Tyro 3受体酪氨酸激酶调控糖蛋白Ⅵ介导的血小板活化

目的研究Tyro 3受体酪氨酸激酶在糖蛋白Ⅵ（glycoprotein VI,GPVI）介导的血小板活化中的调控作用。方法以Tyro 3基因敲除小鼠的血小板为研究对象,应用GPVI的特异性刺激剂,在体外检测血小板的聚集和铺展能力,并应用流式细胞术分析血小板的颗粒释放及整合素αIIbβ3的活化情况。结果与野生型小鼠相比,Tyro 3基因敲除小鼠血小板的聚集和铺展能力减弱,颗粒释放标记物CD 62P的数量减少,整合素αIIbβ3的活化也受到明显抑制。结论 Tyro 3受体酪氨酸激酶在糖蛋白Ⅵ介导的血小板活化中具有重要的调控作用。     

单采血小板血浆低密度脂蛋白在保存期间对血小板免疫活化的影响

目的：探讨单采血小板血浆低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）升高是否对血小板免疫活化产生影响。方法：选取符合国家献血标准的单采血小板献血员血小板标本35例,于血小板保存箱（22℃±2℃）振摇保存,其中LDL正常组（LDL＜3.4 mmol/L）30例,LDL升高组（LDL≥3.4 mmol/L）5例,流式细胞术检测血小板表面活化指标CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平,比较不同LDL水平对单采血小板免疫活化的影响。结果：随着保存时间的延长,血小板CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平无显著改变（P＞0.05）,不同保存时间LDL升高组与LDL正常组比较,CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平的差异无统计学意义（P＞0.05）。保存第2、3、4、5天的血小板经室温不同静置时间,LDL升高组与LDL正常组比较,CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：健康献血者单采血小板血浆LDL水平对血小板保存期间的免疫活化无显著影响,LDL水平较高的单采血小板不会激发血小板免疫活化,从而不影响临床输注效果。     

川芎嗪注射液对TIA患者血小板活化功能及预后的影响

目的探讨川芎嗪注射液对短暂脑缺血发作患者血小板活化功能及预后的影响及其机制。方法62例短暂脑缺血发作患者,随机分为治疗组及对照组,两组患者给予相同的扩血管、抗凝治疗,治疗组另给予川芎嗪干预治疗,共28d,采用酶联免疫吸附法观察两组患者血清凝血酶原时间（PT）、部分活化凝血酶原时间（AVIT）、凝血酶原时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）水平变化,采用流式细胞仪检测血清血小板第四因子（PF4）、可溶性P选择素（CD62P）、纤维蛋白原受体（PAC—I）表达变化,并比较两组患者的预后情况。结果治疗组同对照组相比,PT、APTT、TT延长,PF4及CD62P表达水平降低,FIB及PAC-1表达无差异,治疗组发作率及进展为脑梗死率少于对照组。结论川芎嗪注射液能够改善TIA患者血小板活化状态,减少再发作,改善TIA患者预后。     

丹红注射液对冠心病患者血小板活化及凝血功能的影响

目的探讨丹红注射液对冠心病患者血小板活化功能及凝血功能影响及机制。方法82名冠心病患者,随机分为对照组及治疗组,两组患者给予相同的抗凝、祛聚、降血脂等基础治疗,治疗组再此治疗基础上给予丹红注射液30mL／d,连续应用2周,2周后观察两组患者凝血酶原时间（PT）,部分活化凝血酶原时间（APTT）,凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（Fb）,血小板第四因子（PF4）,可溶性P选择素（CD62P）表达水平。结果治疗组同对照组相比,PT、APTT、TT延长（P〈0．05）,Fhg无显著差异（P〉0．05）,PF4、CD62P表达水平降低（P〈0．05）。结论丹红注射液能够改善冠心病患者的血液高凝状态,其可能通过减少血小板的活化发挥作用。     

