鼠胚实验在新建体外受精胚胎培养室质量控制中的作用

目的:检测新建体外受精实验室培养体系的可靠与否,是否符合人类胚胎体外培养的要求。方法:对昆明白小鼠进行超促排卵,手术获取昆明白小鼠雌雄配子进行体外受精和体内受精的胚胎;并进行体外培养观察两组鼠胚的受精率、2-细胞率、囊胚率及采用密度梯度离心法和上游法两种精液处理方法对小鼠体外受精胚胎发育情况的影响。结果:进行了30个周期的体内受精体外培养实验,共获卵1136枚;进行了35个周期的体外受精实验,共获卵1486枚。体内受精组获得的受精率(93.13±1.46)%和2-细胞率(94.52±1.67)%高于体外受精组的受精率(84.39±2.87)%和2-细胞率(87.80±3.21)%,两组间差异有统计学意义(P0.05)。密度梯度离心法处理精液后,其受精率(90.32±3.14)%和2-细胞率(88.54±2.28)%高于上游法的受精率(76.46±2.35)%和2-细胞率(82.67±2.62)%,两者差异有统计学意义(P0.05)。结论:小鼠卵母细胞体内受精和体外受精后均有高的成胚率,体内受精后进行体外培养优于体外受精后培养,采用密度梯度离心处理精液实施体外受精优于上游法,鼠胚实验可对新建胚胎培养室的培养体系进行评估。     

废弃胚胎继续囊胚培养研究

目的:探讨体外受精治疗周期中废弃胚胎的体外发育潜能。方法:通过囊胚序贯培养法将无原核(0PN)、单个原核(1PN)、多个原核(≥3PN)和卵裂期发育延缓的2原核(2PN)废弃胚胎培养至囊胚期。比较不同来源胚胎囊胚形成情况和d3胚胎的卵裂球数、质量分级等;并利用废弃胚胎囊胚形成情况对体外受精妊娠结局进行预测。结果:共收集801个废弃胚胎,经序贯培养,形成209个囊胚(26.09%),其中58个为优质囊胚(27.75%)。1PN胚胎、0PN胚胎、d3卵裂球数为7-9-细胞胚胎、d3评分为Ⅰ-Ⅱ级胚胎以及卵裂球数为偶数的胚胎囊胚形成率较高(P均<0.05)。废弃胚胎中有囊胚形成者的临床妊娠率明显高于无囊胚形成者(P<0.05)。结论:废弃胚胎有不同程度的发育潜能,部分可发育为囊胚;特别是:①0PN和1PN胚胎;②d3的4-9-细胞胚胎,偶数卵裂球者更佳;③I级和Ⅱ级胚胎。     

小鼠体外培养囊胚辅助孵化的初步研究

目的 :探索体外培养和辅助孵化技术对体外发育小鼠囊胚孵出率的影响。方法 :将昆明白种小鼠的 2～ 4-细胞胚于体外培养到囊胚 ,观察比较 :(1 )体外培养囊胚与体内发育囊胚的自然孵化率 ;(2 )体外培养囊胚经辅助孵化后与未行辅助孵化 (对照组 )的体外孵化率。结果 :(1 )体外培养囊胚与体内发育囊胚的自然孵化率分别为 75.4%和 96 .2 % ;有显著差异 (P<0 .0 0 1 )。 (2 )辅助孵化与对照组的体外孵化率分别为 97.7%和 74.0 % ,有明显差异 (P<0 .0 5)。结论 :体外培养对囊胚的孵化有不利影响 ;辅助孵化则能明显提高体外培养囊胚的孵出效率     

表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子(IGF-Ⅱ)对小鼠1-细胞胚胎体外发育的影响

目的:研究表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)在小鼠早期胚胎体外发育中的作用,以及EGF联合胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-likegrowthfactor-II,IGF-Ⅱ)对小鼠早期胚胎体外发育是否有协同促进作用。方法:①在mKSOM培养液中添加0ng/ml(对照组)、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的EGF、10ng/mlIGF-Ⅱ、1ng/mlEGF+1ng/mlIGF-Ⅱ、1ng/mlEGF+10ng/mlIGF-Ⅱ、10ng/mlEGF+1ng/mlIGF-Ⅱ、10ng/mlEGF+10ng/mlIGF-Ⅱ培养小鼠1-细胞胚胎,每组胚胎在培养箱中连续培养120h,每24h观察胚胎发育情况,分别计算2-细胞率、4-细胞率、桑椹胚率、囊胚率和孵化率,并进行囊胚细胞计数。结果:添加1ng/ml、10ng/mlEGF组的囊胚率及孵化率显著增加;EGF+IGF-Ⅱ组较单一添加组、对照组囊胚率及孵化率显著增加(P<0.05),且EGF+IGF-Ⅱ组囊胚细胞计数显著高于其他组(P<0.05),其中10ng/mlEGF+10ng/mlIGF-Ⅱ组的孵化率及囊胚细胞数最高(P<0.05)。结论:EGF浓度在1￣10ng/ml范围内可以提高体外培养鼠胚的囊胚率及孵化率;EGF及IGF-Ⅱ对体外培养鼠胚的发育有协同促进作用;本实验范围内10ng/mlEGF+10ng/mlIGF-Ⅱ为最优组合。     

