GST酶的提取纯化及特性分析

通过硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25 脱盐、A-25柱层析、丙酮沉淀、Sephadex G-75及Sephadex G-200等一系列分离纯化手段,从小麦幼穗抽提液中分离得到了电泳纯的谷胱甘肽转移酶.结果表明,1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)浓度变化的体系中,该酶表观Km=10.42 nmol/L;谷胱甘肽(GSH)浓度变化的体系中,表观Km=299 μmol/L.     

质谱技术在筛选肺癌血清差异多肽与蛋白质的应用

采用凝胶排阻层析(SEC)与MALDI-TOF质谱非在线联用技术研究男性血清中多肽与蛋白质的组成与分布. 实验结果表明,分离介质Sephadex G-75比Sephadex G-50和Sephadex G-100更加适合血清多肽与蛋白质的预分离. 男性血清经Sephadex G-75层析柱预分离和MALDI-TOF质谱分析后,可获得56个多肽与蛋白质的分子离子峰. 差异比对实验表明,在正常人与患有肺癌疾病的男性血清中,正常男性血清存在着7种不同质荷比(m/z)的差异多肽与蛋白质,其m/z的比值分别为4 808,6 867,6 912,7 036,27 990,28 120,50 687;反之,在肺癌患者血清中发现差异的m/z值为6 139,6 544,8 417,8 480,11 109. 这些差异多肽与蛋白质为临床诊断正常人和患有肺癌疾病患者的标记物提供一条途径.     

芦荟超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化研究

采用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析和DEAE-52柱层析,分离纯化了芦荟(A.vera L.)超氧化物歧化酶,纯化倍数为56倍,回收率为54%,比活力为643(U/mgpro),酶的最适pH值为8.2,最适温度在40~55℃,KCN和H2O2能抑制酶活性。实验表明:芦荟中的SOD属Cu、Zn-SOD。     

杜仲磷酸酯酶的分离、纯化及特性分析

从杜仲嫩芽中提取和纯化磷酸酯酶,并对其性质进行了初步研究.粗酶液经盐析、DEAE-Cellulose离子交换柱,Sephadex G-25和Sephadex G-200层析柱进行纯化.该酶的最适pH值为8.0,最适温度为30 ℃,以对硝基酚磷酸酯(NPP)为底物,测得Km为3.10 μmol/L.酶活的变化受金属离子的影响,当Mg2+浓度为10 mmol/L时,对酶的激活作用最强.     

果菠萝蛋白酶催化功能基团的研究

以菠萝果为材料,应用本实验室开发的工业生产法工艺制备粗酶制品,进一步经DEAE-纤维索(DE-52)和 Sephadex G-75柱层析纯化,获得圆盘电泳单一纯的果酶制剂,测定酶的分子量为29 800,含 19种不同氨基酸,总残基数为286个。化学修饰研究结果表明:巯基、氨基、Trp残基和唯一的His残基是酶活性必需基团,而Ser和羧基与酶活性无关。用邹氏作图法判断 Trp残基的必需基团数,表明酶分子中六个Trp残基仅有一个是酶活性所必需的。     

海生红藻多管藻中藻胆蛋白的分离纯化

选用Middle Fine Sephadex G-150(MFG-150)、Fine Sephadex G-150(FG-150)以及Sephacryl S-300(S-300)3种凝胶过滤对富含R-藻红蛋白(R-PE)的多管藻藻胆蛋白提取液进行R-PE、R-藻蓝蛋白(R-PC)和别藻蓝蛋白(AP)的分离,并对所得R-PE、R-PC/AP组分用DEAE Sepharose-Fast Flow离子交换层析做进一步纯化,优化建立了从多管藻藻胆蛋白提取液中同时有效分离纯化R-PE、R-PC和AP 3类藻胆蛋白组分的技术方法.     