HDL影响冠心病患者血小板ox-LDL诱导活化的体外分析

目的 探讨高密度脂蛋白(HDL)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人血小板活化的影响.方法 将洗涤血小板按照等体积分为3组,Ⅰ组加入100 μg/mL HDL;Ⅱ、Ⅲ组均加入PBS,3组均置于37℃环境下孵育15 min.Ⅰ、Ⅱ组加入50μg/mL ox-LDL;Ⅲ组加入PBS,3组均在37℃再孵育15 min.应用流式细胞仪检测3组CD62P表达水平,应用透射电镜观察3组血小板的形态结构.结果 3组的血小板CD62P表达率差异有统计学意义(P＜0.05),且Ⅱ组(29.26±5.91)％＞Ⅰ组(15.37±1.49)％＞Ⅲ组(2.05±0.85)％3组的血小板CD62P平均荧光强度(MFI)存在差异(P＜0.05),且Ⅱ组(3.97±0.64)＞Ⅰ组(2.51±0.53)＞Ⅲ组(1.50±0.10).Ⅱ组血小板脱颗粒比Ⅰ组更明显,Ⅲ组未发生脱颗粒.结论 HDL能显著抑制ox-LDL体外诱导的血小板活化.     

莱菔硫烷诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡与胞内活性氧的关系

目的研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）在体外对人胃癌SGC7901细胞增生及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法MTT比色法检测SFN对SGC7901细胞增生的影响,透射电镜观察SGC7901细胞形态学变化,流式细胞术检测早期凋亡率、细胞线粒体跨膜电位（△ψm）以及胞内活性氧（ROS）水平。结果SFN呈剂量时间依赖地抑制SGC7901细胞增生,透射电镜观察到SFN作用后SGC7901细胞典型的早期凋亡改变。SFN由0-50μmol／L作用24h,早期凋亡率明显升高（P〈0.01）;△ψm明显降低（P〈0.01）;ROS有不同程度的升高。结论SFN对SGC7901细胞有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,SFN可能通过诱发细胞内活性氧水平增高,弓I发经线粒体途径的内源性凋亡。     

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板释放反应的影响

 【目的】观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）拮抗剂——四肽Arg-Gly-Asp-Ser（RGDS）对血小板聚集和CD62p表达的作用,探讨RGDS对血小板聚集和释放反应的影响。【方法】检测二磷酸腺苷（ADP;终浓度5μmol/L,下同）诱导血小板聚集的最大聚集率（rPA,max）、静息血小板和ADP诱导的血小板CD62p表达,检测不同浓度RGDS对ADP诱导的rPA,max的抑制率和血小板CD62p表达的抑制率,进行回归分析。【结果】5种浓度（50、100、200、400、800μmol/L）的RGDS对rPA,max均有显著抑制作用。正常人静息血小板CD62p表达率为（3.5±0.6）%;ADP激动的血小板CD62p表达率为（65.6±13.8）%,两组比较有显著性差异（P〈0.01）;50、100μmol/L的RGDS对血小板CD62p表达无抑制作用;当RGDS浓度≥200μmol/L时（200、400、800μmol/L）,其可抑制血小板CD62p的表达;RGDS对rPA,max的抑制作用和其对血小板CD62p表达的抑制作用相关。【结论】RGDS浓度〈200μmol／L时，对ADP诱导的血小板释放反应无影响；RGDS浓度≥200μmol/L时，可抑制ADP诱导的血小板释放反应；与RGDS显著的抗聚集效应相比，其对血小板释放反应的影响比较小：RGDS抑制血小板释放反应的作用与其抗血小板聚集有关。     

不同处理方法对血小板表面活化标志CD62p流式检测结果的比较

目的探讨不同处理方法对血小板表面活化标志CD62p流式检测结果的影响。方法采集作者血液中心单采血小板浓缩液5 ml,用贫血小板血浆调整血小板计数为（200～250）×10^9/L（待测PRP,n=6）,分别采用不洗涤不固定不加活化抑制剂与洗涤、固定、加活化抑制剂进行标本处理,流式细胞仪检测血小板活化标志CD62p的变化。结果 CD62p的表达与标本的处理方法有关,但4组之间没有统计学差异（P〉0.05）。其中不洗涤不固定不加活化抑制剂组CD62p测定值为（40.47±2.54）%,低于其它3组检测值[（46.35±2.60）%、（47.54±3.47）%、（45.85±2.88）%]。结论流式细胞术检测血小板活化标志物CD62p中,标本处理步骤越少其活化率就越低,以不洗涤不固定不加活化抑制剂为最好。     