Ⅱ、Ⅲ级胚胎活检后体外发育能力的研究

目的:探讨形态学评价质量较差的胚胎有无活检价值,活检后能否正常发育。方法: 160个IVF和ICSI周期剩余的Ⅱ级、Ⅲ级胚胎,来自同一例患者分级相同的胚胎配对,随机分为实验组和对照组。实验组采用喷酸透明带打孔法取出1个卵裂球,对照组继续培养,对比两组囊胚的形成率、孵化率、囊胚细胞总数,并观察不同形态学特征的胚胎活检后的发育情况。结果:活检组胚胎囊胚形成率,囊胚总细胞数与对照组相比没有差别,但囊胚第6天孵出率活检组明显高于对照组;Ⅲ级胚胎活检后囊胚形成率、第6天孵化率、囊胚总细胞数均明显低于Ⅱ级胚胎;活检前细胞数少于7个的胚胎,活检后发育能力显著降低。结论:活检不影响胚胎体外继续发育的能力;Ⅱ级胚胎活检后具有较好的发育潜力,Ⅲ级胚胎活检后囊胚形成率较低,即使形成囊胚,细胞数也较少,不能正常发育;第3天活检时具有7个或7个以上卵裂球的胚胎具有较好的继续发育能力。     

胚胎自分泌IGF-Ⅱ对胚胎质量及其种植潜能的预测

目的 :探讨胚胎自分泌IGF II水平对胚胎质量及其种植潜能的预测价值。方法 :将小鼠 2 细胞期胚胎在四种不同培养条件下培养至囊胚期 ,在胚胎发育的 4～ 8细胞期及囊胚期分别测定微滴培养液中IGF II含量 ,观察两个时期培养液中IGF II水平与囊胚形成率和植入率之间的关系。结果 :①体内发育组胚胎IGF II水平均高于 3个体外培养组胚胎 (P <0 .0 5 ) ,序贯组IGF II水平也较共培养组和单纯培养组为高 (P <0 .0 5 ) ,单纯培养组最低 ;囊胚期分泌IGF II水平均高于 4～ 8细胞期。②两个时期IGF II含量与囊胚形成率和植入率均呈正相关。结论 :胚胎自分泌IGF II对胚胎质量及其种植潜能可能具有预测价值。     

体外受精胚胎细胞数量和碎片比例对囊胚形成的影响

目的:探讨体外受精(IVF)周期中胚胎细胞数量和碎片比例对囊胚形成的影响。方法:回顾性分析2 404个IVF周期患者的13 037个进行囊胚培养的胚胎。根据第3日细胞数量将胚胎分为2~3-细胞组(2C~3C)、4-细胞组(4C)、5-细胞组(5C)、6-细胞组(6C)、7-细胞组(7C)、8-细胞组(8C)、9-细胞组(9C)、10-细胞组(10C)、11-细胞组(11C)、12-细胞组(12C)、≥13-细胞组(≥13C),分析囊胚培养细胞数量和碎片比例与囊胚形成的关系。结果:碎片为1~2级的胚胎,8C组和≥13C组囊胚形成率明显高于其他各组(P0.05);7C、9C~12C组之间囊胚形成率无统计学差异(P0.05)。碎片为3级的胚胎,8C组的囊胚形成率高于其他各组(P0.05),且与碎片1~2级7C、9C~12C组的胚胎相比无统计学差异(P0.05);9C组囊胚形成率高于7C组,且差异显著(P0.05)。结论:第3日8C胚胎的发育潜能是最优的,可适当放宽对8C碎片的评估;随着碎片比例增大可减弱胚胎的发育潜能。     

人废弃胚胎单卵裂球体外发育潜能研究

目的:探讨体外受精治疗周期废弃胚胎来源的单卵裂球体外发育潜能。方法:收集21例患者授精培养后第3日不适于移植和冷冻的废弃胚胎共60枚,其中2-细胞期胚胎10枚,3-细胞期胚胎8枚,4-细胞期胚胎26枚,5-细胞期胚胎12枚,6-细胞期胚胎4枚。采用化学法去除透明带并分割胚胎获得单卵裂球,继续体外培养,每24h观察卵裂球发育情况。结果:60枚胚胎共获得229枚单卵裂球。以分割取得单卵裂球日作为第1日(d1),继续培养,其发育似乎遵循d2分裂、d3紧密化、d4出现囊胚腔、d5扩张,延续分割前的程序,但提前进入紧密化期,致使囊胚细胞数少,囊胚期体积亦比正常胚胎小。其中,4-细胞期废弃胚胎来源的卵裂球分裂率、紧密化率、囊胚形成率显著高于来自其它细胞数的单卵裂球(P<0.05),且其大部分内细胞团(ICM)细胞的碱性磷酸酶(AKP)表达呈阳性。结论:废弃胚胎来源的单卵裂球能在体外继续发育至囊胚,发育潜能与供体胚胎发育质量密切相关,其发育似乎延续原有供体卵裂球的节律,而形成囊胚所需时间明显缩短,细胞数亦明显减少,但囊胚ICM细胞显示AKP阳性,深信其利用价值会得到进一步证实。     