黑藻水溶性多糖的提取及对小鼠 SOD、CAT和吞噬细胞的影响

研究了黑藻水溶性多糖(HVPS)对正常小鼠的影响.黑藻经热水浸提乙醇沉淀,Savege法去蛋白得到黑藻粗多糖(HVCPS),HVCPS经DEAE-32离子交换,Sephadex G-25层析得纯多糖(HVPPS1,2,3);选取HVPPS1和HVCPS分别按25 mg/kg与50 mg/kg体重ip小鼠,每天1次,连续7 d,测定小鼠脾指数、腹腔巨噬细胞(Mφ)吞噬活性和抗氧化酶活性等.结果表明,HVPPS和HVCPS都能显著提高正常小鼠的脾指数和Mφ吞噬作用,HVPPS对小鼠总抗氧化能力、CAT和SOD活性有显著增强作用.     

半枝莲多糖的研究 分离纯化及其基本性质

半枝莲经乙醚脱脂,热水提取,Sevage 法脱蛋白质,乙醇沉淀后得半枝莲多糖粗品.经 DEAE-纤维素(DE-52)柱层析和 Sephadex G-200凝胶过滤得半枝莲多糖精品.紫外光谱分析表明不含有核酸和蛋白质.经乙酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳和 Sephadex G-200凝胶过滤法柱层析结果表明均为单一条带或者单一峰,证明此多糖精品是均一的.分析表明此多糖精品的总糖含量以半乳糖为标准为115%,以葡萄糖为标准为56%,以糖原为标准是58%.用 SephadexG-200分子筛法测得平均分子量为1×10~4道尔顿.体外实验表明半枝莲多糖对移植肉瘤 S-180细胞和腹水癌细胞均有一定的抑制作用.     

海生红藻多管藻中的2种R-藻红蛋白

以新鲜的海生红藻多管藻(Polysiphonia urceolata Grev)为材料,通过DEAE-52离子交换层析,Sephadex G-150和Sephacryl S-300凝胶过滤层析纯化制备了2种R-藻红蛋白(R-phycoerythrin,R-PE)PE272-1和PE377-2.两者有非常相似的光谱特性,...     

白灵菇多糖的提取及其分离的研究

白灵菇菌丝体通过热水抽提,去蛋白,乙醇沉淀,无水乙醇及乙醚离心,得到多糖粗制品.经DEAE-纤维素离子交换柱层析纯化,得到多糖精制品.利用Sephadex G-200凝胶柱层析进行纯度检测,表明达到了均一的纯度.     

苜蓿种子萌发过程中二胺氧化酶活性的变化

研究苜蓿种子不同生长条件、不同生长时期及不同器官二胺氧化酶(DAO)活性的变化.结果表明:(1)黑暗条件下生长的苜蓿黄化苗的酶活性(35.38nKat)明显高于光照条件下生长的绿苗的酶活性(8.89nKat);(2)浸泡24h后的种子中均未测出DAO,第3d时DAO活性达到最高点33.06nKat,其后酶活性开始下降,培养至第7d酶活性与发芽之初接近;(3)对苜蓿幼苗不同器官进行酶活性测定,下胚轴(78.91nKat)根(24.82nKat)子叶(16.73nKat).对DAO进行分离纯化时选活性较高的黑暗培养3d的黄化苗,DAO活性主要集中在萌发初期的下胚轴处.依次用葡聚糖凝胶G-100(sephadex G-100)、DEAE-纤维素以及羟基磷灰石(hydroxyapatite)层析柱进行分离纯化,酶活性、蛋白质含量、回收率均降低.     

红壤中微生物总DNA的分离与纯化

采用2种不同的土壤DNA直接提取方法,提取了4种不同类型红壤的微生物总DNA,并对提取的DNA用Sephadex G-200离心层析法进行了纯化.结果表明:2种方法都可以从红壤中提取到分子量大于10kb的DNA的片段,不同提取方法获得的DNA的产量存在较大差异.方法二用冻融进行预处理再结合SDS和溶菌酶的化学裂解方法,是效果较好的DNA抽提方法.其提取DNA产量高,重复性好,适合于土壤少量样品的DNA提取.Sephadex G-200离心层析法能较好地去除土壤中的有机物杂质,DNA溶液由原来的黄褐色变得澄清透明,且不会使提取的DNA断裂或损失,是一种较好的土壤微生物总DNA纯化方法.     