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板释放反应的影响

【目的】观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）拮抗剂——四肽Arg-Gly-Asp-Ser（RGDS）对血小板聚集和CD62p表达的作用,探讨RGDS对血小板聚集和释放反应的影响。【方法】检测二磷酸腺苷（ADP;终浓度5μmol/L,下同）诱导血小板聚集的最大聚集率（rPA,max）、静息血小板和ADP诱导的血小板CD62p表达,检测不同浓度RGDS对ADP诱导的rPA,max的抑制率和血小板CD62p表达的抑制率,进行回归分析。【结果】5种浓度（50、100、200、400、800μmol/L）的RGDS对rPA,max均有显著抑制作用。正常人静息血小板CD62p表达率为（3.5±0.6）%;ADP激动的血小板CD62p表达率为（65.6±13.8）%,两组比较有显著性差异（P〈0.01）;50、100μmol/L的RGDS对血小板CD62p表达无抑制作用;当RGDS浓度≥200μmol/L时（200、400、800μmol/L）,其可抑制血小板CD62p的表达;RGDS对rPA,max的抑制作用和其对血小板CD62p表达的抑制作用相关。【结论】RGDS浓度〈200μmol／L时，对ADP诱导的血小板释放反应无影响；RGDS浓度≥200μmol/L时，可抑制ADP诱导的血小板释放反应；与RGDS显著的抗聚集效应相比，其对血小板释放反应的影响比较小：RGDS抑制血小板释放反应的作用与其抗血小板聚集有关。     

血小板第四因子（PF4）对人中性粒细胞粘附性与呼吸爆发的调节作用

目的：研究血小板第四因子（PF4）对人中性粒细胞（Np)功能的影响。方法：用结晶紫染色、免疫荧光标记、PKC试剂盒测定、NBT法及高香草酸（HVA）荧光分光光度法比较对照组与PF4作用的实验组在趋化因子刺激前后,PF4性粒细胞总粘附性、整合蛋白CD11b的表达、PKC水平及呼吸爆发作用产生活性氧物质（reactive oxygen species,ROS)O2^-、H2O2等的影响。结果：PF4对静息中性粒细胞总粘附性有轻度的增强作用,使总粘附性上调了12．24％（P＜0．01）,而对整合蛋白CD11b的表达、呼吸爆发产生的ROS（O2^-、H2O2）则无影响。进一步研究发现PF4使经趋化三肽（FMLP）活化的中性粒细胞的总粘附性下调17．47％（P＜0．01）;使经趋化三肽（FMLP）活化的中性粒细胞的整合蛋白CD11b的表达下调18．84％（P＜0．01）;使经佛波酯（PMA）活化的中性粒细胞的呼吸爆发作用产生的O2^-、H2O2分别下调了50．29％（P＜0．01）、226．53％（P＜0．05）。研究同时发现PF4对静息及活化的中性粒细胞的PKC水平均无影响。结论：首次证明PF4与其它经典的趋化因子不同,是中性粒细胞活化的一个负调节因子,对中性粒细胞功能主要起降调节的作用。这种降调卫作用不是通过PKC信号转导途径完成的。     

Wnt5a对中性粒细胞胞外诱捕网形成的影响

目的：探讨Wnt5a对中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular trap,NET）形成的影响及可能的调控机制。方法：采用50 ng/mL Wnt5a刺激人中性粒细胞3 h,以1 μg/mL牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）和1 μg/mL大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）LPS作为阳性对照,采用免疫荧光技术观察NET的形成,Sytox Green荧光法对胞外DNA进行定量,采用流式细胞术检测细胞产生的活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,Western blot分析信号分子磷脂酰肌醇三激酶（phosphoinositide 3?kinase,PI3K）/Akt和丝裂原活化蛋白激酶1/2（mitogen?activated protein kinase1/2,MEK1/2）、细胞外信号调节蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinases1/2,ERK1/2）表达水平的变化。结果：Wnt5a刺激人中性粒细胞后,可观察到NET的形成和胞外DNA数量的增加（P < 0.05）,ROS水平较刺激前明显增高（P < 0.05）,Western blot检测显示,PI3K/Akt和MEK1/2、RK1/2磷酸化水平增高（P < 0.05）。结论：Wnt5a可能通过PI3K/Akt、MEK1/2、ERK1/2磷酸化,调控ROS生成,进而促进人中性粒细胞形成NET。     

