不同PCR联合用于鼠疫耶尔森菌的检测

目的 建立一种用4对不同引物快速鉴定鼠疫耶尔森菌的PCR方法。方法 分别采用4对针对V抗原，cafl，pla和inv4种基因的引物，在4只管中进行相同循环参数的扩增。结果 用这4对引物能特异性地扩增出鼠疫耶尔森菌217，478，524，295bp的目的DNA片段。结论 该法可用于鼠疫耶尔森菌简便、快速和准确的检测。     

鼠疫菌PCR检测方法的研究

本文采用聚合酶链反应技术，通过扩增鼠疫菌９．５ｋｂ质粒ｐｌａ基因上一个４５ｂｐ片段，用于鼠疫菌的快速论断对４株鼠疫菌参考株ＰＣＲ扩增后，琼脂糖凝胶电泳分析均呈现单一ＤＮＡ扩增区带，其分子量大小与预期结果相符。对１３株非鼠疫菌参考株作平行实验，ＰＣＲ扩增后未见扩增区带。其检测的敏感性为１０个ｃｆｕ。全部实验可在４ｈ内完成。     

我国鼠疫菌pYC质粒PCR检测分析

目的分析全国其他类型鼠疫菌是否存在pYC质粒。方法设计yd1和yd2两对引物通过PCR 进行检查。结果共检查全国11块疫源地18个生态型鼠疫菌802份DNA,其中云南6份、广西5份、贵州6 份扩增阳性,云南另外的163份和全国其他菌株扩增结果均为阴性。结论 yd1和yd2基因仅存在于贵州、广西的菌株和云南的部分菌株中,可作为具有pYC质粒鼠疫菌的PCR诊断和标识基因;全国其他类型鼠疫菌无 6×103(pYC)新质粒。     

PCR检测动物鼠疫方法的应用研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检查感染鼠疫的动物脏器标本并与细菌分离培养进行比较。在３１份肝组织标本中ＰＣＲ阳性１１份（３５．５％），细菌培养阳性９份（２９．０％）３１份脾组织标本中ＰＣＲ阳性２５份（８０．７％），细菌培养阳性２１份（６７．７％），对照组中以假结核菌感染的小白鼠和未经感染的小白鼠脏器标本ＰＣＲ全部阴性，结果表明，ＰＣＲ法优于传统的细菌分离培养，具有快速，特异性强，敏感性高和不受杂菌污染     

PCR技术检测鼠疫菌的试验研究

鼠疫耶尔森氏菌是我国甲类一号传染病──鼠疫的病原体。对鼠疫菌的检测方法自５０年代起就一直应用常规的“四步”检验区［１］。这些方法虽然能够更直接地反映出疫源地的状态或鼠疫流行的强度及趋势,但这些方法也存在繁杂、费时和受材料腐败等诸多因素影响检出的痹病。因此建立一种具备快速、特异、敏感的方法,用于鼠疫的早期诊断是非常必要的。随着分子生物学的兴起,一系列新技术在鼠疫菌的检测中得到应用,如鼠疫菌的核酸探针技术区［２］和鼠疫菌的ＰＣＲ技术［２］等。本试验采用鼠疫菌９．５Ｋｂ质粒上的ｐｌａ基因和１００Ｋｂ质…     

应用内部对照PCR技术检测鼠疫菌DNA

目的调查吉林省长岭县鼠疫疫源地鼠疫活动信息。方法应用内部对照PCR方法直接检测鼠类脏器中鼠疫菌特有的基因片段并进行分析。结果共检查100份黄鼠标本,结果均为阴性,与细菌培养结果一致,未发现鼠疫信息。结论内部对照PCR检测技术可作为鼠疫菌DNA检测方法之一     

多重PCR快速鉴定鼠疫耶尔森氏菌

目的　建立鼠疫耶尔森氏菌多重PCR鉴定系统 ,用于鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定。方法　针对分别存在于pFra、pRst质粒上毒力基因caf1和pla ,以及一段 2 76bp染色体序列 3a分别设计引物。采用多重PCR技术 ,同时检测caf1、pla、3a三个靶序列。结果　应用该多重PCR反应体系 ,对我国鼠疫耶尔森氏菌 17个生态型及新发现的青海田鼠鼠疫疫源地菌株的多重PCR扩增结果表明 ,实验菌株中除 2株分别缺失pFra、pPst质粒而扩增出 2条产物带外 ,其余 5 2株均扩增出预期的 3条产物带 ,相关菌株均阴性 ,其检测灵敏度为 1× 10 -4ngDNA。 结论　该方法用于鼠疫耶尔森氏菌的鉴定简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性 ,为鼠疫耶尔森氏菌的快速鉴定提供了有力手段     

西藏地区鼠疫耶尔森菌基因分型研究

目的研究西藏地区鼠疫菌的基因组成和基因分型。方法对西藏地区分离到的75株鼠疫菌，按照周东生等已经证实的22个差异区段（DFRs）设计引物，对每株鼠疫菌的每个基因差异区段都采用聚合酶链反应（PCR）进行验证。结果西藏地区75株鼠疫菌共包括3个基因型，即5、6、10型。藏北地区分离的鼠疫菌为5型和6型，分别占24．0％、13．3％；藏南地区分离的鼠疫菌为10型，占62．7％。结论在西藏地区鼠疫菌中，青藏高原型鼠疫菌为5和6型，岗底斯山型鼠疫菌为10型。     