重组人促性腺激素对早期鼠胚发育的影响

目的:探讨重组人促性腺激素对小鼠早期胚胎发育的影响。方法:将35只昆明种小鼠随机分为7组,实验组注射一定剂量的重组人促卵泡激素(rhFSH 20 IU)结合不同剂量的重组人促黄体激素(rhLH)对小鼠进行超促排卵,对照组注射孕马血清(PMSG10 IU)和hCG(10 IU),受精0.5 d处死各组雌鼠,收集2-细胞期的鼠胚进行体外培养,观察并记录鼠胚发育至各细胞期的数目。结果:10 IU和15 IU rhLH 组收集的胚胎数与对照组无差异,20 IU rhLH组则高于对照组,但20 IU rhLH组鼠胚发育至4-细胞、8-细胞、桑椹胚、囊胚、扩张期囊胚和孵出期的比率却较低,与对照组比有统计学差异,其余各组收集的胚胎数和胚胎发育至各细胞期数均低于对照组。结论:合适剂量的rhLH对小鼠早期胚胎的发育有明显的促进作用,但剂量过高则对胚胎发育有抑制作用。     

不同浓度促性腺激素对促排卵周期中人类未成熟卵子体外成熟的影响

目的:研究体外成熟培养基中添加不同浓度促性腺激素(卵泡刺激激素和黄体生成激素)对卵子体外成熟培养以及其受精和后续的早期胚胎发育的影响。方法:收集生殖助孕治疗中废弃的人类未成熟卵子,将生发泡(GV)期未成熟卵子随机分为3组,添加终浓度分别为75 U/L的低浓度促性腺激素(低浓度组)和750 U/L的高浓度促性腺激素(高浓度组),以及不添加促性腺激素(空白对照组)进行体外成熟培养20小时,每组入组的卵子数分别为80、83和82枚。将成熟卵子进行卵胞质内单精子显微注射,研究卵子的体外成熟率、受精率以及卵裂率、可用胚胎率和优质胚胎率。结果:低浓度组的卵子体外成熟率最高(80.00%),空白对照组最低(76.83%),但差异无统计学意义(P0.05);低浓度组的受精率最高(67.19%),空白对照组最低(65.08%),但差异无统计学意义(P0.05);高浓度组的卵裂率最高(70.45%),空白对照组最低(63.41%),但差异无统计学意义(P0.05);低浓度组的可用胚胎率最高(28.57%),空白对照组最低(19.23%),但差异无统计学意义(P0.05);高浓度组的优质胚胎率最高(16.13%),空白对照组最低(3.85%),但差异无统计学意义(P0.05)。结论:不同浓度促性腺激素对促排卵周期中人类未成熟卵子的体外成熟和受精,及其后续的早期胚胎发育没有发现显著的影响。     

Effect of lubrication of frictional properties of sutures

The results of this study have provided an insight into the behavior of sutures in the environment of fluids. It has been shown that friction could both increase or decrease with lubrication, depending upon the nature of the application. In tests on straight sutures, lubricants have generally led to an increase in friction. This was found in the present investigation as well as in another study which measured friction in sutures soaked in serum. These results are explained on the basis that higher friction is expected to arise if the lubricant formed a multilayer film between the sliding surfaces. In this instance, the resistance to shear flow by the lubricant becomes the governing factor. On the other hand, if only a small amount of lubricant, such as a monolayer film, is present between surfaces, as expected within the structure of a snugged surgical knot, the lubricant may play the role of decreasing adhesion and, thus, friction.     

卵巢子宫内膜异位症恶性变25例临床分析

目的 探讨卵巢子宫内膜异位症恶性变的临床表现、病理特征、治疗方法和预后。方法 回顾性分析２５例卵巢子宫内膜异位症恶性变患者和病量资料。结果 卵巢子宫内膜异位症恶性变患者的主要症状为盆腔包块、腹胀、腹痛、异常阴道流血和流液。病理类型为子宫内膜样癌１４例,透明细胞癌２例,腺棘癌２例,浆液性腺癌１例,混合性卵巢上皮性癌６例,镜下均可见良性的异位子宫内膜向恶性移行的证据。临床分期为Ⅰ１４例,Ⅱ期７例,Ⅲ期３例,Ⅳ期１例。治疗方法均采用肿瘤细胞减灭术＋化学治疗。患者５年生存率达７７．７％。结论 卵巢子宫内膜异位症恶性变的确切发生率难以估计,该病的治疗以肿瘤细胞减灭术＋化学治疗为主。