抑郁症患者血小板活化功能的临床研究

目的 探讨抑郁症患者血小板活化因子CD62p、CD63的表达和血浆血小板第4因子(PF4)的水平,寻求抑郁症与血小板活化之间的关系.方法 以36例抑郁症患者为研究对象,并以36例健康人为对照组,分别于治疗前和治疗后用流式细胞仪(FCM)测定血小板活化因子CD62p和CD63,用酶联免疫法测定血浆血小板第四因子(PF4)水平.结果 未经治疗的抑郁症患者血小板活化因子CD62p和血浆血小板第四因子(PF4)的表达水平明显高于对照组[分别为(5.24±0.80)%,(2.60±0.64)%(P<0.01)和(7.68±0.79)%,(5.34±0.87)%,P<0.01];抗抑郁治疗后血小板活化因子CD62p和血小板第四因子(PF4)的表达较治疗前明显下降[分别为(2.82±0.91)%,(5.24±0.80)%,P<0.01和(5.48±0.82)%,(7.68±0.79)%,P<0.01].结论 抑郁症患者存在血小板过度活化,西酞普兰抗抑郁治疗可能逆转抑郁症患者血小板的过度活化.     

抗霉素A诱导血小板凋亡的分子机制研究

目的：探讨抗霉素 A（AMA）诱导血小板凋亡及其分子机制。方法取健康志愿者单采血小板,离心洗涤得到洗涤血小板,将洗涤血小板与不同浓度的 AMA 孵育后,流式细胞术检测线粒体跨膜电位（ΔΨm）去极化、磷脂酰丝氨酸（PS）暴露、细胞内活性氧（ROS）、线粒体 ROS、P-选择素表达和整合素αⅡbβ3活化;Western blot 法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的活化。在抑制试验中,先将洗涤血小板与线粒体靶向的 ROS 拮抗剂 Mito-TEMPO 预孵育,然后再与 AMA 孵育,流式细胞术检测相关凋亡指标。结果AMA 剂量依赖性诱导血小板ΔΨm 去极化、PS 暴露、细胞内ROS 和线粒体 ROS 升高以及 Caspase-3活化;但是 AMA 不能诱导血小板活化。线粒体靶向的 ROS 拮抗剂抑制 AMA诱导的血小板ΔΨm 去极化、PS 暴露、Caspase-3活化以及线粒体 ROS 的生成。结论 AMA 能够诱导血小板发生凋亡,线粒体 ROS 可能在 AMA 诱导的血小板凋亡过程中起重要作用。     

急性脑梗死患者动脉溶栓后神经功能改善程度与血小板活化状态

目的观察急性脑梗死患者动脉溶栓对神经功能的改善程度及血小板活化状态的变化,探讨二者间的临床联系及机制。方法选取急性脑梗死患者36例,行重组组织型纤溶酶原激活剂（recombinant tissue plasminogen activator,rt-PA）选择性动脉内溶栓治疗。每位患者在溶栓治疗前、治疗后1 d、7 d及30 d分别检测静脉血血小板活化状态标志物CD62P、CD63及血栓素B2（thromboxare B2,TXB2）水平;分别进行神经功能评估。结果溶栓后,患者CD62P、CD63及TXB2下降（P〈0.05）;显效组患者CD62P、CD63及TXB2下降程度高于无效组（P〈0.05）。结论急性脑梗死患者动脉溶栓后显效者血小板活化降低程度高于无效者,观察血小板活化状态变化有助于对患者治疗效果及预后的判断。     

Flt3基因突变与急性髓系白血病发生和预后的关系

Fms样酪氨酸激酶3（Fms-like tyrosine kinase3,Flt3）是Ⅲ型受体型酪氨酸激酶（receptor tyro-sine kinase,RTK）家族成员之一,在正常造血及免疫系统发育中起着重要作用。Fh3基因突变与急性髓系白血病（acute myelogenous leukemia,AML）的发生、预后密切相关。以Flt3作为靶分子已成为AML治疗的一种新策略。     