聚合酶链反应在鼠疫菌检测中的应用 研究

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，通过扩增鼠疫菌９．５ｋｂ质粒ｐｌａ基础上一个４７８ｂｌ片段，用于鼠疫菌检测，被试的４５株鼠疫菌扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析均呈现单一ＤＮＡ带，其分子量大小与预期结果符合。而假结核菌和一株缺６ＭＤ质粒鼠疫菌未见扩增带，洽部实验可在４ｈ内完成。本法具有快速、特异、敏感等优点，可用于不同生态型鼠疫菌的快速诊断和流行病学研究．     

应用PCR技术检测一例肺鼠疫患者的结果

聚合酶链反应(PCR)作为非培养诊断技术,是近年来鼠疫快速诊断一项重大突破。它是以分析鼠疫菌的遗传物质—DNA而达到特异、敏感、快速地检测和鉴定鼠疫菌的目的。本文应用PCR技术对一例经抗生素治疗后,细菌学检查阴性的肺鼠疫患者痰液进行检测,结果如下。1 材料方法     

云南鼠疫耶尔森菌基因分型研究

目的通过对来自云南省鼠疫自然疫源地155株鼠疫菌进行基因分型,了解鼠疫菌的进化规律。方法根据22个差异区段(differentregions,DFR)设计引物,PCR扩增鼠疫菌的每个DFR。结果滇西山地闽广沿海居民区黄胸鼠鼠疫自然疫源地137株鼠疫菌的基因型均为9型。滇西山地齐氏姬鼠大绒鼠鼠疫自然疫源地18株鼠疫菌,有10株菌为7型,8株菌为9型。结论滇西山地齐氏姬鼠大绒鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌的基因型为7型和9型,而滇闽广沿海居民区黄胸鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌的基因型主要为9型。两疫源地鼠疫菌在遗传关系上有亲缘性,后者可能由前者进化而来。     

用4对引物聚合酶链式反应检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究

目的用4对引物聚合酶链式反应(以下简称4-Prim er-PCR)来检验鼠疫耶尔森氏菌,对于探索鼠疫的快速诊断方法将起到推动作用。方法选择不同疫源地的40株鼠疫耶尔森氏菌;目的基因选择于与鼠疫耶尔森氏菌毒力因子有关的FI抗原质粒基因cafI鼠疫杆菌素Ⅰ基因、与色素沉着有关的质粒基因hm s以及染色体基因inv。结果该法所有的鼠疫耶尔森氏菌全部出现4对引物的预期扩增带;该试验在4 h内完成;结论四对引物鼠疫PCR法具有快速、特异、敏感等优点,可以用于鼠疫的快速诊断和流行病学调查。     

我国鼠疫菌抗链霉素基因的监测

目的了解全国鼠疫菌分离株是否存在抗链霉素基因。方法根据Guiyoule等人在EMBL公布的抗链霉素相关基因,设计2对引物,对271株代表性鼠疫菌进行PCR扩增。结果实验用271株代表性菌株中尚未发现有鼠疫菌抗链霉素基因。结论目前在所实验的271株菌株还未发现鼠疫菌耐链霉素菌株。     

鼠疫耶尔森菌特异基因扩增引物应用于鼠疫菌的鉴定研究

目的研究一种快速鉴定鼠疫菌的PCR方法。方法选用针对鼠疫菌特异序列的6对引物进行PCR扩增,以其它近缘的肠道致病菌做对照,并测序比较鉴定。结果鼠疫菌均能扩出预期产物,而其他近缘的肠道致病菌菌株均不能扩出预期产物。结论这些引物具有较高的特异性,可迅速、有效地鉴定鼠疫菌,并与其它近缘的肠道致病菌相鉴别。     

鼠疫菌6MD质粒在假结核菌中的表达及其对假结核菌毒力的影响

使用电穿孔转化技术,将鼠疫耶尔森氏菌所携带的6MD 质粒转移到假结核耶尔森氏菌中,获得了杂交菌株。该杂交菌株能够表达鼠疫菌素Ⅰ及凝固酶,但其毒力却仍与作为受体的假结核菌株类似,而没有向鼠疫菌的毒力水平接近。本文对这种现象的可能原因进行了分析。     

贵州省鼠疫耶尔森菌生物学特征研究

目的研究贵州省鼠疫耶尔森菌的生物学特征,探讨疫源地性质。方法对37株鼠疫菌进行生化试验、营养需求试验、毒力基因检测、随机扩增多态性DNA分析和脉冲场电泳分析。结果37株鼠疫菌均不发酵鼠李糖和甘油,发酵麦芽糖和阿拉伯糖,脱氮阳性。选择20株代表菌株检测均为苯丙氨酸依赖(Phe )、谷氨酸半依赖(Glu±);用Pla、Cafl、inv、hms4对引物分别进行PCR扩增,均得到456、249、1000和700bp的目标基因条带;随机引物(RAPD)分析均获得505、790、1140和1680bp的条带;脉冲场电泳图谱显示338、242.5、168和77kbp的条带。结论贵州省鼠疫菌株的生物学特征与云南省滇闽居民生态型鼠疫菌相同。     

几种鼠疫菌培养基的筛选试验

比较了鼠疫菌在胰酶消化液琼脂培养基、市售普通营养琼脂培养基和以胰蛋白Ｓｉ为主要万分自制的５种培养基上的生长情况。结果显示,鼠疫菌在上述７种培养基上均生长良好,可培养出具有鼠疫菌特点的典型菌落,其中营养琼脂培养基和胰蛋白Ｓｉ（２、３号）培养基操作简便、经济,便于基层使用和实验条件的质量控制。