小远志多糖的提取及纯化

微波辐射下经水提取得到小远志粗多糖(提取率4.86%),经过脱蛋白、二乙氨基乙基纤维素(DEAE-52)离子交换和Sephadex G-200凝胶色谱法分离得到两个主要组分PP-1和PP-2,纸层析、HPLC、比旋光度法证明两者均为均一组分,经凝胶层析法测得两者的相对分子质量分别为40 800和97 300.     

黑曲霉糖化酶的分离提纯及性质研究

采用硫铵分级、DEAE-纤维素离子交换层析、Sephadex G-150凝胶过滤等方法,从黑曲霉A.S.3.4309变异菌B-11的发酵液中,分离出三种电泳均一的糖化酶(G I.GⅡ和GⅢ)。收率分别为0.8％,50％和18.6％。性质研究表明,G I,GⅡ和GⅢ均由一条多肽链组成。     

苦瓜籽中一种抗胰蛋白肽的分离及抗真菌作用观察

利用凝胶过滤层析Sephadex G-75、强阳离子交换色谱SP-650M,从苦瓜籽中分离纯化出一种活性多肽.该多肽在Tricine-SDS-PAGE上显示为单一的谱带,分子量约为6.8 kDa.在经还原剂二硫苏糖醇(DTT)处理后的电泳结果表明该多肽不含有分子间的二硫键.此多肽是一种胰蛋白酶抑制剂,同时具有抗植物致病菌活性,是一种具有双功能作用的多肽.     

芥菜茎中水溶性多糖的分离纯化及性质的初步研究

采用水提醇沉法从芥菜中提取出水溶性粗多糖CP,经Sevag法脱蛋白和H2O2去色素,过DEAE-纤维素柱,经水洗涤和盐洗脱得到BPA,再经Sephadex G-100凝胶层析纯化得BPA 1.采用SephadexG-150凝胶过滤层析和醋酸纤维纸电泳鉴定,初步鉴定BPA 1为纯品.红外光谱检测证明BPA 1是多糖.     

鸭肝金属硫蛋白的分离纯化及鉴定

以信阳华英鸭为材料,用ZnSO4诱导其肝脏合成金属硫蛋白(MT),将鸭肝材料经Sephadex G-50柱层析和DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱层析2次分离纯化,得到Zn-MT,该MT由61个氨基酸组成,其中半胱氨酸含量约为28%,分子量6.5 KD.鸭肝Zn-MT产率为0.57 mg/kg鲜肝重,在220 nm有吸收峰.     

马血清破伤风抗毒素分离纯化的研究

目的提高马血清破伤风抗毒素制剂中有效成分的含量.方法在超滤浓缩之后,利用凝胶色谱对原液进行纯化,利用电泳图谱对结果进行分析.结果葡聚糖凝胶(Sephadex G-150)对抗毒素的分离有较好效果,可去除一部分杂蛋白,提高F(ab)2等有效成分的含量.结论利用凝胶色谱对抗毒素进行分离可提高制品质量,降低不良反应,因此增加...     

转移因子的性质研究

利用 Sephadex G- 2 5柱层析等方法对自制转移因子进行分离纯化 ,并进行分析 ,结果表明 ,其活性组分为多肽及核苷酸的复合物 ,各组分所携带的碱基成分一致 ,证明均为腺嘌呤 .氨基酸分析表明 ,自制转移因子的总氨基酸包括游离氨基酸和组成多肽的氨基酸     

白眉蝮蛇毒降血压组份的分离纯化及其性质的初步研究

从东北长白山脉的白眉蝮蛇(A.H.Ussurfensis)蛇毒中得到一种聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的降压组份(Hypotensive cpmponent)简称HTC,该组份经过DEAE—Sephadex A_(50)和Sephadex G—75柱层析两步完成,HTC 不含碳水化合物,SDS—PAGE 电泳测得分子量为17500道尔顿,等电点为pH6.6,它具有精氨酸酯酶活性而没有出血活性,促凝,抗凝,纤溶等活性、也无磷脂酶A_2、蛋白质水解酶和L—氨基酸氧化酶的活性.按每公斤家兔体重静脉注入0.1mg HTC 其血压显著下降,数分钟后,血压基本上恢复正常.