who cannot delay the start of chemotherapy. FINDINGS. Since the first live birth after autotransplantation of cryopreserved ovarian tissue in humans was reported in 2004, orthotopic reimplantation has led to the birth of 13 healthy babies. Restoration of ovarian activity and prognostic factors are evaluated by comparison with 7 cases of fresh ovarian tissue transplantation. We report 13 live births after orthotopic transplantation of frozen-thawed ovarian tissue in cancer patients (n = 8) and in patients treated with high doses of chemotherapy for benign diseases (n = 2) (microscopic polyangiitis, sickle cell anemia). INTERPRETATION. Based on our review, we believe that ovarian cortex cryopreservation, associated or not with cryopreservation of immature oocytes, should be offered before gonadotoxic chemotherapy in all cases where there is a high risk of POF and where emergency IVF is not possible.     

枸杞多糖对胎儿卵巢组织冷冻保存的影响

背景：抗氧化剂的应用对于提高卵巢组织冻存后的活力起着很重要的作用。目的：通过观察冷冻保存的胎儿卵巢组织异种移植到裸鼠肾被膜下的发育情况,探索枸杞多糖在卵巢组织冷冻保存中的作用。方法：实验分为4组。①新鲜移植组：取材后的新鲜胎儿卵巢组织直接进行移植。②冻存对照组：冷冻保护液为基液。③β-巯基乙醇组：冷冻保护液为基液添加100μmol/Lβ-巯基乙醇。④枸杞多糖组：冷冻保护液为基液添加400mg/L枸杞多糖。对冷冻复温后的胎儿卵巢皮质块进行祼鼠的肾被膜下移植,并于移植后12周取材。结果与结论：各组在移植物的存活率上差异无显著性意义（P〉0.05）。在卵泡计数上冷冻对照组最低（P〈0.05）。在卵泡的存活率上,各组间差异均有显著性意义,其中以冷冻对照组最低,枸杞多糖组最高。β-巯基乙醇组和枸杞多糖组卵巢超微结构较冷冻对照组保存的好。提示400mg/L的枸杞多糖和100μmol/L的β-巯基乙醇有利于卵巢组织的冷冻保存,并可显著提高冷冻卵巢组织移植后的存活率。     

The potential of ovarian tissue transplant to preserve fertility

Laboratory research on ovarian cryopreservation and transplantation began in the 1950s leading to clinical studies in the 2000s. The research that was performed during this half a century indicated that cryopreserved ovarian tissue has the potential to restore fertility in women who face premature ovarian failure due to chemotherapy, radiotherapy or surgery. Until today, ovarian function has been restored in at least four women. Even though no pregnancies have been reported to date from these clinical studies, animal studies indicate that this is a valid prospect for humans. Future clinical trials will determine in a larger number of patients the longevity of ovarian grafts, normalcy of hormone production and ovarian follicle development, possibility and safety of pregnancy and the safety of auto-transplantation in cancer patients. In addition, further basic research may be needed to develop better cryoprotectants and cryopreservation techniques. However, the major improvement in the efficiency of ovarian transplantation is anticipated to come from research exploring the revascularisation process.     

The potential of ovarian tissue transplant to preserve fertility

Laboratory research on ovarian cryopreservation and transplantation began in the 1950s leading to clinical studies in the 2000s. The research that was performed during this half a century indicated that cryopreserved ovarian tissue has the potential to restore fertility in women who face premature ovarian failure due to chemotherapy, radiotherapy or surgery. Until today, ovarian function has been restored in at least four women. Even though no pregnancies have been reported to date from these clinical studies, animal studies indicate that this is a valid prospect for humans. Future clinical trials will determine in a larger number of patients the longevity of ovarian grafts, normalcy of hormone production and ovarian follicle development, possibility and safety of pregnancy and the safety of auto-transplantation in cancer patients. In addition, further basic research may be needed to develop better cryoprotectants and cryopreservation techniques. However, the major improvement in the efficiency of ovarian transplantation is anticipated to come from research exploring the revascularisation process.     

冷冻保存异体软骨移植免疫排斥反应的研究状况

背景：目前多采用冷冻保存方法来降低异体软骨移植免疫排斥反应,但有关异体软骨的取材、冷冻保存方法、冷冻保存条件仍然需要深入的研究探讨。目的：对于冷冻保存异体软骨移植后免疫排斥反应机制的研究进行回顾分析,并对不同保存方法的特点进行比较分析。方法：由第一作者检索1990/2008 PubMed数据及万方数据库有关异体软骨移植后免疫排斥反应及冷冻保存方法对软骨移植影响等方面的相关文献。结果与结论：异体软骨组织移植治疗关节软骨缺损治疗效果明显优于其他治疗方法。冷冻保存异体关节软骨保持了软骨组织的性状和生物学活性,而且可择期完成关节重建,并且有充裕的时间完成多项指标检测,防止供体携带细菌病毒和传染性疾病的传播,并且降低了软骨组织的抗原性,具有较大的临床应用价值。但冷冻保存的各个环节,如：低温保护剂的应用、降温和复温速度等方面还存在诸多问题,软骨移植后仍然会出现软骨吸收、退变等现象。随着冷冻生物学的不断进步,冷冻损伤机制的不断揭示,这些问题终将会解决,软骨组织冷冻保存技术会得到进一步的完善。