PTA1单克隆抗体诱导人血小板活化聚集和胞浆Ca2+水平的升高

目的：探讨血小板和T细胞活化抗原1（P”fAI）诱导人血小板活化聚集和对血小板胞浆Ca’”水平影响的机制．方法：血小板聚集与ATP释放试验及血小板胞浆Ca‘”水平测定．结果：PTAI单克隆抗体（McAb）体外可诱导人血小板活化聚集，EGTA与PGI。可以完全抑制PTAIMCAb诱导的血小板活化聚集，PTAIMCAbF（。b’）2对CDg或CD。l诱导的血小板活化聚集无明显影响。PTAIMCAb促进血小板胞浆C。’”水平升高．结论：PTAIMCAb的刺激作用与血小板膜表面FC受体和CI＞al／C1761（foNa）复合物有关，促进血小板胞浆Ca‘”水平升高…     

抑肽酶对上消化道出血患儿血小板活化功能的影响

目的探讨抑肽酶对小儿消化道出血的辅助治疗作用及机制。方法 62例上消化道出血患儿随机分为治疗组和对照组各31例,两组同时给予抗酸、止血等治疗,治疗组给予抑肽酶1000U/kg,1周后观察两组患者临床治疗效果及血小板活化标志物第4因子(PF4)、可溶性P选择素(CD62P)表达血小板比例变化。结果治疗1周后,治疗组临床有效率高于对照组,治疗组血清PF4、CD62P表达血小板比例高于对照组。结论抑肽酶能够通过活化血小板、改善血小板的凝聚功能,发挥对小儿上消化道出血的治疗作用。     

心血管病及糖尿病患者血小板活化分子检测的意义

目的 通过检测血小板活化时表达的特异膜糖蛋白分子，以探讨血小板在心血管病及糖尿病患者并发的心血管损伤时血小板的活化状态及其临床意义。方法 利用流式细胞仪（FCM）检测了39例心血管病、12例糖尿病患者及15例正常人外周血血小板的膜糖蛋白CD62P，CD63，CD41，CD61的表达。结果 心血管疾病中的高血压组、脑梗死组、冠心病组和糖尿病组的CD62P，CD63表达与正常人组比较均显著增高（P＜0．05），同时各组的CD41，CD61表达与正常人组比较差异没有显著性（P＞0．05）。结论 心血管病患者和糖尿病患者的血小板活化均增高，因此检测活化血小板的特异膜糖蛋白在这些疾病中有重要的临床应用价值。     

阿托伐他汀对高脂大鼠血小板功能的干预研究

目的：分析高脂血症大鼠血小板功能的变化,探讨阿托伐他汀对高脂血症大鼠血小板功能的影响。方法：34只Wistar大鼠随机分为正常对照组、高脂血症模型组和阿托伐他汀（10mg/kg）干预组,4周后检测3组大鼠的血脂：胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的水平。应用流式细胞术检测血小板表面α-颗粒膜蛋白（CD62P）的表达、酶联免疫法测定血浆中α颗粒膜蛋白-140（GMP-140）浓度。结果：与正常对照组相比,高脂血症组CHO、LDL水平显著升高、HDL/CHO明显降低,CD62P及GMP140水平明显升高。阿托伐他汀干预组在降低CHO、LDL水平的同时,显著降低了GMP140及CD62P水平。结论：高脂血症能够促使血小板活化,阿托伐他汀在调脂治疗的同时,抑制了血小板的活化。     

过敏性紫癜患儿GPⅡb/Ⅲa、P 选择素及vWF检测的意义

目的检测过敏性紫癜(HSP)患儿全血中血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa（CD41a/CD61）、P 选择素（CD62P）及血浆中血管性假血友病因子（vWF）的表达水平,探讨它们在HSP发病机制中的作用。方法应用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测HSP患儿（急性期44例,缓解期40例）及健康对照儿童（18例）空腹血CD41a/CD61、CD62P及vWF水平。结果HSP患儿急性期CD41a/CD61、CD62P、vWF水平明显高于缓解期和对照组（P均<0.01）;肾受累组CD41a/CD61、CD62P、vWF水平高于非肾受累组（P<0.01）。结论血小板的活化及血管内皮的损伤在HSP的发病机制中起着重要作用,CD41a/CD61、CD62P、vWF水平的测定有助于了解HSP患儿早期的凝血异常,为抗凝治疗提供依据。